慢病毒介导WWOX基因过表达对Jurkat和K562白血病细胞生物学特性影响的实验研究

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慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞与K562细胞共培养对伊马替尼耐药的影响

中国组织工程研究第19卷第6期2015–02–05出版C hi n ese Jo urna l o f Tis sue Engineeri ng Res earch February 5,2015Vol.19,No.6www.CRTER.org王吉刚，男，云南省沾益县人，博士，副主任医师，主要从事白血病微环境对白血病生物学特性影响的研究。

通讯作者：周凡，硕士，主任医师，解放军沈阳军区总医院血液科，辽宁省沈阳市110016d oi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.06.006[http://www.crter.o rg]中图分类号:R394.2文献标识码:A 文章编号:2095-4344(2015)06-00849-05稿件接受：2015-01-03Wang Ji-gan g,M.D.,Associatech ief physician ,De partment of Hematology,the Gen eral Hospita l of Sh enya ng Military C omman d,Sh enya ng 110016,Liao nin g Province ,C hin a C orresp ond ing a uthor:Zh ou Fan ,Master,C hie f ph ysicia n,Depa rtme nt o f He matolog y ,the Gen eral Hospita l of Sh enya ng Military Co mmand ,She nyan g 110016,Liao ning Pr o vince ,C hin a53慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞与K562细胞共培养对伊马替尼耐药的影响王吉刚，张海婷，周凡，刘彦琴，白颖，刘景华，李敏燕(解放军沈阳军区总医院血液科，辽宁省沈阳市110016)文章亮点：1酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼的出现使慢性髓细胞白血病的治疗出现转机，伊马替尼耐药已成为困扰临床的主要问题。

翻译2013-12

Biochemistry. 2013 Dec 13. [Epub ahead of print]Molecular Origin ofthe Binding of WWOX Tumor Suppressor to ErbB4 Receptor Tyrosine Kinase.Schuchardt BJ, Bhat V, Mikles DC, McDonald CB, Sudol M, Farooq A.Author informationAbstractThe ability of WWOX tumor suppressor to physically associate with the intracellular domain (ICD) of ErbB4 receptor tyrosine kinase is believed to play a central role in downregulating the transcriptional function of the latter. Herein, using various biophysical methods, we show that while the WW1 domain of WWOX binds to PPXY motifs located within the ICD of ErbB4 in a physiologically relevant manner, the WW2 domain does not. Importantly, while the WW1 domain absolutely requires the integrity of the PPXY consensus sequence, nonconsensus residues within and flanking this motif do not appear to be critical for binding. This strongly suggests that the WW1 domain of WWOX is rather promiscuous toward its cellular partners. We also provide evidence that the lack of binding of the WW2 domain of WWOX to PPXY motifs is due to the replacement of a signature tryptophan, lining the hydrophobicligand binding groove, with tyrosine (Y85). Consistent with this notion, the Y85W substitution within the WW2 domain exquisitely restores its binding to PPXY motifs in a manner akin to the binding of the WW1 domain of WWOX. Of particular significance is the observation that the WW2 domain augments the binding of the WW1 domain to ErbB4, implying that the former serves as a chaperone within the context of the WW1-WW2 tandem module of WWOX in agreement with our findings reported previously. Altogether, our study sheds new light on themolecular basis of an important WW-ligand interaction involved in mediating a plethora of cellular processes.PMID:24308844[PubMed - as supplied by publisher]既往研究表明肿瘤抑制子WWOX通过与ErbB4的胞内结构域结合从而调控后者下游的转录功能。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子转染对白血病细胞K562形态及增殖的影响

山东医药２０１７年第５７卷第３１期
粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子转染对白血病细胞Ｋ５６２形态及增殖的影响
陈蓉。常晋霞，李雪璐，彭丽娟，朱红（川北医学院医学微生物学与免疫学教研室，四川南充６３７０００）
摘要：目的
观察重组ＰｃＤＮＡ３．１一粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ— ｃｓＦ）、外源性ＧＭ．ＣＳＦ对髓系白血
病细胞（Ｋ５６２）形态及增殖的影响。方法将Ｋ５６２细胞分为４组，重组质粒组、外源性组、空质粒组细胞分别以重
ａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＩｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｓＫ５６２
ＣＨＥＮＲｏｎｇ。ＣＨＡＮＧＪｉｎｘｉａ，ＬＩＸｕｅｌｕ，ＰＥＮＧＬ￣ｕａｎ，ＺＨＵＨｏｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙｆｏＮｏｒｔｈｅｒｎＳｉｅｈｕａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｎａｎｃｈｏｎｇ６３７０００，Ｃｈｉｎａ）
中图分类号：Ｒ７３０．５
文献标志码：Ａ
文章编号：１００２ — ２６６Ｘ（２０１７）３１－０００５ — ０４

慢病毒介导过表达组织蛋白酶S基因对肝癌MHCC97H细胞增殖和迁移的作用

慢病毒介导过表达组织蛋白酶S基因对肝癌MHCC97H细胞增殖和迁移的作用张智;朱广志;彭涛;赵国良;徐静【摘要】目的：建立慢病毒介导过表达组织蛋白酶S （cathepsin S，Cat S）基因的肝癌细胞株，观察Cat S基因对肝癌MHCC97H细胞增殖和迁移的影响。

方法利用Age I和EcoR I双酶切获得目的基因片段，构建靶向过表达Cat S基因的慢病毒载体pLVX-EGFP-3FLAG-Puro，通过人胚肾上皮293T细胞进行慢病毒制备并感染肝癌MHCC97H细胞。

使用嘌呤霉素加压筛选，建立稳定过表达Cat S 基因的肝癌细胞株。

通过RT-PCR、Western blot、MTT、Transwell和划痕实验研究稳定过表达Cat S基因对肝癌MHCC97H细胞增殖和迁移的影响。

结果成功包装靶向过表达Cat S基因慢病毒载体并感染肝癌MHCC97H细胞。

慢病毒感染后，与空载对照细胞Mock-MHCC97H相比，慢病毒Cat S-MHCC97H细胞Cat S mRNA、Cat S蛋白及MMP-2蛋白表达量明显升高（P<0.05），细胞增殖、迁移、侵袭能力亦明显增强（P<0.05）。

结论慢病毒介导的Cat S基因过表达可能通过上调MMP-2蛋白表达促进肝癌MHCC97H细胞增殖、转移，Cat S基因可能是治疗肝癌的一个潜在靶点，这为阐明肝癌增殖和转移的分子生物学机制及提高肝癌基因治疗提供了新的实验依据。

%Objective To construct a lentivirus expression vector to drive stable Cat S overexpression in the hepatocellular carcinoma (HCC)cell line MHCC97H,and to investigate the effects of overexpression on cell proliferation and migration. Methods The Cat S gene was inserted into the lentiviral expression vector pLVX-EGFP-3FLAG-Puro using Age I and EcoR I restriction enzymes and transfected into 293T cells to generate recombinant lentivirus. This virus was used to infectMHCC97H cells,and positive cells were selected using puromycin. Real-time quantitative PCR,Western blots,MTT assay,the transwell migration assay and the wound healing migration assay were used to assess the effects of Cat S overexpression on proliferation and migration ofMHCC97H cells. Results A lentiviral vector containing the Cat S gene was constructed,and an MHCC97H cell line stably overexpressing Cat S was established. Cat S overexpression was associated with significantly shorter cell doubling time,as well as significantly greater invasion and migration abilities. Conclusions Lentivirus-mediated Cat S overexpression can increase MHCC97H proliferationand migration,opening the door to future studies of molecular mechanisms of liver cancer invasion and metastasis.【期刊名称】《中国癌症防治杂志》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】7页(P244-249,250)【关键词】肝肿瘤;组织蛋白酶S;过表达;慢病毒;增殖;迁移【作者】张智;朱广志;彭涛;赵国良;徐静【作者单位】530021 南宁广西医科大学第一附属医院肝胆外科;530021 南宁广西医科大学第一附属医院肝胆外科;530021 南宁广西医科大学第一附属医院肝胆外科;530021 南宁广西医科大学第一附属医院肝胆外科;530021 南宁广西医科大学第一附属医院肝胆外科【正文语种】中文【中图分类】R735.7肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC，以下简称“肝癌”）是世界范围内第五位常见癌症［1］，据统计全世界每年新增病例超过660 000例［2，3］。

过表达对K562细胞增殖、凋亡及Survivin、Cox-2表达的影响 ---

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� 通过对糖尿病肾病（ diabetic nephropathy, DN）病人临床穿刺样本和 DN小鼠模型中肾脏组织以及肾脏细胞在模拟糖尿病肾病条件刺激下的体外研究，探讨 NLRP3炎症体在糖尿病肾病病理条件下的表达变化。方法：通过对 DN 病人穿刺样本进行免疫组化和 real-time RT-PCR检测，观察 NLRP3在 DN病人穿刺样本中的表达变化；通过高脂喂养（ HFD ）/STZ 尾静脉注射联合建立 DN 小鼠模型，并通过 Western Blot和半定量 PCR 方法观察 NLRP3在DN 小鼠模型中的表达变化；在体外实验中进一步探讨足细胞和系膜细胞在高糖、 TNFα 、TGF-β条件下 NLRP3蛋白的表达。结果： DN病人小鼠模型中肾脏组织中的 NLRP3 表达水平显著升高；足细胞在高糖、 TNF-α或 TGF-β刺激下 NLRP3表达明显升高且具有统计学意义，而系膜细胞在高糖刺激下 NLRP3蛋白表达升高，在 TNF-α 、TGF-β刺激下 NLRP3 蛋白表达没有显著的变化。结论： NLRP3炎症体的表达上调在 DN的发病机制中可能发挥重要作用，对肾脏固有细胞的体外实验表明 NLRP3的表达变化具有细胞特异性，深入研究 NLRP3炎症体的作用机制将为糖尿病肾病的治疗提供新的靶点和思路。
表达对K562细胞增殖、凋亡及 Survivin、Cox-2表达的影响
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üppe样因子 Sp1样蛋白（ Sp1-like proteins）和 Kr Krü （ Kr üppel-like factors， KLFs) 是一个具有多个结构高度相似成 Krü 员的锌指蛋白家族，在真核细胞的基因转录调控过程中起着重要作用。哺乳动物机体中包含这个家族的大部分成员，在人类基因组中至少编码 21种Sp1-like/KLF蛋白。 KLF4 是目前研究较多的一个 KLF家族成员，它能够通过与下游基因启动子区的 KLF4结合元件相结合，从而直接调控下游基因的转录，是生物体内一种重要的转录因子。研究发现， KLF4 在细胞增殖和分化、肿瘤发生和血管重构等生理、病理过程中均起到重要作用。本文就 Sp1-like/KLF蛋白家族结构， KLF4的结构特性及其生物学功能进行综述。源自大连废旧物资回收 lmqfj

K562与K562A02细胞株中白血病耐药相关microRNA的筛选研究的开题报告

K562与K562A02细胞株中白血病耐药相关microRNA的筛选研究的开题报告题目：K562与K562A02细胞株中白血病耐药相关microRNA的筛选研究研究背景：白血病是一种常见的血液恶性肿瘤，其治疗过程中常常出现耐药现象，严重影响着病人的生存质量。

目前已有研究表明，microRNA在白血病治疗过程中的起重要作用，其中一些耐药相关microRNA则被认为可以成为白血病治疗的潜在靶点，因此本研究将从K562与K562A02细胞株中筛选与白血病耐药相关的microRNA。

研究目的：本研究旨在筛选出K562与K562A02细胞株中与白血病耐药相关的microRNA，并探究其在白血病耐药治疗中的作用机制，为白血病治疗提供理论依据。

研究方法：1.细胞培养及处理将K562与K562A02细胞株分别培养在不同的培养基中，其中K562细胞株作为敏感基础对照组，K562A02细胞株作为耐药实验组。

对K562A02细胞株进行处理，包括化疗药物、RNA干扰、病毒转染等方式。

2. microRNA筛选使用高通量测序技术对K562与K562A02细胞株进行基因表达谱的测序，筛选出在K562A02细胞株中表达水平明显上调的microRNA。

3. 实验验证通过qPCR等技术手段对筛选出的microRNA进行鉴定，并分析其在白血病耐药中的作用机制。

4. 数据分析对测序数据进行生物信息学分析，对不同组间的差异进行比较，并使用GO、KEGG等数据库进行通路富集分析。

预期结果：筛选出与白血病耐药相关的microRNA，探究其在白血病治疗中的作用机制，为白血病治疗提供理论依据。

研究意义：本研究将从分子水平上深入探究白血病耐药的机制，为寻找新型治疗靶点提供新的线索，并有助于提高白血病治疗的效果。

慢性髓细胞性白血病K562细胞适体的筛选与鉴定

SEL EX; ap tam er
【摘要】目的 : 筛选并鉴定出慢性髓细胞性白血病 ( CML ) K562细胞的寡核苷酸适体. 方法 : 体外合成长度为 88 个碱筛细胞 ,利用指数富集的配基系统进化 ( SELEX)技术筛选出与 CML K562细胞特异结合的适体. 将筛选得到的适体回收纯化后连接 pGEM 2T质粒载体 ,经蓝白筛选后 ,随机挑选 24 个克隆子进行序列测定. 采用荧光标记引物法检测 ssDNA 文库与 K562细胞的亲和力 ,并用 Clustal 2. 05和 DNA sis V 2. 5 软件对适体序列进行一级结构同源性分析和二级结构预测. 结果 : 经过 13 轮循环筛选 , CML K562 细胞适体的 A 值从 0. 12上升到 1. 25,至第 13轮 A 值无明显增高. 一级结构分析无同源序列 ,但可分为 6个家族 ,其中 5个家族各自具有保守序列 ,家族 6无保守序列. 二级结构分析表明 ,适体形成的茎环、凸环结构可能是与 K562 细胞特异性结合的结构基础. 结论 : 利用 SELEX技术成功筛选出高亲和性的 CML K562细胞适体. 【关键词】白血病 ,髓样 ,慢性 ; K562细胞 ; SELEX;适体【中图号】R34 【文献标识码】A
0 引言
指数富集的配基系统进化 ( systematic evolution ligands by exponential enrichm ent, SELEX) 技术经过多轮筛选可获得高亲和力、强特异性的寡核苷酸片段. 近几年来 SELEX技术在实验诊断和疾病治疗 [ 1 ] 等方面的应用取得了较大进展 ,目前 SELEX技术已经成功运用于许多靶物质的筛选 ,如蛋白质、核酸、金属离子等 ,成功运用于如炭疽芽孢杆菌等许多疾病的实验室检测 ,一些适体药物已经进入临床前期或临床期试验 ,并逐步成为一类新型药物 [ 2 ] . 由于有关以白血病细胞为靶分子筛选适体的研究还少见报道 ,目前临床尚缺乏慢性髓细胞性白血病 ( chronic myelognous leukem ia, CML ) 的特异性基因诊断技术. 我们以

红白血病细胞系K562诱导外周血NK细胞凋亡机制的初步研究

红白血病细胞系K562诱导外周血NK 细胞凋亡机制的初步研究红白血病细胞系K562诱导外周血NK细胞凋亡机制的初步研究摘要：本研究旨在探索红白血病细胞系K562在外周血NK细胞中引起凋亡的机制以及调节性T细胞（Treg）数量的变化。

使用流式细胞术检测Treg和NK细胞的表型，并通过Annexin V/PI染色和细胞周期分析评价NK细胞凋亡。

对与凋亡相关的信号通路进行了进一步探讨。

同时，评价了癌细胞-免疫细胞交互作用的影响因素。

结果发现，K562导致外周血NK细胞凋亡，并与NF-κB信号通路相关。

此外，K562也可增加Treg的数量且减少T细胞激活标志物CD69的表达程度。

通过康复试验发现，NF-κB信号通路抑制剂Bay 11-7082可以降低K562诱导的NK细胞凋亡率，增加CD69表达和降低Treg数量。

这些结果揭示了红白血病细胞系K-562可以引起外周血NK细胞凋亡，并增加Treg数量的机制，为后续NK细胞免疫治疗策略的研究提供了基础数据。

关键词：红白血病，K562，NK细胞，T细胞，Treg，NF-κB，凋亡，免疫治疗引言：红白血病是一种常见的血液系统肿瘤，治疗难度大且效果不甚理想。

近年来，人们致力于寻找新的治疗策略，其中包括免疫治疗。

NK细胞作为具有天然杀伤活性的一类免疫细胞，可以通过杀伤癌细胞增强机体免疫力，因此，将NK细胞应用于治疗红白血病备受关注。

然而，前期研究发现，K562细胞系可以通过唤醒Treg增加NK细胞的凋亡率加重红白血病的症状。

因此，研究K562对NK细胞凋亡和Treg数量的调节机制，可以为NK细胞免疫治疗研究提供重要理论数据。

材料与方法：实验对象：红白血病患者外周血（11例），健康人外周血（8例）实验组：患者外周血中分离出NK细胞，细胞由K562处理24h，治疗前7h添加Bay 11-7082。

另外，还设置了Treg/Foxp3染色组、螺旋体多糖予以刺激组，制备了癌-T细胞共培养试验体系。

慢病毒载体介导ship基因抑制k562细胞增殖及对p13kakt信号通路的调控

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ADAR1 shRNA对人白血病细胞株K562细胞增殖的影响

［１２］　ＳＨＥＮＬ，ＷＥＮＮ，ＸＩＡＭ，ｅｔａｌ．Ｃａｌｃｉｕｍｅｆｆｌｕｘｆｒｏｍｔｈｅｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍｒｅｇｕｌａｔｅｓｃｉｓｐｌａｔｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｈｕｍａｎｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒＨｅＬａｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＯｎｃｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓ，２０１６，１１（４）：２４１１－２４１９．［１３］　ＬＩＷ，ＺＨＡＮＧＭ，ＸＵＬ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｎｏｎ－ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｉｎｄｕｃｅｄｂｙｃｉｓｐｌａｔｉｎｔｈｒｏｕｇｈｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆＳＴＩＭ１［Ｊ］．ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｎｄＴｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃＰａｔｈｏｌｏｇｙ，２０１３，６５（７－８）：１０７３－１０８１．［１４］　ＬＩＡＮＧＳＪ，ＺＥＮＧＤＹ，ＭＡＩＸＹ，ｅｔａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｏｒａｉ１ｓｔｏｒｅ－ｏｐｅｒａｔｅｄｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｐｒｅｖｅｎｔｓｆｏａｍｃｅｌｌｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２０１６，３６（４）：６１８－６２８．［１５］　ＫＵＭＡＲＡＭＨＳＲ，ＰＩＡＯＭＪ，ＫＡＮＧＫＡ，ｅｔａｌ．Ｎｏｎ－ｔｈｅｒｍａｌｇａｓｐｌａｓｍａ－ｉｎｄｕｃｅｄｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍｓｔｒｅｓｓｍｅｄｉａｔｅｓａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｈｕｍａｎｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＯｎｃｏｌｏｇｙＲｅｐｏｒｔｓ，２０１６，３６（４）：２２６８－２２７４．［１６］　ＤＵＢＯＩＳＣ，ＡＢＥＥＬＥＦＶ，ＳＥＨＧＡＬＰ，ｅｔａｌ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎａｎａｌｏｇｕｅｓｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ：ｃｏｍｐｌｅｘｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｂｙｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｃａｌｃｉｕｍ［Ｊ］．ＦｅｂｓＪｏｕｒｎａｌ，２０１３，２８０（２１）：５４３０－５４４０．［１７］　ＤＯＮＧＤ，ＮＩＭ，ＬＩＪ，ｅｔａｌ．ＣｒｉｔｉｃａｌｒｏｌｅｏｆｔｈｅｓｔｒｅｓｓｃｈａｐｅｒｏｎｅＧＲＰ７８／ＢｉＰｉｎｔｕｍｏｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｓｕｒｖｉｖａｌ，ａｎｄｔｕｍｏｒａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｍａｍｍａｒｙｔｕｍｏｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ，２００８，６８（２）：４９８－５０５．［１８］　ＳＣＨＯＮＴＨＡＬＡＨ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｔａｒｇｅｔｉｎｇｏｆｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍｓｔｒｅｓｓｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１３，８５（５）：６５３－６６６．（编校：闫沛）ＡＤＡＲ１ｓｈＲＮＡ对人白血病细胞株Ｋ５６２细胞增殖的影响胡　彬，张　蓉，刘小五，刘　赞，王刚峰，梁英民ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｓｈＲＮＡ－ＡＤＡＲＩｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＫ５６２ｃｅｌｌｌｉｎｅＨＵＢｉｎ，ＺＨＡＮＧＲｏｎｇ，ＬＩＵＸｉａｏｗｕ，ＬＩＵＺａｎ，ＷＡＮＧＧａｎｇｆｅｎｇ，ＬＩＡＮＧＹｉｎｇｍｉｎＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｘｉ＇ａｎＧａｏｘｉｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｈａａｎｘｉＸｉ＇ａｎ７１００７５，Ｃｈｉｎａ．【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｈＲＮＡ－ＡＤＡＲ１ｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎＫ５６２ｃｅｌｌｌｉｎｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＡＤＡＲ１ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ（ＢＰ）ａｎｄｎｏｒｍａｌａｄｕｌｔｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｒｅａｌ－ｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎａｎｄＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ．ＡｓｔａｂｌｅＫ５６２ｃｅｌｌｌｉｎｅ（ｓｈＡＤＡＲ１）ｗｉｔｈｋｎｏｃｋｄｏｗｎＡＤＡＲ１ｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｃｕｌｔｕｒｉｎｇｈｕｍａｎｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｌｉｎｅＫ５６２ｃｅｌｌｓｗｉｔｈｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓｍｅｄｉａｔｅｄｓｉＲＮＡ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｏｆＡＤＡＲ１ｉｎＫ５６２ｃｅｌｌｓａｎｄｓｈＡＤＡＲ１ｃｅｌｌｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｑＲＴ－ＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ，ａｎｄｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＫ５６２ｃｅｌｌｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｏｆＡＤＡＲ１ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ（ＢＰ）ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｎｏｒｍａｌａｄｕｌｔｓ（Ｐ＜０．０５）．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｉｎＡＤＡＲ１ｉｎｓｈＡＤＡＲ１ｃｅｌｌｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎＫ５６２ｃｅｌｌｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＡＤＡＲ１ｃｏｕｌｄｉｎｈｉｂｉｔｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＡＤＡＲ１ｉｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ（ＢＰ）．ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＡＤＡＲ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙｓｉＲＮＡｃａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｌｉｎｅＫ５６２．ＡＤＡＲ１ｇｅｎｅｍａｙｂｅａｎｅｗｔａｒｇｅｔｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ＡＤＡＲ１，ＣＭＬ，Ｋ５６２ＭｏｄｅｒｎＯｎｃｏｌｏｇｙ２０２１，２９（０８）：１２９２－１２９５【摘要】　目的：探讨ＡＤＡＲ１ｓｈＲＮＡ对人白血病细胞株Ｋ５６２细胞增殖的影响。

IC163对K562白血病细胞增殖抑制和凋亡诱导作用观察的开题报告

IC163对K562白血病细胞增殖抑制和凋亡诱导作用观察的开题报告1. 研究背景白血病是一类由造血干细胞或骨髓细胞克隆性增生引起的血液系统恶性肿瘤，是一种多因素、多基因参与的复杂疾病。

因其病程进展较快，治愈率较低，并且易于复发和转移，因此成为医学界研究的热点之一。

目前白血病的治疗主要是化疗、放疗和造血干细胞移植等，但这些治疗手段仍存在一定的局限性，如产生毒副作用、残存白血病细胞等。

IC163是一种天然化合物，已在肿瘤治疗中被广泛研究。

研究发现，IC163可以影响癌细胞内的多个信号传导通路，抑制癌细胞增殖并诱导癌细胞凋亡。

而对于白血病的治疗，IC163也具有一定的潜在价值。

目前虽然有一些研究探讨了IC163在白血病治疗中的应用，但是对于其准确的机制和作用仍需深入研究。

2. 研究目的本研究旨在探讨IC163对K562白血病细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用，分析其机制，为IC163在白血病治疗中的应用提供理论基础。

3. 研究内容3.1 细胞实验将K562白血病细胞分为4组，每组细胞数相等，分别设置不同的IC163浓度处理组和对照组。

采用CCK-8试剂对细胞进行增殖检测，使用流式细胞术检测细胞凋亡率，并检测凋亡相关的蛋白表达水平。

3.2 分子生物学实验利用Western blot技术检测IC163处理对K562细胞中相关凋亡和生存的蛋白表达水平的影响。

实验中将IC163处理与对照组比较。

4. 研究意义本研究通过对IC163在白血病细胞中的作用机制及作用程度的探究，能够深入了解IC163的特点和作为潜在抗癌药物的应用价值。

研究结果可以为IC163在白血病治疗中的应用提供理论依据，并为探索新型治疗方法提供新思路，具有一定的实用价值和科学意义。

IC162对K562白血病细胞的抗肿瘤作用及分子机制研究的开题报告

IC162对K562白血病细胞的抗肿瘤作用及分子机制
研究的开题报告
研究背景：
K562是一种常见的白血病细胞系，在肿瘤治疗中有一定的研究价值。

IC162是一种小分子化合物，曾被证明对人类肺癌细胞有较强的抗癌作用。

然而，对IC162对K562白血病细胞的影响及其分子机制的研究尚不清楚。

研究目的：
本研究旨在探究IC162的抗肿瘤作用及其分子机制，为进一步开发
IC162作为治疗K562白血病的候选药物提供理论依据。

研究内容：
1.利用MTT法检测IC162对K562细胞增殖的影响；
2.使用流式细胞术检测IC162对K562细胞凋亡率的影响；
3.运用Real-time PCR和Western blot各检测IC162对K562细胞相关基因和蛋白表达的调节情况；
4.建立PI3K-Akt信号通路抑制剂的实验组，探究IC162通过PI3K-Akt信号通路调节K562细胞生长和凋亡的机制。

研究意义：
本研究可为深入研究IC162作为治疗K562白血病的候选药物提供理论基础，探索IC162在肿瘤治疗中的应用前景。

K562及K562A02细胞株遗传学研究的开题报告

K562及K562A02细胞株遗传学研究的开题报告I. 研究背景及意义K562细胞株是人类慢性骨髓性白血病细胞株，常用于白血病的研究。

K562A02细胞株是从K562株经过逐渐加大诱导剂稳定细胞株的筛选、原代细胞的体外扩大等步骤所得的细胞株。

这两个细胞株具有很高的相似性，但K562A02相比K562具有更多的干细胞特征。

本研究旨在探讨K562及K562A02细胞株的遗传学特征，为深入了解白血病细胞的分化和肿瘤发生机制提供理论依据和实验数据。

同时，通过对这两个细胞株的比较，可以揭示细胞株在诱导剂过程中所发生的遗传学变化，为制定更优化的诱导治疗方案提供参考。

II. 研究内容及方法本研究拟采用以下方法和技术进行：1. 细胞培养选取K562及K562A02细胞株进行培养，细胞培养技术可参考相关文献和实验室经验。

2. 细胞生长特征观察通过显微镜观察细胞形态、增殖情况，对比分析K562及K562A02细胞株生长特征。

3. 测序分析采用RNA测序和基因组测序技术对K562及K562A02细胞株进行测序，分析细胞株的转录水平、基因变异和表达差异等遗传学特征，挖掘其与白血病分化和转化相关的分子机制。

4. qPCR定量PCR选取测序分析中差异表达的基因进行定量PCR验证，并进一步分析其生物学功能及与白血病发生发展的关系。

III. 预期结果及意义通过对K562及K562A02细胞株的遗传学分析，我们期望能够揭示其在白血病发生发展中所扮演的角色，为研究白血病的分子机制提供新思路和实验数据。

同时，本研究将揭示不同诱导剂处理下K562及K562A02细胞株的遗传学差异，有助于制定更加个性化的治疗方案，提高白血病患者的治愈率和生存率。

IFNα-2b对K562细胞增殖、细胞周期及ERK基因表达的影响的开题报告

IFNα-2b对K562细胞增殖、细胞周期及ERK基因
表达的影响的开题报告
一、研究背景和意义
癌症是一类由于基因突变引起的异常细胞增殖和分化失调的疾病。

近年来，干扰素(IFN)被广泛地应用于临床治疗多种类型的肿瘤。

IFNα-2b作为一种能够增强抗肿瘤免疫力的干扰素，已在肿瘤治疗中得到了广泛应用。

K562细胞是一种来源于慢性髓性白血病患者的细胞系，在肿瘤治疗研究中非常重要。

因此，研究IFNα-2b对K562细胞增殖、细胞周期及ERK基因表达的影响，对于探究IFNα-2b在肿瘤治疗中的作用机制，具有重要的意义。

二、研究内容和方法
本研究将采用MTT法检测IFNα-2b对K562细胞增殖的影响；采用流式细胞术分析IFNα-2b对K562细胞细胞周期的影响；采用实时荧光定量PCR检测IFNα-2b对ERK基因表达的影响。

三、研究结果的预期意义
预计研究结果将揭示IFNα-2b对K562细胞增殖、细胞周期及ERK 基因的影响，进而探究其在肿瘤治疗中的作用机制。

同时，本研究还将为IFNα-2b在肿瘤治疗中的应用提供实验基础和理论依据。

IFNα-2b对白血病K562细胞增殖、黏附及FAK mRNA表达的作用的开题报告

IFNα-2b对白血病K562细胞增殖、黏附及FAK mRNA表达的作用的开题报告
介绍：
白血病是一类白细胞恶性增生性疾病，其中包括急性和慢性两种类型。

IFNα-2b是一种人源干扰素，可以调节免疫系统和抗病毒应答，同时显示在某些癌症治疗中有一定的作用。

本研究旨在探究IFNα-2b对人白血病K562细胞增殖、黏附和FAK mRNA表达的影响。

研究目的：
本研究的目的在于研究IFNα-2b对K562细胞的影响，特别是对其增殖、黏附和FAK mRNA表达的影响。

这些结果可以为白血病的治疗提供新的思路和策略。

研究方法：
1. 细胞培养：K562细胞将在RPMI 1640培养基中以细胞密度2×10^4/mL培养。

2. 细胞增殖试验：K562细胞将分为IFNα-2b组和对照组。

细胞培养48小时后，使用MTT法检测细胞存活率，评估IFNα-2b与细胞增殖的关系。

3. 细胞黏附实验：将K562细胞分别转移到不同的基质涂层板上，如牛血清白蛋白、Collagen I和Collagen IV。

然后，使用显微镜观察细胞黏附情况和数量。

4. FAK mRNA表达试验：使用RT-PCR技术检测IFNα-2b对K562细胞中FAK mRNA的表达影响。

预期结果：
我们预计IFNα-2b可以抑制K562细胞的增殖和黏附，同时下调FAK mRNA的表达。

这一结果有助于为IFNα-2b在白血病治疗中的应用提供新的实验证据。

K562白血病细胞中Musashi2干扰慢病毒载体的构建和鉴定

K562白血病细胞中Musashi2干扰慢病毒载体的构建和鉴定张慧娟;胡蓉;江丽霞【摘要】目的:构建干扰Musashi 2(Msi2)的慢病毒载体,并探究其在K562白血病细胞株中的干扰效率.方法:将两个Msi2干扰片段分别连接入GV418慢病毒载体,与pHelper1.0、pHelper2.0辅助载体共转染入293T细胞进行慢病毒包装.提取细胞上清感染白血病K562细胞,并用嘌呤霉素药物稳筛,获取稳定感染细胞株.定量PCR和western blot分别检测K562细胞内Msi2的干扰效率.结果:与对照组比较,干扰组shMsi2-1和shMsi2-2的Msi2 mRNA水平分别降为3％和28％(P＜0.05);与对照组相比,优选出的shMsi2-1组中Msi2蛋白水平也显著下降(P＜0.05).结论:成功构建Msi2干扰慢病毒载体并显著沉默白血病K562细胞中Msi2的表达,为后续研究Msi2在白血病中的功能和机制奠定实验基础.【期刊名称】《赣南医学院学报》【年(卷),期】2019(039)005【总页数】4页(P451-454)【关键词】musashi2;白血病;慢病毒载体【作者】张慧娟;胡蓉;江丽霞【作者单位】赣南医学院第一附属医院检验科,江西赣州341000;赣南医学院第一附属医院检验科,江西赣州341000;赣南医学院第一附属医院检验科,江西赣州341000【正文语种】中文【中图分类】R730.2Musashi 2 (Msi2)是一进化上高度保守的RNA结合蛋白[1]，可以与靶蛋白的mRNA3' 非翻译区(3' UTR)结合，抑制其下游靶基因的翻译[2]。

作为细胞命运决定子，Msi2可调控多种组织细胞的不对称分裂，影响干细胞功能[3]。

最近有研究表明，Msi2可以维持人造血干祖细胞的自我更新并促进其体外增长[4-6]，Msi2的缺失会导致造血干细胞的定向分化[7]。

而Kharas等[8]发现，Msi2不仅在造血干细胞中高表达，抑制早期粒系和巨核系的分化，而且参与调控白血病的发生发展。

过表达Src诱导K562细胞产生格列卫耐药

过表达Src诱导K562细胞产生格列卫耐药嘉红云;周强;李娟;叶润清;邓小燕;吴晓蔓【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2012(28)12【摘要】Objective To explore the effects of over-expression of Src kinase on drug-resistance of K562 cells. Methods Gene transfection was conducted to over-express Src kinase in K562 cells, and the expression levels were tested by Western blot. The anti-proliferate effects of imatinib on these transfected cells were tested by WST assay. Then the expression of Src kinase was suppressed by siRNA, and the proliferation of imatinib resistant K562/G cells was observed. Results Over-expression of Src kinase could induce imatinib resistance in K562 cells. Inhibiting Src expression with Src siRNA for 24h could inhibit almost 47% ofK562/G cells proliferation. Conclusion Src kinase plays a pivotal role in the induction of imatinib-resistance of K562 cells. Src kinase may be an attractive target for treating imatinib resistant chronic myeloid leukemia.%目的:探讨过表达Src激酶在诱导K562细胞产生耐药中的作用及机制.方法:应用质粒转染的方法在K562细胞中过表达Src激酶,WST方法检测对格列卫(Imatinib)的敏感性,并通过RNA干扰特异抑制Src激酶,检测其对耐药的K562/G细胞增殖的影响.结果:在K562细胞中过表达Src激酶,显著提高细胞对格列卫的耐药性;用siRNA方法抑制Src激酶,24 h就可以抑制约47％的K562/G细胞增殖.结论:Src激酶在诱导K562细胞耐药中发挥重要作用,抑制Src激酶可以抑制细胞增殖,Src 激酶可以成为治疗耐药的慢性粒细胞白血病的新靶点.【总页数】3页(P1946-1948)【作者】嘉红云;周强;李娟;叶润清;邓小燕;吴晓蔓【作者单位】510260 广州医学院第二附属医院检验科;510260 广州医学院第二附属医院检验科;510260 广州医学院第二附属医院检验科;510260 广州医学院第二附属医院检验科;510260 广州医学院第二附属医院检验科;510260 广州医学院第二附属医院检验科【正文语种】中文【相关文献】1.盐霉素抑制耐格列卫的人慢性粒细胞白血病细胞株K562/Glv增殖并诱导其凋亡[J], 徐霜清;祝爱珍;刘成成;许婷婷;陈小宇;刘革修2.氟达拉宾联合格列卫诱导K562细胞耐药性的影响 [J], 苗玉迪;焦红侠;王晖;魏绪仓3.苦参碱对K562及其多药耐药细胞K562／vin,K562／dox的诱导调？… [J], 李旭芬;张苏展4.伊马替尼敏感及耐药K562细胞P-糖蛋白、缺氧诱导因子和鞘氨醇激酶表达的比较 [J], 许严伟;赵小利;王英;苗润宏;张庆林;杜钢军5.诱导耐药K562/ADM和转基因耐药K562/MDR细胞株的生物学行为和耐药机制的比较研究 [J], 李姣;丁艳芳;赵瑾瑶;杨佩满;孔力因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

过表达SERPINB2上调RB1水平抑制白血病K562细胞的生长的开题报告

过表达SERPINB2上调RB1水平抑制白血病K562细胞的生
长的开题报告
白血病是一种造血系统恶性疾病，其治疗方案通常包括化疗、放疗和造血干细胞移植等多种方法。

然而，这些治疗方案存在一些限制，如毒副作用大、易产生耐药性等问题。

因此，探索新的治疗方法具有重要意义。

SERPINB2 (serpin peptidase inhibitor, clade B (ovalbumin), member 2) 是一种血浆中的血清酶抑制剂，已被证明对多种癌
症具有抑制作用。

近期的研究表明，SERPINB2上调可以促进
白血病细胞凋亡和细胞周期停滞，抑制白血病细胞增殖和侵袭性。

这提示SERPINB2可能成为一种治疗白血病的新靶点。

RB1 (retinoblastoma 1) 是一种细胞周期调节蛋白，与细胞增殖
和细胞周期有关。

多个研究表明，RB1在白血病中起到抑制
作用，其缺失或功能丧失与白血病的发生和恶化有关。

因此，提高RB1的表达水平是一种治疗白血病的有效方法。

本项目旨在探究SERPINB2对RB1水平的调控作用，并评估
其对白血病细胞生长的影响。

我们将利用K562细胞系作为研
究对象，通过转染SERPINB2过表达质粒和shRNA进行SERPINB2的上调和下调，进一步检测RB1水平的变化，并
通过CCK8、细胞周期检测和细胞凋亡检测等方法评估SERPINB2的调控作用对K562细胞生长的影响。

预期结果为，SERPINB2上调可提高RB1水平，抑制K562细胞的生长，从
而为白血病治疗提供新的治疗靶点和策略。

ATRA对K562细胞HOXA5基因表达与细胞周期、凋亡的影响

ATRA对K562细胞HOXA5基因表达与细胞周期、凋亡的影响张滕;刘文君【期刊名称】《中国小儿血液与肿瘤杂志》【年(卷),期】2016(021)004【摘要】目的本研究旨在通过全反式维甲酸(ATRA)对人髓系白血病细胞株K562细胞的干预来分析同源盒基因(HOX)A5的表达变化及其与细胞周期、凋亡的关系,探讨HOXA5在髓系白血病发生、发展过程中的作用,为临床治疗白血病提供实验依据.方法通过细胞增殖-毒性实验(CCK-8)筛选出ATRA干预K562细胞的最佳浓度值.流式细胞术检测10 μmol/L ATRA分别干预K562细胞24 h、48 h和72 h 后,各组细胞的凋亡情况及细胞周期分布的变化.实时荧光定量PCR技术、蛋白免疫印迹法测定K562细胞中HOXA5 mRNA及蛋白的表达情况,并分析HOXA5 mRNA及蛋白的表达与细胞周期、凋亡的关系.结果 K562细胞中可以检测到HOXA5 mRNA及蛋白的表达,ATRA干预K562细胞后HOXA5 mRNA及蛋白的表达量升高,细胞凋亡率明显增加(P＜0.05),细胞增殖周期被阻抑在G0/G1期,细胞增殖受抑,且HOXA5 mRNA及蛋白的表达量与细胞凋亡率呈正相关(r=0.944,r=0.826),与细胞周期G0/G1期增加百分比呈正相关(r=0.870,r =0.962),与S期降低百分比呈负相关(r=-0.946,r=-0.926).结论 ATRA干预K562细胞后,细胞中HOXA5 mRNA及蛋白的表达量升高;ATRA可能通过上调HOXA5 mRNA及蛋白的表达抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡.【总页数】7页(P191-197)【作者】张滕;刘文君【作者单位】646000泸州,四川医科大学附属医院儿科;646000泸州,四川医科大学附属医院儿科【正文语种】中文【相关文献】1.姜黄素诱导K562细胞凋亡及其对细胞周期各时相影响 [J], 回学军;孙冬;于庭;李树岩;吴东辉2.β-榄香烯对K562细胞周期与细胞凋亡的影响及其机制探讨 [J], 陆羡;向金峰3.去甲斑蝥素对白血病细胞系K562的增殖、凋亡、细胞周期及NF-κB活性的影响 [J], 姚铠涛;陈江声;陈春莉4.黄芪总黄酮对K562细胞凋亡及细胞周期的影响 [J], 张冬青;汪德清;李卉;吴亮亮5.铁剥夺对K562细胞凋亡及细胞周期的影响 [J], 汤有才;赵春;贾国存;李丰益;廖清奎;牛文忠;王军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

核干细胞因子蛋白在HL-60和K562白血病细胞的表达

核干细胞因子蛋白在HL-60和K562白血病细胞的表达韩根良;王慧梅【期刊名称】《医药论坛杂志》【年(卷),期】2008(29)16【摘要】目的检测核干细胞因子(Nucleostemin,NS)蛋白在白血病细胞系HL-60和K562的表达,比较与健康人、良性贫血之间的差异,探讨NS蛋白与急性白血病发病机制之间的关系。

方法采用免疫组化技术分别对HL-60、K562细胞、健康人和良性贫血患者骨髓单个核细胞进行NS蛋白表达水平的检测,并比较NS表达水平的差别。

结果白血病细胞系HL-60、K562细胞均存在NS蛋白高表达现象,主要定位在细胞核,有时浓集在核仁部位,阳性积分明显高于健康人和良性贫血单个核细胞(P<0.05)。

结论NS蛋白在人白血病细胞系HL-60和K562细胞中呈高表达状态,可能与白血病的发生、发展有一定的关联。

【总页数】3页(P40-41)【关键词】核干细胞因子;急性白血病;HL-60细胞;K562细胞;免疫组化【作者】韩根良;王慧梅【作者单位】郑州市第二人民医院【正文语种】中文【中图分类】R733.7【相关文献】1.沉默核干细胞因子基因对HL-60白血病细胞形态学和细胞化学影响的检测 [J], 岳保红;佘红纯;王清霞;刘帅;王园园;蔚利纳;张功员;张钦宪2.三氧化二砷对白血病细胞系K562和HL-60血管内皮生长因子表达的影响 [J], 肖延风;陈玺;刘陕西;邬德东;任利芬3.白血病K562/ADM细胞耐药性与白血病干细胞及耐药蛋白表达的关系 [J], 易娟;陈静;孙静;魏虎来4.TPT对HL-60细胞增殖凋亡及其对核干细胞因子表达的影响 [J], 王景;张静;王晋5.螯合白血病患者骨髓细胞内外钙离子对硫化氢生成影响的实验研究相关检索词免疫组化蛋白表达白血病硫化细胞增殖 cell proliferation bax h2s 骨髓胃癌硫化氢细胞周期 bcl-2 间充质干细胞图像分析单个核细胞电极乳腺癌钙离子leukemia 相关专家李杰张旻李艳平葛楚天相关机构· 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所· 中国科学院上海生命科学研究院· 北京师范大学· 浙江大学动物科学学院· 浙江大学螯合白血病患者骨髓细胞内外钙离子对硫化氢生成影响的实验研究 [J], 孙晓红;于志刚;张雪莉;庄宝祥;张圣明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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目录中文摘要 (1)英文摘要 (3)前言 (6)第一部分WWOX基因过表达慢病毒载体的构建与鉴定 (8)材料与方法 (8)实验结果 (16)讨论 (21)结论 (22)第二部分慢病毒介导的WWOX过表达对Jurkat及K562白血病细胞生物学特性的影响 (23)材料与方法 (23)实验结果 (29)讨论 (43)结论 (46)第三部分WWOX基因过表达诱导Jurkat及K562细胞凋亡的分子机制研究 (47)材料与方法 (47)实验结果 (53)讨论 (60)结论 (63)参考文献 (64)综述 (69)致谢 (78)慢病毒介导WWOX基因过表达对Jurkat及K562白血病细胞生物学特性影响的实验研究摘要目的：1. 构建WWOX基因过表达慢病毒重组质粒载体并完成相关鉴定；2. 研究上调WWOX基因对人Jurkat及K562白血病细胞生物学特性的影响；3. 初步探讨其生物学特性改变的相关分子机制。

方法：1. 通过PCR扩增获得目的基因WWOX 全长cDNA 片段，纯化后经Age I 酶切消化。

同时用Age I酶对载体质粒进行酶切、回收得到线性化载体片段。

经T4噬菌体DNA连接酶作用将WWOX连接至线性化载体，连接产物经转化、涂板、挑取克隆、扩增培养后，用质粒小量抽提试剂盒提取质粒，酶切后PCR凝胶电泳鉴定连接产物，并行序列测定。

将构建好的融合基因表达载体进行病毒颗粒包装，得到WWOX过表达慢病毒重组质粒载体系统（pGC-FU-WWOX-GFP和pGC-FU-GFP）。

采用qPCR、Western blot等方法对重组载体进行鉴定。

2. 采用CCK-8比色、集落形成实验、DAPI染色、DNA片段电泳、Annexin V PE/7-AAD双荧光标记、Western blot等方法，研究上调WWOX 对Jurkat和K562细胞生物学特性的影响。

3. 间接免疫荧光检测凋亡相关蛋白p53、p73、NF-κBp65及细胞色素C（Cytochrome C，Cyto C）等的表达及定位。

qPCR、Western blot检测Bcl-2、Bax、Cyto C、Caspase-9、Caspase-3、p53、p73及NF-κB p65等凋亡相关蛋白的表达变化。

免疫共沉淀、Western blot检测WWOX 与p73、p53之间的相互作用。

结果：1. 测序鉴定结果与目标序列完全一致，包装后的慢病毒经qPCR测定滴度约为2×108TU/ml。

2. WWOX重组慢病毒质粒感染Jurkat及K562细胞48h 后，观察到GFP稳定表达。

qPCR显示pGC-FU-WWOX组细胞WWOX 在mRNA 水平表达增加。

Western blot 检测到约72kD的融合蛋白（WWOX融合GFP）表达，随时间延长，融合蛋白表达呈增加趋势。

CCK-8比色实验显示，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组的细胞生长较两对照组明显受抑制（P＜0.05）。

集落形成实验表明，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组细胞集落形成率较两对照组显著降低（P=0.000）。

DAPI染色显示，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组细胞核呈现Ⅱb晚期凋亡形态。

DNA片段电泳显示，Jurkat 和K562细胞中pGC-FU-WWOX组出现明显的梯状降解条带，并随时间延长梯状条带生成更加明显。

Annexin V PE/7-AAD双荧光染FCM检测显示，Jurkat和K562 pGC-FU-WWOX组细胞48h、72h、96h的凋亡率明显高于其他两对照组（P ＜0.001），主要为凋亡中、晚期细胞。

3. 间接免疫荧光染色可见，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组细胞Cyto C在胞质中呈弥散或粗块状分布，而p53、p73及NF-κB p65均定位于胞质，较对照组表达差异不明显。

qPCR及Western blot 显示，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组较其他两对照组Bcl-2表达呈下降趋势，Cyto C表达增加，同时两细胞均有Caspase-9和Caspase-3的剪接激活，而p53表达变化不明显。

K562 细胞中Bax表达呈上升趋势。

免疫共沉淀后SDS-PAGE电泳染色显示，Jurkat和K562细胞pGC-FU-WWOX组均于约73～74kD处出现浓染的蛋白条带，而其他两对照组蛋白条带染色为阴性。

蛋白印迹在两种细胞的pGC-FU-WWOX组均检测到p73及WWOX的表达，而未检测到p53蛋白的表达。

结论：1. 成功构建WWOX基因慢病毒重组载体。

2. WWOX过表达可明显抑制Jurkat和K562细胞增殖，诱导细胞凋亡。

3. WWOX过表达均可使Jurkat 和K562白血病细胞中Bcl-2表达下调，Cyto C表达增多，同时均可激活Caspase-9和Caspase-3的表达剪接，推测通过激活内源性线粒体途径可能是WWOX抑癌机制之一。

4. Jurkat和K562白血病细胞中，上调的WWOX可直接与p73结合，参与诱导细胞凋亡的过程。

关键词：WWOX基因，慢病毒载体，过表达，白血病，增殖，凋亡，分子机制Effects of lentivirus mediated-WWOX gene overexpression on biological properties of Jurkat and K562 human hematopoieticmalignant cellsAbstractObjective: 1.To construct a lentivirus mediated-WWOX overexpression system and verify its validity and infectious efficiency; 2.To investigate the effects of lentivirus mediated-WWOX gene overexpression on biological properties of Jurkat and K562 leukemia cells; 3.To explore the molecular mechanisms underlying the biological properties changes.Methods: 1.PCR technique was performed to obtain our target gene WWOX clones, the cDNA strands obtained in this process were digested by Age I enzyme. At the same time, pGC-FU vector was treated as in the same manner by Age I enzyme to make it linear enough. The linear WWOX cDNA strands and the linear vectors were bound together with the help of T4DNA ligase and followed by transformation, coated onto agar plate, picked clones and amplification, respectively. The combined plasmids were extracted and sent to sequencing. After sequencing, the lentivirus vectors combined full length WWOX cDNA strands were propagated and harvested after centrifugation, then pGC-FU-WWOX-GFP and pGC-FU-GFP overexpression system was completed. qPCR and Western blot were employed in the following evaluation tests. 2.The effects of WWOX gene overexpression on biological properties of Jurkat and K562 cell lines were estimated by cell counting kit 8(CCK-8), Clone forming assay, DAPI stain, DNA ladder electrophoresis Annexin V PE/7-AAD fluorescence test and Western blot, respectively. 3. Indirect immunofluorescence was employed to observe the expression and location of apoptosis related proteins such as p53, p73, NF-κB p65 and cytochrome C in Jurkat and K562 cells.The expression levels of apoptosis related proteins including Bcl-2, Bax, cytochrome C, Caspase-9, Caspase-3, p53 and p73 were identified by qPCR and Western blot after transfection. Immunoprecipitation and Western blot were used to analyze the mutual effectsbetween WWOX and p73, p53.Results: 1. The sequencing of the reconstruct plasmids were completely correct, and the virus titer measured via qPCR was 2×108TU/ml. 2. Stable green fluorescence was observed after infected for 48 hours in both two kinds of cell lines. The WWOX expression level of the overexpresion groups increased distinctly showed by qPCR and a 72kD fusion protein was also detected by Western blot technique. CCK-8 test showed the cell growth in pGC-FU-WWOX group of both Jurkat and K562 cells were inhibited remarkably than that of two control groups(P＜0.05). Clone forming assay revealed the cloning formation ability of pGC-FU-WWOX group cells of both Jurkat and K562 cells were significantly decreased. There were obvious ultrastructure changes of pGC-FU-WWOX group cells in Jurkat and K562 cells with the morpha of chromatin condensation, shrink in phraseⅡb exhibited by DAPI stain. DNA degradative fragments in pGC-FU-WWOX group of Jurkat and K562 cells were detected by DNA ladder electrophoresis, which also showed apoptosis degree of pGC-FU-WWOX group increased with time prolonged. Annexin V PE/7-AAD fluorescence test via FCM showed cells in pGC-FU-WWOX groups of Jurkat and K562 had a significant high apoptosis rate than that of two control groups (P＜0.001), which most of the cells were in late apoptosis stage. 3. Indirect immunofluorescence unfolded that cytochrome C of pGC-FU-WWOX group located in cytoplasm with a dispersive or block like distribution both in Jurkat and K562 cells, while p73, p53 and NF-κB p65 located in cytoplasm equably with no difference. qPCR and Western blot revealed that compared with the other two control groups the expression of Bcl-2 protein in pGC-FU-WWOX group of Jurkat and K562 cells decreased in a time-dependent manner and cytochrome C increased as well as the activation of Caspase-9and Caspase-3 compared with two control groups, while p53 changed unconspicuously. Bax protein of pGC-FU-WWOX group ascended only observed in K562 cells. SDS-PAGE of pGC-FU-WWOX groups in Jurkat and K562 cells exhibits a high concentration protein mixture on 73～74kD of the marker after immunoprecipitation, while the control groups were negative.At the same time, WWOX and p73 proteins were positive in the immunoprecipitation mixture of thetarget gene groups with the help of Western blot, while p53 protein was undetected.Conclusions: 1. Lentivirus mediated-WWOX overexpression system was constructed successfully. 2. Overexpression of WWOX gene exibits an antitumor effect by inhibiting the proliferation of Jurkat and 562 cells and induc ing their apoptosis. 3. Overexpression of WWOX gene in Jurkat and 562 cells could down-regulate the expression of Bcl-2 and increase cytochrome C as well as activate both Caspase-9 and Caspase-3. By activating the endogenous mitochondria pathways is one of the possible mechanisms in its tumor suppression activities of WWOX in Jurkat and K562 cells. 4. WWOX could combine with p73 directly in its apoptosis inducing activities in Jurkat and K562 leukemic cells.Keywords: WWOX gene; Lentivirus vector; Overexpression; Leukemia; Proliferation; Apoptosis; Molecular mechanism前言白血病是一类异质性的造血干细胞恶性克隆性疾病，通常会出现染色体或基因异常。