抗原抗体反应的原理课件
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图解抗原抗体反应类型和原理课件
形成的沉淀物少，上清液中可测出游离的抗体或抗
原的现象。
➢带现象包前括带(prozone)抗体过量时称为。
后代(postzone）抗原过量时称为。
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四、阶段性
第一阶段：抗原与抗体发生特异性 结合阶段
特点：反应快 第二阶段：反应可见阶段
特点：反应时间较长
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第三节 抗原抗体反应影响因素
注意：解离后的抗原或抗体仍然保持其原有生物活性
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三、比例性（proportionality）
1、比例性是指抗原与抗体发生可见反应 遵循一定的量比关系。 2、以絮状沉淀实验为例，受抗原抗体比 例性的影响非常明显。
3、根据所形成的沉淀物及抗原抗体比例 关系绘制反应曲线。
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3
教学内容：
第一节 抗原抗体反应的原理 第二节 抗原抗体反应的特点 第三节 影响抗原抗体反应的因素 第四节 免疫学检测技术的类型
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4
第一节 抗原抗体反应的原理
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5
一、抗原抗体的亲和力和亲合力
* 亲和力（affinity）：是抗体分 子上一个抗原结合点与相应的抗原决 定簇之间的相适应而结合的强度，是 抗原与抗体间固有的结合力。
2、原因：抗原抗体的结合是分子表面的非共价键 结合，因此形成的复合物不牢固。
3、抗原抗体反应动态平衡式如下：
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4、决定抗原抗体解离的因素
（1）抗体与相应抗原的亲合力。 亲合力低的抗体与抗原形成的复合物较易解离。
（2）环境因素对复合物的影响。 PH过高或过低、增加离子强度均可破坏
抗原抗体反应的课件ppt
比例性
抗原抗体反应具有比例性，即当抗原和抗体比例适当时，反应最完全，形成的免疫复合物 最多。当抗原或抗体过量时，反应则不完全，形成的免疫复合物也较少。这种比例性是由 抗原和抗体的浓度以及它们之间的比例关系决定的。
02
抗原抗体反应机制
抗原识别与结合机制
抗原表位识别
T细胞通过TCR识别抗原肽-MHC分子复合物，B细胞通过BCR识 别抗原表位。
抗原抗体反应特点
特异性
抗原抗体反应具有高度的特异性，即一种抗体只能与相应的抗原发生反应，形成免疫复合 物。这种特异性是由抗原决定簇和抗体结合部位的互补性决定的。
可逆性
抗原抗体反应是可逆的，即在一定条件下，免疫复合物可以解离成游离的抗原和抗体，再 次相遇时仍可重新结合。这种可逆性是由抗原抗体结合的亲和力决定的，亲和力越高，结 合越牢固，解离越困难。
优化抗体药物设计
通过机器学习技术对抗体进行优化设计，提高抗 体的亲和力和特异性。
抗原抗体反应模拟
利用深度学习技术模拟抗原抗体反应过程，为药 物筛选和开发提供新工具。
THANKS
感谢观看
自身免疫性疾病检测及诊断
01
02
03
检测方法
介绍常见的自身免疫性疾 病相关抗体检测方法，如 ELISA、免疫印迹技术等 。
临床意义
阐述自身抗体检测在自身 免疫性疾病诊断、病情监 测和预后评估中的应用价 值。
病例分析
通过具体病例展示自身免 疫性疾病抗体检测的临床 应用，如系统性红斑狼疮 、类风湿性关节炎等。
药物开发中抗原抗体反应的意义
01
阐述药物开发中抗原抗体反应的研究意义，包括药物安全性、
有效性等方面。
药物抗原性的研究方法
02
抗原抗体反应具有比例性，即当抗原和抗体比例适当时，反应最完全，形成的免疫复合物 最多。当抗原或抗体过量时，反应则不完全，形成的免疫复合物也较少。这种比例性是由 抗原和抗体的浓度以及它们之间的比例关系决定的。
02
抗原抗体反应机制
抗原识别与结合机制
抗原表位识别
T细胞通过TCR识别抗原肽-MHC分子复合物，B细胞通过BCR识 别抗原表位。
抗原抗体反应特点
特异性
抗原抗体反应具有高度的特异性，即一种抗体只能与相应的抗原发生反应，形成免疫复合 物。这种特异性是由抗原决定簇和抗体结合部位的互补性决定的。
可逆性
抗原抗体反应是可逆的，即在一定条件下，免疫复合物可以解离成游离的抗原和抗体，再 次相遇时仍可重新结合。这种可逆性是由抗原抗体结合的亲和力决定的，亲和力越高，结 合越牢固，解离越困难。
优化抗体药物设计
通过机器学习技术对抗体进行优化设计，提高抗 体的亲和力和特异性。
抗原抗体反应模拟
利用深度学习技术模拟抗原抗体反应过程，为药 物筛选和开发提供新工具。
THANKS
感谢观看
自身免疫性疾病检测及诊断
01
02
03
检测方法
介绍常见的自身免疫性疾 病相关抗体检测方法，如 ELISA、免疫印迹技术等 。
临床意义
阐述自身抗体检测在自身 免疫性疾病诊断、病情监 测和预后评估中的应用价 值。
病例分析
通过具体病例展示自身免 疫性疾病抗体检测的临床 应用，如系统性红斑狼疮 、类风湿性关节炎等。
药物开发中抗原抗体反应的意义
01
阐述药物开发中抗原抗体反应的研究意义，包括药物安全性、
有效性等方面。
药物抗原性的研究方法
02
临床免疫学抗原抗体反应
第二章抗原抗体反应本章考点1概.述2抗.原抗体反应原理3抗.原抗体反应的特点4抗.原抗体反应的影响因素5抗.原抗体反应的类型第一节抗原抗体反应原理抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇（表位）和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性。
这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的。
除两者分子构型高度互补外，抗原表位和抗体超变区必须密切接触，才有足够的结合力。
抗原抗体反应可分为两个阶段：第一阶段为抗原与抗体发生特异性结合的阶段，此阶段反应快，仅需几秒至几分钟，但不出现可见反应；第二阶段为可见反应阶段，这一阶段抗原抗体复合物在适当温度、电解质和补体影响下，出现沉淀、凝集、细胞溶解、补体结合介导的肉眼可见的反应，此阶段反应慢，往往需要数分钟至数小时。
在血清学反应中，以上两阶段往往不能严格分开，往往受反应条件（如温度、电解质、抗原抗体比例等）的影响。
（一）抗原抗体结合力抗原抗体是一种非共价的结合，不形成共价键，需要四种分子间引力参与。
1静.电引力：又称库伦引力。
是因抗原、抗体带有相反电荷的氨基与羧基基团间相互吸引的能力，这种吸引力的大小和两个电荷间的距离平方成反比。
两个电荷距离越近，静电引力越大；2范.德华引力：这是原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力，是抗原、抗体两个大分子外层轨道上电子相互作用时，两者电子云中的偶极摆动而产生的引力。
这种引力的能量小于静电引力；3氢.键结合力：是供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力。
其结合力较强于范德华引力；4疏.水作用力：水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。
当抗原表位和抗体超变区靠近时，相互间正负极性消失，周围亲水层也立即失去，从而排斥两者间的水分子，使抗原抗体进一步吸引和结合。
疏水作用力是这些结合力中最强的，因而对维系抗原抗体结合作用最大。
图10抗原与抗体的结合力（二）抗原抗体的亲和性和亲和力亲和性指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定簇之间相适应而存在的引力，它是抗原抗体间固有的结合力。
抗原抗体反应知识讲义PPT(63张)
特异性示意图
*交叉反应(cross reaction) 两种不同的抗原 物质具有部分相同或类似结构的抗原决定簇
(共同抗原)，则可与彼此相应的抗体反应。
二、比例性（proportionality）
*最适比:是指抗原与抗体发生可见反应，需遵循 一定的量比关系，只有当二者浓度比例适当时， 才出现可见反应。
1．抗原决定簇又称表位（epitope），是指抗原性物质 表面决定该抗原特异性的特殊化学基团，是免疫应答和免 疫反应具有特异性的物质基础。
2．抗原决定簇是很小的，其大小相当于相应抗体的 结合部位，它们可由5-7个氨基酸、单糖或核苷酸残基组成。
3．抗原结合价：是指能与抗体分子结合的抗原决定 簇的总数。每一种半抗原可理解为单一的抗原决定簇，而 天然抗原含有很多不同的抗原决定簇，它是带有大量多种 "天然"半抗原的大分子。
应速度快，几秒钟或几分钟即可完成，但不 出现肉眼可见反应。
第二阶段为可见阶段，表现为凝集、沉淀、
补体结合等反应，本阶段有两个特点，一是 反应进行慢，需要几分钟、几十分钟或更长。 其二是受电解质、温度、酸碱度等多种因素 影响。
二、基本条件：
结合力 亲和力和亲合力 亲水胶体转化为疏水胶体
一、抗原抗体结合力
• 当抗原与抗体结合后，表面电荷减少，水化 层变薄；而且由于抗原抗体复合物形成后， 与水接触的表面积减少，由亲水胶体转化为 疏水胶体。
• 在电解质作用下，各疏水胶体之间靠拢，形 成可见的抗原抗体复合物。
亲水胶体转化为疏水胶体示意图
转化
NaCl
亲水胶体
疏水胶体
可见反应
第二节 抗原抗体反应的特点
特异性 比例性 可逆性 阶段性
絮状沉淀试验
抗原抗体反应的原理
抗原抗体反应的原理
抗原抗体反应是一种免疫学相关的生物分子相互作用过程，其中抗原指的是刺激免疫系统产生抗体的分子，而抗体则是由免疫系统产生的一类蛋白质。
抗原抗体反应的原理是基于抗原与抗体之间的特异性相互作用。
抗原通常是一种能够识别并与抗体结合的分子，可以是蛋白质、多糖或小分子化合物等。
抗体则是由身体免疫系统产生的一类高度特异性的蛋白质，由B淋巴细胞分泌。
抗体的产生是通
过体内的抗原刺激，促使B细胞分化成浆细胞，从而产生大
量的抗体。
抗原抗体反应发生的过程可以分为三个关键步骤：识别、结合和效应。
首先，抗体通过其变量区域中的抗原结合位点（paratope）与
特定的抗原上的抗原决定簇（epitope）相互识别。
这种识别是基于抗原决定簇的三维结构与抗体变量区域的互补性。
然后，一旦抗原与抗体成功结合，它们形成一个稳定的抗原抗体复合物。
这个过程是可逆的，可以通过改变温度、pH或离
子强度等条件来解离复合物。
最后，抗原抗体复合物的形成可以引发一系列生物学效应。
这些效应包括沉淀、凝集、激活免疫细胞、中和毒素、抑制病原体侵入等。
抗原抗体反应在免疫识别、免疫应答和免疫调控等重要的免疫过程中起着关键的作用。
总的来说，抗原抗体反应的原理是基于抗原与抗体之间高度特异性的结合。
这种相互作用是通过抗体的变量区域与抗原的决定簇的互补性来实现的。
抗原抗体反应的理解对于诊断和治疗疾病，以及研究免疫反应机制等方面具有重要意义。
第一章抗原抗体反应讲解学习
三、亲水胶体转化为疏水胶体
抗体和大多数抗原同属蛋白质。在通常的 血清学反应条件下均带有负电荷，使极化 的水分子在其周围形成水化层，成为亲水 胶体，因此蛋白质不会自行凝集出现沉淀。 当Ag与Ab结合后，表面电荷减少，水化层 变薄；而且由于Ag-Ab复合物形成后，与水 接触的表面积减少，由亲水胶体转化为疏 水胶体。此时在电解质(如NaCl)的作用下， 使各疏水胶体之间进一步靠拢、沉淀，形 成可见的Ag-Ab复合物。
抗原抗体结合力示意图
l. 静电引力
➢ 抗原和抗体分子带有相反电荷的氨基和羧 基基团之间相互的引力，称为静电引力， 又称库伦引力。
➢例如，抗体分子上带电荷的碱性氨基酸的 游离氨基(-NH3+)和酸性氨基酸的游离羧基 (-COO-)可与抗原分子上带相反电荷的对应 基团相互吸引。这种引力的大小与两个相 互作用基团间的距离平方成反比。
2.范德华引力
➢ 抗原和抗体相互接近时，由于分子的极 化作用而出现的引力，称范德华引力。
➢结合力的大小与两个相互作用基团的极化 程度的乘积成正比、与它们之间距离的 7 次方成反比，键能约为4.2-12.5kJ/moL。 这种引力的能量小于静电引力。
3.氢键结合力
➢ 供氢体上的氢原子与受氢体原子间的引 力。在抗原抗体反应中，羧基、氨基和 羟基是主要供氢体，而羧基氧、羧基碳 和肽键氧等原子是主要受氢体。
➢氢键结合力与供氢体和受氢体之间距离 的6次方成反比，键能约20.9kJ/mol。
4.疏水作用力
➢ 两个疏水基团在水溶液中相互接触时，由 于对水分子排斥而趋向聚集的力称为疏水 作用力，或称为疏水键。
➢当抗原抗体反应时，抗原决定簇与抗体上 的结合点靠近，互相间正、负极性消失， 由静电作用形成的亲水层立即失去，从而 促进抗原与抗体的相互吸引而结合。疏水 作用力在抗原抗体反应中的结合是很重要 的。提供的作用力最大，约占总结合力的 50%。
抗原抗体反应的原理PPT课件
免疫细胞（Immune cells） 泛指所有参与免疫应答及与免疫应答活动相关的细胞。
免疫活性细胞（Immune competent cell，ICC） 能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、分化并形成效
应产物的淋巴细胞。
第7页/共50页
免疫细胞的类型
红细胞 血小板 肥大细胞 中性粒细胞 巨噬细胞 树突状细胞 浆细胞 T细胞 NK细
半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2 + 蛋白质- NH2 半抗原-CO- NH -蛋白质 + HO-CH2CH（CH3）2
半抗原与载体直接联接
第43页/共50页
琥珀酸酐法
OO 半抗原-CH2 –OH + C-O-C
CH3 CH3
O 半抗原-CH2 –O-C-(CH2 ) 2-COOH
半抗原与载体间接联接
第4页/共50页
第二节 有关免疫学基本概念
一、抗原的概念与属性 二、免疫细胞的概念与分类 三、免疫应答的概念与过程
第5页/共50页
抗原的概念与属性
免疫原性——可识别、可反应性 （诱导机体产生免疫应答的特性） 免疫反应性 ——选择结合性 （和免疫应答产物特异性结合的特性）
第6页/共50页
免疫细胞的概念与分类
第8页/共50页
免疫应答的概念与过程
免疫应答（immune response） 免疫系统接触抗原后，免疫细胞对抗原进行识别；并使特异性淋巴细胞
活化、增殖；表现出免疫效应的过程。 免疫应答的阶段 1、抗原识别阶段（antigen-recognizing phase） 2、淋巴细胞活化阶段（lymphocyte-activating phase） 3、抗原清除阶段（antigen-eliminating phase）
免疫活性细胞（Immune competent cell，ICC） 能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、分化并形成效
应产物的淋巴细胞。
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免疫细胞的类型
红细胞 血小板 肥大细胞 中性粒细胞 巨噬细胞 树突状细胞 浆细胞 T细胞 NK细
半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2 + 蛋白质- NH2 半抗原-CO- NH -蛋白质 + HO-CH2CH（CH3）2
半抗原与载体直接联接
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琥珀酸酐法
OO 半抗原-CH2 –OH + C-O-C
CH3 CH3
O 半抗原-CH2 –O-C-(CH2 ) 2-COOH
半抗原与载体间接联接
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第二节 有关免疫学基本概念
一、抗原的概念与属性 二、免疫细胞的概念与分类 三、免疫应答的概念与过程
第5页/共50页
抗原的概念与属性
免疫原性——可识别、可反应性 （诱导机体产生免疫应答的特性） 免疫反应性 ——选择结合性 （和免疫应答产物特异性结合的特性）
第6页/共50页
免疫细胞的概念与分类
第8页/共50页
免疫应答的概念与过程
免疫应答（immune response） 免疫系统接触抗原后，免疫细胞对抗原进行识别；并使特异性淋巴细胞
活化、增殖；表现出免疫效应的过程。 免疫应答的阶段 1、抗原识别阶段（antigen-recognizing phase） 2、淋巴细胞活化阶段（lymphocyte-activating phase） 3、抗原清除阶段（antigen-eliminating phase）
抗原抗体反应的原理PPT讲稿
半抗原与载体的联接
1、连接方式：物理法（吸附） 化学法
2、化学连接方法： 直接联接法： 间接联接法：
碳化二亚胺法
蛋白质-COO— + R-N+=CN-R` H-N+-R
蛋白质-COO-C-NH-R` + 半抗原-NH2 O
蛋白质-C-NH-半抗原 + R-NH-CO-NH R`
半抗原与载体直接联接
一氯醋酸钠法
半抗原-
- OH + Cl- CH2 - COONa
半抗原-
- CH2 - COOH
半抗原与载体间接联接
重氮化的对氨基苯甲酸法
HOOC-
-NH2 + NaNO2
HOOC-
-N=N
半抗原-
- OH + HOOC-
-N=N
半抗原-
-N=N-
OH
-COOH
半抗原与载体间接联接
本章小结
1、免疫学技术的应用范畴 2、免疫学的基本概念 3、抗原抗体反应的原理、特点、影响因素 4、抗原制备的方法
处理与粉碎
组织粉碎：机械、生物 细胞破碎：物理、化学、生物
蛋白质分离
选择性沉淀：盐析 有机溶剂沉淀 水溶性非离子型聚合物沉淀
透析技术：
超滤技术：
单一组分提取
层析技术：凝胶过滤 离子交换 亲和层析
离心技术：差速离心 密度梯度离心
电泳技术：电泳洗脱 等电聚焦
凝胶层析（分子筛）
— —
+ + ++
一、抗原抗体反应的原理 二、抗原抗体反应的特点 三、影响抗原抗体反应的因素
抗原抗体反应的原理
1、抗原抗体结合的作用力 2、抗原抗体结合物析出原因
《抗原抗体反应》课件
夹心反应
总结词
指抗原和抗体结合后，其复合物可与其 他物质结合，形成夹心结构所引发的反 应。
VS
详细描述
在夹心反应中，抗原和抗体结合后，其复 合物可以与另一种物质结合，形成一种夹 心的结构。这种反应可以显著增加反应的 灵敏度，常用于检测低浓度的抗原。例如 在酶联免疫吸附试验（ELISA）中，酶标 板上的抗体与抗原结合后，再与酶标记的 抗体结合，形成夹心结构。
抗体
指由抗原刺激机体免疫系统产生的，能与相应抗原特异性结合的 球蛋白。
抗原抗体的特性
特异性
抗原和抗体之间的结合具有高度的特异性，即一种 抗原只能与相应的抗体发生结合反应。
亲和力
抗原和抗体之间的结合力称为亲和力，亲和力的大 小决定了抗原抗体反应的强弱。
可逆性
抗原抗体结合后形成的复合物在一定条件下可以解 离，即抗原抗体反应具有可逆性。
凝集反应
观察抗原抗体结合后颗粒物的凝集情况，判断反 应结果。
荧光免疫技术
利用荧光物质标记抗体或抗原，通过荧光信号的 强弱判断反应结果。
06
抗原抗体反应的注意事项
实验前的准备
实验材料准备
确保抗原和抗体溶液的浓 度和纯度，选择适当的标 记物如荧光染料、酶等。
实验设备检查
检查实验所需仪器设备， 如离心机、显微镜、酶标 仪等，确保其正常运行。
02
抗原抗体反应的原理
抗原抗体的结合力
02
01
03
静电吸引
抗原和抗体带有相反的电荷，通过静电吸引相互结合 。
氢键
抗原和抗体中的极性基团形成氢键，增强结合力。
疏水相互作用
抗原和抗体的非极性基团相互靠近，形成疏水键。
抗原抗体的亲和力
《抗原抗体反应原理》课件
免疫应答机制研究
通过研究抗原与抗体的相互作用，深 入了解免疫应答的机制和过程，为疫 苗研发、免疫治疗等提供理论基础。
自身免疫性疾病机制研究
通过对自身抗体与自身抗原的反应进 行研究，揭示自身免疫性疾病的发病 机制，为治疗提供新思路。
免疫细胞功能分析
利用抗原抗体反应检测免疫细胞表面 的抗原标志，分析免疫细胞的功能和 亚型，为免疫学研究提供有力工具。
抗体的纯化
通过一系列分离纯化技术，去除血清中的其 他成分，提高抗体的纯度，常用的方法有离 心、凝胶电泳、亲和层析、离子交换层析等 。
抗原抗体反应的检测方法
沉淀反应
抗原和抗体结合后，在一定条 件下形成肉眼可见的沉淀物， 常用的方法有单向免疫扩散、 双向免疫扩散、对流免疫电泳 等。
凝集反应
抗原和抗体结合后，引起颗粒 性抗原的凝集现象，常用的方 法有直接凝集、间接凝集等。
Байду номын сангаас
抗原抗体的分类
按作用对象分类
外源性抗原和内源性抗原。外源性抗原是指来自机体外部的抗原，如细菌、病 毒等；内源性抗原是指来自机体内部的抗原，如变性或损伤的组织细胞。
按功能分类
完全抗原和半抗原。完全抗原是指具有免疫原性和反应原性的抗原物质，能够 刺激机体产生免疫应答；半抗原是指仅有反应原性而无免疫原性的抗原物质， 不能刺激机体产生免疫应答。
影响因素
亲和力受到抗原和抗体分子间的电荷分布、空间构象、结合位点数目以及溶液环 境等多种因素的影响。
抗原抗体的特异性
特异性的含义
特异性是指抗原和抗体结合的专一性，即一种抗原只能与相 应的抗体发生特异性结合。
决定因素
抗原抗体的特异性是由其分子表面的化学基团决定的，这些 化学基团在空间构象上互补，使得抗原和抗体能精确地结合 在一起。
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离子交换层析
亲和层析
抗原纯度鉴定
方法：层析性质测定 电泳法 免疫法
指标：电泳纯 免疫纯
第三节 半抗原免疫原制备的方法
一、载体的选择 二、半抗原与载体的联接
载体的选择
蛋白质载体：BSA、HAS、OVA、KLH 聚合多肽载体：多聚赖氨酸 高分子聚合物载体：PVP、羧甲基纤维素
一、抗原的概念与属性 二、免疫细胞的概念与分类 三、免疫应答的概念与过程
抗原的概念与属性
免疫原性——可识别、可反应性 （诱导机体产生免疫应答的特性）
免疫反应性 ——选择结合性 （和免疫应答产物特异性结合的特性）
免疫细胞的概念与分类
免疫细胞（Immune cells） 泛指所有参与免疫应答及与免疫应答活动相关
半抗原-CO- NH -蛋白质 + HO-CH2CH（CH3）2
半抗原与载体直接联接
琥珀酸酐法
OO 半抗原-CH2 –OH + C-O-C
CH3 CH3
O 半抗原-CH2 –O-C-(CH2 ) 2-COOH
半抗原与载体间接联接
O-（羟甲基）羟胺法
半抗原-C=O +H2 N-O- CH2 - COOH
抗原制备的主要技术途径
天然抗原——分离、纯化 半抗原——人工合成、载体联接 抗原肽—— 合成、基因工程制备
第二节 完全抗原/免疫原的制备方法
一、颗粒性抗原的制备 二、可溶性抗原的制备
颗粒性抗原的制备
1、采集、分离抗原 2、无害化处理
可溶性抗原的制备与纯化
1、处理与粉碎 2、蛋白质分离 3、单一组分提取 4、抗原纯度鉴定
半抗原与载体的联接
1、连接方式：物理法（吸附） 化学法
2、化学连接方法： 直接联接法： 间接联接法：
碳化二亚胺法
蛋白质-COO— + R-N+=CN-R`
H-N+-R 蛋白质-COO-C-NH-R` + 半抗原-NH2
O 蛋白质-C-NH-半抗原 + R-NH-CO-NH
R`
半抗原与载体直接联接
特异性与敏感性的关系
特异性高、敏感性低 敏感性高、特异性低
第一节 抗原/免疫原制备的基本概念
一、抗原制备的目的 二、抗原的“纯度” 三、抗原制备的主要技术途径
抗原制备的目的
免疫原：激活T、B细胞 半抗原：检测相应抗体
抗原的“纯度”
免疫原：保留足够的可被T、B细胞 识别的抗原决定簇
半抗原：尽可能减少影响反应特异 性的抗原决定簇
处理与粉碎
组织粉碎：机械、生物 细胞破碎：物理、化学、生物
蛋白质分离
选择性沉淀：盐析 有机溶剂沉淀 水溶性非离子型聚合物沉淀
透析技术：
超滤技术：
单一组分提取
层析技术：凝胶过滤 离子交换 亲和层析
离心技术：差速离心 密度梯度离心
电泳技术：电泳洗脱 等电聚焦
凝胶层析（分子筛）
— —
+ + ++
使特异性淋巴细胞活化、增殖；表现出免疫效应的过程。
免疫应答的阶段 1、抗原识别阶段（antigen-recognizing phase） 2、淋巴细胞活化阶段（lymphocyte-activating phase） 3、抗原清除阶段（antigen-eliminating phase）
第三节 抗原抗体反应的基本原理
网格学说（lattice theory）
抗原抗体反应的影响因素
1、电解质 2、酸碱度（pH值6-8） 3、温度（37-42。C）
第四节 免疫学检测技术的评价
一、评价标准 二、特异性与敏感性的关系
评价标准
Specificity（特异） Sensitivity（敏感） Simplicity（简便） Safety（安全） Saving（节约）
抗原抗体反应的原理
第一节 免疫学技术的范畴与应用
一、免疫学技术的范畴 二、免疫学技术的应用特点
免疫学技术的范畴
1、对具有免疫活性物质的定性、 定量测定
2、对免疫系统的组成成分的数量、 状态的测定
免疫学技术的应用特点
1、对象——“包罗万象” 2、方法——“兼容并蓄”
第二节 有关免疫学基本概念
的细胞。
免疫活性细胞（Immune competent cell，ICC） 能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、
分化并形成效应产物的淋巴细胞。
免疫细胞的类型
红细胞 血小板 肥大细胞 中性粒细胞 巨噬细胞 树突状细胞 浆细胞 T细胞 NK细胞
免疫应答的概念与过程
免疫应答（immune response） 免疫系统接触抗原后，免疫细胞对抗原进行识别；并
一、抗原抗体反应的原理 二、抗原抗体反应的特点 三、影响抗原抗体反应的因素
抗原抗体反应的原理
1、抗原抗体结合的作用力 2、抗原抗体结合物析出原因
引起抗原抗体结合的作用力
1、电荷引力（库仑引力） 2、电子云引力（Van der Waals力） 3、氢键结合力 4、疏水作用力
抗原抗体结合物析出的原因
半抗原- -N=N- -COOH
OH
半抗原与载体间接联接
本章小结
1、免疫学技术的应用范畴 2、免疫学的基本概念 3、抗原抗体反应的原理、特点、影响因素 4、抗原制备的方法
+++ ——+— —
+++———
———+++
——— ++—+ +
电解质
析出
抗原抗体性
特异性
特异性反应
交叉反应
无反应
抗原A
抗原B
抗原C
可逆性
K（亲和常数）=
Ag+Ab Ag Ab
适合比例性
抗体含量
抗原含量
前带
等价带
后带
抗体过剩
抗体抗体比例合适
抗原过剩
半抗原-C=N-O- CH2 - COOH
半抗原与载体间接联接
一氯醋酸钠法
半抗原-
- OH + Cl- CH2 - COONa
半抗原-
- CH2 - COOH
半抗原与载体间接联接
重氮化的对氨基苯甲酸法
HOOC-
-NH2 + NaNO2
HOOC- -N=N
半抗原- - OH + HOOC- -N=N
戊二醛法
蛋白质- NH2 + 半抗原-NH2 + COH-（CH2 ） 3 - COH 蛋白质-N=CH-（CH2 ） 3 – CH=N-半抗原
半抗原与载体直接联接
氯甲酸异丁酯法
半抗原-COOH + Cl-COO-CH2 CH（CH3）2 OO
半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2 + 蛋白质- NH2
+ —
—
+
+
+ +
+
— —
—
— —
+ +
+ + +
离子交换层析
亲和层析
抗原纯度鉴定
方法：层析性质测定 电泳法 免疫法
指标：电泳纯 免疫纯
第三节 半抗原免疫原制备的方法
一、载体的选择 二、半抗原与载体的联接
载体的选择
蛋白质载体：BSA、HAS、OVA、KLH 聚合多肽载体：多聚赖氨酸 高分子聚合物载体：PVP、羧甲基纤维素
一、抗原的概念与属性 二、免疫细胞的概念与分类 三、免疫应答的概念与过程
抗原的概念与属性
免疫原性——可识别、可反应性 （诱导机体产生免疫应答的特性）
免疫反应性 ——选择结合性 （和免疫应答产物特异性结合的特性）
免疫细胞的概念与分类
免疫细胞（Immune cells） 泛指所有参与免疫应答及与免疫应答活动相关
半抗原-CO- NH -蛋白质 + HO-CH2CH（CH3）2
半抗原与载体直接联接
琥珀酸酐法
OO 半抗原-CH2 –OH + C-O-C
CH3 CH3
O 半抗原-CH2 –O-C-(CH2 ) 2-COOH
半抗原与载体间接联接
O-（羟甲基）羟胺法
半抗原-C=O +H2 N-O- CH2 - COOH
抗原制备的主要技术途径
天然抗原——分离、纯化 半抗原——人工合成、载体联接 抗原肽—— 合成、基因工程制备
第二节 完全抗原/免疫原的制备方法
一、颗粒性抗原的制备 二、可溶性抗原的制备
颗粒性抗原的制备
1、采集、分离抗原 2、无害化处理
可溶性抗原的制备与纯化
1、处理与粉碎 2、蛋白质分离 3、单一组分提取 4、抗原纯度鉴定
半抗原与载体的联接
1、连接方式：物理法（吸附） 化学法
2、化学连接方法： 直接联接法： 间接联接法：
碳化二亚胺法
蛋白质-COO— + R-N+=CN-R`
H-N+-R 蛋白质-COO-C-NH-R` + 半抗原-NH2
O 蛋白质-C-NH-半抗原 + R-NH-CO-NH
R`
半抗原与载体直接联接
特异性与敏感性的关系
特异性高、敏感性低 敏感性高、特异性低
第一节 抗原/免疫原制备的基本概念
一、抗原制备的目的 二、抗原的“纯度” 三、抗原制备的主要技术途径
抗原制备的目的
免疫原：激活T、B细胞 半抗原：检测相应抗体
抗原的“纯度”
免疫原：保留足够的可被T、B细胞 识别的抗原决定簇
半抗原：尽可能减少影响反应特异 性的抗原决定簇
处理与粉碎
组织粉碎：机械、生物 细胞破碎：物理、化学、生物
蛋白质分离
选择性沉淀：盐析 有机溶剂沉淀 水溶性非离子型聚合物沉淀
透析技术：
超滤技术：
单一组分提取
层析技术：凝胶过滤 离子交换 亲和层析
离心技术：差速离心 密度梯度离心
电泳技术：电泳洗脱 等电聚焦
凝胶层析（分子筛）
— —
+ + ++
使特异性淋巴细胞活化、增殖；表现出免疫效应的过程。
免疫应答的阶段 1、抗原识别阶段（antigen-recognizing phase） 2、淋巴细胞活化阶段（lymphocyte-activating phase） 3、抗原清除阶段（antigen-eliminating phase）
第三节 抗原抗体反应的基本原理
网格学说（lattice theory）
抗原抗体反应的影响因素
1、电解质 2、酸碱度（pH值6-8） 3、温度（37-42。C）
第四节 免疫学检测技术的评价
一、评价标准 二、特异性与敏感性的关系
评价标准
Specificity（特异） Sensitivity（敏感） Simplicity（简便） Safety（安全） Saving（节约）
抗原抗体反应的原理
第一节 免疫学技术的范畴与应用
一、免疫学技术的范畴 二、免疫学技术的应用特点
免疫学技术的范畴
1、对具有免疫活性物质的定性、 定量测定
2、对免疫系统的组成成分的数量、 状态的测定
免疫学技术的应用特点
1、对象——“包罗万象” 2、方法——“兼容并蓄”
第二节 有关免疫学基本概念
的细胞。
免疫活性细胞（Immune competent cell，ICC） 能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、
分化并形成效应产物的淋巴细胞。
免疫细胞的类型
红细胞 血小板 肥大细胞 中性粒细胞 巨噬细胞 树突状细胞 浆细胞 T细胞 NK细胞
免疫应答的概念与过程
免疫应答（immune response） 免疫系统接触抗原后，免疫细胞对抗原进行识别；并
一、抗原抗体反应的原理 二、抗原抗体反应的特点 三、影响抗原抗体反应的因素
抗原抗体反应的原理
1、抗原抗体结合的作用力 2、抗原抗体结合物析出原因
引起抗原抗体结合的作用力
1、电荷引力（库仑引力） 2、电子云引力（Van der Waals力） 3、氢键结合力 4、疏水作用力
抗原抗体结合物析出的原因
半抗原- -N=N- -COOH
OH
半抗原与载体间接联接
本章小结
1、免疫学技术的应用范畴 2、免疫学的基本概念 3、抗原抗体反应的原理、特点、影响因素 4、抗原制备的方法
+++ ——+— —
+++———
———+++
——— ++—+ +
电解质
析出
抗原抗体性
特异性
特异性反应
交叉反应
无反应
抗原A
抗原B
抗原C
可逆性
K（亲和常数）=
Ag+Ab Ag Ab
适合比例性
抗体含量
抗原含量
前带
等价带
后带
抗体过剩
抗体抗体比例合适
抗原过剩
半抗原-C=N-O- CH2 - COOH
半抗原与载体间接联接
一氯醋酸钠法
半抗原-
- OH + Cl- CH2 - COONa
半抗原-
- CH2 - COOH
半抗原与载体间接联接
重氮化的对氨基苯甲酸法
HOOC-
-NH2 + NaNO2
HOOC- -N=N
半抗原- - OH + HOOC- -N=N
戊二醛法
蛋白质- NH2 + 半抗原-NH2 + COH-（CH2 ） 3 - COH 蛋白质-N=CH-（CH2 ） 3 – CH=N-半抗原
半抗原与载体直接联接
氯甲酸异丁酯法
半抗原-COOH + Cl-COO-CH2 CH（CH3）2 OO
半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2 + 蛋白质- NH2