当前位置：文档之家 › 碱茅论文：碱茅 胚性愈伤组织 根癌农杆菌 遗传转化 组织褐化

碱茅论文：碱茅 胚性愈伤组织 根癌农杆菌 遗传转化 组织褐化

  • 格式：doc
  • 大小：50.50 KB
  • 文档页数：3

碱茅论文：碱茅再生体系建立及其遗传转化的研究
【中文摘要】碱茅(Puccinellia chinampoensis)是一种抗旱、耐盐碱(NaHCO3,Na2CO3)性极强的盐碱地特种植物,它与水稻、小麦一样都属禾本科,但在长期的进化及对盐碱适应过程中,形成了与其它
禾本科植物相比极为特殊的抗逆机制,而且具有极强的抗盐碱能力。

通过植物组织培养技术建立碱茅再生体系,进一步筛选出高效转基因体系,为以后碱茅的遗传转化研究实验做了准备。

本研究以碱茅为试验材料,全面而系统地探讨了影响碱茅种子愈伤诱导的一些主要因素,并通过农杆菌EHA105介导下对GUS基因遗传转化。

试验的研究结果为：在碱茅种子愈伤组织的诱导过程中,不同灭菌剂及灭菌时间对种子灭菌效果和诱导情况差异明显,使用70%酒精3min+10%次氯酸钠
30min的灭菌处理效果较好。

在MS培养基上添加不同浓度的2,4-D
对碱茅种子诱导产生愈伤组织的效率不同,最适2,4-D浓度为4 mg/L。

选择以改造培养基I(N6大量元素、MS微量元素、两倍MS铁盐、五倍MS有机物,其中肌醇的用量不变)作为碱茅种子愈伤组织诱导的基本培养基。

不同光照培养条件对碱茅种子诱导产生愈伤组织的效率不同,在短光照(12/12h)、培养温度为...
【英文摘要】Puccinellia chinampoensis is a special gramineous plant like rice and wheat, which can survive well in the saline and alkali environment with severe drought and salt stress. The difference from rice or wheat is Puccinellia
chinampoensis has evolved a series of resistance mechanism via years of adaptation in the saline and alkali soil. In this study, transformation system of Puccinellia chinampoensis has been constructed and optimized, following with optimized regeneration system, through plant tissue cultur...
【关键词】碱茅胚性愈伤组织根癌农杆菌遗传转化组织褐化【英文关键词】Puccinellia chinampoensis embryo callus Agrobacter-ium tumefaciens genetic transformation tissue browning
【目录】碱茅再生体系建立及其遗传转化的研究摘要
4-5Abstract5-6 1 绪论9-18 1.1 碱茅的研究
进展9-12 1.1.1 碱茅的生物学特性10 1.1.2 碱茅结
构解剖研究进展10 1.1.3 碱茅生理生态研究进展
10-11 1.1.4 碱茅分子生物学研究进展11-12 1.2 植
物组织培养研究进展12-14 1.2.1 外植体选择的研究进展
13 1.2.2 各种激素在植物组织培养中的应用
13-14 1.3 植物遗传转化受体系统的研究概况
14-16 1.3.1 外植体直接分化的遗传转化15 1.3.2 以
植物单细胞为受体的遗传转化15 1.3.3 以植物愈伤组织为受
体的遗传转化15-16 1.3.4 植物原生质体的遗传转化
16 1.4 植物遗传转化方法的研究进展16-17 1.4.1 农杆菌介导法16 1.4.2 基因枪法16 1.4.3 电激法
16-17 1.4.4 PEG转化法17 1.4.5 花粉管通道法
17 1.5 本研究的目的及意义17-18 2 碱茅再生体系的建立18-35 2.1 材料与方法18-22 2.1.1 材料
18-20 2.1.2 方法20-22 2.2 结果与分析
22-34 2.2.1 不同灭菌剂对种子灭菌的效果
22-23 2.2.2 两种光照条件下对种子诱导愈伤组织的影响
23-24 2.2.3 诱导种子的愈伤组织试验的结果与分析
24-26 2.2.4 愈伤组织在继代增殖中的调控
26-27 2.2.5 愈伤组织芽分化的结果与分析27-34 2.3 本章小结34-35 3 碱茅的遗传转化35-43 3.1 材料与方法35-39 3.1.1 材料35 3.1.2 方法
35-39 3.2 结果与分析39-41 3.2.1 碱茅种胚愈伤组织筛选过程中Kana筛选浓度的确定39 3.2.2 除菌方式的优化39-40 3.2.3 菌液不同侵染时间对遗传转化的影响
40-41 3.3 本章小结41-43结论43-44参考文献44-49攻读学位期间发表的学术论文49-50致谢
50-51。

合集下载

根癌农杆菌介导的抗除草剂转基因甘薯植株的获得

根癌农杆菌介导的抗除草剂转基因甘薯植株的获得

农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2008,16(1):103~107*基金项目： “十一五” 国家科技支撑计划(No.2006BAD01A06)、 农业部行业计划(No.nyhyzx07­012)和国家杰出青年科学基金(No.30225028)。

**通讯作者。

Author for correspondence.教授， 主要从事甘薯细胞工程与分子育种研究。

E­mail ： <liuqc@>. 收稿日期：2007­04­26 接受日期： 2007­05­23 ·研究论文· 根癌农杆菌介导的抗除草剂转基因甘薯植株的获得 *臧 宁, 张美彦, 翟 红, 李雪琴, 王玉萍, 刘庆昌 **(中国农业大学植物遗传育种系， 农业部作物基因组学与遗传改良重点开放实验室， 北京市作物遗传改良重点实验室，教育部作物杂种优势研究与利用重点实验室，北京 100094) 摘要: 以甘薯 （(L.)Lam.） 品种栗子香的胚性悬浮细胞为受体材料, 用根癌农杆菌介导法， 获得了表达基因的抗除草剂转基因甘薯植株。

根癌农杆菌 （ ） 菌株 LBA4404 携带有 基因的双元载体 pCAM­BIA3300,共计450个胚性细胞团用于遗传转化。

在添加 2mg/L 2,4­D 、 100mg/L Carb 和0.5mg/L PPT （phosphinothricin ）的固体 MS 培养基上选择培养 8周后，得到了19个PPT 抗性愈伤组织。

将这 19个抗性愈伤组织转移到添加 1mg/L ABA 、 100mg/LCarb 和0.5mg/L PPT 的固体 MS 培养基上，其中的10个抗性愈伤组织共再生出 103株拟转基因植株。

PCR 分析表明， 其中的 69株为转基因植株。

根癌农杆菌介导的食用菌转化研究

根癌农杆菌介导的食用菌转化研究

根癌农杆菌介导的食用菌转化研究近年来，根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导的食用菌遗传转化研究取得了一定的进展。

为此，笔者对农杆菌介导转化的原理、转化的食用菌种类以及影响转化效率的相关因素进行了系统阐述。

并分析了农杆菌介导食用菌转化中存在的问题，以及对该技术在食用菌中的应用前景进行了展望。

食用菌；根癌农杆菌；遗传转化食用菌又称蕈菌，通常指那些能够形成大型肉质子实体的真菌。

约有95%的食用菌属于担子菌，少数属于子囊菌[1]。

食用菌味道鲜美，营养丰富，同时许多还具有药用价值。

而且像金针菇（Flammulina velutipes）、刺芹侧耳（Pleurotus eryngii）、斑玉蕈（Hypsizygus marmoreus）等已经实现周年化、工厂化生产，产业发展前景广阔。

因此，利用分子生物学手段和基因工程技术进行食用菌菌种改良、基因功能研究具有重要的现实意义。

遗传转化技术是进行食用菌分子育种和基因水平研究的重要手段之一。

但食用菌基因工程研究起步较晚，没有一个稳定、高效的外源基因转化系统是制约利用分子生物学方法进行食用菌遗传改造的主要障碍。

传统的遗传转化方法聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）介导法[2]、电击法[3]、基因枪法[4]、限制酶介导整合法[5]等由于操作复杂、转化效率低等原因，限制了这些方法在食用菌功能基因研究中的应用[6]。

与此同时，根癌农杆菌介导的转化（Agrobacterium tumefaciensmediated transformation，ATMT）由于转化受体形式多样、转化效率高以及TDNA单拷贝整合等特点，近些年在食用菌转化研究中得到了一定的应用[7]。

另外，ATMT技术在众多丝状真菌中的成功运用也鼓舞人们在食用菌转化研究中对ATMT技术开展更多的探索研究。

鉴于此，笔者就ATMT的原理和已应用的食用菌种类，以及影响转化的因素等方面进行了介绍，以期为相关研究提供有益指导。

根癌农杆菌介导的丝状真菌简青霉遗传转化的研究

根癌农杆菌介导的丝状真菌简青霉遗传转化的研究

龙源期刊网 根癌农杆菌介导的丝状真菌简青霉遗传转化的研究作者：朱咏华吴康郑芒靳冉廖红东刘选明来源：《湖南大学学报·自然科学版》2010年第10期摘要:利用根癌农杆菌LBA4404介导,建立了丝状真菌简青霉(Penicillium simplicissimum)H5的遗传转化系统.潮霉素抗性筛选、PCR和Southern blot分子鉴定等结果表明:筛选获得的转化子能够稳定遗传,外源的T DNA以单拷贝随机整合到简青霉的基因组中.实验初步研究了农杆菌浓度、乙酰丁香酮浓度和共培养时间等因素对转化效率的影响,经过优化后转化体系的效率可达50个转化子/105个孢子.农杆菌介导的遗传转化方法在简青霉上的运用,将为研究该菌的基因工程改造提供强有力的工具.关键词:根癌农杆菌;简青霉;转化中图分类号: Q933 文献标识码:AAgrobacterium Tumefaciens mediated Transformationof the Penicillium Simplicissimum H5ZHU Yong hua,WU Kang,ZHENG Mang,JIN Ran,LIAO Hong dong,LIU Xuan ming(State Key Laboratory of Chemical Biosensing and Chemometrics,School of Biology, Hunan Univ,Changsha,Hunan 410082, China)Abstract:Agrobacterium tumefaciens mediated transformation (ATMT)was applied in Penicillium simplicissimum H5 by Agrobacterium tumefaciens LBA4404. The results of hygromycin resistance selection, PCR and Southern blot analysis showed that T DNA was randomly inserted into the transformants with single copy and the transformants indicated genetic stability. The transformation efficiency was about 50 transformants per 10 5 spores by optimizing the co culture time, the concentration of Agrobacterium tumefacien and acetoyringone (AS).The application of ATMT technique in Penicillium simplicissimum H5 will provide a powerful tool for the genetic engineering of this fungus.Key words:agrobacterium tumefaciens;penicillium simplicissimum;transformation。

农杆菌介导转化愈伤组织获得抗除草剂转基因玉米植株

农杆菌介导转化愈伤组织获得抗除草剂转基因玉米植株

山地农业生物学报27(5):382~388,2008Jour nal of M oun tai n Agricu lture and B iology农杆菌介导转化愈伤组织获得抗除草剂转基因玉米植株*朱友银1,2,冯怡1,2,赵德刚1,2*(1.贵州大学生命科学学院贵州省农业生物工程重点实验室,贵州贵阳550025;2.贵州大学教育部绿色农药与农业生物工程重点实验室,贵州贵阳550025)摘要:对4个玉米基因型Q31@Z31、Q31@Z3、Z3、B73胚性愈伤组织进行农杆菌介导基因转化,根据G us基因表达水平,研究了影响农杆菌介导遗传转化玉米愈伤组织的因素。

结果表明,在选用的玉米基因型中,不同基因)为型转化效率存在显著差异,其中Q31@Z31、Q31@Z3、B73转化效率较高,Z3较低。

农杆菌菌液浓度(OD6000.4~0.6、侵染时间为10m i n、23e暗培养3d是较佳转化条件。

通过农杆菌介导遗传转化,获得再生玉米植株,并对再生植株离体叶片进行除草剂抗性检测,发现转基因再生植株叶片可以抵抗200mg/L B asta。

关键词:玉米愈伤组织;农杆菌;遗传转化;G us基因;Pat基因中图分类号:S513;Q789文献标识码:A文章编号:1008-0457(2008)05-0382-07Callus Transfor m ation of A grobac t eriu m-m ediated and P lants R esistant to Herbicide i n Zea m ays L.Z H U You-y in1,2,FEN G Y i1,2,ZHA O D e-gang1,2*(1.Gu izhou K e y Laboratory of A gro-B ioengineer ing,C olleg e of L i f e Sciences,G uizhou Un iver sity,G uiyang Gu izhou550025,Ch ina;2.K ey L abo ra tory of Green P esticide andA gr icu lturalB io eng ineering,M i n istry of Educa tion,Guizhou Un ivers ity,Gu i y ang G i zhou550025,China)Abstrac t:In t h i s report,four g enotypes of m a i ze(Z ea may s L.)e mbryon ic ca lliw ere transfor m ed v ia Ag robacter i u m tu-m efac i ens.T he expression leve l of B-g l ucuron i dase(G us)g ene was used as the ev al uation index of infl uenc i ng trans-for m ati on e fficiency.T he resu lts sho w ed that there w as do m i nan t d ifference a m ong differentm a ize geno types.The hybri d li ne Q31@Z31、Q31@Z3and li ne B73w ere m ore sensiti ve than li ne Z3.I mproved transf o r m ati on effi c i encies w ere ob-=0.4~0.6)for10m i n i n ta i ned when the e m bryonic ca lliw ere incubated w it h A grobacter i u m suspensi on cells(OD600the infecti on m edi um.O pti m ized co-culture cond iti on w as tha t infecti on w as per f o r m ed at23e i n dark f o r3days.The transgenic ma ize plan ts w ith basta-resistant w ere obta i ned v ia Ag robacter i u m-med i ated transfor m a ti on.K ey word s:M a ize(Zea m ays L.);Embryon ic ca ll;i A grobactcri u m tu m efac iens;G ene ti c transfor m a tion;G us g ene;P at gene玉米Zea m ays L.是重要的粮食作物,也是重要的工业原料。