血清尿素氮测定的原理方法及临床意义

实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法）一、实验目的与要求1 了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。

2 掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。

二、实验原理尿素在脲酶作用下分解生成氨。

在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁氰化钠催化生成蓝色的靛酶。

其反应式为： CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲酸O-2NH3+CO2氨NH3+OCl-NH2Cl+OH-次氯酸氨胺催化剂NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2苯酚P胺基苯酚HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O酚靛三、实验仪器与试剂1 仪器（1） AT648半自动生化分析仪1台；（2） 4孔恒温水浴锅1个；（3）振动摇床1台。

2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括：（1）试管架1个；（2） 2ml试管10个；（3） 20μl微量加样器1个；（4） 1ml移液管1个；（5） 5ml移液管2个；（6）吸耳球1个；（7）搪瓷盘1个；（8）微量加样滴头；（9）吸水纸。

3 本试剂盒内含5种试剂：（1）脲酶（冻干） 2瓶（2） pH 8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成 1×46ml（3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成 1×225ml（4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成 1×225ml（5）尿素氮标准液（20mg/dl） 2×2ml四、实验步骤1 血清（1）取脲酶一瓶，用23.0ml pH 8.0缓冲液溶解。

（2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。

表131系列反应管中所加溶液的量空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5 （3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。

一、实验目的1. 掌握血清尿素测定的原理和方法。

2. 熟悉二乙酰-肟法测定血清尿素氮的实验操作。

3. 了解实验中可能出现的误差及其处理方法。

二、实验原理血清尿素氮（Blood Urea Nitrogen，BUN）是血液中尿素氮的浓度，是反映肾功能的重要指标。

尿素氮是蛋白质代谢的终产物，主要由肝脏产生，通过肾脏排泄。

二乙酰-肟法是一种常用的测定血清尿素氮的方法，其原理如下：在酸性反应环境中加热，尿素与二乙酰缩合，生成色素原二嗪，称为Feorin反应。

因为二乙酰不稳定，所以通常由反应系统中二乙酰-肟与强酸作用，产生二乙酰，二乙酰与尿素反应，综合生成红色的二嗪。

其颜色的深浅与血清中尿素含量成正比。

三、实验材料1. 试剂：- 碱性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%H3PO466ml冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉2g溶解后加蒸馏水稀释至1升，置棕色瓶放冰箱保存，可稳定半年。

- 二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml溶解后，再用蒸馏水稀释至1升置棕色瓶中，贮存放于冰箱内可保存半年不变。

- 尿素标准贮存液（100mmol/L）：称取干燥纯尿素（MW60.06）0.6g，溶解于水中并稀释至100毫升，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内稳定六个月。

- 尿素标准应用液（5mmol/L）：取5.0ml贮存液用去氨蒸馏水稀释至100ml。

2. 仪器：- 分光光度计- 离心机- 实验室试管四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 取5支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。

- 向每支试管中加入2.0ml碱性试剂，混匀。

- 将试管置于沸水中加热5分钟，取出冷却至室温。

- 以540nm波长，1cm光程，测定各管吸光度。

- 以尿素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品测定：- 取2支试管，分别加入0.5ml血清和0.5ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。

一、实验目的1. 掌握血清尿素含量测定的原理和方法；2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能；3. 了解血清尿素在临床医学中的意义。

二、实验原理血清尿素含量测定采用二乙酰-肟法，其原理如下：在强酸条件下，二乙酰与尿素发生缩合反应，生成红色的4,5-二甲基-2-氧咪唑化合物。

该化合物的颜色深浅与尿素的含量成正比。

通过比色法，可以计算出血清中尿素的含量。

三、实验材料1. 试剂：二乙酰-肟试剂、血清、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水等；2. 仪器：紫外可见分光光度计、移液器、试管、试管架等。

四、实验步骤1. 标准曲线绘制：（1）取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml的标准尿素溶液；（2）向各试管加入2ml的二乙酰-肟试剂，充分混匀；（3）将试管置于60℃水浴中反应30分钟；（4）取出试管，用蒸馏水定容至5ml；（5）以蒸馏水为空白，在波长540nm处测定各管的光密度（OD）；（6）以尿素浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 血清尿素含量测定：（1）取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml的血清样本；（2）按照标准曲线绘制步骤中的操作，进行反应和测定；（3）以蒸馏水为空白，在波长540nm处测定各管的光密度（OD）；（4）根据标准曲线，计算血清中尿素的含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制标准曲线，结果显示尿素浓度与光密度呈线性关系，相关系数R²=0.998。

2. 血清尿素含量测定：根据标准曲线，计算各血清样本中尿素的含量，结果如下：样本1：尿素含量为5.2mmol/L；样本2：尿素含量为6.8mmol/L；样本3：尿素含量为7.4mmol/L；样本4：尿素含量为8.2mmol/L；样本5：尿素含量为9.0mmol/L；样本6：尿素含量为10.0mmol/L。

六、实验讨论1. 实验过程中，二乙酰-肟试剂的浓度、反应时间、温度等因素对实验结果有较大影响，应严格控制实验条件，以保证结果的准确性。

血清尿素氮测定的原理嘿，朋友们！今天咱们来聊一聊血清尿素氮测定这个事儿。

你可能会想，这血清尿素氮测定是啥玩意儿啊？为啥要测定它呢？先别急，听我慢慢给你说。

你看啊，咱们人体就像一个超级复杂又神奇的小宇宙。

身体里的各种物质就像小宇宙里的各个星球，都有着自己独特的作用和运行轨迹。

血清尿素氮呢，它就是这个小宇宙里比较重要的一个“小星球”。

那血清尿素氮是怎么来的呢？这就和咱们吃的东西有关啦。

咱们吃进去蛋白质，就像给身体这个大工厂送进去了原材料。

这些蛋白质经过身体里各种“小工人”（酶啊之类的物质）的加工，在肝脏这个大车间里就会产生尿素。

这尿素啊，就像是加工后的产品，会随着血液循环这个“运输大道”跑到肾脏那里去。

肾脏呢，就像一个超级精密的过滤器，它会把尿素过滤出来，然后排出体外。

这血清尿素氮其实就是血液里尿素所含的氮元素的量。

现在咱们就来说说这血清尿素氮测定的原理。

这就好比你要数清楚一个仓库里某种货物的数量一样。

不过，这个仓库就是咱们的血液，货物就是尿素氮。

目前啊，测定血清尿素氮有好几种方法呢。

有一种方法叫二乙酰一肟法。

这个方法可有趣了。

你可以把它想象成一场化学反应的小聚会。

在这个聚会里，二乙酰一肟就像一个超级活跃的小嘉宾，它会和尿素氮来一场特殊的“互动”。

在酸性的环境下，就像给这个聚会提供了一个特定的氛围一样，二乙酰一肟和尿素氮会发生反应，生成一种红色的化合物。

这红色的化合物就像聚会后出现的一个新标志一样。

然后呢，我们就可以通过比色的方法，就像比较颜色的深浅来判断这个红色化合物的多少，从而得出血清尿素氮的含量。

我给你打个比方啊，就像你看颜料混合后的颜色深浅来判断颜料量的多少一样。

这时候你可能会问，那这个方法准不准呢？其实啊，只要按照正确的操作流程来，这个方法还是挺靠谱的呢。

还有一种方法叫脲酶法。

这个脲酶啊，它可是尿素的“克星”。

脲酶就像一把专门开尿素这个锁的钥匙。

当脲酶遇到尿素的时候，就会把尿素分解掉。

这个过程就像拆积木一样，脲酶把尿素这个“大积木”拆成了氨和二氧化碳。

第1篇一、实验目的1. 熟悉生物化学实验的基本操作步骤。

2. 掌握血清尿素测定的原理和方法。

3. 了解血清尿素在临床诊断中的意义。

二、实验原理尿素是哺乳动物体内蛋白质代谢的终产物，主要由肝脏合成，通过肾脏排泄。

血清尿素氮（BUN）是血液中尿素的浓度，是反映肾功能和体内氮代谢状况的重要指标。

本实验采用二乙酰-肟法测定血清尿素，该方法基于二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4,5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。

三、实验材料1. 血清样本：采集受试者空腹静脉血，分离血清。

2. 试剂：二乙酰试剂、强酸试剂、显色剂、空白试剂等。

3. 仪器：分光光度计、移液器、试管等。

四、实验方法1. 样本处理：取血清样本100μl，加入1ml强酸试剂，充分混匀后室温放置10分钟。

2. 显色：加入2ml显色剂，充分混匀，室温放置10分钟。

3. 测定：以空白试剂为参比，于540nm波长下测定吸光度。

4. 结果计算：根据标准曲线计算血清尿素含量。

五、实验结果1. 标准曲线绘制：将不同浓度的尿素标准品按照实验方法进行测定，绘制标准曲线。

2. 血清尿素含量测定：将受试者血清样本按照实验方法进行测定，得到吸光度值，根据标准曲线计算血清尿素含量。

六、结果分析1. 血清尿素正常范围为3.2～7.1mmol/L。

本实验受试者血清尿素含量在正常范围内，说明受试者肾功能正常。

2. 血清尿素升高可能见于以下情况：- 肾脏功能受损：如急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、肾小球肾炎等。

- 蛋白质摄入过多或分解代谢增强：如发热、创伤、肿瘤等。

- 肾前性少尿：如严重脱水、充血性心力衰竭、肝肾综合征等。

3. 血清尿素降低可能见于以下情况：- 蛋白质摄入减少：如营养不良、消化系统疾病等。

- 肝脏功能异常：如肝功能衰竭、肝脏病变等。

- 肾小球滤过功能下降：如肾小球肾炎、肾病综合征等。

七、实验讨论1. 本实验采用二乙酰-肟法测定血清尿素，该方法操作简便、准确度高，是临床常用的测定方法。

尿素氮的检测及临床意义一、概述1、尿素是蛋白质代谢的终末产物，血清尿素的浓度取决于机体蛋白质的分解代谢速度、食物中蛋白质摄取量及肾脏的排泄能力。

2、尿素分子量小且不与血浆蛋白结合，可自由通过肾小球滤过膜滤入原尿，约50% 可被肾小管重吸收，正常情况下30% ~40% 被肾小管重吸收，肾小管有少量排泌。

当肾实质受损害时，肾小球滤过率（GFR）降低，致使血尿素浓度增加，因此目前临床上多测定尿素，粗略观察肾小球的滤过功能。

二、检测方法尿素的测定方法大体上可归纳为酶学方法和化学方法。

1、酶学方法先用尿素酶将尿素分解成离子(NH4+)和碳酸根，然后用波氏反应或谷氨酸脱氢酶法，测定反应过程中的离子生成量。

2、化学方法是用二乙酰一肟直接与尿素反应，缩合成红色二嗪化合物，在 540nm 测定其吸光度值。

波氏法和二乙酰一肟法适用于手工法。

3、谷氨酸脱氢酶偶联速率法是在340nm 处通过监测NADH 吸光度值降低速率检测尿素量，较前两种方法有更高的准确度与灵敏度，是自动生化仪最常用的方法。

三、样本收集与处置1、血清和肝素抗凝血浆在二乙酰法、酶谷氨酸脱氢酶、离子导电法中均可应用。

2、氟化物能抑制脲酶反应，故不能用氟化物作为抗凝剂，肝素抗凝剂也不能在脲酶法中使用。

3、尿样本按照1:20到1:50稀释后，可用以上三种方法测定。

4、由于尿素易于被细菌降解，故血清和尿样本在分析前应放置在4~8℃的冰箱中。

四、参考区间成人血尿素：男：(20~59岁)3.1~8.0mmol/L，(60~79岁) 3.6 ~9.5mmol/L；女：(20~59岁)2.6 ~ 7.5mmol/L(60~79岁) 3.1~ 8.8mmol/L。

若表示为血(清)尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)，因为1分子尿素中含 2个氮原子，故应将上述数值乘以2即BUN。

五、临床意义1、肾前性疾病常见于剧烈呕吐、幽门梗阻、肠梗阻和长期腹泻等。

严重脱水、大量腹腔积液、心脏循环功能衰竭、肝肾综合征等导致的血容量不足、肾血流量减少灌注不足致少尿。

血清尿素测定的临床意义
血清尿素测定是一种用于检测血液中尿素含量的常规检查。

它的临床意义包括：
1. 评估肾脏功能：尿素是肾脏排泄代谢产物，因此血液中的尿素含量可以用于评估肾脏功能。

肾脏功能受到损害时，尿素的排泄量会减少，导致血液中的尿素含量增加。

2. 诊断肝脏疾病：肝脏功能受损时，血液中的氨基酸无法由肝脏转化为尿素，并排出体外，致使血液中的尿素含量降低。

因此，血清尿素测定可以用于评估肝脏功能。

3. 评估蛋白质代谢：尿素是蛋白质代谢的产物之一，因此血液中的尿素含量可以用于评估患者的蛋白质代谢情况。

4. 监测营养支持治疗：血清尿素测定可以用于监测营养支持治疗的效果。

因为营养支持治疗对患者的蛋白质代谢有影响，所以可以通过测定血液中的尿素含量来监测治疗的效果。

5. 诊断其他疾病：尿素水平异常升高或下降可能与其他疾病有关，如肾小球肾炎、肝硬化、水中毒等。

总之，血清尿素测定对于评估肾脏和肝脏功能、评估蛋白质代谢、监测营养支持
治疗效果等方面具有重要的临床意义。

测定尿素的临床意义
血尿素氮更能反映GFR（GFR即肾小球滤过率）功能，且测定方法更简便，因此逐渐成为常规方法。

尿素是氨基酸代谢终产物之一。

肝内生成的尿素进入血液循环后主要通过肾排泄，肾外途径（如汗液）排出量比例很小（低于5%），GFR减低时尿素排出受阻，血中尿素浓度即升高。

临床意义：
•在蛋白质摄入及体内分解代谢较恒定的状态下血清尿素浓度取决于从肾排出的速度。

因此在一定程度上血清尿素能反映GFR功能，但只有在有效肾单位约50%以上受损时，血清尿素才开始上升。

在肾功能不全代偿期Ccr（肌酐清除率）开始下降，但是血清尿素和尿尿素尚
无明显变化，到氮质血症阶段这两项指标开始明显增高。

•血清尿素升高除肾本身因素外，还有如下肾外因素：①肾前因素：肾血流量明显减少，GFR减退，导致尿素排出减少，血中浓度上升，常见于各种原因造成的脱水，急性失血，休克等有效循环容量急剧减少时。

②身后因素：见于尿路梗阻，如尿路结石、肿瘤、前列腺肿瘤或肥大等。

•蛋白质分解亢进：见于消化道出血、甲状腺功能亢进、烧伤、挤压综合征等
•生理性增高：见于高蛋白饮食后。

•生理性减少：见于妊娠期。

专注糖尿病。

血清尿素氮（BUN）谷氨酸脱氢酶测定法1.实验原理脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。

尿素被脲酶水解产氨。

在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD ＋。

NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。

本法是连续监测法。

脲酶尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－谷氨酸脱氢酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD＋+H2O2 标本：2.1 病人准备：血清无特殊要求。

要留取24小时尿样。

2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。

无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。

用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。

3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。

尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。

6. 实验材料6.1 试剂：申能尿素测定试剂盒（142 3107170 1 试剂1：6×64ml＋试剂2：6×16ml）6.1.1 试剂组成试剂1：Tris缓冲液pH7.8 120mmol/Lα-酮戊二酸7mmol/LADP 0.6mmol/L谷氨酸脱氢酶≥1000U/L脲酶≥6000U/L试剂2：NADH 0.25mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。

不要入口，吞下有害。

保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。

血清尿素氮的测定一.实验原理血清中尿素在氨基硫脲存在下，与二乙酰一肟在强酸溶液中共煮时，可生成双乙酰和尿素形成的红色复合物(二嗪衍生物)，其颜色深浅与尿素含量成正比，与同样处理的尿素标准液比色。

即可求得血清中尿素的含量。

由于反应在强酸中进行，所产生的羟胺是干挠物质，所以必须用氧化剂将其氧化除去。

在呈色反应中产生的有色复合物对光不稳定．加入氨基硫脲可增加其稳定性，还可提高尿素与双乙酰反应的灵敏度。

二.实验操作取试管3支，注明空白管、标准管、测定管，按下表操作540nm比色，以空白管调零，测定各管吸光度值。

三.计算血清尿素氮（mmol / L ）=——————— X 17.85 测定管吸光度标准管吸光度正常值参考范围3．57～14．28mmol ／L四.临床意义血液中非蛋白含氮化合物包括尿素、尿酸、肌酸、肌酐、 胆红素及氨等。

其中尿素含量约占l ／3～1／2。

尿素是蛋白质代谢的产物．通过肾脏排出，故测血清尿素氮可作为检测肾脏功能的试验，并且其增高程度与病变的严重程度呈平行关系。

五.试剂1.尿素氮试剂：蒸馏水lOOml ，浓硫酸44ml ，85％磷酸66ml ，冷却至室温后，加氨基硫脲50mg ，硫酸镉(3CdSO ４·8H 2O)2g ，溶解后稀释至1000ml 。

2.20g ／L 二乙酰一肟试剂：称取二乙酰一肟20g ，加入蒸馏水约900ml ，溶解后稀释至1000ml.３.尿素氮标准贮存液(357mmol ／L)：称取尿素1.072g 溶解于蒸馏水中定容至1000ml 。

４.尿素氮标准应用液(17.85mmol ／L)；取贮存液5ml ，加蒸馏水至100ml 。

一、实验目的1. 熟悉血清尿素氮测定的原理和方法。

2. 掌握家兔血清采集和处理技术。

3. 学习使用生化分析仪进行血清尿素氮的定量测定。

4. 了解血清尿素氮在动物生理和疾病诊断中的意义。

二、实验原理血清尿素氮（Blood Urea Nitrogen，BUN）是血液中尿素氮的浓度，是反映肾脏功能的重要指标之一。

血液中的尿素氮主要由肝脏合成，通过肾脏排泄。

当肾脏功能受损时，尿素氮的排泄减少，导致血液中尿素氮浓度升高。

本实验采用酶偶联法测定家兔血清尿素氮。

该方法利用尿素酶催化尿素分解产生氨，氨与水合酶反应生成亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下与N-（1-萘基）乙二胺反应生成红色化合物，通过测定该化合物的吸光度，计算出血清中尿素氮的浓度。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 家兔血清- 尿素氮试剂盒- 10%三氯乙酸- 水合酶- N-（1-萘基）乙二胺- 酸性溶液- 生化分析仪2. 实验仪器：- 采血器- 移液器- 离心机- 酶标仪四、实验方法1. 采集家兔血清：- 将家兔固定在实验台上，使用采血器采集家兔耳缘静脉血。

- 将采集到的血液加入含有10%三氯乙酸的试管中，混匀后离心分离血清。

2. 测定血清尿素氮：- 根据试剂盒说明书，将血清加入反应杯中。

- 加入适量的水合酶和N-（1-萘基）乙二胺，混匀。

- 将反应杯放入生化分析仪中，设定相应的参数进行测定。

3. 结果计算：- 根据生化分析仪显示的吸光度，查表得到相应的尿素氮浓度。

五、实验结果实验过程中，采集到家兔血清样本后，按照实验方法进行血清尿素氮测定。

结果显示，家兔血清尿素氮浓度为X mmol/L。

六、实验讨论1. 血清尿素氮是反映肾脏功能的重要指标，本实验通过酶偶联法测定家兔血清尿素氮，结果可靠。

2. 在实验过程中，应严格按照操作规程进行，确保实验结果的准确性。

3. 血清尿素氮浓度升高可能见于多种疾病，如肾脏疾病、肝脏疾病、心脏疾病等。

本实验为临床诊断提供了一定的参考依据。