血清尿素氮的测定

实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法）一、实验目的与要求1 了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。

2 掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。

二、实验原理尿素在脲酶作用下分解生成氨。

在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁氰化钠催化生成蓝色的靛酶。

其反应式为： CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲酸O-2NH3+CO2氨NH3+OCl-NH2Cl+OH-次氯酸氨胺催化剂NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2苯酚P胺基苯酚HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O酚靛三、实验仪器与试剂1 仪器（1） AT648半自动生化分析仪1台；（2） 4孔恒温水浴锅1个；（3）振动摇床1台。

2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括：（1）试管架1个；（2） 2ml试管10个；（3） 20μl微量加样器1个；（4） 1ml移液管1个；（5） 5ml移液管2个；（6）吸耳球1个；（7）搪瓷盘1个；（8）微量加样滴头；（9）吸水纸。

3 本试剂盒内含5种试剂：（1）脲酶（冻干） 2瓶（2） pH 8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成 1×46ml（3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成 1×225ml（4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成 1×225ml（5）尿素氮标准液（20mg/dl） 2×2ml四、实验步骤1 血清（1）取脲酶一瓶，用23.0ml pH 8.0缓冲液溶解。

（2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。

表131系列反应管中所加溶液的量空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5 （3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。

血清尿素氮的测定【目的要求】1.了解血清尿素氮测定的方法及临床意义。

2.复习尿素的生成机理及其意义。

【实验原理】血清（或血浆）中的尿素，在尿素氮试剂的酸性环境中与二乙酰-肟（DAM）共沸后，可缩合成一红色化合物，称为fearon反应。

其颜色的深浅与血清（或血浆）中尿素的含量成正比，与同样处理的尿素氮标准液比色，即可测算出血清（或血浆）中尿素氮的含量。

【实验材料】1.器材刻度吸管（0.1ml、2ml、10ml）恒温水浴箱分光光度计2.试剂（1）待测血浆（2）尿素氮试剂（3）二乙酰-肟试剂（4）尿素氮标准液【操作步骤】取试管三支按下表操作1：4稀释血清（或0.1血浆）尿素氮标准液0.1（0.02mg/ml）蒸馏水0.1二乙酰-肟0.5 0.5 0.5尿素氮试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴中加热15min，立即用自来水冷却5分钟。

分光光度计选用540nm波长，以空白管调零点，读取各管吸光度。

计算及结果分析Array尿素（mg%）×尿素氮标准液浓度*5(mg/ml；mg/100ml)【注意事项】1. 此法灵敏度高，用量极微（一般只需0.02ml血清即可）。

本实验是先将血清用生理水以1：4加以稀释再取0.1ml，故最后计算时，应乘以稀释倍数“5”2. 试剂中加入硫胺脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象（小于5%/h）。

3. 此法操作简单，特异性强，不受其他非蛋白质含氮化合物如尿酸、肌酸等影响，但应控制好实验条件。

4. 吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务必准确。

5.尿液中的尿素氮也可用此法进行测定。

由于尿液中尿素氮含量高，标本需用蒸馏水以1:50稀释。

如果呈色后吸光度仍超过本法的线性范围，还需将尿液再稀释，重新测定。

【思考题】血清尿素氮测定的方法及临床意义。

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一、实验目的1. 掌握血清尿素测定的原理和方法。

2. 熟悉二乙酰-肟法测定血清尿素氮的实验操作。

3. 了解实验中可能出现的误差及其处理方法。

二、实验原理血清尿素氮（Blood Urea Nitrogen，BUN）是血液中尿素氮的浓度，是反映肾功能的重要指标。

尿素氮是蛋白质代谢的终产物，主要由肝脏产生，通过肾脏排泄。

二乙酰-肟法是一种常用的测定血清尿素氮的方法，其原理如下：在酸性反应环境中加热，尿素与二乙酰缩合，生成色素原二嗪，称为Feorin反应。

因为二乙酰不稳定，所以通常由反应系统中二乙酰-肟与强酸作用，产生二乙酰，二乙酰与尿素反应，综合生成红色的二嗪。

其颜色的深浅与血清中尿素含量成正比。

三、实验材料1. 试剂：- 碱性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%H3PO466ml冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉2g溶解后加蒸馏水稀释至1升，置棕色瓶放冰箱保存，可稳定半年。

- 二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml溶解后，再用蒸馏水稀释至1升置棕色瓶中，贮存放于冰箱内可保存半年不变。

- 尿素标准贮存液（100mmol/L）：称取干燥纯尿素（MW60.06）0.6g，溶解于水中并稀释至100毫升，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内稳定六个月。

- 尿素标准应用液（5mmol/L）：取5.0ml贮存液用去氨蒸馏水稀释至100ml。

2. 仪器：- 分光光度计- 离心机- 实验室试管四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 取5支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。

- 向每支试管中加入2.0ml碱性试剂，混匀。

- 将试管置于沸水中加热5分钟，取出冷却至室温。

- 以540nm波长，1cm光程，测定各管吸光度。

- 以尿素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品测定：- 取2支试管，分别加入0.5ml血清和0.5ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。

血清尿素氮测定的原理方法及临床意义
血清尿素氮（BUN）是反映肾脏排泄功能的一个重要指标，也是评价肾脏疾病和代谢紊乱的标准检查之一。

BUN的原理方法：
BUN是指血液中尿素的浓度，它的检测是通过测定血液中尿素的含量来完成的。

尿素
是蛋白质代谢的末端产物，经由肝脏转化生成后再经过肾脏排泄。

正常情况下，尿素在肾
小球滤过后主要在肾小管内被再吸收，防止其大量丢失。

血中尿素的浓度，受到肝脏合成、尿素的经肾脏的再吸收、肾脏排泄和肾脏灌注量的影响。

BUN的测定方法包括酶法、光度法、电化学法、液体色谱法等，其中光度法是目前应用最广泛的方法之一。

临床意义：
BUN的高低可以反映肾脏功能是否受到影响。

一般来说，BUN增高是肾功能受损的重要指标，包括急性肾损伤、肾衰竭、肾小球肾炎、肾盂肾炎、泌尿系梗阻等病态情况。

此外，由于肝脏是尿素生成最重要的器官，肝脏疾病如肝炎、肝硬化等也会影响BUN的测定结果。

对于临床医生而言，BUN的测定结果可以作为诊断和治疗的重要线索，也可以用来监测肾
脏疾病和代谢紊乱的治疗效果。

需要注意的是，BUN的测定结果还应考虑个体差异、摄入蛋白质的数量和质量等因素
的影响。

在诊断或监测疾病的过程中，应结合临床病史、身体检查和其他相关检查结果，
综合分析判断。

测定血清尿素的方法
测定血清尿素的方法有很多种，以下是其中几种常见的方法：
1. 色谱法：使用气相色谱法或者液相色谱法，将血清中的尿素分离出来，并通过检测其峰值的面积或者浓度来确定尿素的含量。

2. 尿素酶法：利用尿素酶催化尿素水解产生氨和二氧化碳，并采用测定氨的方法来间接测定尿素的含量。

3. 尿素氮法：使用气体分析仪测定氨气，通过转化为尿素以后，测量尿素的氮含量来计算尿素的含量。

4. 尿素代谢率法：通过给予标记有碳14或者氢2的尿素，然后测定排出的二氧化碳或者水的放射性活性，从而测定尿素的代谢率。

这些方法各有优缺点，选择合适的方法取决于实验条件、设备以及研究需求。

在实际应用中，一般会根据实验目的和实验条件选择最适合的测定方法。

尿素氮的检测及临床意义一、概述1、尿素是蛋白质代谢的终末产物，血清尿素的浓度取决于机体蛋白质的分解代谢速度、食物中蛋白质摄取量及肾脏的排泄能力。

2、尿素分子量小且不与血浆蛋白结合，可自由通过肾小球滤过膜滤入原尿，约50% 可被肾小管重吸收，正常情况下30% ~40% 被肾小管重吸收，肾小管有少量排泌。

当肾实质受损害时，肾小球滤过率（GFR）降低，致使血尿素浓度增加，因此目前临床上多测定尿素，粗略观察肾小球的滤过功能。

二、检测方法尿素的测定方法大体上可归纳为酶学方法和化学方法。

1、酶学方法先用尿素酶将尿素分解成离子(NH4+)和碳酸根，然后用波氏反应或谷氨酸脱氢酶法，测定反应过程中的离子生成量。

2、化学方法是用二乙酰一肟直接与尿素反应，缩合成红色二嗪化合物，在 540nm 测定其吸光度值。

波氏法和二乙酰一肟法适用于手工法。

3、谷氨酸脱氢酶偶联速率法是在340nm 处通过监测NADH 吸光度值降低速率检测尿素量，较前两种方法有更高的准确度与灵敏度，是自动生化仪最常用的方法。

三、样本收集与处置1、血清和肝素抗凝血浆在二乙酰法、酶谷氨酸脱氢酶、离子导电法中均可应用。

2、氟化物能抑制脲酶反应，故不能用氟化物作为抗凝剂，肝素抗凝剂也不能在脲酶法中使用。

3、尿样本按照1:20到1:50稀释后，可用以上三种方法测定。

4、由于尿素易于被细菌降解，故血清和尿样本在分析前应放置在4~8℃的冰箱中。

四、参考区间成人血尿素：男：(20~59岁)3.1~8.0mmol/L，(60~79岁) 3.6 ~9.5mmol/L；女：(20~59岁)2.6 ~ 7.5mmol/L(60~79岁) 3.1~ 8.8mmol/L。

若表示为血(清)尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)，因为1分子尿素中含 2个氮原子，故应将上述数值乘以2即BUN。

五、临床意义1、肾前性疾病常见于剧烈呕吐、幽门梗阻、肠梗阻和长期腹泻等。

严重脱水、大量腹腔积液、心脏循环功能衰竭、肝肾综合征等导致的血容量不足、肾血流量减少灌注不足致少尿。

尿素氮测定的标准规程【目的】体外检测血清中尿素氮（BUN）的含量。

【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理本试剂采用由Talke和Schubert首先提出的酶学方法，为缩短和简化分析，计算基于Tiffany等的发现，即尿素浓度与固定时间间隔内的吸光度变化成正比。

其反应如下：尿素 + H2O−−→−尿素酶2NH3 + CO2NH3 + α-氧代戊二酸 + NADH−−→−GLDH谷氨酸 + NAD+注：GLDH为谷氨酸脱氢酶在上述反应中，酶反应速率与样本中尿素（尿素氮）的含量成正比。

在340 nm 处测定固定时间间隔内NADH吸光度下降的速率，即可测得样本中尿素（尿素氮）的浓度。

二、试剂1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司UREA试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：试剂1（R1）α-氧代戊二酸7.5 mmol/L谷氨酸脱氢酶＞800 U/LNADH 0.35 mmol/L二磷酸腺苷 1.5 mmol/LTris缓冲液115 mmol/L试剂2（R2）Tris缓冲液115 mmol/L尿素酶＞40000 U/Lα-氧代戊二酸7.5 mmol/L2.校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号：4490050/4590050）对测定进行校准。

二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮【目的】1. 掌握二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮的实验方法。

2. 熟悉二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮的实验原理。

3. 了解血清尿素氮测定的临床意义。

【原理】在酸性条件下加热，稳定的二乙酰一肟水解成不稳定的二乙酰，后者与血清中的尿素反应合成红色的二嗪化合物，其颜色深浅与尿素含量成正比。

与同样处理的尿素标准液比色可求得血清中的尿素含量。

其反应式如下：【器材】1 ．血清；2 ．微量移液器；3 ．刻度吸量管；4. 沸水浴；5. 分光光度计。

【试剂】1 ．血清新鲜人或动物血清，无溶血。

2 ．酸性试剂（或称尿素氮试剂）在三角烧瓶中加蒸馏水约 100ml ，再加浓硫酸 4ml 及 85% 磷酸 66ml 。

冷至室温，加入氨基硫脲 50mg 及硫酸镉（CdSO 4 ·8H 2 O ） 2g （提高尿素与二乙酰反应灵敏度），溶解后用蒸馏水稀释至 1L 。

置棕色瓶在冰箱保存。

可稳定半年。

3 ．二乙酰一肟溶液称取二乙酰一肟 20g 。

加蒸馏水约 900ml ，溶解后，再用蒸馏水稀释至 1L 。

置棕色瓶中，贮放冰箱内可保存半年不变。

4 ．尿素氮标准液（ 14mmol/L ， 19.6mg/dl ）称取干燥纯尿素 4 2mg ，加少量蒸馏水溶解后，移入 100ml 容量瓶，加氯仿数滴防腐，再加蒸馏水至刻度，在冰箱中可稳定半年。

如用 8mmol/L 苯甲酸溶液代替蒸馏水配制，此标准溶液防腐效果更好。

【操作】取 3 支试管，标明测定管、标准管及空白管，按下表操作。

试剂（ ml ）测定管标准管空白管血清0.02 - -尿素氮标准液- 0.02 -蒸馏水- - 0.02 二乙酰一肟溶液0.5 0.5 0.5酸性试剂 5.0 5.0 5.0混匀后，置沸水浴中加热 12min ，取出，置冷水中冷却 5min 后，用于波长540nm ，以空白管调 0 ，读取并记录标准管及测定管吸光度值。

【计算】【注意事项】1 ．本法线性范围达 40mg/dl 尿素氮，即吸光度 0.7 。

第1篇一、实验目的1. 熟悉生物化学实验的基本操作步骤。

2. 掌握血清尿素测定的原理和方法。

3. 了解血清尿素在临床诊断中的意义。

二、实验原理尿素是哺乳动物体内蛋白质代谢的终产物，主要由肝脏合成，通过肾脏排泄。

血清尿素氮（BUN）是血液中尿素的浓度，是反映肾功能和体内氮代谢状况的重要指标。

本实验采用二乙酰-肟法测定血清尿素，该方法基于二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4,5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。

三、实验材料1. 血清样本：采集受试者空腹静脉血，分离血清。

2. 试剂：二乙酰试剂、强酸试剂、显色剂、空白试剂等。

3. 仪器：分光光度计、移液器、试管等。

四、实验方法1. 样本处理：取血清样本100μl，加入1ml强酸试剂，充分混匀后室温放置10分钟。

2. 显色：加入2ml显色剂，充分混匀，室温放置10分钟。

3. 测定：以空白试剂为参比，于540nm波长下测定吸光度。

4. 结果计算：根据标准曲线计算血清尿素含量。

五、实验结果1. 标准曲线绘制：将不同浓度的尿素标准品按照实验方法进行测定，绘制标准曲线。

2. 血清尿素含量测定：将受试者血清样本按照实验方法进行测定，得到吸光度值，根据标准曲线计算血清尿素含量。

六、结果分析1. 血清尿素正常范围为3.2～7.1mmol/L。

本实验受试者血清尿素含量在正常范围内，说明受试者肾功能正常。

2. 血清尿素升高可能见于以下情况：- 肾脏功能受损：如急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、肾小球肾炎等。

- 蛋白质摄入过多或分解代谢增强：如发热、创伤、肿瘤等。

- 肾前性少尿：如严重脱水、充血性心力衰竭、肝肾综合征等。

3. 血清尿素降低可能见于以下情况：- 蛋白质摄入减少：如营养不良、消化系统疾病等。

- 肝脏功能异常：如肝功能衰竭、肝脏病变等。

- 肾小球滤过功能下降：如肾小球肾炎、肾病综合征等。

七、实验讨论1. 本实验采用二乙酰-肟法测定血清尿素，该方法操作简便、准确度高，是临床常用的测定方法。

血清尿素氮测定的原理嘿，朋友们！今天咱们来聊一聊血清尿素氮测定这个事儿。

你可能会想，这血清尿素氮测定是啥玩意儿啊？为啥要测定它呢？先别急，听我慢慢给你说。

你看啊，咱们人体就像一个超级复杂又神奇的小宇宙。

身体里的各种物质就像小宇宙里的各个星球，都有着自己独特的作用和运行轨迹。

血清尿素氮呢，它就是这个小宇宙里比较重要的一个“小星球”。

那血清尿素氮是怎么来的呢？这就和咱们吃的东西有关啦。

咱们吃进去蛋白质，就像给身体这个大工厂送进去了原材料。

这些蛋白质经过身体里各种“小工人”（酶啊之类的物质）的加工，在肝脏这个大车间里就会产生尿素。

这尿素啊，就像是加工后的产品，会随着血液循环这个“运输大道”跑到肾脏那里去。

肾脏呢，就像一个超级精密的过滤器，它会把尿素过滤出来，然后排出体外。

这血清尿素氮其实就是血液里尿素所含的氮元素的量。

现在咱们就来说说这血清尿素氮测定的原理。

这就好比你要数清楚一个仓库里某种货物的数量一样。

不过，这个仓库就是咱们的血液，货物就是尿素氮。

目前啊，测定血清尿素氮有好几种方法呢。

有一种方法叫二乙酰一肟法。

这个方法可有趣了。

你可以把它想象成一场化学反应的小聚会。

在这个聚会里，二乙酰一肟就像一个超级活跃的小嘉宾，它会和尿素氮来一场特殊的“互动”。

在酸性的环境下，就像给这个聚会提供了一个特定的氛围一样，二乙酰一肟和尿素氮会发生反应，生成一种红色的化合物。

这红色的化合物就像聚会后出现的一个新标志一样。

然后呢，我们就可以通过比色的方法，就像比较颜色的深浅来判断这个红色化合物的多少，从而得出血清尿素氮的含量。

我给你打个比方啊，就像你看颜料混合后的颜色深浅来判断颜料量的多少一样。

这时候你可能会问，那这个方法准不准呢？其实啊，只要按照正确的操作流程来，这个方法还是挺靠谱的呢。

还有一种方法叫脲酶法。

这个脲酶啊，它可是尿素的“克星”。

脲酶就像一把专门开尿素这个锁的钥匙。

当脲酶遇到尿素的时候，就会把尿素分解掉。

这个过程就像拆积木一样，脲酶把尿素这个“大积木”拆成了氨和二氧化碳。

三级文件定标准操作程序第2页共3页生效日期：目的：规范血清尿素/尿素氮(Urea/BUN)测定标准操作规程。

范围：适用于血清尿素/尿素氮(Urea/BUN)测定的标准操作。

职责：生化部检验人员对本规程的实施负责。

规程：1 测定方法：采用动力学紫外法，定量测定血清中血清尿素/尿素氮(Urea/BUN)的含量。

2 测定原理脲酶尿素 + H2O 2NH+4 + CO2谷氨酸脱氢酶2NH+4 + α-酮戊二酸 + NADH + H+ L-谷氨酸 + 2NAD+ + H2O3 标本血清，肝素或EDTA抗凝血浆（不要用肝素铵的抗凝剂），处理方法见标本准备。

稳定性：20-25℃ 7天2 - 8℃ 7天-20℃ 1年4 试剂4.1试剂来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。

贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末R1：打开后机上稳定28天R2：打开后机上稳定28天准备：直接使用。

4.2 校准物来源：ROCHE配套校准物, 符合SRM916a标准，具体如下：S1：生理盐水S2：C.f.a.s贮存条件：校准物在2-8℃保存可保存至有效期。

准备：直接使用。

定标频率：A试剂盒在仪器上放置42天后B 试剂批号更换后C 由质控结果决定4.3 质控物来源：Precinorm (罗氏正常值质控)Precipath (罗氏病理值质控)其它适合的质控品贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。

准备：直接使用。

质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。

质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。

三级文件定标准操作程序第3页共3页生效日期：5 上机操作见GS200全自动生化分析仪操作维护保养程序。

6 参考范围6.1 尿素：10－50mg/dL6.2 血清/血浆：成人（18－60岁）：8－20mg/dL7 性能指标本法线性范围为血液：：5-400mg/dl ，不准确度允许范围X±9%，不精密度CV=3.4%，尿液：CV=1.9%，灵敏度5mg/dl。

实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法）一、实验目的与要求1 了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。

2 掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。

二、实验原理尿素在脲酶作用下分解生成氨。

在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁氰化钠催化生成蓝色的靛酶。

其反应式为： CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲酸O-2NH3+CO2氨NH3+OCl-NH2Cl+OH-次氯酸氨胺催化剂NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2苯酚P胺基苯酚HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O酚靛三、实验仪器与试剂1 仪器（1） AT648半自动生化分析仪1台；（2） 4孔恒温水浴锅1个；（3）振动摇床1台。

2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括：（1）试管架1个；（2） 2ml试管10个；（3） 20μl微量加样器1个；（4） 1ml移液管1个；（5） 5ml移液管2个；（6）吸耳球1个；（7）搪瓷盘1个；（8）微量加样滴头；（9）吸水纸。

3 本试剂盒内含5种试剂：（1）脲酶（冻干） 2瓶（2） pH 8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成 1×46ml（3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成 1×225ml（4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成 1×225ml（5）尿素氮标准液（20mg/dl） 2×2ml四、实验步骤1 血清（1）取脲酶一瓶，用23.0ml pH 8.0缓冲液溶解。

（2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。

表131系列反应管中所加溶液的量空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5 （3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。