薄层色谱法操作规程
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ZLSOP001600薄层色谱法操作规程 第 1 页 共 3 页
亳州市张仲景药业有限责任公司-标准操作规程 薄层色谱法操作规程
目的：建立薄层色谱法的操作规程，以规范操作过程，确保检验结果准确可靠。
适用范围：原料、中药饮片
责任人：质量管理部主任、检验员
内容：
1 简述
薄层色谱法系指以适宜的固定相涂布于玻璃板、铝箔片或聚酯薄膜上使成一均匀的薄层，将供试品与相应的对照物点于薄层板的一端，以适宜的溶剂置展开容器内展开，使供试品所含的相应成分分离，采用适宜的显色剂或显色方法显色，将供试品色谱与对照物色谱相比较，或采用薄层扫描仪扫描，以进行鉴别、检查或含量测定的方法。
2 仪器与材料
2.1 薄层板
按照固定相的种类，薄层板可分为正相薄层板（如硅胶薄层板、聚酰胺薄膜）、反相薄层板（如C18键合相薄层板）等。硅胶薄层板是目前使用最广的薄层板，如硅胶G、硅胶GF254、硅胶H和硅胶HF254等。高效薄层板所使用的固定相较普通薄层板平均粒度小，颗粒分布范围窄，因此在相对短的展开距离中可以达到更好的分离效果。
目前使用的薄层板有市售薄层板和自制薄层板两种。一般市售薄层板分离效果较自制薄层板好。如需特殊薄层板（如改性板）时，可采用自制薄层板。
2.2 点样器
2.2.1 手动点样 主要用微升毛细管配合与之相应的手动点样仪等。
2.2.2 自动点样 采用半自动点样仪或全自动点样仪，按预设程序自动点样。 ZLSOP001600薄层色谱法操作规程 执行日期
起草 审核 批准
部门 质量管理部 质量管理部 质量负责人
姓名 郑亚敏 白静 史修强
签名
日期
分发部门 质量管理部 ZLSOP001600薄层色谱法操作规程 第 2 页 共 3 页
亳州市张仲景药业有限责任公司-标准操作规程 2.3 展开容器 又称展开缸，为大小适宜的密闭展开容器。有双槽展开缸及平底展开缸等。此外，也有自动展开仪器，可将薄层板按预定程序单次或多次展开，提高薄层展开的重现性。
2.4 显色设备 包括喷雾显色、浸渍显色以及蒸气熏蒸显色的设备。
2.4.1 喷雾显色 多用玻璃喷雾瓶或其它专用的喷雾设备，喷雾形成的雾滴应细小并且均匀。
2.4.2 浸渍显色 多在盛有显色剂的展开缸中进行。
2.4.3 蒸气熏蒸显色 可在密闭的展开缸、干燥器等设备中进行。如薄层板需加热，可使用烘箱或专用的薄层加热台。
2.5 检视和记录设备 由暗箱及摄像设备组成。
2.5.1 暗箱 配备可见光、254nm 和365nm紫外光光源以及相应的滤光片。
2.5.2 摄像设备 光学照相机、摄像头或数码相机等。
2.6 薄层色谱扫描仪
薄层色谱扫描仪是薄层色谱定性定量分析的专用仪器。主要由光源、单色器、薄层板台、检测器及工作站等组成。有关内容详见薄层色谱扫描法标准操作规程。
3 操作方法
3.1 薄层板的制备和处理 除另有规定外，自制薄层板应采用大小为20cm×20cm、20cm×10cm或10cm×10cm等规格的光滑平整玻璃板进行涂布。涂布时，将1份固定相和3份水（或其他加有黏合剂的水溶液适量）在研钵中按同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2~0.3mm），将玻璃板取下，置水平台上室温下晾干，活化备用。
改性薄层板可在自制薄层板时加入改性剂，或用改性剂浸渍薄层板制备。
薄层板表面应均匀、平整、光滑，无麻点、无气泡、无破损及污染。如果薄层板放置过久被杂质污染，可用氯仿、甲醇或二者的混合溶剂展开预洗。
铝箔片市售薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破损。
市售薄层板和自制薄层板使用前一般应于105~110℃活化30分钟，活化后置干燥器中备用。
3.2 点样
薄层点样应在洁净干燥的环境中进行。点样方法有接触式点样和喷雾点样两种。接触式点样时将吸有样品溶液的毛细管或针头与薄层板表面接触，从而使样品在薄层板上形成圆点状的点。接触式点样应注意防止毛细管损伤薄层板表面。喷雾点样时，点样针针杆匀速缓慢下推，针头部形成的小液滴被喷头喷出的气流吹落到薄层板上，ZLSOP001600薄层色谱法操作规程 第 3 页 共 3 页
亳州市张仲景药业有限责任公司-标准操作规程 机械控制薄层板匀速摆动，则形成均匀的条带状原点。喷雾点样可提高点样的准确度与重现性，同时由于条带状原点的径向扩散较小，也可提高薄层色谱的分离度。
除另有规定外，点样基线距底边10~15mm，高效薄层板一般基线距底边8~10mm。接触式点样原点直径一般不大于3mm，喷雾式点样所得条带宽度一般为5~10mm，高效薄层板条带宽度一般为4~8mm。点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般不少于8mm，高效薄层板供试品间隔不少于5mm。
市售高效薄层板载样量较普通薄层板小，容易引起过载，应适当调整点样量。
3.3 展开 选择大小适合的展开容器，将薄层板放入展开容器中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密闭，展开。一般上行展开8~15cm，高效薄层板上行展开5~8cm。溶剂前沿达到规定展距，取出薄层板，晾干，待检测。
展开前如需要溶剂蒸气预平衡，可在展开缸中加入适量的展开剂，密闭，放置15～30分钟，待溶剂蒸气平衡后，迅速放入薄层板，立即密闭，展开。也可使用双槽展开缸，在一侧槽内加入展开剂，薄层板置另一侧槽内，密闭容器，放置15～30分钟，再迅速将薄层板放入装有展开剂的展开槽内，密闭，展开；或放置到规定时间后，保持容器密闭，小心倾斜展开容器，使展开剂进入到放置有薄层板的槽内，放平展开容器，展开。
3.4 显色与检视
3.4.1 直接检视 在可见光下有颜色的供试品斑点可直接在日光下检视；有荧光的供试品斑点可在紫外光灯（365nm或254nm）下检视其荧光斑点；在254nm 紫外光下有吸收的物质可使用带有荧光剂的薄层板（如硅胶GF254板）展开后，再于254nm
紫外光灯下观察其荧光淬灭所形成的色谱。
3.4.2 显色后检视 如供试品斑点不能直接检视，可喷以适宜显色剂或采用其它显色方法显色后再于可见光或紫外光下检视。显色时应确保均匀。渍溃显色应防止显色溶液溶解样品所造成的损失和色谱斑点变形。
3.5 记录 可使用光学照相机、摄像头以及数码相机等设备拍摄色谱结果，以光学照片或电子图像的形式保存。在紫外光下拍摄时，光源发出的紫外光会干扰摄像设备感光，导致拍摄结果与肉眼观察存在一定的色差，应使用适当滤光片滤除紫外光。可见光下进行检视的薄层板也可采用平板扫描仪记录薄层色谱结果。如拍摄的图谱不能完全反映实际图谱的情况时，可另附手绘图谱。
3.6 薄层色谱扫描详见薄层色谱扫描法标准操作规范。
