氨基酸的分离鉴定 纸层析法实验报告

第 1 页 共 1 页 氨基酸的鉴定(纸层析法)

1、掌握纸层析法的基本原理

2、 通过对氨基酸的分离，掌握纸层析的操作方法并学会分析未知样品中的氨基酸组分。实验原理：

1、层析法又称色谱法(Chromatography)，是一种物理的分离方法。利用混合物中各组分物理化学性质的差异(如吸附办、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等)，使各组分以不同程度分布在固定相和流动相两相中，并使各组分以不同速度移动，从而得到有效的分离。操作方式: 纸层析、薄层层析、柱层析等。分离机理: 分配层析、吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析等。

2、纸层析法是用滤纸作为情性支持物的分配层析法，展层溶剂由有机溶剂和水组成。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，在滤纸上水就被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相。当有机溶剂(流动相)

沿纸流动经过层析点时，层析点上溶质就在水相和有机相之间不断进行分配。由于溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。物质被分离后在纸层析图谱上的移动速率用Rf值来表示：

第 1 页 共 1 页 3、 在一定条件下，物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。

4、 本实验利用纸层析法分离氨基酸，利用茚三酮反应将氨基酸层析点显色来鉴定氨基酸的种类。试剂：

1、酸性展层剂正丁醇：88%甲酸:水=15:3:2

2、显色储备液：0、4mol/L茚三酮-异丙醇:甲酸:水=20:1:5

3、标准氨基酸溶液(6mg/ml,苯丙氨酸Phe、甘氨酸Gly、脯氨酸Pro、组氨酸His)

4、 未知样品液：上述4种氨基酸中的一种或几种混合液(每组任选一个样品)实验器材：

1、滤纸

2、 烧杯

3、 剪刀

4、 毛细管

5、 层析缸

6、 微量注射器

7、 电吹风

8、 保鲜膜操作方法：

1、点样

第 1 页 共 1 页 1、量取30ml层析溶剂、1ml显色贮备液于层析缸中，混匀密闭，静置。（展层缸洗净后应除去多余的水，否则会影响展层溶剂的比例而影响展层）

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纸色谱法实验报告

篇一：纸层析法分离氨基酸实验报告

前言

纸层析法纸层析法又称纸色谱法，是目前广泛应用的一种分离技术。本世纪初俄国植物学家m.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。它是一种以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。用斑点扫描仪或将组分

2 16 点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。

纸层析法（paperchromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析工具。纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。

在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如gc、hpLc应用普遍。在

做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体与层析液（石油醚）混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。由此观查出各种色素的相对含量和种类。

纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快，反之则慢；含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法能清楚地将叶绿体中的色素分离。

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氨基酸纸上层析实验报告

篇一：实验六氨基酸的纸层析法

氨基酸的纸层析法

一．目的

了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。

二、原理

以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法；有上向下移动的，称为下行法。将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。

2 12 在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、ph值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（Rf值）Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。用混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。这种方法称为双向层析法。

本试验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。

三、实验仪器

1、新华滤纸

2、层析缸

3、细线

4、点样管

5、橡皮筋

6、电吹风

7、喷雾器

四、实验试剂

1、混合氨基酸（精氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸）

2、展层剂：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸馏水=13：3：3：1（v:v）

3 12 3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml无水丙酮，贮于棕色瓶中

五、实验步骤

1、取滤纸剪成20×10厘米的滤纸条一张，在一端打孔，系一根细线，在另一端2~3cm处用铅笔画一横线，中间画一圆点（原点）。

氨基酸双向纸层析实验报告

实验目的：掌握氨基酸双向纸层析法的原理和操作方法，熟悉氨基酸在纸层析时的行为，学习如何用此方法分离氨基酸混合物。

实验原理：

纸层析是一种简单，快速而经济实惠的氨基酸分离方法之一。它的原理是利用氨基酸在纸上所表现的生物学或化学特性将混合的氨基酸分离成单独的成分。纸层析有两种类型：单向和双向。在单向纸层析中，样品放置在纸上一侧，溶液向纸另一侧移动。而在双向纸层析中，则要求溶液从两侧移动，使样品分布在纸的中间。

实验方法：

1. 在一个试管中准确称取混合氨基酸0.2g，在其中加入15ml甲醇和5ml去离子水，并充分振荡溶解。

2. 准备好纸层析装置和氨基酸标准溶液，在纸层析平板上或纸层析胶带片上涂上一定量的纸层析液，并让其干燥。

3. 在纸层析平板上放置两片氨基酸标准溶液，最好选择邻近、分子量差异较大的氨基酸。注意将标准溶液涂在同一平行线上。

4. 在纸上另一侧涂上已溶解好的混合氨基酸溶液，然后安装纸层析槽盖板，使其充分固定。

5. 向纸层析槽中注入50ml氨基酸移动液，并允许移动液从两侧向中间移动。

6. 移除液面上的任何泡沫，并允许柱段将混合物分离到不同的位置。

7. 要测定纸层析板上各氨基酸物质的位置，使用如Arnold、Poutu或Ninjaoxin之类的可见物质校正剂，可以在层析板上生成图案，并从分离的氨基酸上观察这些图案。或者，将纸层析板放入I2墨汁中显化氨基酸，通过颜色的形成来确定各氨基酸的位置。

实验结果：

在实验中分离出了不同的氨基酸，观察到它们独立移动并在不同位置生成不同的化学图案，测定其Rf值并与标准氨基酸作对比，进一步证明了氨基酸双向纸层析法的可靠性。

结论：

双向纸层析法是一种便捷、经济实惠、分离能力比较强的氨基酸分离方法。但其准确度与其他准确度更高的氨基酸分离方法相比稍低，实验条件的不同可能会导致分离结果的误差。因此，选择合适的实验操作，特别是氨基酸的选择和标准品的准备，将有助于获得更准确、可重复的数据。