Agilent_1100高效液相色谱仪操作规程[1]

高效液相色谱仪（Agile 1100型）标准化操作规程一、开机1、开机前准备：流动相使用前必须至少过0.4 μm滤膜，最好过0.2 μm滤膜；（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜纯净水，不能使用超过3天的纯净水，以防止长菌或长藻类）；水相混匀后超声10~15分钟脱气（有在线脱气机不需超声脱气）；把流动相放入溶剂瓶中（棕色瓶可以防止藻类生长）。

一般A瓶：为有机相；B瓶：为水相。

有机溶剂通道和盐溶液通道要固定，不要互换。

避免使用下述可腐蚀钢铁的溶剂：·碱金属卤化物及其酸溶液(如：碘化锂、氯化钾等)。

·高浓度无机酸，如硝酸、硫酸.·可能含有过氧化物的色谱醇醚(如THF、二氧六环、二丙基乙醚)。

这些在使用前必须用干燥氧化铝过滤除去过氧化物。

·含强络合剂的溶液(如EDTA，乙二胺四乙酸)。

·四氯化碳与2 -异丙醇或四氢呋喃的混合液。

2、打开电脑，进入Win 2000或NT界面。

（Agilent 在Win 2000和NT操作系统下稳定）3、双击CAG Boodp server图标，放大CAG Boodp server小图标，出现窗口，5min内自下至上打开各模块电源，并待各模块自检完成后(指示灯变成黄色)，等待1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭CAG Boodp serve窗口。

4、双击online图标，仪器自检，进入工作站。

该页面主要由以下几部分组成：——最上方为命令栏，依次为File，Run Control，Instrumen…等；——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等；——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告；——中下部为动态监测信号；——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。

5、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。

二、编辑参数及方法1、开始编辑完整方法：从“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击OK，进入下一画面。

2、方法信息：在“Method Comments”中加入方法的信息，如方法的用途等。

单击OK，进入下一画面。

3、泵参数设定：进入“auxiliary”画面，设置“minimum stroke”（最小冲程）和“compressibility”（压缩因子）（注意：以上两个参数不包括在方法里，如拷贝方法，该两个参数需重新设置成相同数据，否则条件无法重现）；进入“Setup pump”画面，在“Flow”处输入流量，如1ml/min；在“Solvent B”处输入水相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert 一行“Timetable”，编辑梯度；输入保留时间；在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压（注意：聚四氟乙烯密封圈的压力范围为：0-200bar；建议在泵的压力限制中，将最大压力设为200bar），以保护柱子。

单击OK，进入下一画面。

4、柱温箱参数设定：在“Temperature”下面的方框内输入所需温度。

柱温的设定通常选择比常温（25℃左右）高10℃左右，但一般不超过50℃5、DAD检测器参数设定：进入“DAD signals”画面，输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽（参比波长带宽默认值为100nm）；选择Stoptime：as Pump；在“Spectrum”中输入采集光谱方式“store”：选All；如只进行正常检测，则可选None；范围Range：可选范围为190~950nm；步长Step可选2.0nm；阀值：选择需要的灯；Peak width（Response time）即响应值应尽可能接近要测的窄峰峰宽，可选“2s”或4s；Slit-：狭窄缝，光谱分辨率高；宽时，噪音低。

可选4nm，单击OK，进入下一画面。

6、VWD检测器参数设定：VWD检测器参数设定: 在“Wavelength”处输入所需的检测波长, 在“Peak width (Response time)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min (2s)。

在Timetable 中可以“Insert”一行，输入随时间切换的波长，如1min ，波长=300nm。

点击ok进入下一画面。

7、进入“Signal Details”画面，单击OK，进入下一画面。

8、进入“Edit Integration Events”（编辑积分结果）画面，单击OK，进入下一画面。

9、进入“Specify report”（积分参数）画面，单击OK，进入下一画面。

10、进入“Instrument curves”画面，单击OK，进入下一画面。

11、进入“Run Time checklist”（运行时间表）画面，选择“Date Acquisition”和“Standard Date Analysis”，单击OK，完成参数设定，回到工作站画面。

12、单击“Method”菜单，选中“Save method as”，输入文件名，单击OK。

（路径：e\HPCHEM\1\methods\***）注：如果调用一个方法，则在“Method”菜单，选中“Load method”，选方法名，单击OK。

13、从菜单“View”中选择“Online signal”，选中Window 1 ，然后单击Change钮，将所要绘图的信号移到右边的框中，点OK。

（如同时检测二个信号，则重复11，选中Window 2）。

三、运行样品1、单击泵（Pump）图标下面的小瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，并且选停泵体积。

单击OK。

2、手动打开Purge阀：逆时针转2~3圈。

3、单击泵（Pump）图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。

更换溶剂时，将该通道比例改为100%，Flow：5ml/min，单击OK。

)4、开泵：直接点Pump图标下面的泵开关小图标，或单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK。

5、系统开始排液（Purge），直到该通道管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道（将切换后须排除气泡的通道比例改为100%）继续排液，直到所有通道无气泡为止。

（每个管线内液体约20ml，在5ml/min的流速下，均需4~5min才能排完，如仪器配有标准脱气机则须至少7min才能排完气泡）6、单击泵（Pump）图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。

在“Solvent ”处输入各溶剂瓶中溶剂实际体积比。

把Flow改为0.2~1.0ml/min，单击OK。

7、等待流速降下来后，关闭排液阀。

（拧上即可，不可太紧）8、待压力稳定后，从“Instrument”菜单中选择“System on”或单击GUI图标的On图标启动系统。

开始走基线，并可选择观察信号。

注：仪器运行过程，画面颜色由灰色转变成黄色或绿色，当各部件都达到所设参数时，画面均变为绿色，左上角红色的“not ready”变为绿色“ready”，表明可以进行分析。

（此时如果要终止仪器的运行，可单击流程图右下角的“off”，再单击“Yes”，关闭输液泵和检测器氘灯）。

9、单击最大化按钮，将online Plot窗口放大。

待基线平稳后，点信号窗口的“Balance”，调至零点。

10、等仪器Ready ，从“Run control”菜单中选择F5或“Run method”。

11、编辑样品信息：从“Run control”菜单中选择“Sample into”选项，选择“Sample Info…..”，即打开了样品信息页面，输入操作者（Operator Name）、数据存贮通道（Subdirectory）、样品名（Sample Name）、进样瓶号（Vial）、浓缩因子（Multiplier）、稀释因子（Dilution）、，“Data file”中选择“Prefix”，在Prefix框中输入批号或日期等，在Counter框中输入计算器的起始位，仪器会自动命名。

（样品量（Sample Amount）、内标量（ISID Amount）可不选，Location只对自动进样器有用，不填则走空白，检查干扰峰的来源。

）单击OK。

12、进样分析：手动进样：六通阀使用和维护注意事项：①生物样品进样前必须j经过前处理以澄清溶液进样，以减少微粒对进样阀的磨损。

②将进样阀扳到Load位置，插入注射器，注样品，进样后扳动阀至Inject 位置。

③转动阀芯时要快，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力；再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。

④为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。

通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。

自动进样：在“stop time”处输入运行时间。

13、进样分析结束，点Close键退出样品分析。

（注意：检测完尽量要关DAD和VWD的灯，以保持灯的寿命。

单击DAD图标，出现参数设定菜单，单击control ，选择关灯。

）四、数据分析方法编辑（可在offline下操作）1、从“View”菜单中选“Date analysis”进入数据分析画面。

该页面最上方为命令栏，依次为File，Graphics，Integration……等。

命令栏下为快捷操作图标，如积分、校正、色谱图、单一色谱图调用、多色谱图调用、调用方法、保存等。

2、从“File”菜单中选“Load signal”，或单击快捷操作的“单一色谱图调用”图标，选择色谱图文件名，单击“ＯＫ”，画面中即出现所调用的色谱图。

3、做图谱优化，从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项。

从Ranges中选择Auao scale及合适的显示时间，单击OK，或选择“Use Ranges”调整。

反复进行，直到图的比例合适为止。

4、积分（1）先调用所要分析的色谱图，从“Integration”中选择“Auto integrate”，从“Integration”中选择“Integration Results”，此时仪器将内置的积分参数给出积分结果。

如积分结果不理想，再从“Integration”菜单中选择“Integration Events”选项，或单击快捷操作的“编辑/设定积分表”图标，此时，在屏幕下方左侧出现积分参数表，右侧为积分结果，在积分参数表中按实际的要求输入修改的参数，如斜率（Slope sensitivity）、峰宽（Peak width）、最小峰面积（Area reject）、最低峰高（Height reject）等。