医学检验·检查项目：载脂蛋白AⅡ_课件模板

④免疫印迹分析
取出转移后的NC膜在洗涤液中洗3次后，置封 闭液中室温封闭3h（或37℃1h
在洗涤液中洗3次
加入1：100稀释的第一抗体并充分混匀，37℃ 温浴6h（或过夜）
用洗涤液洗5次（10min×5）甩干
加入1：500稀释的第二抗体，混匀，37℃作用 2h
洗涤同上
加入新配制的底物溶液于室温下摇动直至出现 紫色（或紫褐色）并看到背景（1～5min）时 用蒸馏水冲洗终止反应，空气干燥封于塑料袋
Marcovina等
应用SDS-1.5%agarose凝胶电泳结合 免疫印迹技术，首次报道人类至少 有35种Apo（a）异构体，此法是在 Kamboh等法基础上发展起来的一种 高分辨的分析方法。
上述两类方法有许多共同点，即首先 采用电泳技术将Apo（a）与其他载 脂蛋白分离，然后Western blotting，灵敏而特异地显示Apo （a）多态区带的位置，最后根据其 与ApoB100电泳速率比较或根据其分 子量大小而确定Apo（a）表型。
免疫印迹反应中也可选用鼠抗人Apo（a） 单克隆抗体作为一抗，用酶标兔抗鼠IgG 作为二抗。
应用酶标抗体反应作为二抗时，底物以 脂溶性4-氯-1-萘酚或联茴香胺较水溶性 DAB溶液为好
金标、I125标抗体作为二抗，通过银染或 放射自显影技术显示Apo（a）蛋白区带
将生物素标记的抗体作为二抗，通过生 物素-亲和素系统放大信号，可大大提高 检测敏感性
③电转移
取此凝胶，切下分子量蛋白带放入SDS洗脱 液中过夜，以固定凝胶大小并洗脱掉未与蛋 白结合的SDS，0.01%考马斯亮蓝G-250染色 室温1h，7%乙酸脱去背景颜色。
剩余凝胶铺在已浸过转移电泳缓冲液的NC膜 上，搭建滤纸/凝胶/NC膜/滤纸一同放在电 泳转移支架上，按层次相夹置于装满转移电 泳缓冲液的电泳槽中。120V电泳6h（30℃以 下）或4℃30V转移过夜

谢谢！
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临床意义：
1.升高：见于肝病如急慢性肝炎、肝 硬化等，肾病综合征，糖尿病以及恶性肿 瘤等。 2.降低：见于急性肾小球肾炎、 急性胰腺炎、胃溃疡、肺气肿、慢性肝炎、 类风湿性肝炎、糖尿病、甲状腺功能亢进 症、弥散性血管内凝血(DIC)、抗纤维蛋 白溶解治疗、心脏手术、营养不良。
医学检验·各论 血清α2-巨球蛋白
（α2-Mห้องสมุดไป่ตู้） 内容课件模板
医学检验·各论：血清α2-巨球蛋白（α2-MG） >>>
别名： α2-聚球蛋白,α2-巨球蛋白。
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简介：
α2-巨球蛋白是血浆中分子量最大的 蛋白质，在肝细胞与单核-巨噬细胞系统 合成，其具有酶抑制剂的作用，能调节细 胞外蛋白水解，还可以刺激淋巴细胞和粒 细胞发育。测定血液中α2-巨球蛋白对诊 断肝、肾疾病有一定的意义。
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相关症状： 腹部肿块、腹水、腹痛、脱水、恶心与呕 吐、食欲异常。
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相关疾病：
慢性溃疡性结肠炎、弥漫性血管内凝血、 急性胰腺炎、糖尿病、营养不良、隐匿性 肾小球肾炎、肾病综合征、胃、十二指肠 溃疡出血、原发性巨球蛋白血症肾损害、 阻塞性肺气肿、肝硬化、弥散性血管内凝 血、小儿急性胰腺炎、小儿原发性肾病综 合征、甲亢、膜性肾小球肾炎、病毒性肝 炎、肺气肿、消化性溃疡。
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临床意义：
降低：冠心病、糖尿病、肾病综合征、 遗传性ApoA-Ⅰ缺乏症(Tangier病)、家族 性低α-脂蛋白血症、鱼眼病、重度营养 不良、肝炎活动期、肝功能低下。
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正常值： 免疫透射比浊法：1.01～1.32g/L;
火箭免疫电泳法：1.02～1.36g/L。
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相关检查： 心电图、动态心电图（Holter监测）、心 血管造影、血糖测定、全血糖化Hb、餐后 2小时血葡萄糖（2HPG,PBG）。
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相关症状： 高血脂性血管损害、心悸伴心率异常、劳 累后感觉胸闷、胸痛伴胸闷、心悸、胸闷 憋气、孕妇胸闷气短。
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医学检验·各论 载脂蛋白AⅠ 内容课件模板
医学检验·各论：载脂蛋白A分各类脂 蛋中均含有一种和几种不同特异性载脂蛋 白。目前已经发现的载脂蛋白有20余种。 其中主要有aPOA1、AⅡ、B-100、B48、 CⅠ、CⅡ、CⅢ、D、E等。
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相关疾病：
高渗性非酮症性糖尿病昏迷、II型糖尿病、 I型糖尿病、糖尿病、心绞痛、小儿糖尿 病肾病、小儿糖尿病、冠状动脉粥样硬化 性心脏病、糖尿病乳酸性酸中毒、糖尿病 肾病、糖尿病酮症酸中毒、猝死型冠心病、 缺血性心肌病、妊娠合并糖尿病、冠心病。
谢谢！

医学检验·各论 血清α2-巨球蛋白
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别名： α2-MG。
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简介：
α2-MG是血浆中分子量最大的蛋白质， 由肝细胞与单核-巨噬细胞系统合成。半 衰期约5天，具有酶抑制剂的作用。能调 节细胞外蛋白水解，还可刺激淋巴细胞和 粒细胞发育。测定血液中α2-巨球蛋白对 诊断肝、肾疾病等有一定意义。
3.50g/L (150～350mg/dl); 女：1.75～ 4.70g/L (175～470mg/dl)。
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相关检查：
血清免疫球蛋白测定、抗甲状腺微粒体抗 体、甲状腺、甲状旁腺的超声检查、血糖 测定、全血糖化Hb、餐后2小时血葡萄糖 （2HPG,PBG）。
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临床意义：
(1)升高：肾病综合征、肝硬化、糖 尿病、急慢性肝炎。 (2)降低：肺气肿、 慢性肝炎、糖尿病、甲状腺功能亢进症、 急性肾小球肾炎、急性胰腺炎、弥散性血 管内凝血(DIC)、营养不良。
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正常值： 免疫扩散法(RID法)： 男：1.50～
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相关疾病： 肾病、糖尿病酮症酸中毒、妊娠合并甲亢、 妊娠合并糖尿病。
谢谢！
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相关症状： 周身出汗、口干、心悸伴消瘦、腹泻、消 瘦、出汗异常、心悸。
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医学检验·各论 脂蛋白a（Lp-a）
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别名： 血清脂蛋白-a。
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简介：
脂蛋白a主要是在肝脏合成，主要的 功能是阻止血管内血块溶解，促进动脉粥 样硬化形成。脂蛋白水平持续升高与心绞 痛、心肌梗死、脑溢血有密切关系。是冠 心病的独立危险因子。
医Hale Waihona Puke 检验·各论：脂蛋白a（Lp-a） >>>
临床意义：
增高：见于动脉粥样硬化性心脑血管 病、急性心肌梗死、家族性高胆固醇血症、 糖尿病、大动脉瘤及某些癌症等。 减低： 见于肝脏疾病、酗酒、摄入新霉素等药物 后。
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正常值： 10～140mmol／L(0～300mg／L)。
谢谢！
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相关检查： 血清脂蛋白和血清脂蛋白电泳。
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相关症状： 高血脂性血管损害、背部有隐约麻痛不适、 腰背痛、身痛、心脏杂音、心脏震颤。
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相关疾病：
动脉瘤、高血脂、心律失常、原发性心脏 肿瘤、心包肿瘤、心肌梗死、心肌梗塞并 发心室间隔穿破、心肌梗塞并发左心室室 壁瘤、心绞痛、心原性肝硬化、急性心肌 梗死、主动脉瘤、高脂蛋白血症、缺血性 心肌病、冠心病。

并受炎性介质的调节。 • 水解ox-LDL-C上的磷脂，生成促炎物质lyso-
PC和ox-FA，因此具有促炎症和促动脉粥样硬 化的作用 。
Lp-PLA2在粥样斑块形成中的作用
血管腔 氧化型 LDL
内膜
单核细胞 细胞因子
粘附分子
粥样斑块形成
Lp-PLA2
溶血卵磷脂 氧化脂肪酸
巨噬细胞
泡沫细胞
中膜
稳定斑块vs易损斑块组织学特征对比
是一个可用于冠心病药物干 在干预治疗中不是一个特异靶点 预治疗的特异靶点
Lp-PLA2生物变异性低
% with Elevated Biomarker % Intra-Individual CV
50% 40%
46%
50% 40%
42.6%
30% 20%
30% 20%
22.8%
10% 4%
0%
Lp-PLA2
hs-CRP
血管内皮炎症的标记物
全身性炎症的标记物
由巨噬细胞产生
全身炎症急性期由肝脏产生
在血管炎症过程的早期阶段 在心血管疾病中的具体作用不清
启动
楚
不受其他炎症性疾病影响 在所有炎症性疾病患者中均升高
是一个可用于冠心病药物干 在干预治疗中不是一个特异靶点 预治疗的特异靶点
Lp-PLA2 vs HCY
的炎性反应标志物
内容
• 心脑血管疾病现状及研发背景 • Lp-PLA2与动脉粥样硬化的关系 • 临床研究 • 临床意义 • 康尔克Lp-PLA2定量检测试剂盒简
介 • 产品详解与注意事项
Lp-PLA2
• 脂蛋白相关磷脂酶A2，英文缩写Lp-PLA2。 • 又称血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）。 • 分子量为45KDa 。 • 由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，

种类：
已有很多种，主要有LDL受体、残粒受体（remnant receptor） 及清道夫受体（scavenger receptor）其它有ApoE受体（CM） HDL受体和β-VLDL受体等。
.
16
各种脂蛋白受体功能
➢LDL受体： 分布于肝细胞、动脉壁平滑肌细胞等细胞膜表面 识别结合ApoB100、E的脂蛋白如LDL、VLDL等。 合成受体内胆固醇的负反馈调节
2.胆固醇与高铁 – 硫酸试剂产生稳定的紫红色
Zak反应： Zak提出用硫酸、醋酸和Fe3+等与胆固醇作用生成紫红色化合物 来测定胆固醇，称为Zak反应。 （比L-B反应的灵敏度高，呈色稳定不需要皂 化，反应特异性差）
Ⅱa Ⅱb 同上 Ⅱb
Ⅲ
以甘油三酯升高为主，可有轻度胆固醇升 高，VLDL明显增加。
Ⅳ
.
30
（二）低脂蛋白血症
定义：
一般将血清TC＜3.3mmol/L，或TG＜0.45mmol/L，或LDL-C＜ 2.1mmol/L者，称为低脂蛋白血症。脂质如TC和TG同时降低或脂蛋白 如HDL、LDL和VLDL同时降低多见。
蛋 白
－
＋
电
泳
原点 γ β α2 α1 清蛋白
血
浆
脂
蛋－
＋
白
电
泳
原点
β 前β α
（CM）
.
8
（二）血浆脂蛋白的组成与结构
脂类：甘油三酯、磷脂、胆固醇、胆固醇酯 血浆脂蛋白
蛋白质：载脂蛋白
.
9
各种血浆脂蛋白的组成及功能
密度
脂 组类
成
蛋 白
质
主要生 理功能
CM 乳糜微粒
＜0.95

医学检验·各论 血脂四项
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简介：
常用的血脂检查项目有七项：胆固醇、甘 油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂 蛋白胆固醇、脂蛋白(a)、载脂蛋白AⅠ、 载脂蛋白B。 一、胆固醇(TC，CHO) 参考值： 合适水平：≤5.17mmol/L(200mg/dL) 临界范围：5.20～5.66mmol/L(201～ 219mg/
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简介： apoB可以减少冠心病发病及促进粥样斑块 的消退。
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正常值： 。
医学检验·各论：血脂四项 >>>
相关检查： 血清甘油三脂、血清胆固醇与磷脂比值、 血清磷脂、高密度脂蛋白胆固醇、极低密 度脂蛋白-胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇。
医学检验·各论：血脂四项 >>>
简介：
恶性肿瘤等。 五、脂蛋白(a)［Lp(a)］ 参考值：10～140mmol／L(0～300mg／L) 病理性升高：≥300mg/L 临床意义：Lp(a)升高增加动脉粥样硬化 和动脉血栓形成的危险性，其浓度增加是 动脉粥样硬化性心血管疾病的一个独立的 危险因素。 六、载脂蛋白AⅠ(ap
医学检验·各论：血脂四项 >>>
简介：
发生动脉粥样硬化的重要危险因素之一， 用于判断是否存在患冠心病的危险性，也 是血脂异常防治的首要指标。 升高：可见于遗传性高脂蛋白血症、甲状 腺功能低下、肾病综合征、梗阻性黄疸、 慢性肾功能衰竭、Cushing综合征等。 降低：可见于无β-脂蛋白血症、甲状腺 功能亢进、消化吸收不良、肝硬化
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医学检验·各论：血脂四项 >>>
简介：
L(150mg/dL) 临界范围：1.69～2.25mmol/L(150～ 200mg/dL) 升高：2.26～5.63mmol/L(200～500mg/dL) 极高：≥5.64mmol/L(500mg/dL) 临床意义： 升高： TG升高的危害：甘油三酯也是冠心病发病 的一个危险因
医学检验·各论：血脂四项 >>>
相关症状： 血脂异常、高血脂性血管损害、血浆胆固 醇水平高、血清TC水平升高、煤尘或胆固 醇结晶的黏痰。
医学检验·各论：血脂四项 >>>
相关疾病：
脑出血、高血压肾病、高血压脑病、老年 人高脂血症、老年人原发性恶性高血压引 起的恶性小动脉肾硬化、糖尿病和高血压、 高血脂、高血压危象、获得性高脂蛋白血 症、妊娠高血压综合征、妊娠合并原发性 高血压、高脂血症、小儿肺动脉高压、小 儿肾血管性高血压、高血压、高血压性脑 出血、小儿高血压、肾血管性高血压、妊 高征。
医学检验·各论：血脂四项 >>>
简介：
恶性肿瘤等。 五、脂蛋白(a)［Lp(a)］ 参考值：10～140mmol／L(0～300mg／L) 病理性升高：≥300mg/L 临床意义：Lp(a)升高增加动脉粥样硬化 和动脉血栓形成的危险性，其浓度增加是 动脉粥样硬化性心血管疾病的一个独立的 危险因素。 六、载脂蛋白AⅠ(ap
医学检验·各论：血脂四项 >>>
简介：
g/L 临床意义：Lp(a)升高增加动脉粥样硬化 和动脉血栓形成的危险性，其浓度增加是 动脉粥样硬化性心血管疾病的一个独立的 危险因素。 六、载脂蛋白AⅠ(apoAⅠ) 参考值：1.20～1.60g/L 临床意义：一般情况下，apoAⅠ可以代表 HDL水平，与HDL-C呈明显正相关。低于

〔1〕受试者应处于稳定代谢形状；〔2〕受 试者应在血脂分析前至少2周内坚持普通饮食 习惯和体重稳定；〔3〕如血脂检测异常，在 作出进一步处置医学决议前，应在两月内进 展多次测定，但至少要相隔1周；〔4〕测定 前24小时内受试者不应进展猛烈体育运动； 〔5〕禁食或非禁食标本均适用于TC测定，但 对于TG和其他脂蛋白检测需求禁食12小时； 〔6〕抽血前受试者至少应坐位休憩5分钟； 〔7〕静脉穿刺过程中止血带运用不应超越1 分钟；〔8〕血清或血浆标本均适用于TC、
〔3〕临床要素，如①疾病诱导(内分泌或代谢 性疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、储存性疾病、 急性或暂时性疾病等)，②药物诱导〔抗高血 压药、免疫抑制剂和性激素等〕；
〔4〕标本搜集与处置，如禁食形状、血液浓缩、 抗凝剂与防腐剂、毛细血管与静脉血标本储 存等。
减少血脂和脂蛋白测定分析前要素对结果 影响的方法
CM主要功能是转运外源性TG及Chol。 VLDL主要功能是转运内源性TG。 LDL主要功能是将肝合成的内源性Chol
转运至肝外组织。 HDL主要功能是参与Chol由肝外组织转
运至肝的逆向转运。
血浆载脂蛋白的分类
apo A ： apo AI、 apo AⅡ、 apo A Ⅲ apoB： apoB100、 apoB48 apo C： apo CI、 CⅡ、CⅢ apoD： apoE： apo EI、 EⅡ、EⅢ
调理脂蛋白代谢关键酶
如脂蛋白脂肪酶(LPL) 卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT) 肝脂肪酶(HL)
高脂血症
高脂血症是指血浆中Chol和/或TG程度升 高。由于血脂在血中以脂蛋白方式运输，实 践上高脂血症也可以为是高脂蛋白血症。血 浆中HDL-C降低也是一种血脂代谢紊乱。故 有人建议采用脂质异常血症(dyslipidemia)一词 全面准确反映血脂代谢紊乱形状。