几种抗氧化剂含量的测定

5．抗氧化剂包括亚硫酸类、抗坏血酸衍生物、硫代衍生物、氨基酸类、有机酸类、酚类、胺类、油溶性抗氧化剂等。

5.1．亚硫酸类5.1.1．无水亚硫酸钠Anhydrous Sodium Sulfite Na2SO3126.04 [7757-83-7]含Na2SO3应为95.0％～100.5％。

【性状】白色结晶或粉末；无臭。

在水中易溶，在乙醇中极微溶解，在乙醚中几乎不溶。

【鉴别】（1）本品的水溶液（1→10）显碱性，并且溶液显亚硫酸盐的鉴别反应（附录Ⅲ）。

（2）本品的水溶液显钠盐的鉴别反应（附录Ⅲ）。

【检查】溶液的澄清度与颜色取本品1.0g，加水20ml使溶解，溶液应澄清无色。

硫代硫酸盐取本品2.0g，加水100ml，振摇使溶解，加甲醛溶液10ml、醋酸10ml，摇匀，静置5分钟，加淀粉指示液0.5ml，用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，记录消耗的体积，扣除空白试验消耗的体积，不得过0.15ml（0.1%）。

铁盐取本品1.0g，加盐酸2ml，置水浴上蒸干，加水适量溶解，依法检查（附录ⅧG），与标准铁溶液1.0ml制成的对照液比较，不得更深（0.001％）。

重金属取本品1.0g，依法检查（附录ⅧH 第一法），含重金属不得过百万分之十。

硒取本品3.0g，加甲醛溶液10ml，缓缓加入盐酸2ml，水浴加热20分钟，溶液所显粉红色，与另取本品1.0g，精密加硒标准溶液（精密称取硒0.100g，加硝酸2ml，蒸干，残渣加水2ml 使溶解，蒸干，重复操作3次，残渣用稀盐酸溶解并定量转移至1000ml量瓶中，加稀盐酸稀释至刻度，摇匀，即得）0.2ml，加甲醛溶液10ml，缓缓加入盐酸2ml，水浴加热20分钟，制得的对照溶液的颜色比较，不得更深（0.001%）。

砷盐取本品0.5g，加水10ml溶解后，加硫酸1ml，置砂浴上蒸至白烟冒出，放冷，加水21ml 与盐酸5ml，依法检查（附录ⅧJ 第二法），应符合规定（0.0004%）。

绝缘油中T501抗氧化剂含量检测细则（红外光谱法）1检测条件1.1环境要求除非另有规定，检测均在当地大气条件下进行，且检测期间，大气环境条件应相对稳定。

a)取样应在良好的天气下进行。

b)环境温度不宜低于5℃。

c)环境相对湿度不大于80%。

1.2待试样品要求a)用洁净的500mL 磨口具塞试剂瓶，从设备下部取样口采样500mL。

b)油样在运输、保管过程中要注意样品的防尘、防震、避光和干燥等。

1.3人员要求试验人员需具备如下基本知识与能力：a)熟悉绝缘油抗氧化剂含量检测技术的基本原理和标准。

b)了解红外光谱仪的技术参数和性能。

c)掌握绝缘油抗氧化剂含量检测操作方法和影响因素。

d)了解被测样品取样基本要求。

e)熟悉电力生产和化学相关安全管理规定。

f)经过上岗培训并考试合格。

1.4安全要求a)执行国家电网公司《电力安全工作规程（变电部分）》相关要求。

b)现场取样至少由2人进行。

c)应在良好的天气下进行取样工作。

d)按照化学药品安全使用规定进行操作，注意防火防毒。

e)测试仪器确保良好接地。

1.5试验仪器及材料要求1.5.1主要仪器设备a)红外分光光度计：波长涵盖3800cm -1～3500cm -1，分辨率不低于4cm -1。

b)液体吸收池：在3800cm -1～3500cm -1范围内透明、具有无选择性吸收的任何材料的池窗(常用池窗有KBr，NaCl)、光程长0.3mm～1.0mm（也可根据不同的仪器状况，选择合适程长)的吸收池。

c)吸耳球。

d)玻璃注射器：1mL～2mL。

e)搅拌器。

f)分析天平，精度为0.0001g。

冷月无声1.5.2试剂与材料要求a)四氯化碳：分析纯。

b)浓硫酸：密度1.84g/cm 3，98%，分析纯。

c)2，6二叔丁基对甲酚：化学纯。

d)干燥白土：细度小于200目的白土约500g ，在120℃下烘干1h ，保存于干燥器内。

2检测准备2.1环境、人员、仪器准备检查环境、人员、仪器满足检测要求。

在食品体系和生物体系中还普遍使用过渡金属 或过渡金属的氧化还原反应引发氧化 , 如 Fe2 + 和 Cu2 + 、Fe3 + / 抗坏血酸等 。但是这些体系中的一些成 分 (如抗坏血酸) 能与自由基反应 ,干扰测定结果 。而 且使用含有过渡金属的体系不能将不同于初始型抗 氧化剂的抑制机理 (如螯合作用) 区别开 。另外 ,也有 用光照或紫外光来加速氧化的 ,但是光引发脂质氧化 可能引起氧化机理的改变 ,因此这种方法不常用 。 31113 脂质氧化的检测
利用脂质氧化测定抗氧化活性时 ,在常温下添加 完抗氧化剂后 ,脂质氧化变慢 ,抗氧化活性的测定往 往需要几个月甚至更长的时间 。因此常使用各种加 速氧化的方法 , 如烘箱法 、活性氧法 、Rancimat 法 、 OSI 法 。这些方法是通过升温或增加氧浓度加速氧 化的 。上述加速氧化所使用的温度与食品体系中氧 化变质的条件不同 ,而且高温加速试验造成氧化机理 的改变 ,有可能导致错误的结果 。
法和 DPPH 法 。 311 以抗氧化剂抑制脂质氧化为基础的方法
在食品中 ,以抑制脂质氧化降解为基础的方法是 测定抗氧化活性最方便也是最常用的方法 。脂质中 的不饱和脂肪酸自动氧化 ,生成不稳定的氢过氧化 物 ,氢过氧化物继续分解形成短碳链的醛 、酮 、酸等小 分子化合物 。抗氧化剂的加入可以延缓氢过氧化物 及其分解产物的形成 ,由此可测得抗氧化活性 。由于 氧化的底物 、引发或加速氧化的方法以及脂质氧化检 测方法的不同 ,该法又可分为以下几种情况 。 31111 氧化的底物或使用的体系
为了得到重复性的结果 ,选择底物时应优先考虑 单一的物质 ,如亚油酸或亚油酸甲酯 。不推荐使用植 物油或血浆等生物试样作为底物 ,因为它们是混合 物 ,提供完全相同的底物是不可能的 。此外 ,底物中 含有的抗氧化剂 (如植物油中常含有 VE) 也能参与测 试过程 ,干扰测定 。但是实际测定中常使用植物油等 脂质混合物 ,因为它们是与真实食品有关的脂质成 分 。实际操作中应根据具体的测试方法选择合适的 底物和测试体系 。 31112 引发或加速氧化的方法

抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定方法在食品、药物、化妆品以及生物学研究中具有重要的应用价值。

抗氧化活性是指物质对自由基的清除能力，其测定方法可以评估物质的抗氧化性能和保护细胞免受氧化损伤的能力。

本文将介绍一些常用的抗氧化活性测定方法。

一、DPPH自由基清除法DPPH自由基清除法是目前应用最广泛的抗氧化活性测定方法之一、该方法基于DPPH自由基的紫色溶液，在受到氧化损伤时会褪色。

通过测定样品对DPPH自由基的清除能力，可以评估其抗氧化活性。

实验步骤：1.准备0.1mM的DPPH溶液。

2.取一定量的样品，加入适量的溶剂溶解。

3.取不同浓度的样品溶液，加入相同量的DPPH溶液。

4.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出样品的抗氧化活性。

二、还原能力测定法还原能力测定法是一种常用的抗氧化活性测定方法。

该方法基于物质对氧化剂的还原能力，通过测定还原剂浓度与吸光度之间的关系，评估样品的抗氧化活性。

实验步骤：1.准备一系列不同浓度的还原剂溶液。

2.取一定量的还原剂溶液，加入适量的氧化剂溶液。

3.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出还原剂的浓度与吸光度之间的关系。

4.根据吸光度与还原剂浓度的关系，评估样品的抗氧化活性。

三、总抗氧化能力测定法总抗氧化能力测定法是一种综合评估样品抗氧化活性的方法。

该方法基于样品的抗氧化剂含量和抗氧化活性，通过测定样品对氧自由基的清除能力，评估其总抗氧化能力。

实验步骤：1.准备一定浓度的氧自由基溶液。

2.取一定量的样品，加入适量的溶剂溶解。

3.取不同浓度的样品溶液，加入相同量的氧自由基溶液。

4.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出样品的抗氧化活性。

以上是常用的抗氧化活性测定方法，还有其他一些方法如ORAC法、TEAC法等也被广泛应用。

不同的方法适用于不同的样品和测定目的，选择适合的方法进行测定可以更准确地评估样品的抗氧化活性。

抗氧化物活性测定方法（倾向于考虑DPPH法和ORAC法）1.FRAP法:铁离子还原抗氧化能力测定法[1]FRAP(ferric ion reducing antioxidant power)方法，在低pH值的溶液中，Fe3+-TPTz(Fe3+-三吡啶三嗪)被抗氧化剂还原成有色的Fe2+-TPTZ。

反应的结果常以Fe2+当量或标准物质的抗氧化能力表示。

该法快速简便、易于操作、重复性好，但FRAP反应属于电子转移(SET)反应，因此FRAP方法不能够测定氢转移反应(HAT)起作用的物质。

而且该法实际测定的是待测生物活性物质将Fe3+还原为Fe2+的能力，因此没有抗氧化能力的生物学相关性。

2.TEAC法(trolox equivalent antioxidant capacity)ABTS(2,2'-amino-di(2-ethyl-benzothiazoline sulphonic acid-6)ammonium salt,2,2'氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6)铵盐)与过氧化物酶和氢过氧化物在一起形成ABTS+阳离子自由基。

在抗氧化剂存在时，这种自由基混合物的光吸收值下降，下降程度取决于抗氧化剂的抗氧化能力，测得的结果以TEAC表示，即被测抗氧化剂清除ABTS·+的能力(吸光度大小的变化)与标准抗氧化剂trolox(VE的水溶性类似物)清除ABTS·+的能力的比值。

TEAC法十分简单，适用于大量样品的分析检测。

但是，ABTS·+并非生理自由基，缺乏生理相关性，而且与FRAP方法相似，ABTS·+与不同抗氧化剂问的氧化反应时间不同，因此，只能定性不能定量评价样品的抗氧化能力。

3.DPPH法[2，3](2，2-diphenyt-l-picrylhydrazyl radical scavenging capacity)DPPH·(二苯代苦味肼基自由基)法是较常用的方法之一。

气质联用法同时测定肉制品中的抗氧化剂和防腐剂唐双双【摘要】要：建立气质联用法同时测定肉制品中3种抗氧化剂和7种防腐剂的方法.肉制品经6mol/L盐酸酸化后，乙醚提取，最后用甲醇浓缩定容，以气质联用色谱仪(电子轰击源)测定.结果表明10种物质在2~1000mg/L质量浓度范围内有良好的线性关系，相关系数都在0.999以上，其中3种抗氧化剂的最低质量浓度可以达到0.5mg/L.10种物质的最低检出限在0.2~0.8mg/kg之间，回收率范围是89.6%~97.8%.该方法快速简单，检出限低，线性范围宽，实用性强，为肉制品中多种常见防腐剂和抗氧化剂的同时测定提供了一种快速灵敏的方法.%A GC-MS method has been established for the simultaneous determination of three antioxidants and seven preservatives in meat products. Samples were acidified with 6 mol/L hydrochloric acid and extracted with ethyl ether. The resulting extract was rotary evaporated to dryness and redissolved in methanol prior to GC-MS analysis (electron impact ion source). A good linear relationship in the concentration range of 2 to 1000 mg/L with correlation coefficient above 0.999 was found for all 10 analytes. Three antioxidants showed the widest linear range with the lowest concentration of 0.5 mg/L. The limits of detection for all 10 analytes ranged from 0.2 to 0.8 mg/kg, and their average recoveries from spiked samples varied from 89.6%to 97.8%. This method was rapid, simple and practical and had low detection limit and wide liner range, thus providing an effective method for the simultaneous determination of preservatives and antioxidants in meat products.【期刊名称】《肉类研究》【年(卷),期】2013(000)002【总页数】3页(P18-20)【关键词】气相色谱-质谱法(GC-MS);肉制品;抗氧化剂;防腐剂【作者】唐双双【作者单位】镇江市产品质量监督检验中心，江苏镇江 212132【正文语种】中文【中图分类】TS251.4在食品中加入防腐剂可以延长保存期，防止腐烂变质，而食物中的油脂极易氧化发生酸败，并产生有毒物质，加入抗氧化剂可以预防这一过程的发生。

摘
要： 通 过 用 高 效 液相 色谱 法 测 定饲 料 添加 剂 乙氧 基 喹 啉 含 量 ， 建 立 了一 种 简单 、 快速 、 准确 评 价 饲 料 添 加 剂 乙
氧 基 喹 啉 品 质 的 方 法 。 选取 典 型 乙氧 基 喹 啉 产 品 （ 主 要 包括 ９ ５ 原 油、 ６ Ｏ 粉 剂和 ３ Ｏ ％粉 剂 ） ， 用 乙腈 超 声 提 取 ， 外 标 法定 量 。在 １ Ｏ ～１ ０ ０＃ ｇ ／ ｍｌ 范 围 内， 乙氧 喹 的 峰 面 积 与 其 质 量 浓 度 间 有 良好 的 线 性 关 系 ， 相 关 系数 为 ０ ． ９ ９ ９ ６ 。 精 密 度 实验 ， 相 对标 准偏 差 均 小 于 ２ ， 能 够 满 足 饲料 添加 剂 乙氧 基 喹 啉 检 测 的要 求 。
２ ． Ｔｈ ｉ ｓ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｃ ｏ ｕ ｌ ｄ ｂ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｆ ｅ ｅ ｄ ａ ｄ ｄ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ｅ ｔ ｈ ｏ ｘ ｙ ｑ ｕ ｉ ｎ ．
６ Ｏ ｅ ｔ ｈ ｏ ｘ ｙ ｑ ｕ ｉ ｎ ｄ ｒ ｙ ｐ ｏ ｗｄ ｅ ｒ ａ ｎ ｄ ３ ０
ｅ ｔ ｈ ｏ ｘ ｙ ｑ ｕ ｉ ｎ ｏ ｎ，
ｅ ｔ ｈ ｏ ｘ ｙ ｑ ｕ ｉ ｎ ｄ ｒ ｙ ｐ ｏ ｗｄ ｅ ｒ ）ｗｅ ｒ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ａ ｃ ｅ ｔ ｏ ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｌ ｅ ｂ ｙ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｓ ｏ ｎ ｉ ｃ ． Ｔｈ ｅ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ
关键词 ： 乙氧基 喹 啉 ； 饲料添加 剂； 高效 液 相 色谱 法 中图分类号 ： ＴＳ ２ １ ０ ． ７ 文献 标 志码 ： Ａ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ３ —６ ２ ０ ２ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ —０ ０ ５ ９ —０ ４

害 和肝癌 有关 系 ， 这样 Ｓ Ａｓ 食 品 中使 用 是 被政 Ｐ 在
府 严 格 控 制 的。 例 如 ， Ｂ Ｔ ＨＱ 在 欧 盟 是 被 禁 止 的 。一 般 国家 通 常 １ ０ｍｇ ｋ ～ ２ ０ ｍｇ ｋ ０ ／ ｇ ０ ， ｇ的 ／
脂 酸败 ， 防止 油 脂 酸 败 的关 键 在 于 防 止 其 自身 氧
研 究 与 探 讨
中国标准导报
ＣＨＩ ＮＡ ＴＡＮＤ ＡＲＤＳ ＲＥＶ Ｉ Ｓ ＥＷ
食品中抗氧化剂的限量标准及检测方法探讨
罗 成 玉 赵 全 明 张 耀 明 金 建 国 张 宇 王 锋 瞿 春 芳
摘 要 ： 本 文 阐述 了世界 各 国对食 品 中抗 氧化 剂 的 限量 规 定 ， 中对 我 国规 定 其 的限量 标准 的不 完善 地 方进行 了探 讨 ； 另外 对 国 内外 的检 测 方 法进 行
化反 应 。
和合 成类抗 氧化 剂 ， 由于 天然 抗 氧化 剂 的稳 定 性一
般较 差 ， 品生 产 商 都愿 意选 择 如 ＴＢ 食 ＨＱ、 ＨＡ、 Ｂ
Ｂ ＨＴ、 Ｇ 等 的 合 成 酚 类 抗 氧 化 剂 （ Ｐ ） 为 了 阻 Ｐ Ｓ Ａｓ 。
而油 炸食 品等应 以脂肪 计 ， 样在 实 际 判定 中容易 这
甘油、 双甘油 酯和游 离脂肪酸 ， 通 过加热、 单 可 精 练， 以破 坏或 消除脂 肪 酶而 达 到保 护作 用 。更 普 遍
和重要 的是 油脂 的氧 化 ， 是 一个 复 杂 的 过 程 ， 它 也
是 使 用 抗 氧 化 剂 的 主 要 目的 。
效益 ， 消费 者 的 利 益 于不 顾 ， 量使 用 抗 氧化 剂 置 超
中国标准导报

维生素E的含量测定
校正因子的计算

校正因子 f AS / mS AR / mR
式中，AS：为内标物的峰面积 AR：为对照品的峰面积
mS：为加入内标物的质量 mR：为加入对照品的质量
维生素E的含量测定
含量的计算
含量
mi
f
Ai AS / mS
式中，Ai：为供试品峰面积 mi：为供试品的含量
维生素E的含量测定
标示量的计算
标示量%
（mi
/Vi）1000 10 1/1000 取样量 标示量
平均片量
100
%
式中，平均片量、标示量均以mg为单位 mi/Vi：为1μL供试品溶液中所含维生素E的质量，μg
10：为供试品溶液的总体积，mL 1/1000：为将μg换算成mg
1000：为将1μL中的质量换算为1mL中的质量，μg
维生素E的含量测定——内标法
维生素E的含量测定
维生素E
维生素E是有8种形式的脂溶性维生素，为一重要的抗氧化剂。维生素E包括生育酚 和三烯生育酚两类共8种化合物，即α、β、γ、δ生育酚和α、β、γ、δ三烯生育酚，α-生 育酚是自然界中分布最广泛含量最丰富活性最高的维生素E形式。
维生素E的含量测定
测定原理
03
样品的测定
测定方法
取本品20粒精密称定，清出内容物混合均匀。囊壳以乙醚清洗干净，置通 风处使溶剂自然挥尽，再精密称定囊壳质量，求得平均每粒质量，精密称取内 容物适量（约相当于维生素E 20mg），置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标 溶液10mL，密塞，振摇使溶解，取取1῀3μL注入气相色谱仪，计算含量。
供试品和内标均制成甲醇溶液，进入气相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸 收检测器于波长254nm处检测维生素E（C31H52O3）和内标正三十二烷的吸收 值，计算出其含量。

高效液相色谱法测定食用植物油中TBHQ、BHA、BHT含量作者：续颖刘雪莹伍蓥来源：《安徽农业科学》2017年第18期摘要 [目的]建立食用植物油中3种抗氧化剂含量的测定方法。

[方法]利用甲醇溶解提取与离心相结合的技术进行脱脂处理，采用反相高效液相色谱法同时测定食用植物油中特丁基对苯二酚（TBHQ）、丁基羟基茴香醚（BHA）和二丁基羟基甲苯（BHT）含量。

[结果]TBHQ、BHA、BHT浓度在1～10 mg/L时线性关系良好，相关系数分别为0.999 92、0.999 95、0.999 93；检出限分别为0.54、0.48、0.48 mg/kg，回收率为73.7%～97.3%。

[结论]该方法准确、灵敏，适用于各类植物油的TBHQ、BHA、BHT含量分析。

关键词食用植物油；特丁基对苯二酚；丁基羟基茴香醚；二丁基羟基甲苯；脱脂处理；高效液相色谱法中图分类号 TS225.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2017）18-0089-02Abstract [Objective] To establish a method for determination of 3 antioxidants content in edible vegetable oil.[Method] The content of TBHQ，BHA，BHT in edible vegetable oil was determined by reversed phase high performance liquid chromatography （HPLC），using the technology of methanol extraction and centrifugation to conduct degreasing.[Result] Experimental results showed that the experiment of TBHQ，BHA，BHT had a good liner relationship in concentration range of 1-10 mg/L，the correlation coefficient of linear curve were 0.999 92，0.999 95，0.999 93； the limits of detection were 0.54，0.48，0.48 mg/kg； the recovery of 3 antioxidants ranged from 73.7% to 97.3%.[Conclusion] The method was proved to be highly efficient，robust and sensitive，and was suitable for the analysis of TBHQ，BHA，BHT in edible vegetable oil.Key words Edible vegetable oil；TBHQ；BHQ；BHT；Degreasing treatment；High liquid performance chromatography食用植物油是人们日常生活必需食品之一，近年来频频发生的食品安全事件中不乏与食用油有关的事件，抗氧化剂等安全性指标超出限量标准的情况会对人们身体健康造成不可逆转的伤害，加剧了消费者对食品安全的信任危机。

抗氧化能力的测定（精选4篇）以下是网友分享的关于抗氧化能力的测定的资料4篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。

DPPH抗氧化能力测定篇一DPPH.法测定绿原酸清除自由基能力2.1 待测液的制备将绿原酸(纯度56%)、维生素C和没食子酸分别配制成体积分数为0.1mg/mL的无水乙醇溶液。

2.1.1 绿原酸母液的配制称取9.0 mg绿原酸，定容到50ml，即可得到绿原酸的母液0.1mg/mL。

然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。

分别为mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml;mg/ml。

2.1.2 Vc母液的配制称取mg VC，定容到100ml，即可得到VC的母液。

然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。

分别为mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml。

2.1.3 没食子酸母液的配制称取mg 没食子酸，定容到100ml，即可得到没食子酸的母液。

然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。

分别为mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml。

2.1.4 DPPH母液的配制称取mg DPPH，用无水乙醇定容到100ml，即可得到DPPH的母液。

然后，再将所配制的母液按照要求稀释成至一定浓度的溶液。

CDPPH= mg/ml。

（建议用0.025mg/mL）2.2 DPPH.溶液的可见光谱以无水乙醇为对照，在分光光度计上对DPPH.溶液进行在440～600nm下扫描。

Amax= nm2.3 抗氧化活性测定DPPH.是一种稳定的自由基，它的乙醇溶液呈紫色，在可见光区最大吸收峰为nm。

当DPPH.溶液中加入自由基清除剂时，溶液颜色变浅，517nm处的吸光度变小，而吸光度变小的程度与自由基被清除的程度呈线性关系。

因此，可用来检测自由基的清除情况，从而评价某物质的抗氧化能力，其能力用清除率(Scavenging Rate,SR)来表示，清除率越大，抗氧化能力越强具体实验步骤及方法：精确吸取的DPPH.溶液2mL与2ml无水乙醇混合均匀后，以相对应的溶剂(4mL无水乙醇)为对照，用分光光度计测定上述溶液在nm处的吸光度值(A0)。

（ 州 白云 山中药厂 ） 熟地 黄 １ ０ｇ 广 ： ６ ，山茱萸 （ ） 制 ８ ， ０ｇ 牡丹 皮 ６ ， Ｏｇ 山药 ８ ， 苓 ６ ，泽 泻 ６ Ｏｇ 茯 ０ｇ Ｏ
ｇ 小 柴胡 汤丸 （ 。 兰州佛 慈制药 股 份、 黄 素 ）、 白质 和 酶 类 以及 微 量 元 茜 大 蛋
大枣 １ ０ｇ 甘 草 ８ ， ２ ， ０ｇ 生姜 ６ 。 ４ｇ
１ ３ 实 验 方 法 ．
１ ３ １ 中药方 剂溶液 的制备 ． ．
小 柴胡 汤丸 ， 味 六
地黄丸 ， 牛黄 上清 丸及 牛 黄解 毒 丸 各称 取 ｌｇ 粉 ，
碎 ， ７ 加 Ｏ／ ９ ６乙醇 ３ ， 纱 布 过 滤 ， 液 置 ５ Ｏｍｌ用 滤 ０ ｍｌ 量瓶 中定 容［ 。 容 ５ ］
反应 活性 ， 存在 时间短 ， 在体 系 内加入水 杨 酸捕 捉 羟 自由基 并 产 生有 色 物 质 ， 物质 在 ５ ０ ｎ 下 该 １ ｍ
于对 氧 自由基 的 清 除 作 用 。
关 键 词 ：中 药方 剂 ；自 由基 ；清除 作 用
自 Ｈａ ｎ创立 抗 衰 老 的 自由基 学说 以来 的 ｒ ｍａ
国产分 析纯 。 １ ２ 中药 方剂处 方 。 牛黄解 毒丸 （ 京 同仁 堂 制药 厂 ） 人 工 牛 黄 北 ：
５ｇ 雄 黄 ５ ， ， ０ ｇ 石膏 ２ ０ ｇ 大 黄 ２ ０ ｇ 黄 芩 １ ０ ０ ， ０ ， ５ ｇ 桔梗 １ ０ｇ ， ０ ，冰片 ２ ， ５ｇ 甘草 ５ 。牛黄 上清 丸 ０ｇ （ 京 同仁堂制 药厂 ） 人工 牛黄 ２ｇ 薄荷 ３ ， 北 ： ， ０ｇ 菊 花 ４ ， 芥穗 １ ， ０ｇ 荆 ６ｇ 白芷 １ ，ｔ １ ， ５ ６ｇ Ｊ 芎 ６ｇ 栀 Ｏ Ｊ

【 文献标志码】 Ａ
【 文章编号】 １００７ － ８５１７ (２０２１) ０８ － ００２６ － ０４
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｉｎ Ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ３ Ｓｏｆｔ Ｃａｐｓｕｌｅｓ ｂｙ ＨＰＬＣ Ｔｈｅ Ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｄｉｂｕｔｙｌ Ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅ
ｓｏｆｔ ｃａｐｓｕｌｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｔｈｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｌｕｍｎ ｗａｓ Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ Ｃ１８ (２５０ ｍｍ × ４ ６ ｍｍꎬ ５ ｍ) ꎬ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ｍｅｔｈａｎｏｌ －
ｗａｔｅｒ ａｎｄ ｍｅｔｈａｎｏｌ － ｅｔｈａｎｏｌ ( ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ) ꎬ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １ ０ ｍＬ / ｍｉｎꎬ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２７８ ｎｍꎬ ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ
２６
中国民族民间医药 ２０２１ 年 ４ 月第 ３０ 卷第 ８ 期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｙꎬ２０２１ꎬＶｏｌ ３０ꎬＮｏ ８
药物研究
ＨＰＬＣ 法测定维生素 Ｄ３ 软胶囊中抗氧剂
二丁基羟基甲苯的含量
周惠惠１ 胡立学２ 刘佳佳２ 梅兴国１ꎬ３∗
ｍｏｎｓｉｌＣ１８ 柱 (２５０ ｍｍ × ４ ６ ｍｍꎬ ５ μｍ) ꎬ 流动相为甲醇 － 水、 甲醇 － 乙醇 ( 梯度洗脱) ꎬ 流速为 １ ０ ｍＬ / ｍｉｎꎬ 检测波长为
２７８ ｎｍꎬ 柱温为 ３５ ℃ ꎬ 进样量 ２０ μＬꎮ 结果: ＢＨＴ 浓度在 ５ ４４ ~ １６ ３１ μｇ / ｍＬ 范围内线性关系良好 ( ｒ２ ＝ ０ ９９９９ꎬ ｎ ＝ ５) ꎻ

高效液相色谱法同时快速测定植物油中的三种抗氧化剂邵亮亮; 杜京霖; 张谷平; 赵美凤; 应美蓉; 陈曦; 徐晨斌【期刊名称】《《粮食与食品工业》》【年(卷),期】2019(026)006【总页数】6页(P49-53,58)【关键词】抗氧化剂; 快速测定; 高效液相色谱法; 植物油【作者】邵亮亮; 杜京霖; 张谷平; 赵美凤; 应美蓉; 陈曦; 徐晨斌【作者单位】浙江省粮油产品质量检验中心杭州 310012【正文语种】中文【中图分类】TS207.3植物油是人们日常生活中的重要消费品。

植物油中含有许多不饱和脂肪酸，极易发生氧化酸败。

氧化酸败会破坏油脂中的不饱和脂肪酸和维生素等营养成分，改变色泽及粘度，降低油脂的稳定性，从而影响油脂类食品的感官质量和储存期限[1]，并对人体健康产生危害[2]。

为防止油脂氧化酸败，抗氧化剂被广泛应用于食用油生产加工中，许多厂家为了达到更好的抗氧化效果，常常同时添加几种不同的抗氧化剂[3]。

目前，常用的有3种苯酚类人工合成抗氧化剂[4]：特丁基对苯二酚(tertiary butylhydroquinone, TBHQ)，叔丁基对羟基茴香醚(butylated hydroxyanisol, BHA)，2,6-二叔丁基对甲酚(butylated hydroxytoluene, BHT)。

人工合成抗氧化剂过量使用会对人体产生不利影响，如TBHQ对动物有至突变的可能，BHA和BHT有致癌作用[5]，因而世界上很多国家对抗氧化剂使用量有严格的规定，如日本尚未批准TBHQ作为油脂抗氧化剂，食品中不得检出[6]。

我国食品安全国家标准GB 2760—2014《食品添加剂使用标准》规定，在脂肪，油和乳化脂肪制品以及基本不含水的脂肪和油中，三种抗氧化剂均不得超过0.2g/kg[7]。

目前TBHQ、BHA和BHT的测定方法主要有薄层色谱法[8-10]、比色法[11-13]、气相色谱法[14-16]和高效液相色谱法[17-20]等，其中薄层法、比色法稳定性差，准确度低，而气相色谱法前处理繁琐、耗用试剂多。

植物叶片中GSH含量测定一、实验目的掌握TDBN（巯基试剂显色法）测定GSH含量的原理和步骤。

二、实验原理还原型谷胱甘肽（GSH）是植物细胞内一种重要的抗氧化剂，直接或间接地参与了许多植物生理活动如硫的代谢和转运。

它含有活性巯基，极易被氧化。

GSH能与TDBN反应产生GSSG，GSSG呈黄色，在波长412nm处有最大光吸收。

因此利用标准曲线法可测定样品中GSH的含量。

三、实验仪器天平、冷冻离心机、恒温水浴锅、分光光度计、研钵、移液枪等。

四、实验试剂10µg/mL GSH标准溶液；5%偏磷酸；0.2mol/LpH7.0磷酸钾缓冲液；TDBN试剂五、实验材料小麦叶片六、实验方法1、样品测定取两份0.2g叶片，一份为对照，另一份在0℃处理4min。

两份叶片剪碎后均加入少量5%偏磷酸，冰浴研磨后分别转移到两支试管中，再加5%偏磷酸定容到6mL，各取3mL在离心管中，平衡后在4℃，10000rpm下离心8min。

各取离心后上清2mL，加入4mL磷酸缓冲液和0.4mLTDBN试剂，摇匀后，30℃显色5min。

最后测定它们在412nm下的吸光值。

2、标准曲线制作含量为横坐标，吸光值A为纵坐标，得到标准曲线及其对应的回归方程。

七、实验结果及计算1、GSH含量（µg/g FW）=(C x·Vt)/(Vs·W)C x：根据标准曲线计算的2mL提取液中的GSH含量（µg）；Vt：样品提取液总体积（6mL）；Vs：测定用提取液体积（2mL）；W：样品鲜重（0.2g）。

2、实验结果：（1）标准曲线结果得到标准曲线及回归方程如下图：（2）样品测定结果计算。

实验一超氧阴离子自由基清除能力的测定——抗氧化实验之一一、目的要求通过本实验掌握利用利用植物（或微生物发酵生产的原料）提取物进行超氧阴离子自由基清除能力测定的方法。

二、实验原理超氧阴离子自由基是生命活动代谢过程中产生的一种重要的自由基，超氧阴离子自由基具有很强的氧化能力，因此在抗氧化物性能的测定时，经常把清除超氧阴离子自由基作为其中一个重要的指标，产生超氧阴离子自由基的体系有多种，邻苯三酚自氧化法由于操作简单、反应灵敏等特点而被广泛采用。

邻苯三酚在碱性条件下迅速自氧化，在自氧化过程中会产生02﹣∙，02﹣∙能加速邻苯三酚自氧化速率，同时生成有色中间产物，中间产物的积累在滞后30s~45s 与时间呈良好的线性关系，一般维持4min左右，随后减慢.，有色产物在325nm 有强烈的光吸收，由于自氧化速率依赖于02﹣∙的浓度，清除02﹣∙就可以抑制自氧化反应，阻止中间产物的积累，从而达到清除超氧阴离子的目的。

三、器材及试剂（一）器材恒温水浴锅、控温电动搅拌器、电子天平、超滤器、电加热套、紫外分光光度计、旋转蒸发仪、超声波清洗仪等。

10ml比色管、秒表、比色皿、100ml容量瓶、温度计、微量取样器、移液管等。

（二）试剂邻苯三酚、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、HCl、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、抗坏血酸、BHT等。

（1）pH8.2的Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L，25℃）：50ml 0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与22.9ml 0.1mol/L盐酸混匀后，加水稀释至100ml。

（2）0.2mmol/L邻苯三酚溶液（邻苯三酚用0.05mol/L的盐酸配制）四、操作步骤（一）样品的测定（1）先将提取物用双蒸水配制成不同浓度梯度，在10mL的比色管中分别加入4mL（0.05mol/L）pH8.2的Tris-HCl缓冲液，置于25℃水浴中预热20min，然后加入25℃水浴中预热20min不同浓度样品液1mL，再加入在25℃水浴中预热20min的0.2mmol/L邻苯三酚溶液1mL（邻苯三酚用0.05mol/L的盐酸配制），混匀后在25℃水浴中反应4min，立即用浓HCl两滴终止反应，并在325nm处测定吸光度（A样）。

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