样本预处理方式对精子染色质结构分析结果的影响

精子质量报告分析引言精子质量是评估男性生殖健康的一个重要指标。

精子质量报告是通过对精液样本进行检测和分析得出的结果，可以提供关于精子数量、运动能力和形态结构等方面的信息。

本文将对精子质量报告进行详细分析，并探讨其对男性生育能力的影响。

方法精子质量报告通常包括精子密度、活力、形态等参数的测定。

这些参数是通过对精液样本进行显微镜观察和计数得出的。

以下是对这些参数进行分析的具体方法。

精子密度精子密度是指单位体积内精子的数量。

通常使用显微镜和计数室来进行测定。

在计数室中，精液样本被加入到一个已知深度的计数室中，然后在显微镜下观察，并通过计数室的刻度来确定精子的数量。

精子活力精子活力是指精子的运动能力。

一般通过显微镜观察精子的运动状态来进行评估。

根据精子的运动能力分为四个等级：A级（活动迅速）、B级（活动缓慢）、C级（活动微弱）和D级（无活动）。

精子形态精子形态是指精子的结构和形状。

正常的精子形态应该是头部呈椭圆形，尾部长而直。

通过显微镜观察精子的形态，并根据其异常形态的百分比来进行评估。

结果根据精子质量报告的分析结果，可以对男性生育能力进行初步评估。

以下是对精子质量报告中常见参数的分析结果。

精子密度精子密度是衡量精液中精子数量的重要指标。

根据世界卫生组织的标准，正常的精子密度应该在15至200百万/ml之间。

如果精子密度低于15百万/ml，可能会影响男性的生育能力。

精子活力精子活力反映了精子的运动能力。

根据世界卫生组织的标准，正常的精子活力应该在A级和B级之间。

如果大部分精子的活力低于B级，可能会影响精子的受精能力。

精子形态精子形态异常可能会导致精子无法正常受精。

根据世界卫生组织的标准，正常的精子形态应该超过4%。

如果异常形态的精子超过4%，可能会降低精子的受精能力。

讨论精子质量报告是评估男性生育能力的重要依据之一。

通过对精子密度、活力和形态等参数的分析，可以初步判断男性是否存在生育障碍，并为进一步治疗提供参考。

临床分析前、分析中、分析后等精液常规分析质量控制要点近年来，男科疾病特别是不育患者呈显著增加趋势。

精液常规分析为临床诊断正常精液、少精症、弱精症、无精症等提供参考依据，是男性泌尿生殖系统疾病诊断、病情监测及预后判断的基础实验室指标；同时也为临床评估患者的生育能力、探索不育的病因、选择辅助决策生殖技术等提供了有力支持。

不同于血液、尿液等来源的标本, 精液标本具有黏稠性、不均一性、取材难度大、标本重现性差、标本留取条件要求高等特点。

为此, 为获取一份可靠的精液常规分析报告, 需关注精液分析前、分析中及分析后每个环节。

分析前质量控制留取每份合格的精液标本, 是保证精液分析结果可靠性的前提, 以下4方面因素必须予以关注。

精液采集前自身准备精液留取需关注精液自身的波动性。

常见的影响自身波动性的因素是禁欲时间带来的影响, 一次射精并不能完全使附睾排空, 有些精子是上一次射精时留存的, 如果这部分精子的数量变异很大, 会影响到精子的老化程度和精子质量, 从而无法客观纵向反映患者几次检测结果间的真实变化, 给临床监测病情及疗效带来影响。

为此, 实验室要求患者每次留取标本时需禁欲3至5d, 才能保证结果反映患者真实状况。

同时对于精液常规分析一般建议患者检测两次, 临床医生会依据两次的检测结果综合判断。

采集全段精液标本采集者需一次留取全部的精液标本用于检测。

依据精液的自身特点, 精液在排出体外时并不是匀质的液体, 精子也不是均匀分布的。

精液的前段主要富含精子, 后段主要是腺体分泌的精浆部分。

如果在采集过程中丢失了前段部分, 会使精子计数假性偏低;反之, 丢失后段部分会使精子计数假性偏高, 这也是各实验室间精液常规分析可比性差的原因之一。

所以为了有效避免此类问题, 我们实验室会关注两个环节, 一是在发放标本采集管时, 详细告知采集者需要留取全部的精液到标本采集管中, 二是在采精室内张贴图文并茂的留取指南, 使采集者能够按要求留取合格的标本。

两种精子优选法对精子DNA 结构完整性及其它参数的影响杨俊涛1,王亚平1,黄国宁2,高　洋21.重庆医科大学组织胚胎学教研室,重庆　400016;2.重庆市妇产科医院生殖与遗传研究所,重庆　400013提要:目的:采用精子染色质结构分析法,检测未处理精子、经上游法和Pure Sperm 密度梯度离心法处理后精子D NA 结构完整性,并对精子其它参数进行检测,以综合评价两种方法的优选效果。

方法:30份精液标本经上游法和Pure Sperm 法处理前后:计算机辅助精液分析仪检测精子密度、活率、活力及动态参数等;精子染色质结构分析法(SCSA )检测精子D NA 结构完整性的变化。

结果:优选后精子密度明显下降(P <0.01),精子活率、活力及VCL 、VSL 、VAP 、LIN 等运动参数升高或增强;D NA 结构完整的精子数量在优选后显著提高(P <0.01),但两法之间比较无差异(P >0.05)。

结论:两种优选方法处理后精子活率、活力增加;DNA 结构完整的精子数量较优选前明显提高,但两种方法之间无明显差异。

关键词:精子;上游法,Pure Sperm 密度梯度离心法;SCSA 中图分类号:R69 文献标识码:A 文章编号:0253-2743(2009)06-0090-02The effect of two sperm selection technique methods on structural integrity of sperm DNA and other factorsYAN G Jun -tao 1,WAN G Ya -ping 1,HUA NG Guo -ning 2,GAO Y ang 21.Department of Histology and Embryology ,Chongqing Medical Univers ity ,Chongqing 400016,China ;2.Chongqing R eproduciive and Genetic Institute ,Chongqing Obs tetrics and Gynecology Hospital 400013,ChinaAbs tract :Objective :To st udy the integrit y of sperm DNA of untreated sperm ,as well as s perm treated with s wim -up and Pure Sperm gradient centrifugation by s perm chromatin s tructure ass ay ,and other parameters of s perm will be detected to get comprehens ive evaluation of the effect of two met hods of s election .Method :30semen sa mples treated with s wim -up and Pure Sperm :sperm dens ity ,viability ,vital ity and dynamic para meters were tes ted by computer -ass isted semen anal ys is (CSCA );The changes of structural integrity of s perm DN A detected by sperm chromatin s truct ure assay (SCSA ).Results :Sperm density decreased after selecti on ,and sperm viability ,vital ity and VCL ,VSL ,VAP ,LIN and other parameters increased or enhanced .The number of sperm with integral DN A si g -nificantly increas ed after s election (P <0.01),but there is no s ignificant difference between s wi m -up and Pure Sperm (P >0.05).Conclus ion :The viability ,vitality of sperm were increas ed .The number of s perm wit h integral D NA s ignificantl y increas ed after selection ,but the resul ts between swi m -up and Pure Sperm have no significant difference .K ey words :sperm ;s wi m -up method ;pure s perm ;SCSA收稿日期:2009-09-14作者简介:杨俊涛(1977-),男,医学硕士。

精子形态学分析报告1. 引言精子形态学分析是男性生育能力评估的重要指标之一。

通过对精子形态进行细致的观察和分析，可以了解精子的结构和形态异常情况，为不孕症患者的诊断和治疗提供重要依据。

本文将从步骤逐一介绍精子形态学分析的过程，并对结果进行解读。

2. 样本采集精子形态学分析需要获取新鲜的精液样本，以确保结果的准确性。

样本采集前应避免性行为2-7天，以确保精液的充分积累。

采集前应注意个人卫生，以避免细菌污染。

可以采用避免使用含有精子毒性物质的避孕套进行采集。

3. 样本制备采集到的精液样本需进行适当的制备，以便于形态学的观察和分析。

制备过程包括： - 将精液样本置于离心管中； - 以适当的转速离心，以分离精子和其他成分；- 去除上清液，留下含有精子的沉淀； - 加入适量的生理盐水或其他适宜的液体悬浮精子沉淀； - 将悬浮液涂片并固定。

4. 形态学观察在形态学观察过程中，可以使用显微镜进行放大观察。

观察时应注意以下几个方面： - 精子头部是否正常，头部应呈椭圆形且不应有明显畸形； - 精子颈部是否正常，颈部连接头部和尾部，应保持完整； - 精子尾部是否正常，尾部应为一根长而直的尾巴。

5. 形态学评估形态学评估是精子形态学分析的重要部分。

通常采用Kruger标准进行评估，该标准将正常形态的精子定义为头部、颈部和尾部均正常的精子。

评估时，应随机选择多个视野，并计算正常形态的精子所占的比例。

6. 结果解读根据形态学观察和评估的结果，可以对精子的形态进行分析和解读。

通常情况下，正常形态的精子比例应在4-14%之间。

若正常形态的精子比例低于此范围，可能说明存在精子形态异常，这可能会对男性生育能力造成影响。

7. 结论精子形态学分析是男性生育能力评估的重要指标之一。

通过对精子形态进行观察和评估，可以了解精子的结构和形态异常情况。

本文详细介绍了精子形态学分析的步骤，并对结果进行了解读。

精子形态学分析结果的准确性对于不孕症患者的诊断和治疗具有重要意义。

影响实验室精液分析的因素精液常规检查就是临床中针对男性不育症患者最常用的实验室检查手段之一，同时也是评价男性生育能力、男科疾病临床诊断的重要参考依据，具有操作方便、时间短、准确性高等优点，为临床诊断与治疗提供重要依据。

本文中将对影响实验室精液分析的因素进行分析，并探讨精液常规检查的标准化操作，以提高临床检验的准确率。

标签：实验室；精液检查；精子精液分析是评价男性精子质量与生殖能力的重要检查手段，同时也是男科疾病临床诊断与治疗效果观察的重要参考[1]。

目前，精液分析主要借助计算机辅助精液分析系统进行，先进的计算技术与图像处理技术取代了传统的显微镜分析，能够对精液的外观、精液量、液化时间、pH值、精子存活率、精子活动力、精子计数、黏稠度等进行综合分析，为临床诊断提供准确信息。

虽然检验技术较以往有较大提高，但是影响实验室精液分析的因素仍然很多，如实验室环境、样本制备、检验人员经验及技术水平、检验系统参数设置等都会对精液分析报告的可比性和通用性造成影响。

本文中将探讨精液常规检查的标准化操作，规范实验室操作标准，提高精液分析的质量控制。

1影响精液分析结果的因素1.1標本因素标本因素主要是指在标本采集过程中对标本质量产生影响的因素；主要包括精液采集，精液运送及无菌处理等。

男性精液标本采集前，患者应禁欲3~7d，频繁的射精会影响精子的密度、活性及形态。

对于男性不育患者在初诊时，应至少采集两次精液以获取基线数据，两次采集应间隔1w以上，且少于3w。

标本采集方法应依照《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》[2]（以下简称实验室手册）中的相关规定，以手淫法收集精液，将精液置于干燥清洁的试管内并在37℃恒温条件下送检，送检时间不得超过30min。

每一份精液标本都要标明受患者姓名、禁欲时间、标本采集日期以及标本运送时间等，对于采集不完整及标本运送时间超过1h的标本均不能进行精液分析。

建立完整、规范的送检及验收流程，对质量不合格的标本应经常退回或拒收，将影响检验结果的因素降至最低，确保实验结果真实可靠。

临床探索精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响分析*陈晓文，郑文玲，梁光林，李永强，杨文滔 （茂名市人民医院生殖中心，广东茂名 525000）摘要：目的：探讨精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响。

方法：选择2019年1月至2020年12月于茂名市人民医院生殖中心就诊并进行人类辅助生殖技术（ART）治疗的80例男性患者的精液标本，每份标本等分4份，以原液作为对照（A组），其他三组分别采取不同方法处理，B组采取洗涤法，C组采取上游法，D组采取密度梯度离心法，之后进行精子冷冻复苏。

比较四组精子总数、前向运动精子活率、膜完整率、DNA完整率，比较四组精子低活力与正常活力的精子冷冻复苏率。

结果：四组标本优化前精子总数、膜完整率、DNA完整率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；复苏后，四组精子总数均降低，C组、D组低于A组、B组，且B组、C组、D组膜完整率、DNA完整率均升高并高于A组，同时C组、D组高于B组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

80份标本中精子低活力20份，正常活力60份。

A组精子冷冻复苏率最高，C组、D组稍低，但C组与A组、D组比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）；D组精子冷冻复苏率低于A组，B组低于A组、C组、D组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

结论：不同精液冷冻前优化处理方式均会降低精子总数及前向运动精子活率，但可提高细胞膜完整率及DNA完整率，其中洗涤法明显降低精子冷冻复苏率，而上游法优化效果好但回收率低，密度梯度离心法回收率高但优化效果一般，应根据实际情况选择适宜的处理方式。

关键词：精液冷冻；洗涤法；上游法；密度梯度离心法；精子冷冻复苏率；精子总数；精子活力指数自精保存即将精子进行低温冷冻，是人类辅助生殖技术（ART）的重要组成部分，为患者进行ART前提供了精子解决方案。

考虑到男性不育患者多因为年龄、环境污染物、重金属、致癌物、生殖系统疾病等因素导致精子细胞、DNA完整性受到影响，因此需对精液进行优化处理，去除大部分非精子物质，获得活力与形态更好的精子，利于供精人工授精（AID）和供精体外受精（IVF-D）治疗[1]。

精子优选方法对人工授精治疗结局的影响目的：探讨精子优选方法对人工授精治疗结局的影响。

方法：采取方便抽样法抽取100例于2016年4月-2017年4月来笔者所在医院实施人工授精的不孕症夫妻152对（共732个周期），按照其采取的精子优选方法进行分组，其中上游法66对夫妻（共314个周期）作为A组，其中密度梯度离心法86对夫妻（共418个周期）作为B组。

比较两组周期妊娠率、流产率及出生婴儿的性别。

结果：A组周期妊娠率和流产率均高于B组，但差异无统计学意义（字2=1.173、0.904，P>0.05）。

两组人工授精出生的婴儿性别比例比较，差异无统计学意义（字2=0.034，P>0.05）。

结论：上游法和密度梯度离心法提取精子在人工授精应用中，其妊娠率、流产率及对子代的性别影响相似，因此，在临床实际操作过程中可根据患者的具体情况选择以上任一种精子优选方法来提取精子。

标签：精子优选方法；人工授精；治疗结局人工授精是临床上常用的一种不孕症治疗的辅助手段，在人工授精过程中，最重要的也是最基础的一个环节就是从精液中提取精子[1]。

精子提取方法是否科学会对精子的质量产生直接的影响，从而影响到最终的人工授精治疗结局。

因此，积极探索有效的精子优选方法是非常重要的[2]。

目前临床上常用的体外精液优选处理方法主要有上游法和密度梯度离心法[3]。

笔者为了探讨最佳的精子提取方法，对上游法和密度梯度离心法提取精子对人工授精治疗结局的影响进行了研究。

1 资料与方法1.1 一般资料采取方便抽样法抽取于2016年4月-2017年4月来笔者所在医院实施人工授精的不孕症夫妻152对，共732个周期，纳入标准：（1）女方至少有一侧输卵管通畅，无子宫畸形、子宫腺肌症、子宫肌瘤及内分泌疾病；（2）女方肝肾功能均正常；（3）无妊娠合并症。

排除标准：（1）女方人工授精术前6个月内使用过激素类药物；（2）男方合并弱精子症或死精子症。

按照其采取的精子优选方法进行分组，采用上游法66对夫妻（共314个周期）作为A组，夫妇平均年龄（31.33±3.68）岁；不孕病程（4.23±2.03）年；其中自然周期210个，促排卵周期104个。

精子染色质结构分析董语可153******** 1980年，精子染色质结构分析(Sperm Chromatin Structure Assay,SCSA)首次在Science(240:1131)上提出，精子染色后呈现红色或绿色荧光的显微照片被用作这一期杂志封面。

这一项生物技术发展至今，已被广泛应用于检测精子亚临床损伤、评估男性生育力和预测体外受精胚胎移植的成功率。

一、技术原理精子染色质分析利用吖啶橙的异染性与专用软件计算机界面的流式细胞仪相结合，快速识别带有不正常染色质结构的精子。

[6]哺乳动物精子DNA是遗传信息的载体，对繁衍后代具有重要意义。

这一特殊使命要求精子的染色质具有特殊结构。

与其他细胞不同，精子的染色质形成经过了加倍浓缩与组装。

在精子发生过程中，与DNA结合的核蛋白发生了从组蛋白→过渡蛋白→精核蛋白的组型转换。

早期精子形成阶段，圆形精子细胞伸长，合成的过渡蛋白取代了染色质内的组蛋白；晚期精子形成阶段，过渡蛋白又被精核蛋白取代，精子头部凝缩，精子核外形形成。

精核蛋白的体积仅有组蛋白的一半。

精子双链DNA围绕这些体积较小的精核蛋白形成染色质基本结构，而后通过精核蛋白分子内外的二硫键交联进一步浓缩，从而使染色体更为稳定。

在前列腺液Zn+作用下，余下的精子染色体形成过程（图片来源：/virtue/woocommerce/mammalian-protamines/）Science封面：精子染色后的荧光显微照片(v.240,p.1131,1980)游离巯基间形成共价键，精子核成熟。

这样的成熟精子遇酸能维持双链结构的稳定。

而对于受到损伤的不成熟精子，其精核蛋白中不具备二硫键，形成松散结构的染色质，DNA 在酸的作用下则会变性成单链。

吖啶橙(Scridine Orange,AO)可与双链DN A 结合呈单体形式发出绿色荧光,与单链DNA 结合呈聚合物形式发出红色荧光。

红荧光在总荧光中所占的比例反映了精子染色质结构的缩合水平,可通过各计算机界面流式细胞仪来评价。