青蒿中AaWRKY3转录因子的克隆及表达分析

青蒿素缩环二聚体和PI3Kα突变体抑制剂的设计、合成和抗肿瘤活性研究众所周知,癌症是当前威胁人类健康的第一杀手,新型抗肿瘤药物的研发也一直是社会关注的重点。

由于肿瘤疾病的多样性和复杂性,许多抗肿瘤药物在临床使用中经常出现各类毒副作用。

因此提高抗肿瘤药物的靶向性和选择性,开发既可高效的杀灭肿瘤组织又可降低对正常组织毒副作用的抗癌药物具有重大而深远的意义。

基于此,本论文拟采用两种策略开展抗肿瘤药物研究工作。

其一,利用天然产物毒副作用小的优点,以其分子骨架为基础,设计天然产物的新型衍生物,并提高其抗肿瘤活性。

其二,针对肿瘤组织中某些特异存在的异常基因突变现象,通过高通量筛选技术获得先导化合物,然后进行结构优化得到全新骨架的小分子蛋白抑制剂。

这类抑制剂精准靶向突变基因表达的蛋白,具有较强抗肿瘤活性,同时毒副作用较低。

本论文分为以下几部分:Ⅰ.青蒿素五元缩环二聚体青蒿素及其衍生物是一类含三氧杂环倍半萜烯结构的具有多种生物活性的化合物。

目前,青蒿素及其衍生物已经成为抗疟疾临床治疗的一线用药,而且安全无毒副作用。

在抗肿瘤药物研发领域,青蒿素也被广泛关注。

但是相对较差的抗肿瘤活性和代谢稳定性是制约其在该领域广泛使用的最大障碍。

本论文第一部分工作以天然产物青蒿素为先导化合物,设计合成了一类新颖的青蒿素缩环二聚体结构,使用MTT法检测了这类结构在五株肿瘤细胞和一株正常肝细胞上的抗肿瘤活性。

并基于此,详细研究了这类化合物的构效关系,而且对代表性化合物的抗肿瘤生物机理和代谢稳定性进行了研究和讨论。

与青蒿素相比,大部分新合成的二聚体结构表现出更好的抗肿瘤活性,尤其是化合物A-8b对PC12细胞株表现出最佳的抗肿瘤活性(IC₅₀=1.56μM),较青蒿素和二氢青蒿素提高了50倍。

进一步生物学机制研究结果表明,化合物A-8b可以阻断肿瘤细胞周期于G1期,同时通过上调Bad,Bax,caspase-3和caspase-9蛋白表达,抑制Bcl-xL的表达实现促凋亡作用。

《长叶红砂WRKY转录因子的克隆及特性分析》篇一一、引言随着生物技术的不断发展，转录因子在植物生长、发育及逆境响应过程中的作用日益受到关注。

WRKY转录因子作为一种广泛存在于植物中的调控蛋白，对植物的多种生理过程起着关键作用。

本文以长叶红砂为研究对象，对其WRKY转录因子进行克隆，并对其特性进行分析，旨在深入了解该转录因子在长叶红砂中的功能及其调控机制。

二、材料与方法1. 材料本实验所使用的长叶红砂材料采自自然环境，经过实验室培养后用于实验。

实验所需试剂及仪器均为市售高品质产品。

2. 方法（1）基因克隆：通过PCR技术，以长叶红砂cDNA为模板，扩增出WRKY基因的全长序列。

（2）序列分析：对克隆得到的WRKY基因进行测序，利用生物信息学软件进行序列分析，包括开放阅读框（ORF）预测、保守结构域分析等。

（3）特性分析：通过实时荧光定量PCR技术，分析WRKY 基因在长叶红砂不同组织、不同发育阶段及不同逆境条件下的表达模式；通过酵母双杂交、EMSA等技术，研究WRKY蛋白与其他蛋白的相互作用及DNA结合能力。

三、结果与分析1. 基因克隆结果通过PCR技术成功克隆得到长叶红砂WRKY基因的全长序列，测序结果显示序列正确，无突变。

2. 序列分析结果序列分析表明，长叶红砂WRKY基因具有典型的WRKY结构域，属于WRKY家族成员。

通过与其他植物WRKY基因的比对，发现该基因具有较高的保守性。

3. 特性分析结果（1）表达模式分析：实时荧光定量PCR结果显示，长叶红砂WRKY基因在根、茎、叶等组织中均有表达，且在不同发育阶段及逆境条件下表达水平发生变化。

这表明WRKY基因在长叶红砂的生长、发育及逆境响应过程中发挥着重要作用。

（2）蛋白互作与DNA结合能力分析：酵母双杂交及EMSA 实验表明，长叶红砂WRKY蛋白具有与其他蛋白的相互作用能力及DNA结合能力。

这表明WRKY蛋白在植物体内可能通过与其他蛋白的相互作用及与DNA的结合来调控基因表达。

《长叶红砂WRKY转录因子的克隆及特性分析》篇一一、引言随着生物技术的飞速发展，转录因子作为基因表达调控的关键因素，其研究逐渐成为分子生物学和遗传学领域的重要课题。

WRKY转录因子作为植物中一类重要的转录因子，在植物生长发育和响应环境胁迫等过程中发挥重要作用。

长叶红砂作为一种重要的经济作物，其WRKY转录因子的克隆及特性分析，对于深入了解其基因表达调控机制具有重要意义。

本文以长叶红砂为研究对象，通过克隆WRKY转录因子，并对其特性进行分析，为进一步研究其在植物生理过程中的作用奠定基础。

二、材料与方法2.1 材料长叶红砂叶片、试剂、引物、培养基等。

2.2 方法（1）总RNA提取与cDNA合成：采用Trizol法提取长叶红砂叶片总RNA，利用反转录酶合成cDNA。

（2）WRKY转录因子基因克隆：根据已知的WRKY转录因子基因序列设计特异性引物，通过PCR扩增得到目的基因片段。

（3）序列分析：对克隆得到的WRKY转录因子基因序列进行测序、比对和分析。

（4）生物信息学分析：利用生物信息学软件对WRKY转录因子进行结构预测、功能注释等分析。

三、结果与分析3.1 WRKY转录因子基因的克隆通过PCR扩增，成功克隆得到长叶红砂WRKY转录因子基因片段。

测序结果显示，该基因片段与已知的WRKY转录因子基因序列高度相似，表明成功克隆了长叶红砂WRKY转录因子基因。

3.2 序列分析对克隆得到的WRKY转录因子基因序列进行比对和分析，发现其具有典型的WRKY结构域，包括WRKYGQK保守序列和锌指结构。

此外，还发现该基因具有其他功能域和调控序列，表明其具有多种生物学功能。

3.3 生物信息学分析（1）结构预测：利用生物信息学软件对长叶红砂WRKY转录因子进行结构预测，发现其具有典型的α-螺旋和β-折叠结构，且在不同植物中的保守性较高。

（2）功能注释：通过对长叶红砂WRKY转录因子的功能注释分析，发现其可能参与植物生长发育、环境胁迫响应等多种生物学过程。

小麦转录因子TaWRKY35的克隆及功能分析小麦转录因子TaWRKY35的克隆及功能分析引言转录因子是在细胞内调控基因表达的关键因素。

在小麦中，转录因子TaWRKY35在多种生物逆境条件下发挥重要作用。

本研究通过克隆和功能分析，探究了小麦转录因子TaWRKY35的结构和功能，以期为进一步理解小麦逆境响应机制提供理论支持。

材料与方法1.小麦样本的处理收集生长状况良好的小麦植株叶片和根系样本，并将其分别存放在RNA保护剂中，以保证样本的完整性。

2.总RNA的提取和cDNA合成使用RNA提取试剂盒提取小麦叶片和根系样本中的总RNA，并使用反转录酶合成cDNA。

3. TaWRKY35基因的克隆根据已有的小麦转录组数据分析结果，设计引物并通过PCR扩增目标基因。

将扩增的目标基因片段连接到T植物中间载体，并进行质粒的测序验证。

4. TaWRKY35基因的功能分析将得到的重组质粒转化至小麦叶片中，通过过表达或沉默该基因来研究TaWRKY35对小麦的影响。

观察转基因小麦的表型变化、生长状况和耐逆性的变化，并分析其基因表达模式的差异。

结果与讨论1. TaWRKY35基因的克隆通过PCR扩增和克隆技术成功得到了小麦转录因子TaWRKY35的基因序列。

测序结果显示，克隆的基因序列与已有的小麦转录组数据中的TaWRKY35序列完全一致。

2. TaWRKY35基因的功能分析通过过表达或沉默TaWRKY35基因，观察到转基因小麦的表型变化。

结果表明，TaWRKY35在小麦的生长和发育中发挥着重要作用。

过表达TaWRKY35基因的转基因植株生长健壮，根系发达，叶片色泽鲜绿。

而沉默TaWRKY35基因的转基因植株生长受限，根系较短且叶片表面呈现黄化斑点。

进一步分析显示，TaWRKY35基因沉默转基因植株在干旱和盐胁迫条件下表现出更严重的生长受限和叶片黄化现象，而过表达转基因植株则呈现较强的逆境抗性。

这表明TaWRKY35在小麦的逆境应答中起到了积极的调节作用。

摘要利用现代分子生物学和基因工程技术手段，克隆青蒿索生成途径的关键酶基因，研究关键酶基因对青蒿素生物合成的调控规律，是打破青蒿素生物合成的限速步骤，大幅度提高青蓠素含量，最终达到利用植物生物技术工业化生产青蒿素的目的必须解决的关键阀题。

本论文基于此目的，开展了青蒿素生物合成相关基因的分子克隆工作。

用ＲＡＣＥ方法从青蒿高产株系００１中克隆了一个新的１８８６ｂｐ的全长倍半萜合酶ｅＤＮＡ。

晓隆的倍半萜合酶氨基酸序列与烟草马兜铃烯合酶、莨菪岩兰螺旋二烯合酶、棉花杜松烯合酶的一致性分别为３９％，３８％和４１％；与青蒿柏木脑合酶、紫穗槐二烯合酶和一个推测的倍半萜合酶克隆ｃＡＳＣｌ２５的一致性为５０％，４８％和５９％。

ｃＤＮＡ编码区序列被克隆进原核表达载体ｐＥＴ一３０ａ，并在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中诱导表达，但过量表达的蛋自主要是以不溶性蛋白形式存在。

ＲＴ－ＰＣＲ分析表明此基因在茎、叶和花中表达，在根中没有表达。

＼用ＲＴ／ＰＣＲ方法从青蒿高产株系００１中克隆了ａｍｏｒｐｈａ－４，１１－ｄｉｅｎｅ合酶ｅＤＮＡ。

ｉ将该ｅＤＮＡ插入原核表达载体ｐＥＴ３ｄ并在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中过量表达。

Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明ＡＭＳ基因在青蒿基因组中至少有３个拷贝。

ＡＭＳ基因组ＤＮＡ有一个复杂的结构，包含有７个外显子和６个内含子。

ＲＴ／ＰＣＲ分析表明ＡＭＳ基因在叶片、茎和花中表达，而在根中没有表达。

用ＲＡＣＥ方法首次从青蒿中克隆了一个１５３９ｂｐ全长鲨烯合酶ｅＤＮＡ。

青蒿鲨烯合酶氨基酸序列与拟南芥、烟草、人类、酵母鲨烯合酶的一致性分别为７０％、７７％、４４％、３９％。

青蒿鲨烯合酶基因组ＤＮＡ有一个复杂的结构，包括１４个外显子和１３个内含子。

全长的或Ｃ末端截短的鲨烯合酶ｃＤＮＡ被克隆进原核表达载体ｐＥＴ３０ａ并在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中诱导表达。

但在含有全长的鲨烯合酶ｅＤＮＡ的大肠杆菌中并没有观察到预期大小的鲨烯合酶表达，而Ｃ末端截短３０个疏水氨基酸的鲨烯合酶可在大肠杆菌中过量表达。

三个青蒿素衍生物通过抑制JAK/STAT3信号通路抗AML作用的分子机制目的:研究青蒿素衍生物青蒿琥酯、双氢青蒿素和蒿甲醚对急性髓系白血病HL60细胞株和急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株增殖、凋亡和分化的影响及其作用机制,并与高三尖杉酯碱、三氧化二砷及全反式维甲酸作比较,探讨三个青蒿素衍生物抗急性髓系白血病的分子机制,为青蒿琥酯、双氢青蒿素和蒿甲醚用于白血病的临床治疗提供理论依据。

方法:1.青蒿琥酯、双氢青蒿素、蒿甲醚作为实验组,高三尖杉酯碱、三氧化二砷及全反式维甲酸作为阳性对照组,1640培养基作为阴性对照组,用不同浓度的青蒿琥酯、双氢青蒿素、蒿甲醚处理对数生长期的急性早幼粒细胞性白血病细胞株NB4细胞和HL60细胞,观察:（1）CCK8法检测各组24小时、48小时和72小时的细胞增殖情况;（2）药物处理48小时后用流式检测各组细胞凋亡情况及各组细胞CD_11b和CD₃₃的表达水平;（3）Western Blotting方法检测STAT3、p-STAT3、LNK、Bcl-2、Bax、caspase-3、pre-caspase-3、pre-caspase-8、pre-caspase-9、c-Myc蛋白的表达水平;2.构建NB4细胞和HL60细胞的裸鼠成瘤模型;分别将青蒿琥酯、双氢青蒿素、蒿甲醚腹腔注射至成瘤裸鼠体内,观察裸鼠体重、精神、饮食及瘤体变化;30天后对裸鼠进行安乐死,解剖获取肿块、肝脏和脾脏,计算肿瘤体积,提取瘤块组织的蛋白,Western Blotting方法检测STAT3蛋白、LNK蛋白的表达水平;最后进行统计学分析。

结果:1.青蒿琥酯、双氢青蒿素、蒿甲醚均能抑制NB4和HL60细胞增殖、促进凋亡和诱导分化。

青蒿琥酯、双氢青蒿素和蒿甲醚抑制效果随着药物浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强。

在NB4细胞中,双氢青蒿素抑制细胞增殖强于青蒿琥酯;在HL60细胞中,双氢青蒿素抑制细胞增殖强于蒿甲醚。

《黄花苜蓿MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22基因的克隆及特性分析》篇一摘要：本文报告了黄花苜蓿中MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22三个基因的克隆过程，以及对其表达特性的分析。

通过生物信息学分析和实验验证，我们探讨了这些基因在黄花苜蓿中的潜在功能和作用机制，为进一步研究其在植物抗逆和生长发育中的角色提供了基础数据。

一、引言黄花苜蓿作为一种重要的豆科植物，在生态环境和农业生产中具有重要作用。

近年来，随着分子生物学技术的发展，越来越多的基因被克隆并分析其在植物生长和抗逆过程中的作用。

NAC （NAM/ATAF1/2/CUC2）和WRKY转录因子家族是植物中重要的调控因子，参与多种生物学过程。

本研究旨在克隆黄花苜蓿中的MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22基因，并对其特性进行分析。

二、材料与方法1. 材料准备选取生长良好的黄花苜蓿植株作为实验材料，提取其总RNA 和DNA。

2. 基因克隆利用PCR技术，以黄花苜蓿的cDNA为模板，扩增MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22基因的编码区序列。

3. 生物信息学分析利用生物信息学软件对克隆得到的基因序列进行开放阅读框分析、氨基酸序列比对和保守结构域分析等。

4. 特性分析通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，分析基因在不同组织部位及不同处理条件下的表达模式。

三、结果与分析1. 基因克隆结果成功克隆了黄花苜蓿中MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22三个基因的编码区序列。

序列长度分别为X碱基对（具体长度根据实际克隆结果而定）。

2. 生物信息学分析通过生物信息学软件分析发现，MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22均具有典型的NAC和WRKY转录因子家族的保守结构域，表明它们具有转录调控的功能。

其中，MfNAC48具有NAC家族的特征性DNA结合域，而MfWRKY3和MfWRKY22则具有WRKY家族的保守WRKYGQK基序。

《黄花苜蓿MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22基因的克隆及特性分析》篇一一、引言近年来，随着生物科技和基因技术的迅猛发展，对于各种植物的基因结构和功能的解析，已经逐渐成为了生物研究的重要方向。

本文中，我们将聚焦于黄花苜蓿（某品种或种类）中的三个基因——MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22，对它们进行克隆，并对其特性进行深入分析。

这一研究不仅有助于我们理解黄花苜蓿的基因调控机制，也为后续的基因工程和育种工作提供重要的理论基础。

二、实验材料与方法1. 材料准备黄花苜蓿样品采集，根据具体采样时间、地点和条件进行描述。

实验所需试剂、仪器等设备的准备。

2. 实验方法（1）基因克隆技术：采用PCR技术，对MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22基因进行克隆。

（2）序列分析：通过生物信息学手段，对克隆得到的基因序列进行初步分析。

（3）特性分析：结合已有的生物信息学数据库和实验数据，对三个基因的特性进行深入分析。

三、实验结果与分析1. 基因克隆结果描述三个基因（MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22）的PCR扩增结果，包括PCR产物的电泳图和条带亮度等信息。

使用测序仪对PCR产物进行测序，展示测序结果，包括基因序列的完整性和准确性。

2. 序列分析利用生物信息学软件对三个基因的序列进行初步分析，包括开放阅读框（ORF）的预测、编码的氨基酸序列等。

通过与其他植物相关基因的序列比对，分析三个基因的保守性和特异性。

3. 特性分析（1）表达模式分析：通过实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术，分析三个基因在不同组织或不同环境条件下的表达模式。

（2）功能预测：结合基因表达模式和已有的生物学知识，对三个基因的功能进行预测。

（3）与其他基因的互作分析：通过酵母双杂交等技术，探讨三个基因之间的互作关系及其在黄花苜蓿中的调控网络。

四、讨论结合实验结果和分析，对三个基因（MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22）在黄花苜蓿中的功能和作用进行详细讨论。

《黄花苜蓿MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22基因的克隆及特性分析》篇一一、引言黄花苜蓿是一种重要的豆科植物，因其对土壤改良和生态平衡的积极影响而备受关注。

近年来，随着分子生物学技术的发展，我们对黄花苜蓿基因表达的研究也逐渐深入。

MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22是黄花苜蓿中具有重要功能的基因，它们在植物的生长、发育以及应对环境压力方面发挥重要作用。

本文将对这三个基因的克隆及特性进行详细分析。

二、实验材料与方法（一）实验材料实验材料选用黄花苜蓿作为研究对象，获取其DNA、RNA 以及相应的蛋白样本。

（二）方法1. 基因克隆：通过PCR技术，从黄花苜蓿的基因组中扩增出MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22三个基因，将其插入至相应的克隆载体中，实现基因的克隆。

2. 基因特性分析：利用生物信息学方法，对克隆得到的基因进行序列分析、结构预测及表达模式分析等。

三、实验结果（一）基因克隆结果PCR扩增得到MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22三个基因的序列，成功将其克隆至克隆载体中，为后续的基因特性分析提供了基础。

（二）基因特性分析1. 序列分析：通过生物信息学软件对三个基因的序列进行分析，发现它们均具有典型的启动子序列和编码序列，证实了它们为真正的基因序列。

2. 结构预测：对三个基因编码的蛋白进行结构预测，发现它们均具有典型的蛋白结构域，这些结构域在其它植物的同类蛋白中是保守的，说明它们在进化过程中具有保守的功能。

3. 表达模式分析：通过实时荧光定量PCR技术，对三个基因在黄花苜蓿不同组织及不同环境条件下的表达模式进行分析。

结果表明，这些基因在黄花苜蓿的不同组织中具有不同的表达模式，且在不同环境条件下也有明显的表达差异。

这表明这些基因在黄花苜蓿的生长、发育以及应对环境压力方面具有重要作用。

四、讨论MfNAC48、MfWRKY3和MfWRKY22三个基因在黄花苜蓿中具有重要的功能。

WRKY转录因子及油菜素内酯对中药青蒿中青蒿素
生物合成的调控的开题报告
本开题报告将探讨WRKY转录因子及油菜素内酯（JA）对中药青蒿（Artemisia annua）中青蒿素生物合成的调控作用。

青蒿素是一种广泛应用于世界各地的治疗疟疾的有效药物，而青蒿
是其天然来源。

青蒿素的生物合成过程受到多种内外因素的影响，其中
转录因子的作用尤为重要。

WRKY转录因子是一类广泛存在于植物中的转录因子家族，具有对
植物生长发育、逆境应答等多方面的调控作用。

近年来的研究表明，在
青蒿中，WRKY转录因子家族的成员可以诱导青蒿素生物合成，促进青蒿素的积累。

油菜素内酯（JA）是植物生长素的一种代表性物质，在调控植物的
生长发育、抗逆等方面起着重要的作用。

研究表明，JA可以通过激活WRKY转录因子，调控青蒿中青蒿素的生物合成。

同时，一些研究也表明，JA的浓度和处理时间对青蒿素的生产有较大的影响。

因此，本研究将以青蒿为材料，探讨WRKY转录因子及JA对青蒿中青蒿素生物合成的调控作用及其机制，为深入理解青蒿素的生物合成和
开发新型抗疟疾药物提供理论基础和实验依据。

青蒿素生物合成基因的转录谱分析青蒿素是一种用于治疗疟疾的药物，它是从青蒿中提取出来的。

青蒿素生物合成的过程非常复杂，其中涉及到多个基因的参与和调控。

了解这些基因在不同发育阶段和环境中的表达情况，对于深入研究青蒿素的生物合成机制和提高其产量具有重要意义。

本文将简要介绍青蒿素生物合成基因的转录谱分析方法及其应用。

转录谱分析方法转录谱分析就是对不同组织、不同发育阶段和不同环境条件下的基因表达进行定量分析的方法。

常见的转录谱分析方法包括实时荧光定量PCR (RT-qPCR)、芯片技术和RNA测序。

RT-qPCRRT-qPCR是一种高灵敏度、高特异性的基因表达定量方法。

该方法基于荧光探针含量变化对PCR反应进行实时检测，通常使用单个或多个内参基因来标准化样品差异。

RT-qPCR适用于小样品和低表达基因的定量分析。

在青蒿素生物合成基因的转录谱分析中，RT-qPCR可以用来验证RNA测序分析结果的准确性。

芯片技术芯片技术是一种高通量的基因表达分析方法，通过将上千个探针固定在具有规律图案的芯片上，实现对全部或部分基因的同时检测。

芯片技术的优点在于高通量和高效率，可以同时检测大量基因的表达情况。

不过，它需要针对特定物种芯片，所以具有很高的局限性。

在青蒿素生物合成基因的转录谱分析中，芯片技术可以用来快速筛选差异表达基因。

RNA测序RNA测序是一种高通量的基因表达分析方法，利用高通量测序技术对RNA样品进行测序，然后通过比对基因组序列或转录组序列来确定基因的表达程度。

RNA 测序广泛应用于各种生物领域中，因为它具有高灵敏度和高准确度。

在青蒿素生物合成基因的转录谱分析中，RNA测序可以快速、全面地确定差异表达基因。

青蒿素生物合成基因的转录谱分析应用青蒿素生物合成基因的转录谱分析已经被广泛应用于以下几个方面。

基因调控机制研究通过对不同发育阶段的青蒿植株进行RNA测序分析，可以了解青蒿素生物合成基因在不同生长阶段的表达差异，从而研究基因的调控机制。

枸杞 WRKY3基因克隆及组织表达分析徐惠娟;郑蕊;陈任;王彦才;王丽娟【期刊名称】《西北植物学报》【年(卷),期】2016(0)9【摘要】以枸杞为材料，采用 PCR 及 RACE 方法，克隆了枸杞 WRKY 转录因子基因 cDNA 序列，命名为Lb WRKY3，GenBank登录号为 KX196192。

在生物信息学分析的基础上，进行亚细胞定位、基因表达分析。

结果显示：（1）Lb WRKY3开放阅读框ORF长度为1068 bp ，编码356个氨基酸。

（2）生物信息学分析显示，Lb WRKY3编码蛋白具有一个 WRKY 结构域，二级结构中不规则卷曲结构所占比例最大（58．67％），延伸链结构次之（18．88％），α螺旋比例为15．82％，β转角最少，仅为6．63％；Lb WRKY3蛋白与案头菊 WRKY 蛋白、黄花蒿WRKY蛋白相似性较高。

（3）亚细胞定位显示，Lb WRKY3蛋白定位于细胞核。

（4）实时定量 PCR分析表明， Lb WRKY3在根中表达量最高，在花中表达量最低；在枸杞果实发育过程中 Lb WRKY3均有表达，表达量随果实成熟逐渐升高，并于35 d达到峰值；Lb WRKY3基因在果实中的表达具有组织特异性表达特性（果肉＞果皮＞种子）。

研究表明，Lb WRKY3基因参与了枸杞果实生长发育调控。

%With wolfberry (L ycium barbarum L .) asmaterial ,polymerase chain reaction (PCR) combined with RACE technology were used to clone a cDNA of WRKY from wolfberry ,named as Lb WRKY3 . (GenBank accession No .KX196192) .Meanwhile ,on the basis of bioinformatic analysis ,we performed the subcellular localization assays and tissue‐specific expression analysis . The results indicated that :(1 ) LbWRKY3 has an open reading frame(ORF) of 1 068 bp ,which encoded a protein of 356 amino acid resi‐dues .(2)Bioinformatic analysis indicated that Lb WRKY 3 protein contains the one conserved WRKY mo‐tifs ,the predictive secondary structure showed that Lb WRKY3 protein was made up of 15 .82% alpha‐he‐lix ,6 .63%beta‐turn ,18 .88% extended strand and 58 .67% random coil .Lb WRKY3 protein showed the highest homology identity with WRKY protein from Chrysanthemum x mori f olium and A rtemisia annua . (3)Subcellular localization assays showed that the Lb WRKY 3 prote in was located in the nucleus .(4)Real‐time PCR analysis indicated that Lb WRKY3 was expressed in high transcript level inroots ,low levels in flower .The Lb WRKY3 gene expression could be detected during the whole period of fruit development . Interestingly ,Lb WRKY3 gene showed a high transcription level in 35 days .The expression level in the pulp was higher than that in the seed and peel .Lb WRKY3 gene takes part in fruit development and sugar accumulation in wolfberry .【总页数】7页(P1721-1727)【作者】徐惠娟;郑蕊;陈任;王彦才;王丽娟【作者单位】宁夏大学生命科学学院，西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，银川750021;宁夏大学生命科学学院，西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，银川750021;宁夏大学生命科学学院，西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，银川750021;宁夏大学生命科学学院，西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，银川750021;宁夏大学生命科学学院，西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，银川750021【正文语种】中文【中图分类】Q785;Q789【相关文献】1.枸杞胼胝质酶基因克隆及在雄性不育材料中的表达分析 [J], 李彦龙;樊云芳;戴国礼;秦垦;曹有龙2.栽培黑果枸杞活性成分生物合成关键基因克隆及表达分析 [J], 王德富;杨锋;崔丽艳;龙丹丹;李玲玉;申少斐;牛颜冰3.广灵驴SCD基因克隆、生物信息学及组织差异表达分析 [J], 关家伟;孙瑜彤;邱丽霞;李武峰;杜敏4.北美鹅掌楸LtuFPPS1基因克隆与组织表达分析 [J], 张成阁;刘换换;宗亚仙;李火根5.草鱼褪黑激素受体Mtnr1基因克隆及组织表达分析 [J], 胡伟;吴慧;袁汉文;郜卫华;陈敦学;郭利伟;许巧情因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。