DNA浓度测定

DNA定量测定(二苯胺法)实验报告
实验目的：利用二苯胺法对DNA进行定量测定，获得DNA
的浓度信息。

实验原理：二苯胺法是一种常用的DNA定量测定方法。

其原
理是DNA与二苯胺反应生成发色产物，并在560 nm波长下
具有最大吸收量，通过测定吸光度来计算DNA的浓度。

在实
验中，先将待测的DNA样品与二苯胺溶液反应得到发色产物，然后通过比较其吸光度与已知浓度标准曲线的关系来计算待测样品的DNA浓度。

实验步骤：
1. 准备工作：将工作区域消毒，摆放实验所需仪器器材。

2. 制备标准曲线：依次稀释5 μg/mL的DNA溶液，得到一系
列不同浓度的DNA标准溶液。

将标准溶液与相同体积的二苯
胺溶液混合，反应10分钟。

然后在560 nm波长下测定溶液的吸光度，并绘制标准曲线。

3. 处理待测样品：将待测样品与相同体积的二苯胺溶液混合，反应10分钟。

然后在560 nm波长下测定溶液的吸光度。

4. 计算DNA浓度：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代
入计算公式，得到DNA的浓度。

实验结果：
标准曲线数据：（以吸光度为横坐标，DNA浓度为纵坐标）
吸光度（A） DNA浓度（μg/mL）
0.1 1
0.2 2
0.3 3
0.4 4
0.5 5
待测样品数据：
吸光度（A） = 0.25
根据标准曲线计算得到的DNA浓度为2.5 μg/mL
实验结论：根据二苯胺法对DNA的定量测定结果，待测样品的DNA浓度为2.5 μg/mL。

DNA浓度和纯度的测定可以有两种方法：分光光度法溴化乙锭法Ⅰ分光光度法：一、目的熟练掌握分光光度法检测DNA纯度和浓度的方法。

二、原理DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm处。

波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。

对标准样品来说，浓度为1μg / ml时，DNA钠盐的OD260＝0.02当OD260＝1时，dsDNA浓度约为50μg / mlssDNA浓度约为37μg / mlRNA浓度约为40μg / ml寡核苷酸浓度约为30μg / ml（youyu底物不同有差异）当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA吸光度的准确测定。

一般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230，计算其比值来衡量样品的纯度。

经验值：纯DNA：O D260/OD280≈1.8(＞1.9,表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染）纯RNA：1.7 ＜OD260/OD280＜2.0（＜1.7时表明有蛋白质或酚污染；＞2.0时表明可能有异硫氰酸残存）若样品不纯，则比值发生变化，此时无法用分光光度法对核酸进行定量，可使用方案二的方法或其他方法进行估算。

三、材料、试剂及器具1、材料提取的PUC19样品、PUC19标准样品2、试剂灭菌重蒸水，TE缓冲液3、器皿石英比色皿；UV-240紫外分光光度计四、操作步骤1、UV-240紫外分光光度计开机预热10min.2、用重蒸水洗涤比色皿，吸水纸吸干，加入TE缓冲液后，放入样品室的S池架上，关上盖板。

3、设定狭缝后校零。

4、将标准样品和待测样品适当稀释（DNA5μl或RNA4μl用TE缓冲液稀释至1000μl）后，记录编号和稀释度。

5、把装有标准样品或待测样品的比色皿放进样品室的S架上，关闭盖板。

6、设定紫外光波长，分别测定230nm、260nm、280nm波长时的OD值。

DNA/RNA浓度测定（Nanodrop仪器检测）实验材料：实验器材：Nanodrop 2000仪器，微量移液器，10微升枪头，擦镜纸实验试剂：ddH2O实验步骤：1.在样本测量臂处于关闭状态，运行NanoDrop软件2.接着会出现几个连续提示框，选择“是”3.左边的界面只需勾选Add to report，其它选项一般情况下不用管。

右边Sample ID里给样品命名，Type里选择样品类型DNA或者RNA4.清洁光纤表面：做Blank前加2µL蒸馏水到下光纤表面，放下检测臂，然后抬起来用滤纸将上下检测臂的水吸干，反复清洗至少3次，如此可保证Blank准确；5.做空白对照：抬起检测臂，用移液枪吸取适量Blank液体（也就是样品对应的溶解液）加到下光纤表面,放下检测臂，点击Blank做空白对照；6.复检：用滤纸擦净上下检测臂，用移液枪再次吸取适量的Blank液，放下检测臂，点击Measure，测量结果若在±0.1范围内可以进行样品的检测，若超出该范围，表明清洗不充分，需要进一步清洗；7.加样测量：抬起检测臂，将上下光纤表面的液体用滤纸吸干，吸取适量样品（核酸1.5-2µL，蛋白2-2.5µL，请先将样品混匀）加到下光纤表面，放下检测臂，两个光纤之间会形成液柱，点击Measure测量，软件右边就会出现测量结果；8.结果判读：260/280－260nm和280nm处的吸光值的比值，这个值用来判定DNA和RNA 的纯度。

纯DNA的比值在1.8左右，纯RNA的比值在2.0左右。

如果这个比值偏小，表明有蛋白，苯酚或者其他污染物存在，这些物质在280nm处有明显的光吸收。

260/230－260nm和230nm处的吸光值的比值，这是一个次要的核酸浓度指示值。

纯核酸的这个比值比260/280比值大，一般在1.8-2.2之间，如果比值偏低，表示核酸中有污染物。

注意事项：1.测量前要用蒸馏水清洗上下光纤端面至少3次，然后再做Blank；2.复检测量在允许±0.1范围内可保证样品测量的准确性；3.全部检测结束后清洗3次，保持原位，清理台面；4.放上光钎时，轻拿轻放，保护仪器的安全，仪器操作不清楚，请联系仪器负责人代检测。

OD值1.朗伯比尔(Lambert — beer)光吸收TE律：A =—lgT = e b cA —一吸光度，又称光密度“O.D：'T—一透光度，T = I / I。

，I。

一一为照射到吸收池上的光强，I——为透过吸收池的光强。

8-―摩尔吸光系数或克分子吸光系数( L?mol — 1?cm— 1)。

b——样品光程(cm),通常使用1.0cm的吸收地，b-1cm。

C?-样品浓度(mol/L )。

由上式可以看出：吸光度A与物质的吸光系数“亦口物质的浓度“C成正比。

2.DNA和RNA 的OD值2.1原理喋吟碱和嚅嚏碱具有共轴双键，使碱基、核昔、核昔酸和核酸在240~290nm的紫外波段有一强烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性。

DNA钠盐的紫外吸收在260nm附近有最大吸收值(图3-25)，在230nm处为吸收低谷，其吸光率( absorbance^以A260表示，A260是核酸的重要性质，RNA钠盐的吸收曲线与DNA无明显区别，蛋白质在280nm处有最大的吸收峰，盐和小分子那么集中在230nm处，对于纯的核酸溶液，测定A260 ,即可利用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量，核酸的比吸光系数是指浓度为1^〃mL的核酸水溶液在260nm处的吸光率，天然状态的双链DNA的比吸光系数为0.020,变性DNA和RNA的比吸光系数为0.022。

据朗波—比尔光吸收定律 A = -lgT =£b(M c= A/m而b通常为1cm,所以，通常以1OD值相当于50 mL双螺旋DNA，或40 mL单螺旋DNA (或RNA ), 或20 必mL寡核昔酸计算。

2.2纯度DNA和RNA的纯度可以通过测定260nm ,230nm和280nm的紫外吸收值来测定，纯的DNA OD260/280 在1.8-1.9 , OD260/230 应大于2.0,纯的RNA OD260/ 280 在1.9-2.0,如果DNA比值高于1.8-1.9,可能有RNA没有去除干净，如果DNA比值小于1.8-1.9,可能含有酚或者蛋白质(RNA中含有酚或者蛋白质比值也会降低) ，假设OD260 /230小于2.0说明有残存的盐或小分子杂质污染。

dna的质量分析实验报告实验目的：通过DNA的质量分析，了解DNA样本的纯度和浓度，为后续的实验设计和操作提供参考。

实验原理：DNA的质量分析主要包括纯度分析和浓度分析两个方面。

1. 纯度分析：纯度是指DNA样本中所含的杂质和污染物的含量。

常用的纯度检测方法有比色法和光谱法。

比色法：通过检测DNA溶液的吸光度，判断其中蛋白质、RNA和其他杂质的含量。

DNA纯度范围一般在1.8-2.0之间。

2. 浓度分析：DNA的浓度是指单位体积内所含的DNA量。

常用的浓度检测方法有比色法和荧光法。

比色法：根据DNA与染料之间的比色反应，根据反应产物的吸光度来确定DNA浓度。

荧光法：在荧光素染料的作用下，测定DNA溶液中的荧光强度，从而确定DNA浓度。

实验步骤：1. 取DNA样本，使用比色法进行纯度分析。

根据比色反应的结果，判断DNA样本中是否存在杂质和污染物。

2. 使用比色法或荧光法进行DNA浓度分析。

根据比色或荧光反应产物的吸光度或荧光强度，计算出DNA的浓度。

实验结果及分析：1. 纯度分析：通过比色法检测，得到DNA溶液的吸光度为1.9，说明DNA样本中较少含有蛋白质、RNA和其他杂质，纯度较高。

2. 浓度分析：通过比色法或荧光法检测，得到DNA溶液的浓度为50 ng/μL，说明该DNA样本中单位体积内含有50 ng的DNA。

结论：通过DNA的质量分析，我们得知该DNA样本的纯度较高，且浓度为50 ng/μL。

这为后续的实验设计和操作提供了参考。

在实际操作中，我们应该注意保护DNA样本的纯度，避免杂质和污染物的污染。

同时，根据所需的实验要求，调整DNA的浓度，以保证实验的准确性和可重复性。

实验中可能存在的误差：1. 实验操作不规范或仪器故障导致的数据偏差。

2. DNA样本的提取和处理过程中可能存在污染，影响纯度和浓度的测定结果。

3. 不同测定方法的差异性，可能导致不同的浓度结果。

改进方案：1. 注意实验操作的规范性，尽量减少人为因素对实验结果的影响。

第二章DNA的纯化、浓度的测定及质量鉴定实验一 DNA(或RNA)的核酸酶处理纯化一、原理和用途在基因工程中，DNA与RNA的提取与纯化是最基本的实验方法。

在DNA提取时，有时会有RNA的污染，在RNA提取时，有时会有DNA的污染，为了消除它们对后续实验的影响，通常我们要对所提取的DNA或RNA用相应的核酸酶进行纯化。

核糖核酸酶A（又叫RNA酶A，RNase A）来源于牛胰脏，是一种内切核糖核酸酶，可特异性攻击RNA上嘧啶残基的3′端，切割与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键，从而除去RNA，其反应终产物为嘧啶3′磷酸及末端带嘧啶3′磷酸的寡核苷酸。

脱氧核糖核酸酶I（又叫DNA酶I，DNase I）来源于牛胰脏，是一种内切脱氧核糖核酸酶，它能水解双链或单链DNA，产生带5′端磷酸基团的单核苷酸及寡核苷酸的混合物。

当Mg2+存在时，DNA酶I可独立地作用于每条DNA链，且切割位点随机分布。

而当Mn2+存在时，DNA酶I可在两条链大致同一位置上切割DNA链，产生平齐末端或具有1～2个核苷酸突起的DNA片段。

二、实验材料粗提的DNA（或RNA）溶液。

三、溶液与缓冲液1．核糖核酸酶A2．10×RNase A悬浮液3．DNase I4．10×DNase I液（含MgCl2）或10×DNase I缓冲液（含MnCl2）5．灭菌纯水6．无水乙醇7．70％乙醇8．TE缓冲液四、仪器设备及耗材制冰机，冰箱，冷冻低温超速离心机，干燥培养恒温器，恒温水浴箱，旋涡振荡器，真空干燥器，离心管架，吸头盒, 2 μL、10 μL、100 μL、200 μL、1000 μL移液器，10 μL、200 μL、1000 μL吸头，1.5 mL离心管等。

五、实验方法1. 有些商业用固体RNase A干粉（或DNase I）可能含有微量的DNase（或RNase）活性，故在使用前应去除其活性，去除的方法可按照商家的使用说明书进行。

qubit测dna浓度的原理
Qubit测DNA浓度的原理
DNA浓度的准确测量是分子生物学研究中的重要环节。

Qubit是一种常用的DNA浓度测量仪器，其原理是基于荧光染料与DNA结合的特性。

Qubit测量DNA浓度的荧光染料有两种：dsDNA HS Assay和dsDNA BR Assay。

其中，dsDNA HS Assay适用于高浓度的DNA
样品，而dsDNA BR Assay适用于低浓度的DNA样品。

在测量过程中，首先将待测DNA样品与荧光染料混合，荧光染料会与DNA结合，形成荧光复合物。

然后，将混合物放入Qubit测量仪器中，仪器会通过激光激发荧光复合物，使其发出荧光信号。

Qubit测量仪
器会根据荧光信号的强度来计算出DNA的浓度。

Qubit测量DNA浓度的优点在于其准确性和灵敏度。

相比于传统的比色法和吸光度法，Qubit测量仪器可以避免样品中其他物质的干扰，
从而提高了测量的准确性。

同时，Qubit测量仪器对于低浓度的DNA 样品也有较高的灵敏度，可以测量出非常微小的DNA浓度变化。

总之，Qubit测量DNA浓度的原理是基于荧光染料与DNA结合的特性。

其准确性和灵敏度使其成为分子生物学研究中不可或缺的工具。

实验报告DNA浓度测定实验报告：DNA浓度测定一、引言DNA浓度测定是分子生物学研究中常见的实验操作之一。

测定DNA浓度可以帮助研究者判断DNA样品的纯度和适用于后续实验的浓度范围，对于研究结果的准确性和可靠性具有重要意义。

本实验报告旨在介绍DNA浓度测定的实验步骤、方法和结果分析。

二、实验材料和方法1. 实验材料：- DNA样品- DNA浓度测定试剂盒- 分光光度计/比色计- 显微管- 微量吸管2. 实验方法：1) 样品制备：取一定量的DNA样品，加入适量的去离子水进行稀释，使其浓度在量测范围内。

2) 数据测定：将浓度稀释好的DNA样品移至显微管中，然后使用分光光度计/比色计进行读数。

根据试剂盒的说明书，确定测量波长和量程。

3) 数据处理：根据实验数据，计算出DNA样品的浓度，并进行结果分析。

三、实验结果在实验中，我们测定了三个DNA样品的浓度，并得到如下结果：1) 样品A的浓度为X μg/mL；2) 样品B的浓度为Y μg/mL；3) 样品C的浓度为Z μg/mL。

四、结果分析通过浓度测定实验，我们可以知道各个样品的DNA浓度。

根据浓度结果，我们可以得出以下结论：1) 样品A的DNA浓度最高，说明该样品中DNA的含量较多，纯度较高。

2) 样品B的DNA浓度较低，可能由于样品制备过程中的误差或DNA质量较差导致。

3) 样品C的DNA浓度介于样品A和样品B之间，表示该样品的DNA含量适中。

五、实验误差与改进在实验中，可能存在一些误差，影响了测定结果的准确性。

针对这些误差，我们可以采取以下改进措施：1) 样品制备时要严格控制取样量和稀释倍数，避免因样品制备不当导致测定结果的不准确。

2) 在使用分光光度计/比色计测定时，要注意减小光路差异对结果的影响，确保测量的准确性。

3) 在实验过程中，及时记录实验条件和操作步骤，以便于后续的数据分析和结果验证。

六、实验应用DNA浓度测定是分子生物学实验中常用的技术手段。

实验报告DNA浓度的测定首先，需要明确实验的目的是测定DNA浓度。

正如标题所示，本实验报告将按照实验报告的格式进行书写。

以下是实验报告的主体部分：材料与方法：1. 实验器材：- 紫外可见分光光度计- 石英比色皿- 10 mm的光路长度石英比色皿- 1 cm的光路长度石英比色皿- 常温离心机- 无菌微量吸管- DNA样品- 恒温水浴2. 实验试剂：- 纯化的DNA样品- 1×TE缓冲液- 纯化水3. 实验步骤：步骤1：使用纯化的DNA样品和1×TE缓冲液按1:9的体积比例配置不同浓度的DNA溶液（例如浓度分别为10 ng/μL，20 ng/μL，30ng/μL，40 ng/μL，50 ng/μL）。

步骤2：使用紫外可见分光光度计测定每个DNA溶液的吸光度值。

注意使用纯化水作为参比溶液。

步骤3：逐个将DNA溶液加入石英比色皿中，确保准确的测定每个浓度的DNA吸光度值。

步骤4：将测定得到的吸光度值记录下来，并根据吸光度与浓度之间的关系绘制标准曲线。

步骤5：使用待测DNA溶液测定吸光度值，并利用标准曲线确定其对应的浓度。

结果与讨论：根据实验操作，我们测定了不同浓度的DNA溶液吸光度值，并绘制了标准曲线。

通过比较待测DNA溶液的吸光度值，我们能够准确地确定其浓度。

结论：本实验成功测定了DNA溶液的浓度，并通过标准曲线的绘制与待测DNA溶液的吸光度值相对应，确立了测定DNA浓度的可靠方法。

参考文献：在此列出用于实验的相关文献及仪器使用说明书。

附录：在此提供实验所需的相关数据和图表。

实验报告结束。

分光光度计测定dna浓度及纯度的原理下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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可以。

DNA的碱基在260nm处有吸收。

用紫外分光光度计测260nm处DNA 分子的OD值，就能通过朗伯-比尔定律OD=εlc换算出浓度。

式子里l是吸收光路的长度；c是浓度，单位一般用μg/ml；ε是吸光系数,双链DNA一般取0.02ml/（μg·cm)，单链DNA因为增色效应,ε要大一些，取0.05ml/(μg·cm)。

如果知道一个DNA片段的碱基数，还可以换算出DNA片段的物质的量浓度. 取1μDNA，用ddH2O水稀释到1ml，以1ml ddH2O为对照，紫外分光光度计测定OD260，OD280,OD260/OD280(都在1。

8左右之间，说明DNA样品纯度较高)，concentration。

另，基因组DNA1％的琼脂糖凝胶电泳检测均呈现完整清晰条带没有拖尾,说明DNA 样品的完整性好，也可通过DNA marker 推算出DNA浓度。

目的：了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理，掌握测定方法.原理：核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm，在波长260nm 时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280)，估计核酸的纯度。

纯净DNA的比值为1。

8, RNA 为2。

0.若比值高于1。

8说明DNA样品中的RNA尚未除尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。

270nm存在高吸收表明有酚的干扰。

紫外分光光度法只能用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。

试剂与仪器：提取的质粒DNA，紫外分光光度仪.操作步骤:1）分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零。

2) 取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入分光光度计的石英比色杯中。

3）在260nm和280nm分别读出样品光密度值.如果样品浓度单位为μg/μl，则样品DNA浓度为OD 值的10倍,即如OD<SUB>260〈/SUB〉=0。

测定dna浓度的注意事项测定DNA浓度是许多生物实验中的一项重要步骤，它可以帮助我们了解DNA 的含量以及评估DNA样本的质量。

以下是在进行DNA浓度测定时需要注意的事项：1. 实验室环境：确保实验室环境清洁整洁，并且尽量减少灰尘和污染物的存在，因为它们可能会干扰浓度测定结果。

2. 器具和试剂：确保使用干净的试剂和仪器。

试剂需要保存在适当的温度下，并避免使用过期的试剂。

器具应经过正确的清洗和灭菌，以避免污染。

3. 样本收集和贮存：样本应该正确收集，并遵守实验室指南和卫生要求。

DNA样本应妥善保存，并在需要时进行冷冻保存。

避免反复冻融循环，因为这可能会导致DNA降解。

4. 样品纯化：在进行DNA浓度测定之前，需要对样品进行纯化，以去除潜在的污染物，例如蛋白质、RNA和化学试剂。

纯化过程应尽量快速和高效，并避免对DNA 产生损伤。

5. 操作技巧：操作过程中要注意细节并保持谨慎。

使用正确的工具和试剂，遵循操作步骤，并在操作过程中避免产生气泡。

使用无菌、切口和胶金的试剂管，以确保准确和可重复的结果。

6. 定量方法：选择合适的DNA浓度测定方法，根据实验需求和样品类型选择合适的方法。

常见的方法包括分光光度法、荧光法和凝胶电泳法。

不同的方法可能需要不同的试剂和设备，因此需要确保正确的选择和操作。

7. 标准曲线和校正：在进行DNA浓度测定之前，制备一系列已知浓度的DNA标准溶液，并绘制标准曲线。

使用标准曲线来校正实验样本的测定结果，以提高测量的准确性和可靠性。

8. 重复测量：测定DNA浓度时，建议进行多次测量并取平均值。

这可以减少实验误差，并提高测量结果的可靠性。

9. 数据记录和分析：记录所有实验操作的详细信息，并记录测定结果。

进行适当的数据分析和统计，以得出准确和有意义的结论。

10. 质量控制：定期对实验室的DNA浓度测定方法进行质量控制，例如通过使用已知浓度的DNA样本进行定量测量，以确保实验过程和结果的准确性和可靠性。

质粒dna浓度和纯度测定的方法质粒DNA浓度和纯度是生物学研究中常用的实验技术指标，用于评估纯化方法和实验样品的质量以及判断DNA提取的效果。

测定质粒DNA浓度和纯度的常用方法有分光光度法、比色法、凝胶电泳法和荧光法等。

其中，分光光度法是最常用的一种方法。

分光光度法基于质量作用定律，通过测定光通过样品溶液后的吸光度，来推算溶液中的DNA浓度。

光的吸收程度与物质的浓度成正比。

在分光光度法中，一般使用260 nm波长进行测定，这是DNA 的吸收极大值。

首先将样品溶解于合适的缓冲溶液中，然后使用光度计测定260 nm波长下的吸光度。

通过校正因子和DNA的摩尔吸光系数，可以计算出质粒DNA的浓度。

然而，分光光度法仅能提供DNA的总体量，无法区分DNA的来源，也无法检测样品是否存在杂质。

为了评估DNA的纯度，可以通过分光光度法测定DNA 在280 nm和230 nm波长下的吸光度比。

DNA的纯度直接影响吸光度比之间的差异。

这些差异可以用来推断DNA溶液是否受到污染，污染程度的大小。

在实验过程中，使用分光光度法测定质粒DNA浓度和纯度时需注意以下几点：1. 样品制备：要保证样品中的DNA溶解充分，并且不含有杂质。

一般来说，可以使用TE缓冲液溶解精心制备的DNA溶液，并进行适当的稀释。

此外，如果样品中含有蛋白质、RNA、杂质或其他污染物，可能会对测定结果产生干扰。

2. 使用纯化的DNA标准曲线：为了准确测定质粒DNA浓度，建议使用已知浓度的纯化DNA标准曲线进行校准。

通过测定不同浓度的标准曲线样品的吸光度，并绘制吸光度与DNA浓度之间的关系曲线，可以通过比对样品的吸光度，推算出样品的DNA浓度。

3. 质粒DNA纯度校正：在测定DNA纯度时，应该特别关注纯度校正因子。

使用的标准曲线应该具有相似的纯度，以减小纯度校正引入的误差。

通常情况下，使用纯度校正因子纠正DNA浓度，以获得更准确的结果。

除了分光光度法外，凝胶电泳法也是常用的质粒DNA浓度和纯度测定方法之一。

dna浓度测定原理
DNA浓度测定的原理主要有两种：紫外分光光度法和脱氧核糖核酸-二苯胺法。

1. 紫外分光光度法：由于核酸分子（DNA或RNA）含有嘌呤环和嘧啶环的共轭双键，在260nm波长处有特异的紫外吸收峰，其吸收强度与核酸的浓度成正比。

因此，通过测定不同波长的紫外线吸收值，可以计算出核酸样品的浓度。

此外，通过测定260nm和280nm的紫外线吸收值的比值
（A260/A280），还可以估计核酸的纯度。

纯的DNA制品的比值为，RNA的比值为。

若比值高于，则可能有RNA污染，低于则有蛋白质污染。

对于很稀的核酸溶液，可用荧光光度法进行测定。

在荧光染料溴化乙锭(EB)插入DNA的碱基对平面之间并与之结合后，DNA样品能在紫外光的激发下产生桔红色荧光。

荧光强度与被结合的EB的量成正比，而被结合的EB 的量又与核酸分子长度和含量成正比。

2. 脱氧核糖核酸-二苯胺法：在酸性环境中，脱氧核糖与二苯胺试剂一起加热会产生蓝色化合物。

生成的蓝色化合物在595nm处有最大吸收值。

此方法测定的是样品中的总磷量，若样品中含有无机磷杂质，需通过对照组扣除无机磷含量。

该方法灵敏度相对较高，但易受蛋白质和核苷酸影响。

这两种方法各有特点，可以根据具体情况选择适合的方法进行DNA浓度测定。

DNA浓度测定标准：OD260值为1相当于50ug/ml双链DNA，OD260/OD280比值在1.7--1.9之间说明所得的DNA 纯度较好。

比值若低于1.7可能有蛋白污染，若高于2.0则DNA 很可能已降解。

如果溶解DNA的缓冲液离子浓度偏低，或者直接用水溶，因为pH值和离子浓度会影响光吸收值，比值会偏低。

依次来看你的DNA 已经降解，建议重新抽提！不知道你用的比色杯是一次性的还是可以反复用的，我以前也遇到过类似的情况，主要是因为一次性的比色杯是进口的比较贵，所以反复用，用过一段时间后就发现不对头，测出来的260/280远大于2，且浓度很低，换一只新的后测出来的值就比较正常了，比色杯用的时间久了透光度就会下降很多。

你的OD260值在0.1-0.5范围内吗? 分光光度仪的吸光值仅在一定区域是线性的,OD260值在0.1-0.5之间,OD200到OD320之间的数值构成一条光滑的曲线时,OD260/OD280比值是衡量核酸纯度的标准之一.如果OD值不在范围内那么就需要重新稀释你的DNA了,如果OD值没问题的话还可以跑一个胶看看有没有托尾现象,验证是否DNA降解.当你辛辛苦苦纯化出蛋白，准备下一步的实验时，如果后续实验的反应体系中涉及到DNA 或RNA或寡核苷酸，那么你就有必要在实验之前测定一下你的蛋白样品中是否有核酸污染。

那么，如何判断蛋白是否被核酸污染呢？用OD260:OD280比值！Warburg和Christian（1942）提出OD260:OD280比值是蛋白制品被核酸所污染程度的很好指标。

当蛋白中掺入了核酸之后，OD260：OD280比值变化很明显，尤其是纯的蛋白制品中掺入了一点点核酸后，变化最明显。

例如：纯的蛋白样品，其OD260：OD280比值为0.57，而掺入5%的核酸之后，该笔直上升到了1.06。

但是反过来却是不成立的，即：这个比值不能用来指示核酸被蛋白污染的程度。

因为核酸在260nm和280nm处的消光系数比蛋白质高很多，即使有明显的蛋白污染也不会大幅度改变核酸溶液的OD260：OD280比值。

实验八、紫外吸收法检测DNA的浓度与纯度一、实验目的学会利用紫外分光光度计测定样品的吸光度，从而测出DNA的浓度与纯度。

二、实验原理DNA的吸收峰在260nm，蛋白质的吸收峰在280nm。

1μg/ml标准DNA样品A260=0.02，因此，A260=1时，双链DNA含量为50μg/ml；单链DNA与RNA含量为40μg/ml；寡聚核苷酸的含量为30μg/ml。

一般来说，纯净的DNA 其A260/A280的比值约为1.8，大于1.8表明样品xxRNA污染严重，小于1.6说明有蛋白质或苯酚污染；纯净的RNA A260/A280的比值约为2.0，在样品中若含有蛋白质，会使A260/A280的比值下降。

三、实验材料紫外分光光度计、比色皿、移液枪、实验七中获得的质粒DNA四、实验步骤1、选取合适的按键。

待测定样品为dsDNA（如PCR产物），按下键“7/dsDNA”。

待测定样品为ssDNA（如反转录合成的第一链cDNA产物），按下键“8/ssDNA”。

待测定样品为RNA，按下键“9/RNA”。

待测定样品为Oligo（如PCR引物），按下键“6/Oligo”。

2、将空白对照置入样品xx。

注意：空白对照是空白液，并非所有情况都是水。

例如，用Tris溶液溶解DNA样品，则要用Tris液做空白对照。

3、按下“Blank”键。

仪器记录空白对照，设置为0.000A。

4、将样品置入样品孔，按下“Sample”键，仪器显示样品的吸光度和浓度值，以及其他相关参考比值。

五、实验结果与分析A260/A280=1.118，DNA浓度86.45。

A260/A280小于1.6，说明蛋白质或苯酚污染严重，这可能是在制备质粒DNA时加入的酚/氯仿不足，或加入酚/氯仿后没有混合均匀等原因。

DNA浓度偏低，可能是实验的多次弃上清过程中存在损耗。

六、思考题问：利用紫外-可见分光光度计测得的结果比实际浓度偏高还是偏低？为什么？答：核酸在波长260 nm处有最高吸收峰。

质粒dna浓度和纯度测定的方法
质粒DNA浓度和纯度测定的方法主要有以下两种：
1.紫外分光光度计法：这种方法是通过测量DNA在260nm和280nm处的吸光度来测
定DNA的浓度和纯度。

在260nm处的吸光度反映了DNA的总量，而在280nm处
的吸光度反映了蛋白质的含量。

因此，可以通过比较这两个波长的吸光度来计算
DNA的浓度和纯度。

具体来说，OD260/OD280的比值应在1.7-1.9之间，偏低可能
是蛋白质污染，偏高则可能是DNA降解或RNA污染。

2.凝胶电泳法：这种方法是通过凝胶电泳来检测DNA的含量和纯度。

首先，取一定
量的DNA溶解液与适量的溴化乙锭混合，溴化乙锭可以迅速嵌入DNA双螺旋结构
中，嵌入的溴化乙锭受紫外光激发而发出荧光。

然后，将混合液通过凝胶电泳分离，
由于DNA分子的大小不同，它们在电场中的迁移率也不同，因此可以通过比较样
品与标准品的荧光强度来对样品中的DNA进行定量。

以上信息仅供参考，建议咨询专业人士获取更准确的信息。