常用培养基的制备及注意事项(1)

一、MS培养基母液的配制注意：1．除CaCl2·2H2O单独配制外，大量元素按照使用时高10倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。

2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。

3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。

4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。

5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。

A.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。

B.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。

二、培养基配制和灭菌一．养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————母液浓缩倍数（二）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。

常用培养基的制备及注意事项一、实验目的了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法;二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物;培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水;根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有不同的种类和配制方法;牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基;由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供微生物生长繁殖之用; 干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果;三、试剂与器材1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等;2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂四、实验内容1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌五、关键步骤及注意事项1.要严格按配方配制;2.调pH不要过头;3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧,注意温度的时间控制,70oC以下放物、取物;4.高压灭菌要注意物品不要过多,加热后排除冷空气,到时降压回零取物;5.过滤除菌要注意各部件灭菌,压滤时,压力要适当,不可太猛太快,滤膜要注意清洗保存;。

培养基质量控制标题：培养基质量控制引言概述：培养基是微生物学实验中不可或者缺的重要物质，其质量控制直接影响到实验结果的准确性和可靠性。

因此，对培养基的质量进行严格控制是非常重要的。

本文将从培养基的选择、制备、贮存、消毒和使用等方面进行详细介绍。

一、培养基的选择1.1 选择基础成份：根据微生物的需求选择合适的碳源、氮源、矿物盐等基础成份。

1.2 添加生长因子：根据微生物的生长特性，添加适量的生长因子，如维生素、氨基酸等。

1.3 调节pH值：保持培养基的pH值在适宜范围内，通常为7.0摆布，可通过添加缓冲液进行调节。

二、培养基的制备2.1 材料准备：准备好所需的各种原料和试剂，确保其质量符合要求。

2.2 按比例混合：按照配方比例将各种基础成份、生长因子等混合均匀。

2.3 消毒灭菌：将混合好的培养基进行高压蒸汽灭菌或者过滤灭菌，确保无菌状态。

三、培养基的贮存3.1 温度控制：将制备好的培养基保存在4℃摆布的冰箱中，避免高温或者受潮。

3.2 防光保鲜：避免暴露在阳光下，尽量保存在阴凉干燥处，避免光照导致培养基变质。

3.3 定期检查：定期检查培养基的外观温和味，确保无明显变质迹象。

四、培养基的消毒4.1 灭菌方法：选择合适的灭菌方法，如高压蒸汽灭菌、紫外线灭菌等。

4.2 消毒时间：控制好消毒时间，确保灭菌效果，同时避免对培养基中的营养成份造成破坏。

4.3 消毒环境：在无菌条件下进行培养基的消毒处理，避免二次污染。

五、培养基的使用5.1 温度控制：在适宜的温度条件下使用培养基，保持微生物的生长活力。

5.2 湿度控制：避免培养基过度干燥或者受潮，影响微生物的生长。

5.3 使用时限：尽快使用制备好的培养基，避免长期贮存导致培养基质量下降。

总结：培养基的质量控制是微生物实验中至关重要的一环，通过选择合适的基础成份、严格制备、科学贮存、有效消毒和正确使用，可以确保培养基的质量稳定，为实验结果的准确性和可靠性提供保障。

．常用培养基的制备（1）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）和马铃薯蔗糖琼脂（PSA）培养基培养真菌最常用的培养基，成分如下：去皮马铃薯200 g 葡萄糖或蔗糖20g琼脂15－20g 水1000 ml配制方法：将马铃薯洗净去皮，称取200 g，切成小块（不必大小）放入锅中，加水1000ml，煮沸半小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加蔗糖20g，加水补足到1000ml。

配成的培养基一般呈酸性，用于培养真菌，可以不必调pH。

如配制固体培养基，在加蔗糖前先加15－20g 琼胶加热熔化，最后加入蔗糖，混匀并加水补是至1000ml，趁热分装在试管或三角瓶中。

标准试管（15×150mm）分装量如下：一般用作斜面培养的每试管装培养基3－5ml，用作平面培养的每试管约10ml，加棉花塞后灭菌。

培养细菌用的培养基必须调节其酸度值到中性（pH7．0左右）。

（2）牛肉汁蛋白胨培养基（NA）是培养细菌最常用的培养基，又称营养琼脂或肉汤培养基。

成分如下：酵母浸膏1g 牛肉浸膏3g蛋白胨5-10g 蔗糖（或葡萄糖）l0g琼脂15-20g 水1000mlpH7.0配制方法：称取牛肉浸膏及蛋白胨溶于少量热水中备用，在其余水中加入琼脂，加热溶化后将牛肉浸膏和蛋白胨溶液加入混匀，然后加水补足到1000 ml，用NaOH或HCL调整至pH7.0，趁热分装，加棉花塞后灭菌。

（3）玉米叶培养基取一定数量的玉米叶片，洗净后剪成1㎝2左右的小块，放在250ml的三角瓶中，盛放量一般为三角瓶的1／3，然后加少量的水以保持湿润，加棉花塞后灭菌。

天然培养基一般不必调整pH。

（4）查氏（Czapek）培养基查氏培养基是一种组合培养基，其成分如下：NaNO3 2g K2HPO4 1 gMgSO4·7H2O 0．5g KCl 0．5gFeSO4 0．01g 蔗糖30g水1000ml（5）灭菌水的配制蒸馏水（或自来水）经过灭菌处理即成灭菌水，是实验室用量最大的必备品之一，常用于病原菌的分离、稀释、保湿等。

培养基的配制方法培养基是微生物学、生物学等实验中将微生物培养的一种物质基质，它提供了微生物生长所必需的营养和环境条件。

培养基的配制方法主要包括选择基质、添加营养成分、调节pH值、灭菌和包装等步骤。

以下是一般的培养基配制方法及注意事项。

1.选择基质培养基的基质可以选择为水或含有必要营养成分的溶液。

一般情况下，使用蒸馏水或双蒸馏水作为基质是比较常见的选择。

2.添加营养成分培养基中必须添加适当的营养成分，以满足微生物的生长需求。

常用的营养成分有碳源、氮源、无机盐、维生素和生长因子等。

常用的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等，常用的氮源有氨基酸、酵母浸出物、肉浸出物等。

此外，还可以根据微生物的特殊要求增加一些其他的营养成分。

3.调节pH值pH值对于微生物的生长十分重要，大多数微生物的最适生长pH在6.5-7.5之间。

因此，培养基在配制过程中需要进行pH值的调节。

可以使用酸碱溶液（如HCl和NaOH）进行pH调节，并通过使用pH试纸或pH计监测pH值。

4.灭菌培养基的灭菌工作非常重要，它可以防止杂菌的污染。

常用的灭菌方法有高压灭菌、干热灭菌和滤过灭菌等。

高压灭菌是指将配制好的培养基放置在高压锅中，经过高温高压的处理。

干热灭菌是将配制好的培养基放置在烘箱中进行加热处理。

滤过灭菌是将培养基通过0.22um的无菌滤膜过滤，以去除微生物。

灭菌后，需要用无菌操作将培养基倒装入无菌培养器皿中。

5.包装灭菌后的培养基需要进行包装保存，以防止污染。

常用的包装方式有试管包装、琼脂平板包装和瓶装包装等。

试管包装是将培养基倒入试管中，用苏打棒打破试管口，并通过注封的方法密封试管。

琼脂平板包装是将培养基倒入无菌琼脂平板中，并使用无菌的平板封口膜密封。

瓶装包装是将培养基倒入无菌玻璃瓶中，用无菌胶塞封闭瓶口。

在配制培养基的过程中，还需要注意以下几点：1.保持操作环境无菌，使用无菌操作台、无菌器具和无菌操作方法。

2.注意各种添加物的浓度，不可过量或过少。

常用培养基的制备及注意事项培养基是细菌、真菌、细胞等微生物进行繁殖和培养的营养地，广泛应用于微生物学和生物技术领域。

下面将介绍几种常用的培养基的制备方法及注意事项。

1.琼脂培养基：琼脂培养基是最常见的一种培养基，它以琼脂凝胶为基质，通过加入不同的营养成分，满足微生物的生长需求。

制备方法如下：1）称取适量琼脂，加入适量蒸馏水中搅拌均匀。

2）加入适量皂液，加热融化琼脂。

3）待琼脂溶液冷却至40°C左右时，加入已经制备好的培养基成分，如碳源、氮源、维生素等。

4）搅拌均匀，调整pH值，加热煮沸。

5）倒入装有适量培养基的培养皿中，使其凝胶化。

注意事项：1）使用较干燥的琼脂可减少湿润时间。

2）煮沸或加热时间不宜太长，以免过度加热导致一些营养成分失活。

3）制备过程中要注意无菌操作，避免细菌等微生物污染。

2.液体培养基：液体培养基适用于微生物的扩大培养、动态研究等实验。

制备方法如下：1）称取适量蒸馏水，加热至沸腾。

2）加入培养基成分，如碳源、氮源、维生素等，搅拌均匀。

3）调整pH值，加热至沸腾。

4）倒入试管或烧杯中，用胶塞或铝箔盖好。

注意事项：1）加热过程中要注意及时搅拌，避免成分沉积或变色。

2）制备前要将试管或烧杯等容器进行高温灭菌处理。

3）使用培养基前要进行菌液均匀混合，避免因成分沉积而导致的营养不均匀。

3.固体选择性培养基：固体选择性培养基是指根据微生物对特定组分的感受性选择性地制备的培养基。

制备方法如下：1）制备好的琼脂培养基加热至融化，放置冷却至40°C左右。

2）加入特定的抗生素、色素或指示剂等，搅拌均匀。

3）倒入装有适量培养基的培养皿中，等待凝胶化。

注意事项：1）特定抗生素或其他抑菌剂的添加量需要谨慎，过量添加可能抑制需要培养的微生物。

2）搅拌均匀时，应快速且均匀，以避免导致混合不均。

3）固体选择性培养基凝胶化后，尽量避免暴露于空气中，以免细菌等微生物的污染。

以上所述的常用培养基只是其中的一部分，不同微生物的培养要求不同，制备方法也有所差异。

《医学微生物学》细菌的人工培养实验[目的]1．掌握平板划线法、斜面、液体和半固体培养基等各种接种方法。

2．掌握接种细菌用具、接种细菌的环境要求和无菌操作要领。

3．熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。

4．熟悉细菌和二氧化碳培养方法。

5．熟悉常用的厌氧菌培养技术。

6．了解培养基制备的基本过程。

[内容]（一）、培养基制备技术[材料]1．试剂：牛肉膏、氯化钠、蛋白胨、琼脂粉、抗凝绵羊血、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、葡萄糖、乳糖、甘露醇、柠檬酸钠、硫酸镁、磷酸二氢铵、硝酸钾、硫代硫酸钠、柠檬酸铁、硫酸。

亚铁、尿素、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中性红、酚红、lmol ／L NaOH、lmol／L HCl。

2．器材：500ml锥形瓶、500ml量筒、10ml、5ml和lml吸管、精密pH试纸、华氏试管、硅胶塞、天平、高压蒸气器、血清凝固器、脱脂棉、滤纸、漏斗、无菌平皿。

[方法]1．培养基制备的基本过程包括调配成分、溶解、矫正pH、过滤澄清、分装、灭菌、质量检查和保存。

（1）调配成分：按培养基组成准确称取各成份用量，放入锥形瓶或大容量烧瓶中，加一定量蒸馏水，使其充分混合。

应注意染料、胆盐和指示剂等应在矫正pH后加入。

（2）溶解：将调配好的混合物在沸水浴或流动蒸气灭菌器中，使其完全溶解。

不可将培养基装在铜铁容器中加热，因培养基中含铜量超过0.3mg／L时，细菌不易生长；含铁量超过0.14mg／L时可抑制细菌毒素的产生。

（3）矫正pH：一般将培养基的pH调至7.2～7.6左右。

经高压灭菌后其pH可发生0.1～0.2变动。

若用NaOH矫正，高压灭菌后pH下降0.1～0.2；若用Na2CO3矫正，高压灭菌后pH升高0.1～0.2。

（4）滤过澄清：自配的培养基通常有一些混浊或沉淀，需滤过澄清后方可使用。

液体或半固体培养基常用滤纸过滤；固体培养基在熔化后趁热以绒布或双层纱布加脱脂棉过滤。

（5）分装：①基础培养基：一般分装于锥形瓶灭菌后备用，以便随时分装倾注平板或配制营养培养基等；②琼脂斜面：通常在熔化后分装于试管，量约为试管高度的1/4～1/3，加塞后灭菌，趁热摆成斜面，斜面长度约为试管长度的2/3，且保持试管下端1cm柱高；③半固体培养基：分装量为试管量的1/4-1/3，加塞灭菌后趁热直立凝固④琼脂高层培养基：分装量为管长的2/3(接种厌氧菌用)，灭菌后趁热直立凝固；⑤琼脂平板无菌分注：先将灭菌琼脂熔化后冷却至50℃左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内(内径90mm的平皿约13～15min)，水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。

常用培养基的制备及注意事项制备常用培养基的步骤：1.准备所需材料和试剂：包括原材料、化学试剂、水质等。

2.按照配方准备培养基的成分，称取所需质量的每种成分，并放入容器中备用。

需要注意的是，成分的配比应严格按照配方比例进行。

3.取一定容积的纯化水，进行加热和搅拌。

加热需注意温度控制，以避免高温引起成分变性和水的蒸发。

4.将加热的纯化水慢慢倒入容器中的培养基成分中，同时用搅拌器搅拌，以保证成分均匀溶解。

5.溶液温度降至室温后，通过过滤器或高温高压灭菌器对培养基进行消毒处理，以杀灭存在的微生物。

6.消毒后，将培养基分装到适当的容器中，如试管、琼脂培养皿等，并密封好，以免受到外界的污染。

7.对于固体培养基，添加适量的琼脂、琼脂糖或者琼脂葡萄糖固化成体，用压力灭菌器灭菌。

8.储存培养基要注意避光、防潮和防火，并在相关容器上标明名称、配方和制备日期。

1.成分准确：制备培养基时，需要准确称取每种成分的质量，确保配方比例准确。

不同的微生物和细胞需要不同的营养成分，所以要了解不同微生物和细胞的需求，选择适当的配方。

2.水质净化：培养基的制备需要使用纯化水，如去离子水、超纯水等，以确保水质的纯净。

水质若不符合要求，会影响培养基的质量。

同时，加热时要控制温度，以避免成分变性和水的蒸发。

3.消毒杀菌：培养基在制备完成后需进行消毒处理，以杀灭存在的微生物。

可以通过过滤器或高温高压灭菌器进行消毒。

消毒过程中要做到严格的操作规范，保证培养基的纯度。

4.容器选择：对于不同的培养基，选择合适的容器也非常重要。

常用的容器包括试管、琼脂培养皿、培养瓶等。

选用容器时要考虑到培养的需求，如气体交换、液体混合等。

5.储存注意：制备完成的培养基需要正确储存，避免光照、潮湿和高温。

同时要在容器上标明名称、配方和制备日期，以便管理和使用。

总结：制备常用培养基需要严格按照配方比例进行，控制水质和温度，并进行消毒处理。

在容器选择和储存过程中也要注意一系列的注意事项，以确保培养基的质量和纯度。

PDA培养基的配制方法和注意事项PDA（Potato Dextrose Agar）是一种常用的真菌培养基，适用于培养和生长多种真菌菌株。

下面将介绍PDA培养基的配制方法以及注意事项。

配制方法：1. 准备所需材料：马铃薯（200g）、葡萄糖（20g）、琼脂（15g）、蒸馏水（1000ml）。

2.将马铃薯洗净，并切成块状。

3.将切好的马铃薯放入一个大锅中，加入足够的蒸馏水，使其完全浸泡。

4.使用中小火煮沸约30分钟，直到马铃薯变得软烂。

5.用纱布过滤掉马铃薯块，收集到的液体称为马铃薯提取液。

6.将马铃薯提取液加热到煮沸，并添加葡萄糖，搅拌使其充分溶解。

7.加入琼脂，搅拌溶解。

8.继续加热并保持搅拌，直到琼脂完全溶解。

9.关火冷却到40-45°C，搅拌均匀。

10.倒入培养皿或试管中，使其充分凝固。

11.将培养基容器包装好，使用锡箔纸和胶带封口，避免杂菌污染。

12.PDA培养基可以根据需要分装成适当大小的琼脂平板或斜面管，以供后续使用。

注意事项：1.所有试剂和仪器应尽可能消毒和无菌处理，以确保制备的PDA培养基无菌。

2.马铃薯切成块状是为了加速煮沸的过程，但切的过小可能导致提取液中的杂质过多，影响培养基质量。

3.煮沸的时间不宜过短，马铃薯需要彻底煮熟才能提取足够的营养物质。

4.搅拌是为了使葡萄糖和琼脂均匀溶解，并避免极度热区出现。

5.琼脂的溶解需要一定的时间和温度，不可急于冷却和使用。

6.冷却到40-45°C是为了防止高温对培养基中微生物的损害，也是为了避免由于过度冷却导致琼脂凝固太快。

7.封装培养基容器是为了防止杂菌和空气中的孢子进入培养基，避免细菌和真菌污染。

8.在分装培养基前，应将工作台面和器皿用酒精消毒，防止培养基受到外界污染。

9.PDA培养基在20-25°C的常温下可保存2-4周，或在4°C冰箱中保存2-3个月。

保存时不可直接暴露在光线下，避免褪色和干燥。

实验二常用基础培养基的制备同学们大家好欢迎来到微生物检验课堂今天我们做的实验是常用基础培养基的制备。

这节课我们一起来学习三种不同的培养基制备的操作;好那我们开始，这节课的实验原理是：培养基是人工合成的一种混合营养料，用以分离细菌。

基础培养基中含有大多数常见菌生长繁殖所需要的营养物质，并可制成液体、半固体、固体三种不同的性状。

实验项目是细菌培养基的制备，最常见的培养基包括：肉汤培养基的制备普通琼脂平板培养基的制备半固体斜面培养基的制备等三种方法实验目的是：掌握培养基制备方法实验材料有：牛肉膏、蛋白胨，氯化钠、蒸馏水琼脂粉，10%NaOH pH试纸、三角烧瓶量筒，天平酒精灯、等培养基的制备步骤：配料→熔化→测定pH→滤过+分装→灭菌→备用。

肉汤培养基:取1000ml蒸馏水,加人牛肉膏3-5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,混合加热溶解，调整pH至7.4-7.6,分装于烧瓶中，可供一般细菌生长。

(2) 普通琼脂培养基:取1000ml肉汤培养基，加入2% ~3%琼脂，加热溶化，过滤,分装于烧瓶或试管中。

(3)半固体培养基:取1000ml肉汤培养基，加人3-5g琼脂，分装于烧瓶或试管中，主要用于保存菌种或观察细菌动力三种培养基分装好后均在全自动高压灭菌器中高压。

高压灭菌的主要方法：首先把制备好的培养基放入灭菌器里，把盖子盖好，温度调制121.3摄氏度，时间调制30分钟，开始高压灭菌，好，灭菌时间到了，取出培养基，待冷却后即可以使用。

利用PPT照片展示结果：一下就是三种培养基制备好后的形态。

注意：通过今天的实验我们已经学到了固体培养基，液体培养基，半固体培养基等三种不同培养基的制备，下课后希望大家可以分组讨论本次实验收获。

好同学们，今天的课程就讲到这里，下节课再见。

培养基的制备实验报告材料（文章一）：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)（一）、实验题目：培养基的制备与灭菌（二）、实验目的：（1）、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。

（2）、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。

（三）、实验器材：（1）、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。

（2）、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。

（四）、实验原理：（1）、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。

（2）N源：包括无机氮和有机氮。

（3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。

（4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。

微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。

有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。

（2）、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。

培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。

（3）、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。

（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。

若是含糖培养基，110℃、30min。

（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。

因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。

（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。

（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。

除病菌需更小。

常用细菌培养基制备及注意事项细菌培养是生物学研究中一种重要的实验技术。

精准的细菌培养技术，可以让我们快速、准确地获得细菌样品，方便细菌的种类鉴定和活性测定。

因此，熟练掌握细菌培养基制备及其使用方法及注意事项，对于生物学研究来说是非常重要的。

一、常用细菌培养基的分类常用的细菌培养基可以分为两大类：标准培养基和特殊培养基。

标准培养基由四种基础成分构成，即营养源、碳源、离子源和碱源，重点是碱培养基。

标准培养基可以满足一般细菌的培养需求，但对于某些特殊细菌而言，可能不够充分，这时就需要特殊培养基。

特殊培养基是根据细菌的特殊需求而设计的，它可以弥补标准培养基的不足。

二、细菌培养基的制备1、准备培养基的原料首先，我们需要根据配方准备好必要的原料，比如，营养源、碳源、离子源，以及其他必要的调味料。

2、将原料进行混合然后，将所有原料放入容器中，使用搅拌器混合成细菌培养基溶液，以防止原料结块。

3、细菌培养基灭菌接下来，需要对混合好的细菌培养基进行灭菌处理，以杀灭所有混入的细菌菌株，避免对样品的污染。

一般采用蒸馏水或甲醛的方法进行灭菌处理。

4、灭菌后的细菌培养基存储至此，细菌培养基制备完毕，需要将其存放在室温下，避免阳光直射，以防菌种被破坏。

如果长期不用，应将细菌培养基冷藏或冷冻保存。

三、细菌培养基使用注意事项1、实验室清洁卫生实验室在使用细菌培养基时，应当保持良好的清洁卫生，以免在实验过程中污染样品。

2、实验前样品处理在实验前，应对样品进行必要的处理：将溶液过滤，以去除杂质；对固体样品进行消毒，以免被细菌污染。

3、避免污染在使用细菌培养基时，要谨慎操作，以避免被污染；操作过程中，应尽量避免气流，以减少培养基中的细菌数量；在使用细菌培养基后，要及时将容器盖好，以免空气中的微生物进入容器。

四、总结细菌培养基是实验研究中一种重要的实验技术，需要科学准确地进行制备和使用。

常用的细菌培养基可以分为标准培养基和特殊培养基。

细菌培养基的制备包括准备原料、混合、灭菌和存储等步骤。

常用细菌培养基制备及注意事项
常用细菌培养基制备及注意事项：
1. 细菌培养基的选择：根据细菌的生长特性（如碳源、氮源、pH值、离子条件等），选择合适的培养基。

2. 细菌培养基的制备：将所需要的原料按照配方量放入容器中，加入适当的活化剂（氢氧化钠及抗凝血剂），煮沸消毒后，冷却至50℃；然后添加必要的有机物质（如牛血清白蛋白等），然后进行细胞优化处理。

3. 注意事项：
（1）在制备细菌培养基时，应保证原料的高质量；
（2）细菌培养基的制备过程中，应控制温度、pH 值、离子浓度等，以达到最佳的细菌培养效果；
（3）在添加活化剂和有机物质时，应尽量避免对细胞的损伤；
（4）在制备培养基高温杀菌时，应保持温度稳定，控制好煮沸时间，防止培养基的硫酸盐残留；
（5）在使用培养基时，应避免与其它污染物接触，并及时存放在-20℃以下的环境中。

培养基的制备、融化程序的确认及注意事项——1（一）培养基的制备微生物实验室所用培养基可按药典规定检查方法中所列的培养基配方配制，也可使用复合型的干燥培养基，或是使用已配制且分装好的成品培养基。

干燥培养基是将新鲜配制的液体培养基用不同的方法使水分去掉；或将培养基内的各种固形成分，经过适当的处理，充分混匀，使成干燥的粉末状。

用时只要按比例加入一定量的蒸馏水，经过溶解、分装、高压蒸汽灭菌，即可应用。

其优点是节省培养基配制时间，携带方便，使用简易，特别使用于一般流动性及设备简单的小型实验室。

目前，国内外已有多家生产，如法国生物梅里埃公司、美国密理博公司的产品、中国药品生物制品所监制的产品，其制造方法有下列几种：喷雾法、真空法、烘干法、蒸发法、球磨法。

药品微生物限度检验、无菌检验、抗生素效价测定、药敏试验及其抗菌、防腐等项微生物检测中，培养基的质量好坏、稳定与否，对检验结果有极为重要的影响。

但因培养基的配方中各原料成分的理化性能、稳定性不同，致使检验结果有较大差异，即使同一厂家生产的同一型号的原料产品，各个批号之间质量都有较大的差异，加上各地实验室配制培养基的方法不一，同一实验生长有显著不同。

为此培养基的质量标准十分重要。

干燥培养基，使用方便，节约人力、物力、时间，是培养基标准化的必由之路。

按说明书要求称取适量后加水溶解配制，所用培养基质量必须符合药典规定的灵敏度检查试验及无菌性检查试验才可用于检验。

配制培养基、缓冲液、试剂等时，称量要迅速以免吸潮而影响称量的准确性，同时为避免增加培养基等中的金属离子及其他微量化学元素而影响微生物的生长、鉴别、所用器具、容器应为洁净玻璃制品，所用溶解用水应为纯水或蒸馏水。

加热溶解时不断搅拌促进培养基充分溶解，采用直火加热时易使培养基结底炭化而影响营养度和澄明度，可用沸水浴或隔套蒸锅通过蒸汽加热。

然后调节pH，按规定的要求分装，容器封口后用经验证过的灭菌程序灭菌。

灭菌程序的参数应记录于高压灭菌柜的使用日志及相应的配制记录中。

培养基配制方法1.1了解并掌握培养基的配制、分装方法1.2掌握各种实验室灭菌方法及技术。

2原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。

由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。

另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。

琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。

加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。

但多次反复融化，其凝固性降低。

任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。

一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。

3材料3.1器皿及材料天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。

3.2药品试剂蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。

4流程称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。

5步骤5.1培养基的制备5.1.1称量药品根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。

蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。

5.1.2溶解用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。

待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。

如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。