生化仪检测原理及应用.55页PPT

统以光源扫射黑条白空相间的条码符号由于条和空对光的反射 不同、不同宽窄的条符反射光持续时间不同，产生强度不同的 反射光．再经光电转换元件接收并转换成相应强度的电信号， 最后通过信号整形，由译码器解译。系统自动识别样品架及样 品编号识别试剂、校准品及其批号、失效期，有的并可识别校 验校准曲线等信息。
实验室常用条形码类型有CODE 39、CODE 128、2 of 5 Standard、Interleaved2of 5等。要自编样品条形码需要条 形码输入器，条形码阅读系统与条形码要匹配。已有全自动试 管分配暨条形码粘贴准备系统。
自动生化分析仪工作原理
生化分析仪（Chemistry Analyzer）是临床检验中经常使用的 重要分析仪器之一它通过对血液或者其他体液的分析来测定各种生化 指标：如转氨酶、血红蛋白、白蛋白、总蛋白、胆固醇、肌肝、葡萄 糖、无机磷、淀粉酶、钙等。结合其他临床资料，进行综合分析，可 以帮助诊断疾病，对器官功能做出评价，鉴别并发因子，以及决定今 后治疗的基准等。
②样品探引(Probe)与加样臂相联，直接吸取样品。探针均设有 液面感应器，防止探针损伤和减少携带污染。有的设有阻塞检测报 警系统当探针样品中的血凝块等物质阻塞时．仪器会自动报警冲洗 探针，并跳过当前样品，对下一样品加样。有的还有智能化防撞装 置遇到阻碍探针立即停止运动并报警。即使如此，它仍是非正规操 作时的易损件。为了保护探针，除预先需要根据样品容器的高低、 最低液面高度等进行设置外、，样品容器的规格、放置以及液面高 度等设定条件不得随意改变。在某些仪器上，采样器和加液器组合 在一起，加样品和加试剂或稀释液一个探针一次完成。
自动生化分析仪基本结构及工作原理
二)典型分立式自动生化分析仪基本结构
1．样品(Sample)系统 样品包括校准品、质控品和病人样品。系统一般由样品装载、

二：质控 质控的基础就是 正态分布图。
• 几个概念： • 准确度：一个检测结果与可接受的参考值之间的一致程度。 (ISO3534-1：1993) • 正确度：很大一个系列检测结果的均值与可接受的参考值之间的一致 程度。(ISO3534-1：1993)。与系统误差有关，常用偏倚(bias)表示不 正确度。 • 精密度：在规定条件下独立检测结果之间的一致程度（ISO3534-1： 1993）。与随机误差有关，常用SD或CV表示不精密度。
分析仪参数设定及相关资料：
7600基本设置
双波长：有两个不同的波长即测量波长（主波长）和参比波长（次波 长）。由检测器测出的吸收度是这两个波长下吸收度的差值△A。△A与 被测定物质的浓度成正比，这个方法称双波长法。双波长差吸光度法具 有可以克服样本混浊（溶血、脂血、黄疸）、共存组分吸收谱线叠加的 干扰，以及减少比色杯的光学不均一等优点。 空白(blank)校正:在分光光度法中，常利用空白溶液来调节仪器的吸光度 零点，或用来抵消某些测定的干扰因素。
化学发光技术基本原理：
• 1：电化学发光分析技术（ECL）：是一种 在电极表面由电化学引发的特异性化学发 光反应。包括了两个过程，发光底物二价 的三联吡啶钌及反应参与物三丙胺在电极 表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失 去一个H成为强还原剂，将氧化型的三价钌 还原成激发态的二价钌，随即释放光子恢 复为基态的发光底物。 （发光标记物-三联 吡啶钌） • 代表仪器品牌----德国罗氏Cobas E601
一点终点法：当待测物与试剂反应到达平衡，测定其吸光度， 计算待测物浓度，该法在标本正常情况下较稳定，若空白对 照较大时（如有干扰吸光度物质）影响检测真实值。
2、两点终点法：在被测物反应或指示反应未开始时，选择第一个吸光度 点，在反应到达平衡后选择第二个吸光度点，两点吸光度点之差用于计 算结果。 此法能有效减少标本溶血、脂血、黄疸造成的干扰。

由于是曲线，除了在Y轴上的截距 （S1Abs）以及斜率（K）外，还 需有A/B/C等参数来决定弯曲程度 等信息。
分光光度法的分析类型
Roche可供选择的校准曲线类型非常丰富
线性的“直尺”。
种类丰富的“弯尺”。
分光光度法的分析类型
那么，Roche为每个项目选择校准曲线的原则是什么？
在各个医学决定水平处，检测试剂能 表现出最佳的灵敏度、精密度和准确度。
分光光度法的分析类型
首先，我们Roche的检测系统包括哪些组成部分？
• 标本及容器
二 • 仪器 三 • 试剂 四 • 试剂所配套校准品 五 • 试剂的检验程序 六 • 质量控制及保养维护程序
分光光度法的分析类型
接下来，检测系统中都存在哪些影响因素需要消除？
• 标本及容器（不同样本具有的不同本底吸光度）
分光光度法的分析类型
Q：如果出现以下的Rate A反应曲线，结果是否可信？
此阶段由于样本中待测物 浓度太高，反应体系吸光 度出现急剧变化。
试剂中的底物不足以支持过快 的消耗速度，反应体系吸光度 变化开始加慢，甚至不再变化 。样本浓度会被严重低估。
分光光度法的分析类型
Q：如何避免以上误报情况的发生？
2、光线经凸透镜 整理成为平行光
4、衍射光栅将出射光线 分为不同波长的单色光
5、光电信号检测光线强度
分光光度法的工作原理
Q：后分光模式相比前分光模式有什么优点？
后分光模式进入比色杯时为全波段光线，出射之后再分为多束单波长光线各自检 测强度，所以方便仪器得到多个波长下的吸光度。
前分光模式进入比色杯时为单色光，要想实现多波长检测则需要两个单色器产生 不同波长光线，由切光器控制，交替的通过同一比色杯，不可连续监测。

3质控统计方法：
• a L-J质控图(最常用) -----L-J质控曲线，全称Levey-Jennings。1924年，美国休哈特 （W.A.Shewhart）首先提出质控图。20世纪50年代，Levey和Jennings把质控图引入 到临床检验中。（质控方法是建立在单个质控品双份测定值的均值和极差的基础上） Henry和Segalove对L-J质控图（X-R）进行了修改，以20份质控品的试验结果，计算 均值和标准差，定出质控限，每天或每批随患者标本测定质控品一次，将所得的质控 结果标在质控图上。这各质控图一般称为单值质控图，也就目前大家所熟悉的L-J质控 图。
湿化学常见的比色分析反应类型：
• 直接测量：具有特征性的吸收峰，不经过任何反应直接在指定波长测 量； • 单一反应：待测反应本身有特征性吸收峰的底物或产物量的变化；如 ALB测定原理：白蛋白+BCG-----白蛋白-溴甲酚绿复合物 • 溴甲酚绿复合物在波长为570nm处吸光度最强，固此法ALB主波长应 设定在570nm； • 偶联反应：底物或产物无特征性吸收峰，需经过其他反应生成有特征 性的吸收峰测量的化合物，这种反应称为指示反应。如ALT测定原理： • L-丙氨酸+α—酸戊二酸 丙酮酸+L-谷氨酸 • 丙酮酸+NADH+H+ 乳酸+ NAD • NADH在340nm处吸光度最强，其吸光度与NADH的浓度成正比，固 ALT此法检测主波长应设定在340nm处。
• DXC800照片
3.干化学反射分析技术原理及优点：
• 与普通生化仪比较，干化学被测物质的化 学反应是在干燥的基质中进行，入射光通 过基质被吸收后，检测反射光的减弱程度 来反映被测物质浓度的大小。 • 普通生化仪反应载体是水溶液，入射光被 有色反应产物吸收后减弱，通过吸光度的 大小来反映被测物质浓度的大小。 • 干化学均用一次性消耗品，无交叉污染和 携带污染。缺点是：成本比较高。

湿化学常见的比色分析反应类型：
• 直接测量：具有特征性的吸收峰，不经过任何反应直接在指定波长测 量； • 单一反应：待测反应本身有特征性吸收峰的底物或产物量的变化；如 ALB测定原理：白蛋白+BCG-----白蛋白-溴甲酚绿复合物 • 溴甲酚绿复合物在波长为570nm处吸光度最强，固此法ALB主波长应 设定在570nm； • 偶联反应：底物或产物无特征性吸收峰，需经过其他反应生成有特征 性的吸收峰测量的化合物，这种反应称为指示反应。如ALT测定原理： • L-丙氨酸+α—酸戊二酸 丙酮酸+L-谷氨酸 • 丙酮酸+NADH+H+ 乳酸+ NAD • NADH在340nm处吸光度最强，其吸光度与NADH的浓度成正比，固 ALT此法检测主波长应设定在340nm处。
5：反渗透纯水系统：
• 原水为自来水，首先经过机械过滤器，去除混在 水中的铁锈、砂、红虫、胶体等大颗粒杂质；首 级过滤后的水进入活性碳滤器，活性炭对水中的 余氯、有机物及异味有极高的去除效果；然后经 过软水处理器去除水中造成结垢的钙、镁等离子， 变成软水。经过处理后出来的水，再经过5μm保 安过滤器，防止预处理滤料微粒及5μm以上的杂 质进入反渗透系统，再经高压泵增压1.0MPa或 1.5MPa，在此压力下，反渗透析出纯水，然后送 到纯水箱。
化学发光技术基本原理：
• 1：电化学发光分析技术（ECL）：是一种 在电极表面由电化学引发的特异性化学发 光反应。包括了两个过程，发光底物二价 的三联吡啶钌及反应参与物三丙胺在电极 表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失 去一个H成为强还原剂，将氧化型的三价钌 还原成激发态的二价钌，随即释放光子恢 复为基态的发光底物。 （发光标记物-三联 吡啶钌） • 代表仪器品牌----德国罗氏Cobas E601

生化分析仪的分类
光度法
通过测量光的吸收、透射、散射等特性来分析 样品中的化学成分。
电化学法
利用电流、电势等电化学参数来分析样品中的 物质含量。
色谱法
通过分离样品中的化学成分，再进行定量分析。
质谱法
利用质谱仪分析样品中的化学成分，常用于有 机物分析。
生化分析仪的应用
临床生化分析
生化分析仪在临床诊断中用于 检测血液、尿液等样品中的生 化指标，帮助医生做出准确的 诊断。
1 定期清洗、校准
为了保证仪器的准确性和稳定性，需要定期进行清洗、校准。
2 注意使用环境
生化分析仪对使用环境要求较高，需要避免灰尘、湿气等对仪器的影响。
3 做好样品预处理
样品预处理是保证生化分析结果准确的重要步骤，需要注意操作规范。
生化分析仪常见故障及处理
1
数据不准确
处理方法：检查样品处理是否正确。
2
仪器噪声大
处理方法：检查设备连接是否稳定。
3
仪器出现故障提示
处理方法：检查仪器是否需要校准。
生化分析仪未来发展趋势
生化分析仪未来的发展将与人工智能结合，实现更智能化的数据分析和结果 预测。同时，生化分析仪也会趋向便携化和高通量化，满足不同场景下的需 求。
《生化分析仪资料》PPT 课件
生化分析仪是一种用于分析生物体内化学成分的仪器，通过光、电、热、化 学等方法测量样品中的物质含量。本课件将带您深入了解生化分析仪的原理、 分类、应用以及选购指南等内容。
什么是生化分析仪
生化分析仪是一种用于分析生物体内化学成分的仪器，借助光、电、热、化 学等方法测量样品中的物质含量。它在医学、生物科学、环境监测等领域起 着重要作用。
基因测序

1.连续监测法
• 即零级反应速率法,亦称斜率法 在较长反应时间区段内(90-180秒)，每隔一 定时间(5~30秒)读取一次吸光度值，至 少读 取4点，得到3个以上△A，最后算出 反应速 率△A/min。
Au 106 VTu U/L t u l Vu
1.连续监测法特点
• 与固定时间法相比，属于即时观测，无需 停止酶促反应、不需添加其他呈色试剂， 且可将多点的测定结果绘图连线，快速、 直观查看酶促反应进程，很容易找到呈直 线的线性期，检查到是否偏离零级反应。
光吸收曲线
Lamber-Beer定律：分光光度法基本 定律
描述物质对某一波长光吸收的强弱与吸光物 质的浓度及其液层厚度的关系
Lamber定律：A∝l Beer定律：A ∝C
入射光强度I0 透射光强度I 物体截面为S 厚度为l
Lambert-Beer（朗伯-比尔）定律
• 当一束平行单色光通过均匀的非散射样品 时，样品对光的吸光度与样品的浓度及厚 度成正比
• • A = kcb A---吸光度 k---吸光系数 c---溶液浓度 b---液层厚度
吸光系数
• 定义：吸光物质在单位浓度及单位厚度时 测得的吸光度。 • K值的大小取决于吸光物质的性质、入射 光波长、溶液温度和溶剂性质等，与溶液 浓度大小和液层厚度无关。但K值大小因 溶液浓度所采用的单位的不同而异。
Lambert-Beer（朗伯-比尔）定律
• 郎伯-比尔定律表明：当液层厚度固定时， 溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。 即：A/C=const • 故：只要测出某种溶液的吸光度，将它与 已知浓度的标准溶液吸光度进行比较，就 可以算出该溶液的浓度。
生化测定方法
终点法： 一点终点法 二点终点法 速率法：

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Logit-log 3P（非线性法）
适用于随浓度升高而吸光度表 现为收敛的工作曲线。
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1) 校准参数设置: 校准方法 ：【Logit-log 3P】
2) 校准公式系数及计算：
R
R0
1
K aC
R0 ：为 Cx 接近∞时的吸光度或每分钟吸光度变化的近似值。 K，a：是近似式的常数，会被自动算出。 3) 浓度计算
数。由于是分段拟合，其拟和程度在所有校准类型中最高。 3) 浓度计算 通过二分法近似计算出 Cx，然后执行修正：
C Cx * IFA IFB
4) 适用的校准类型：【全点校准】
校准类型
• 根据校准液数量的不同，有三种不同的校准类型。只对校准液1（试剂空白）进行校准的空白校准，对试剂空白 液与第二个校准液进行校准的二点校准，使用所有设定校准液进行校准的全点校准。可根据不同需要进行选择。
n
n
CiRi (Ci)( Ri) / n
•
K i1 n
i 1
i 1
n
Ri 2 ( Ri)2 / n
i 1
i 1
n
n
( Ci) / n
R0 ( Ri) / n i 1
i 1
K
• 3)浓度计算
•
Cx K (Rx R0 )
C Cx * IFA IFB
•
• 4)适用的校准类型：【全点校准】
• 速率法的线性反应期之前即延迟期。正确选择延迟时间 的长短，有利于准确测定，减少试验误差。设置一般根 据试剂盒的说明书，还应考虑本室的仪器特点和工作程 序
点击输入大标题
指经过一段时间的反应，反应 达到平衡，由于反应的平衡常 数很大，可认为全部底物(被 测物)转变成产物，反应液的 吸光度不再增加(或降低)，吸 光度的增加(或降低)程度与被 测物的浓度成正比。这类方法 是最理想的分析类型，通常被 称为“终点”法。

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自动生化分析仪的上机参数
生化分析仪的参数就是仪器工作的指令，操作者通过设 置正确的参数控制仪器完成一系列复杂而有序的操作程 序，主要包括试剂量、样本量、测定方法、校准方法、 反应时间、测定波长和控制因素等。通常各个机型性能 不同，参数设置也不同。
具体情况可上机观看。
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2019/9/13
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自动生化分析仪的工作程序
样 本
试 剂 1
搅 拌
延迟
比比比 色色色 杯杯杯
试 剂
搅
2拌
反应
比比 色色 杯杯
比 色
光电感应器检测
传 输
打印机打印结果 传输 计算机进行计算
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自动分析仪的基本分析方法
终点法 （1点）终点法和2点终点法
速率法 速率法和2点速率法（固定时间法）
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终点法
酶促反应，在一定条件和测定范围内，当Km〉〉底物浓 度，符合零级速率法，底物消耗/生成的速率只与催化反 应的酶的活性有关，为正比例关系，直线的斜率为定值 （即K值或factor）
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连续监测速率法的反应曲线
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两点速率法
两点速率法适用于反应吸光度随时间的变化而变化，在 一定时间内无到达终点的趋势，该反应的变化规律为在 一定时间内反应的趋势为直线或接近于直线。
比色系统
光源 比色杯
分立式比色转盘 比色杯恒温
水浴、空气浴、恒温液循环间接加热 比色杯类型
硬质石英/玻璃、塑料，永久、半永久、一次性。
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分光系统
干涉滤光片 光栅分光式
无相差蚀刻凹面光栅 后分光集束式光路系统
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关于双波长检测的优点
通过计算两个波长之间的差值，可纠正样品中脂血、溶 血和黄疸干扰的影响；也可补偿电压波动的影响，从而 获得稳定的测定结果。

原因： 如果是新试剂，检查试剂复溶及混匀情况 检查样品针和试剂针. 样品或试剂上有气泡 光源灯或比色杯老化 混匀不佳
PPT课件
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Sensitivity limit(灵敏度限制)
该数值标识出空白和 c.f.a.s之间的单位浓度吸光度变化 差异的最大值和最小值 .
在终点法的生化项目校准中，最小吸光度变化是必须检 测的标准 Sen:
在非单色光的条件下， 由于待测物质在各个波段下 吸光系数 K 的不同，造成相 关曲线也出现不同程度的偏 离。 实际上，理论上的单色 光是不存在的，我们所做的 只能是让入射光的光谱带宽 尽可能的小，要尽可能的靠 近单色光。
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5
为什么仅适用一定范围内？
Lambert-Beer Law在有解 离、缔合、生成络合物或溶剂 化等会对比尔定律产生偏离。 解离是偏离朗伯-比尔定律 的主要化学因素，当溶液浓度 （大于0.01mmol/L）改变， 解离程度也会发生变化，吸光 度与浓度的比例关系便发生变 化，导致偏离朗伯-比尔定律。
常见报警类型
Duplicate Limit Sensitivity Limit Calibration Limit Standard Limit Standard Absorbance Standard Error
潜在原因 加样不准 (样本、试剂)，搅拌 (P)，反应杯光 源老旧，环境， 电压 校准品、水点污染，试剂，校准品单位更改 未更改数值 cfas和水空白，加样不准，系统水，光源灯
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Lambert-Beer Law的适用范围：
(1) 入射光为平行单色光且垂直照射.
(2) 吸光物质为均匀非散射体系.
(3) 吸光质点之间无相互作用. (4) 辐射与物质之间的作用仅限于光吸收,无荧光和光化学现象发生. (5) 待测物在一定溶度范围之内.

生化分析离不开生化分析仪。所谓生化分 析一般是指以吸光光度分析为基础的（有 的包含离子选择电极等测定方法）、具有 样品取样及加试剂、混合、保温反应等测 定。分析过程监控和数据处理及输出能力 的半自动或全自动仪器。它们的分析方法 都以仪器和试剂为基础，以方法学为指导 标准来规范，以试验参数来联系体现。所 以，首先必须了解仪器、试剂和方法学的 原理及特点，其次是利用方法学评价对仪 器、试剂及参数在实践中作评价，以保证 分析的精密度和准确度，提高成本效益。
在浓度、厚度、单色光波长、溶剂及其
温度等相同条件下，不同吸光物质的吸光 度不同，即它们的吸光系数不同。
是物质的特性常数，它只和该物质分子在
基态和激发态之间的跃迁几率有关。它的
物理意义是吸光物质在单位浓度及单位厚
度时的吸光度，常用的表示方式是摩尔吸 光系数（molar absorptivity）。摩尔吸光系 数即1摩尔浓度的溶液在厚度为 1cm时的吸 光度。在吸光度与浓度之间的直线关系中，
溶液中颗粒浓度间的关系，称为散射比浊 ，即本次大会达成一致的主要结论是：
抗原抗体比例合适时，复合物生成量达到峰值；
法（nephelometry）。 (四)酶促反应的特点：
在一些特定情况下产生一立方添加以解
0005ABS/小时光径： 7毫米光源： 卤素灯功率： 35W电源： 12V 直流电持续时间: 2000小时
单色光源是用分光光度计由单色器或滤光 片从连续光谱的多色光中选择的、最大吸 收波长λmax在内的一小段波长范围的复合 光。以谱带宽度较小、吸收峰较宽的λmax 作为测定条件。
2．Beer定律一般适用于稀溶液的测定 有 两层含义：被测物的浓度不宜过大，其吸 光度应在相对测量误差较小的区域；溶液 在反应中存在化学平衡，受浓度、pH、溶 剂和温度等因素的影响。

46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
ห้องสมุดไป่ตู้
生化仪检测原理及应用.
1、战鼓一响，法律无声。——英国 2、任何法律的根本；不，不成文法本 身就是 讲道理 ……法 律，也 ----即 明示道 理。— —爱·科 克
3、法律是最保险的头盔。——爱·科 克 4、一个国家如果纲纪不正，其国风一 定颓败 。—— 塞内加 5、法律不能使人人平等，但是在法律 面前人 人是平 等的。 ——波 洛克