清脂通脉颗粒制备工艺的研究_于艳丽_李建学_于睿

DOIʒ10．13192/j．issn．1000-1719．2014．02．050清脂通脉颗粒制备工艺的研究于艳丽，李建学，于睿（辽宁中医药大学，辽宁沈阳110847）摘要：目的：优选清脂通脉颗粒最佳制备工艺。

方法：以酸枣仁皂苷A 含量和干膏率为评价指标，高效液相色谱法定量，采用L 9（34）正交设计试验法，对清脂通脉颗粒制备过程中的稀乙醇提取工艺进行优化；以挥发油的包含率为指标，对β－环糊精包含工艺进行研究。

结果：最佳稀乙醇提取工艺为70%乙醇6倍量提取3次，每次1．5h ；挥发油：β－环糊精投料比例为1ʒ8，包合温度为40ħ，包合时间为40min 。

结论：优选得到的清脂通脉颗粒工艺稳定可行，适用于药物的制备。

关键词：清脂通脉颗粒；制备工艺；正交设计；酸枣仁皂苷A 含量；干膏率中图分类号：Ｒ284．2文献标志码：B 文章编号：1000-1719（2014）02-0313-03收稿日期：2013－08－25作者简介：于艳丽（1986－），辽宁凌源人，硕士研究生，研究方向：中西医结合防治冠心病。

通讯作者：于睿（1969－），女（锡箔族），辽宁沈阳人，主任医师，博士，研究方向：中西医结合防治冠心病。

心血管疾病是威胁人类健康的主要疾病之一，据流行病学调查，是目前占人类死亡率第一位的疾病。

心血管疾病共同的病理基础是动脉粥样硬化，而高脂血症是引起和加速动脉粥样硬化多个因素中的最危险因素。

清脂通脉原方是由柴胡、当归等4味中药配制而成，具有疏肝降脂的功效［1］，临床多用于治疗高脂血症，疗效较好。

原方为水煎剂，本研究为方便患者服用及长期保存，根据方剂中所含药材的性质与剂量，选择制成颗粒剂。

在中医药理论的指导下，根据中药现代研究及临床使用特点，利用现代技术对清脂通脉颗粒的提取、成型工艺进行了研究，为确保有效成分的提取效果，保证制剂的质量及疗效，本实验对本品的制备工艺进行了优化，现报道如下。

1试药柴胡、当归等4味中药均购自辽宁中医药大学附属医院。

按照《中华人民共和国药典》［2］2010年版标准检验，均符合规定。

2方法与结果2.1提取工艺的研究将本方柴胡、当归先行提取挥发油，将挥发油用适量β－环糊精包含，提油后的水溶液备用；药渣与绞股蓝等其他药材用乙醇回流提取，滤过提取液，与提油后的水溶液合并，浓缩，干燥，粉碎成细粉，加入上述β－环糊精包含物，混匀。

取药粉加糊精混匀，以乙醇制粒。

2.1.1挥发油提取工艺优选挥发油是柴胡、当归重要的有效成分之一，参考《中国药典》2010年版一部［S ］附录XD 挥发油测定法，采用水蒸气蒸馏法提取挥发油。

水蒸气蒸馏法提取挥发油的主要影响因素是蒸馏时间。

按处方比例分别称取柴胡药材粗粉400g ，当归药材粗粉400g ，共6份，加入8倍量水，浸泡2h ，水蒸气蒸馏提取挥发油，分别提取1、2、3、4、5、6h ，收集提取液，用乙醚萃取3次，挥干乙醚，称重。

结果见表1。

表1挥发油提取工艺考察提取时间（h ）123456ＲSD%（2 6h ）挥发油（mg ）444.7593.4618.8659.3626.1666.54.76结果表明：第2h 收集的挥发油量与随后的4次结果的ＲSD%小于5，所以可认为2h 基本把挥发油提取完全。

因此确定最佳提取工艺为：药材粗粉加入8倍量水，浸泡2h ，水蒸气蒸馏2h 。

2.1.2β－环糊精包含工艺优选（1）正交试验设计因素水平的确定：本方中柴胡和当归水蒸汽蒸馏提取挥发油后，由于挥发油不稳定，易挥发，为防止制剂过程中的损失，拟采用β－环糊精对挥发油进行包合，通过正交试验优选出最佳包合工艺，考虑到生产实际，采用饱和水溶液的方法进行包合，挥发油与β－环糊精的比例，搅拌时间，包合温度对挥发油的包合率有较大影响，因此，按照L 9（33）正交设计表试验，以挥发油的包合率为指标，考察挥发油与β－环糊精的比例，包合时间（搅拌时间），包合温度3个因素，每个因素3个水平。

表2因素水平表水平因素包合时间（min ）（A ）包合温度（ħ）（B ）挥发油：β－环糊精（C ）误差（D ）120201ʒ6240401ʒ8360601ʒ10（2）包合物制备：按正交试验表，精密称取β－环糊精，置于三角瓶中，加入蒸馏水，加热使之完全溶解，在规定各温度的恒温水浴中，不断搅拌，制成β－环糊精饱和溶液。

挥发油用无水乙醇稀释（1ʒ20），用注射器缓慢滴入不同温度的环糊精溶液中，继续搅拌至规定时间。

停止加热，继续搅拌至室温，置4ħ冰箱中冷藏24h，抽滤至干，用少量蒸馏水冲洗。

在真空干燥箱中（50ħ）干燥4h，得白色干燥粉末状包合物。

（3）挥发油回收率实验：将每份包合物加入200mL 蒸馏水，按药典测定，得挥发油。

按下面的公式计算油回收率，分别填入表3后面的包合物油回收率栏内。

表3正交试验设计表及试验结果编号因素A B C D回收率（%）1111155.012122275.513133357.224212368.215223170.146231258.047313259.918321367.199332174.79K1187.740183.130180.240199.940K2196.390212.840218.510193.460K3201.890190.050187.270192.620k162.58061.04360.08066.647k265.46370.94772.83764.487k367.29763.35062.42364.207Ｒ 4.7179.90412.757 2.440表4方差分析表方差来源离差平方和自由度均方差F值P值包合时间（min）33.922216.961 3.170P＞0.05包合温度（ħ）161.106280.55315.059P＞0.05挥发油：β－环糊精276.6612138.330525.861*P＜0.05误差10.702 5.35注：F0.05（2、2）=19.00由方差分析表可知，挥发油与β－环糊精的比例对实验结果有显著性影响，选C2，包合时间与包合温度二因素无显著性差异，可选任意水平，直观分析表明，最佳工艺A3B2C2，考虑大生产能量节约，因此最佳工艺确定为A2B2C2，即挥发油：β－环糊精投料比例为1ʒ8，包合温度为40ħ，包合时间为40min。

2.1.3稀乙醇提取工艺优选本处方所含药味的化学成分类型主要有黄酮类、皂苷类等，易溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂；还有有机酸类等易溶于水。

根据处方所含化学成分的理化性质，采用稀乙醇为提取溶剂，可最大限度的将有效成分提取出来，确保疗效。

（1）正交试验设计因素水平的确定：选用稀乙醇对柴胡、当归等药材进行回流提取，以酸枣仁皂苷A 含量和干膏率为评价指标分别评价，以乙醇浓度（A）、乙醇用量（B）、提取时间（C）及提取次数（D）为影响因素，采用四因素三水平L9（34）正交试验优选最佳的稀乙醇回流提取工艺，因素与水平见表5。

（2）干膏率的测定：按处方比例称取柴胡、当归等药材共9份，按挥发油提取工艺先提取挥发油，药液备用，药渣干燥后与另两味药材合并，采用L9（34）正交实验，按正交因素表中的各因素水平，进行乙醇回流提取，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加入上述药液，浓缩，置已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，70ħ干燥至恒重，称重，计算干膏率（干膏量/药材量ˑ100%），结果见表6。

表5因素水平表水平因素乙醇浓度/%（A）乙醇用量/倍（B）提取时间/h（C）提取次数/次（D）1606 1.012708 1.5238010 2.03表6交试验设计表及试验结果编号因素A B C D干膏率（%）酸枣仁皂苷A（mg/g）1111117.210.1262122218.180.1473133321.760.2284212324.660.2135223117.800.0786231219.960.2137313220.370.068321321.910.039332117.210.081干膏率K157.15062.24059.08052.220K262.42057.89060.05058.510K359.49058.93059.93068.330k119.05020.74719.69317.407k220.80719.29720.01719.503k319.83019.64319.97722.777Ｒ 1.757 1.4500.324 5.370酸枣仁皂苷AK10.5100.3990.3690.285K20.5040.2550.4410.42K30.1710.5220.3660.471k10.1670.1330.1230.095k20.1680.0850.1470.140k30.0570.1740.1220.157Ｒ0.1110.0890.0250.062（3）酸枣仁皂苷A的含量测定［3］：①色谱条件与系统适用性试验：Agilent TC－C18色谱柱（250mmˑ4.6mm，5μm）；流动相为乙腈－水的梯度洗脱（0 15 min，乙腈为20%→40%；15 28min，乙腈为40%；28 30min，乙腈为40%→70%；30 32min，乙腈为70%→100%）；蒸发光散射检测器；流速：1mL/min，柱温：30ħ。

理论塔板数按酸枣仁皂苷A峰计算应不低于2000。

②对照品溶液的制备，精密称取酸枣仁皂苷A的对照品适量，加甲醇摇匀，制成每1mL含0.1692mg的酸枣仁皂苷A溶液。

（3）供试品溶液的制备：取提取后得到的9份干燥粉末（过三号筛），精密称定，置锥形瓶中，精密加入加70%乙醇30mL，称定重量，加热回流2h，放置至室温，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

④测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得（见图1 2）。

图1酸枣仁皂苷A对照品高效液相色谱图图2酸枣仁供试品高效液相色谱图（4）数据分析：正交试验结果见表6，方差分析结果见表7、8。

表7干膏率方差分析方差来源离差平方和自由度均方差F值P值A 4.6482 2.32424.989*＜0.05B 3.4402 1.7218.4950.05C0.18620.093 1.000＞0.05D43.948221.974236.280*＜0.05注：F0.05（2，2）=19.00表8酸枣仁皂苷A含量方差分析方差来源离差平方和自由度均方差F值P值A0.02420.135524.000*P＜0.05B0.01220.06612.000P＞0.05C0.00120.0065 1.000P＞0.05D0.00620.034 6.000P＞0.05注：F0.05（2，2）=19.00对表6数据进行直观分析可知，以干膏率为评价指标，最佳提取工艺条件为A2B1C2D3，各因素的主次顺序为D＞A＞B＞C，表7方差分析表明因素A、D因素有显著性影响，应选取最佳水平A2和D3；对表6数据进行直观分析，以酸枣仁皂苷A含量为评价指标，其最佳提取工艺条件为A2B3C2D3，各因素的主次顺序为A＞B＞D＞C，表8方差分析表明A因素有显著性影响，应选取最佳水平A2。