苦参素对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用

苦参素对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用

王琴;汪菁;张凯

【摘 要】目的 研究苦参素对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及机制.方法 将45只C57小鼠按双盲法随机分为对照组、模型组和苦参素低、中、高剂量组(40 mg/kg、80 mg/kg、160 mg/kg),每组9只.采用腹腔注射CCl4诱导小鼠急性肝损伤模型.全自动生化分析仪测定血清中谷草转氨酶(AST) 、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)和碱性磷酸酶(ALP)表达水平;过碘酸希夫反应(PAS)染色检测肝组织病理学改变;黄嘌呤氧化酶法检测肝脏过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和超氧化物歧化酶(SOD)活性;硫代巴比妥酸法检测肝脏丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附(ELISA)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测血清和肝脏肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6 (IL-6)和白介素1β (IL-1β)表达量.结果 与对照组比较,模型组AST、ALT、TBIL、ALP、MDA、TNF-α、IL-6和IL-1β表达水平及肝组织病理损伤明显增加,而CAT、GPx和SOD活性明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,苦参素可呈浓度依赖性降低AST、ALT、TBIL、ALP、MDA、TNF-α、IL-6和IL-1β表达水平以及肝组织病理损伤,但也可呈浓度依赖性增加CAT、GPx和SOD活性,差异均有统计学意义(P<0.05);苦参素各剂量组与对照组比较,在AST、ALT、TBIL、ALP、MDA、TNF-α、IL-6和IL-1β表达水平,CAT、GPx和SOD活性以及肝脏病理损伤方面,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 苦参素对CCl4诱导的急性肝损伤有保护作用,其作用机制与增强肝脏抗氧化酶活性,减少脂质过氧化和抗炎相关.%Objective To study the protective effects

of matrine on carbon tetrachloride (CCl4)-induced acute liver injury in mice

and its mechanisms. Methods A total of 45 C57 mice were randomly

divided into the control group, model group, matrine low, medium and high dose group (40 mg/kg, 80 mg/kg, 160 mg/kg) according to double

blind method (n=9). The model of acute liver injury was induced by

intraperitoneal injection of CCl4. The serum levels of aspartate

aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), total bilirubin

(TBIL) and alkaline phosphatase (ALP) were determined by automatic

biochemical analyzer. The pathological injury of liver tissues was detected

by PAS staining. The activities of liver catalase (CAT), glutathione

peroxidase (GPx) and superoxide dismutase (SOD) were de-tected by

xanthine oxidase assay. The content of malondialdehyde (MDA) was

determined by thiobarbituric acid assay. The serum levels of TNF-α, IL-6

and IL-1β were detected by ELISA and their gene expression levels in liver

were de-termined by RT-PCR. Results Compared with the control group,

the model group had higher expression of AST, ALT, TBIL, ALP, MDA, TNF-α, IL-6 and IL-1β, more serious hepatic pathological injury, and lower

activity of CAT, GPx and SOD (P<0.05). Compared with the model group,

matrine could decrease hepatic pathological injury and the expression lev-els of AST, ALT, TBIL, ALP, MDA, TNF-α, IL-6 and IL-1β and increase the

activity of CAT, GPx and SOD in a dose-de-pendent manner (P<0.05).

There was no statistical significance between the control group and each

dose group of matrine on the expression levels of AST, ALT, TBIL, ALP,

MDA, TNF-α, IL-6 and IL-1β, the activity of CAT, GPx and SOD, and

pathological injury of liver (P>0.05). Conclusion Matrine can protect mice

against acute liver injury induced by CCl4, and its mechanism is related to enhancing the activity of liver antioxidant enzymes, reducing lipid

peroxidation, and anti-in-flammation.

【期刊名称】《海南医学》

【年(卷),期】2018(029)012

【总页数】4页(P1629-1632)

【关键词】苦参素;急性肝损伤;四氯化碳;保护作用;机制

【作 者】王琴;汪菁;张凯

【作者单位】三峡大学附属仁和医院消化科,湖北 宜昌 443000;三峡大学附属仁和医院消化科,湖北 宜昌 443000;三峡大学附属仁和医院消化科,湖北 宜昌 443000

【正文语种】中 文

【中图分类】R-332

苦参素是从天然植物苦参中提取的主要有效成分，包含98%的氧化的苦参碱及氧化的槐果碱。药理学研究显示苦参素具有较强的抗炎和抗氧化活性，可强力清除炎症因子和氧自由基(ROS)，对衣霉素诱导的急性肝损伤具有保护作用[2]。因此本研究通过四氯化碳(CCl4)构建小鼠急性肝损伤模型，探讨苦参素对急性肝损伤的保护作用并对其保肝机制进行初步探讨，为苦参素的开发和应用提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 苦参素购买于正大天晴制药公司，四氯化碳购买于正大天晴制药公司，过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)均购买于南京建成生物科技公司，肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素1β (IL-1β)ELISA试剂盒均购买于美国Ebioscience公司。

1.2 仪器 倒置显微镜购买于日本Olympus公司，全自动生化分析仪购买于德国Sigma公司，酶标仪美国赛默飞公司。

1.3 动物 雄性C57级小鼠，SPF级，体质量22～25 g，购买于武汉大学实验动物中心，许可证号SYXK(鄂)2011-0027，设施使用证明号00124732，自由进食和进水。

1.4 动物分组及给药 45只小鼠双盲随机分成5组，每组9只。分别为正常对照组(control，C)、模型组(carbon tetrachloride，CCl4)和苦参素(matrine，M)低、中、高剂量组(40 mg/kg、80 mg/kg、160 mg/kg)[2]。给药方案：苦参素组分别给予(40 mg/kg、80 mg/kg、160 mg/kg)苦参素灌胃，1次/d，持续12 d，各组大鼠在末次灌胃后4 h，除正常对照组外，其余各组大鼠按照(6 mL/kg)腹腔注射植物油配制的四氯化碳溶液[3]。

1.5 检测指标 建模后24 h，戊巴比妥钠麻醉后行腹主静脉采血，离心取血清，全自动生化分析仪检测血清AST、ALT、TBIL和ALP含量；ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的表达量。采血完毕后处死小鼠，取肝脏，称其总重，计算肝脏指数。取左肝脏匀浆，离心取上清利用黄嘌呤氧化酶法检测肝脏过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和超氧化物歧化酶(SOD)活性；硫代巴比妥酸法检测肝脏丙二醛(MDA)含量；RT-PCR检测TNF-α 、IL-6和IL-1β的信使RNA(mRNA)水平，PCR反应条件为95Ⅱ15 s、60Ⅱ 30 s、72Ⅱ 30 s共40个循环，取PCR产物4 μL进行琼脂糖凝胶电泳。采用凝胶成像系统和图像分析系统进行成像及灰度分析，以β-actin为参照，引物序列参见表1。取右肝，置于多聚甲醛，固定，石蜡包埋，PAS染色检测肝脏病理形态，具体损伤评分参考文献[3]。

1.6 统计学方法 应用SPSS12.0统计学软件分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，多组间计量数据比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，组间比较采用最小显著差法(least significant difference，LSD)，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 苦参素对急性肝损伤小鼠血清中AST、ALT、ALP和TBIL表达水平的影响 与正常对照组相比，模型组小鼠血清中AST、ALT、ALP和TBIL的表达水平均明显增高，差异有统计学意义(P＜0.05)。与模型组相比，不同浓度的苦参素预处理均能减少血清中AST、ALT、ALP和TBIL表达水平，并且呈现浓度依赖性关系，组间差异有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表1 引物序列TNF-α IL-1β IL-6 β-actin小鼠小鼠小鼠小鼠CTGAACTTCGGGGTGATCGG AGCTTCCTTGTGCAAGTGTCT

CTGCAAGAGACTTCCATCCAG AGAGGGAAATCGTGCGTGAC