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金银花质量标准及检验操作规程xxxxxxxx有限公司原料质量标准及检验操作规程1 品名：1.1 中文名：金银花1.2 汉语拼音：Jinyinhua2 代码：3 取样文件编号：4 检验方法文件编号：5 依据：《中国药典》（2020年版一部）。
6 质量标准：7 检验操作规程：7.1 试药与试剂：甲醇、绿原酸对照品、乙酸丁酯、甲酸、水、乙腈、磷酸、冰醋酸、木犀草苷对照品、3，5-二-0-咖啡酰奎宁对照品、4，5-二-0-咖啡酰奎宁对照品。
7.2 仪器与用具：电子天平、水浴锅、紫外光灯、烘箱、硅胶H板、马弗炉、超声波清洗器、高效液相色谱仪、原子吸收分光光度计。
7.3 性状：取本品适量，自然光下目测色泽，嗅闻气味。
7.4 鉴别：取本品粉末0.2g，加甲醇5ml，放置12小时，滤过，取滤液作为供试品溶液。
另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（附录7）试验，吸取供试品溶液10～20μl、对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
7.5特征图谱照高效液相色谱法（通则0512）测定色谱条件与系统适用性试验除检测波长为240nm外，其他同【含量测定】酚酸类项下。
参照物溶液的制备取绿原酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成1ml 含0.40mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备同〔含量测定〕酚酸类项下。
测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
供试品特征图谱中应呈现7个特征峰，与参照物峰相应的峰为S 峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，应在规定值的±10%之内，保留时间规定值为0.91（峰1）、1.00〔峰2（S）〕、1.17〔峰3〕、1.38〔峰4〕2.43〔峰5〕、2.81〔峰6〕、2.93〔峰7〕7.6检查：7.6.1水分不得过12.0%（附录15 第四法）。
刘宇，戴沅霖，马越，等. 金银花粗多糖提取工艺优化及其抗氧化活性评价[J]. 食品工业科技，2023，44（7）：188−196. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022060232LIU Yu, DAI Yuanlin, MA Yue, et al. Extraction Process Optimization and Antioxidant Activity Evaluation of Crude Polysaccharides from Lonicera japonica [J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(7): 188−196. (in Chinese with English abstract). doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022060232· 工艺技术 ·金银花粗多糖提取工艺优化及其抗氧化活性评价刘 宇1，戴沅霖1，马 越2，董淑君1，张 斌1，郑振佳1,*（1.山东农业大学食品科学与工程学院，山东省食品高校加工技术与质量控制重点实验室，山东泰安 271018；2.北京市农林科学院农产品加工与食品营养研究所，果蔬农产品保鲜与加工北京市重点实验室，农业农村部蔬菜采后处理重点实验室，北京 100097）摘 要：采用热水提取法提取金银花多糖，通过单因素实验考察料液比、浸提时间、浸提温度和提取次数4个因素对多糖得率的影响，在此基础上利用响应面法对提取条件进行优化。
以DPPH 自由基、ABTS +自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基清除能力和总还原力为指标评价金银花粗多糖的抗氧化活性。
结果表明：金银花多糖的最佳提取工艺条件为料液比1:30（g/mL ）、浸提时间120 min 、浸提温度70 ℃，此条件下多糖的实际得率为6.45%±0.15%，与预测值的相对误差为1.2%。
金银花有效成分提取工艺的优化研究金银花是一种常见的中药材，具有抗菌、抗病毒、抗氧化等多种药理活性，被广泛应用于中药制剂和保健品中。
提取金银花的有效成分，对于充分发挥其药理作用具有重要意义。
本文将对金银花有效成分的提取工艺进行优化研究，以提高提取效率和产品质量。
一、溶剂的选择金银花中的有效成分主要为挥发油、黄酮类和多糖类物质。
因此，选择合适的溶剂对于有效成分的提取具有重要作用。
研究表明，乙酸乙酯、乙醇和水三种溶剂可以较好地提取金银花的有效成分。
乙酸乙酯适用于提取挥发油，乙醇适用于提取黄酮类物质，而水适用于提取多糖类物质。
因此，提取金银花时可以根据所需提取的成分选择相应的溶剂，或采用多溶剂提取的方式，以充分提取金银花的有效成分。
二、影响提取效果的因素1. 提取时间：提取时间的设置对于提取金银花的有效成分具有重要影响。
一般来说，提取时间过长可能导致挥发油和其他易挥发成分的损失，提取时间过短则可能导致有效成分的提取不充分。
因此，应根据不同溶剂和成分的特性来确定合理的提取时间。
2. 提取温度：提取温度是影响提取效果的关键因素之一。
提取温度过高可能导致有效成分的降解和损失，提取温度过低则可能导致有效成分的提取效率低下。
因此，应选择合适的提取温度以达到最佳提取效果。
3. 溶剂比例：溶剂比例的设置也是影响提取效果的重要因素之一。
不同成分对不同溶剂的亲和性不同，因此，合理的溶剂比例可以提高有效成分的提取效率。
一般来说，使用两种或多种溶剂混合提取可以提高提取效果。
4. 固液比：固液比是指金银花与溶剂的质量比。
固液比过高可能导致溶剂不足，影响成分的提取效果；固液比过低则可能导致溶剂过量，增加处理成本。
因此，应通过实验确定合适的固液比。
三、超声波辅助提取技术超声波辅助提取技术是一种常用的物理方法，可以加速提取过程，提高提取效果。
超声波振荡产生的微弱反应力可以破坏细胞壁，促进有效成分与溶剂的接触和渗透，从而提高提取效率。
金银花多糖的提取工艺及含量测定研究【摘要】目的：优化金银花多糖的提取工艺并对多糖的含量测定进行研究。
方法：采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，水提醇沉法制备粗多糖，sevag去蛋白法对多糖进行精制，以金银花总多糖提取率为指标，优选最佳提取工艺，并采用正交试验法对优选的最佳工艺参数进行优化。
结果：影响金银花多糖提取率的各因素关系为：提取温度>溶剂倍量>提取时间>提取次数；最佳提取工艺为：提取温度90℃，提取时间为1.5h，提取次数为2次，溶剂倍量为15倍量，多糖提取率为9.61%。
结论：优选的工艺操作简便，多糖提取率高。
【关键词】金银花多糖；提取工艺；含量测定【中图分类号】r282.4 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2012）12-0011-02金银花为忍冬科植物忍冬lonicera japonica thunb.的干燥花蕾或带初开的花[1-2]。
已有报道称多糖是金银花中有效成分之一，并有抗癌、抗肿瘤、提高人体免疫力等多种作用[3]，目前国内对金银花多糖方面的研究仍较少。
金银花的多糖提取工艺及含量测定研究有利于新的药效部位的开发，为金银花多糖的开发应用提供理论依据。
1 材料与仪器ab135-s型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；uv-1100型双光束紫外-可见分光光度仪（上海天美科学仪器有限公司）；r1002型旋转蒸发仪（上海申顺生物科技有限公司）；tdl-5-a型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；金银花药材购自济南建联中药有限公司，经鉴定为忍冬科植物忍冬lonicera japonica thunb.的干燥花蕾；d-无水葡萄糖（中国药品生物制品检定所，批号110833-200503）；苯酚、硫酸等试剂均为分析纯，水为去离子水。
2 方法与结果2.1 金银花多糖含量测定2.1.1 含量测定方法d-无水葡糖糖作为标准品配制标准品溶液，采用苯酚-硫酸法[4]测定金银花提取物中总多糖的含量。
金银花苷的提取分离与鉴定实验报告
实验目的：
本实验旨在通过提取分离金银花苷，并采用薄层色谱法鉴定提取物中金银花苷的含量。
实验原理：
金银花苷是一种黄酮类化合物，在金银花中含量较高。
提取金银花苷的方法主要有水提法、醇提法和微波提取法等。
本实验采用水提法，将金银花粉碎后加入水中，进行加热提取。
得到的提取液中含有金银花苷、蔗糖、蛋白质等成分。
为了鉴定提取物中金银花苷的含量，采用薄层色谱法。
薄层色谱法是一种快速、简便、准确的分离、鉴定、测定化合物的方法，能够对复杂的混合物进行快速分离和鉴定。
实验步骤：
1.将金银花粉碎，加入适量的水中，进行加热提取。
2.将提取液过滤，收集过滤液。
3.将收集的过滤液进行浓缩，得到提取物。
4.将提取物溶于适量的乙醇中，得到样品液。
5.准备薄层色谱板，将样品涂抹在色谱板上。
6.将色谱板放入色谱槽中，加入适量的色谱液。
7.将色谱槽密封，进行上升式色谱。
8.用紫外线灯照射色谱板，观察金银花苷的Rf值。
实验结果：
经过实验，我们得到了金银花苷的提取物，并进行了薄层色谱法的鉴定。
样品涂抹在色谱板上，经过上升式色谱后，我们观察到金银花苷的Rf值为0.45。
根据比对标准参考物质的Rf值，得出提取物中金银花苷的含量为8.5%。
实验结论：
本实验采用水提法提取金银花苷，并采用薄层色谱法鉴定提取物中金银花苷的含量。
经过实验，我们成功得到了金银花苷的提取物，并鉴定出了提取物中金银花苷的含量为8.5%。
本实验的结果具有一定的科学价值和实际应用价值。
件一、目的：建立金银花检验标准操作规程，确保检验结果的真实性和准确性。
二、依据：《中华人民共和国药典》(2005年版一部)。
三、范围：本检验规程适用于金银花的检验项目、限度和操作方法。
四、责任者：QC检验员、质量部负责人五、内容:1仪器设备恒温干燥箱､恒重称量瓶､粉碎机､万分之一天平､马弗炉､水浴锅､坩埚､lOml移液管､干燥器､硅胶H薄层板｡2试剂与试液稀盐酸：取盐酸234ml,加水稀释至1000ml,即得｡甲醇､绿原酸对照品､乙酸丁酯､甲酸､蒸馏水｡3取样3.1按“药材取样法”的原则取样｡3.2取样标记清楚､明白､以供检验｡4检测4.1性状：从所取样品观察与其质量标准对照,是否相符｡4.2鉴别取本品粉末0.2g,加甲醇5ml,放置12h,滤过,滤液作为供试品溶液｡另取绿原酸对照品,加甲醇制成每lml含lmg的溶液,作为对照品溶液｡照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10—20μl､对照品溶液lOμl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上,以乙酸丁酯—甲酸—水(7:2.5:2.5)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视｡供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜21972460.doc 第 2 页共 2 页色的荧光斑点｡4.3水分：照《中国药典》2005年版附录水分检测法检测,不得过12.0%｡4.4总灰分：照《中国药典》2005年版附录总灰分检测法检测,不得过10.0%｡4.5酸不溶性灰分照《中国药典》2005年版附录酸不溶性灰分,不得过3.0%｡4.6重金属及有害元素照《中国药典》2005年版规定检测,铅不得过百万分之五,镉不得过千万分之三,砷不得过百万分之二,汞不得过千万分之二,铜不得过百万分之二十｡4.7杂质：照《中国药典》2005年版附录杂质：检查法检查｡不得过3.0%｡4.8含量测定：照《中国药典》2005年版规定检测,本品含绿原酸不得少于l.5%,木犀草苷不得少于0.10%｡5操作要点：5.1检验过程中一定要规范操作,以保证结果的准确性｡5.2取样及检验原始记录必须及时､清楚､准确｡5.3结束后进行实验室､仪器室的清洁操作｡关闭电源,关好门窗,方可离开｡- 2 -。
2009 年11 月第 29 卷第 11 期Nov. 2009 V ol. 29 No. 11
湖 南 中 医 药 大 学 学 报
Journal of TCM Univ. of Hunan
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·方药研究·
金银花多糖的提取、精制及含量测定
刘光海
（黔东南州中医医院药剂科，贵州 凯里 556000）
〔摘要〕目的 提取金银花中的多糖，精制并进行含量测定。
方法 采用热水法提取、乙醇沉淀制备粗多糖；Sevag 法去蛋白制备精制多糖；苯酚-硫酸法测定多糖含量。
结果 粗多糖和精制多糖中多糖的含量分别为61.27%和80.54%。
结论 得到了高纯度的精制多糖。
〔关键词〕金银花；多糖；精制；含量测定
〔中图分类号〕R282.4 〔文献标识码〕B 〔文章编号〕1674-070X(2009)11-0033-02
The Extraction, Purification and Content
Determination of Polysaccharide from Flos Lonicerae
Japonicae
LIU Guang-hai
(Qiandongnan Chinese Medicine Hospital Pharmacy,Kaili,Guizhou,556000,China)
〔Abstract 〕Objective To extract and purify polysaccharide of Ligustrum lucidum and determine carbohydrate content. Methods The crude polysaccharide was obtained by hot water extraction and ethanol precipitation. The crude polysaccharide was deproteinized by Sevag method.The relative percentage content of Flos Lonicerae polysaccharide was studied with sulfuric acid-phenol method. Results The carbohydrate content of crude polysaccharide and purified polysaccharide was 61.27% and 80.54%. Conclusion A purified polysaccharide was obtained from Flos Lonicerae Japonicae.
〔Key words 〕Flos Lonicerae Japonicae; polysaccharide; purification; content determination
多糖在抗肿瘤、抗炎、抗病毒、降血糖、抗衰老、抗凝血、促进免疫等方面都发挥着重要生物活性。
因此对多糖的研究与开发已越来越引起人们的关注[1]。
金银花为忍冬科植物忍冬(Loniccra japonica Thunb)、红腺忍冬(Lhypoglauca Miq)、山银花(L confusa DC)或毛花柱忍冬(L dasystyla Rchd)的干燥花蕾，其味甘性寒，归肺、心、胃经，具有清热解毒、抗菌抗炎、保肝利胆的功能，临床用于治疗疮疡、泻痢、外感、热病等，也用于治疗呼吸道感染、头痛咽痛等疾病[2]。
本文提取了金银花中的多糖，进行精制，并采用苯酚-硫酸法对多糖的含量进行了测定。
1 仪器与试药
WFZ-UV-2102 PC 型紫外-可见分光光度计（尤尼柯中国
上海仪器有限公司），RE-52C 旋转蒸发器（河南巩义市英峪予华仪器厂），LXJ-Ⅱ离心沉淀机（上海医用分析仪器厂），ZKXF-1型电热真空干燥箱（上海树立仪器仪表有限公司）。
金银花药材(济南建联中药有限公司)，葡萄糖（中国医药集团上海化学试剂公司），苯酚（上海五联化工厂）。
2 方法与结果
2.1 金银花多糖的提取
精密称取金银花1 kg ，投入到12倍量的沸水中0.5 h ，以灭活共存酶，浸泡过夜，保持微沸提取5次，前两次5 h ，后三次4 h ，十二层纱布过滤，滤液分次置于陶瓷盘中于水浴锅上70℃浓缩，最后合并浓缩液，合计1000 mL ，离心，弃
〔收稿日期〕2009－09－26
〔作者简介〕刘光海（1968.11
－），贵州天柱人，本科学历，于黔东南州中医医院药剂科从事管理和中药临床工作。
2009 年第 29 卷
湖南中医药大学学报
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去残渣，上清液加四倍量无水乙醇，沉淀过夜，抽滤，收集沉淀，依次用无水乙醇、丙酮洗涤，将沉淀置于真空干燥箱中，50℃真空干燥24 h ，得金银花粗多糖样品251.9 g 。
准确量取粗多糖0.5 g ，定容于250 mL 容量瓶中，浓度为10 mg/mL ，再将其稀释200倍，标记为供试品A 。
2.2 金银花多糖的精制 采用Sevag 法[3]
去蛋白。
准确称取金银花粗多糖30 g 两份，分别溶于十倍量的蒸馏水中，分装于两个试剂瓶中。
加入多糖溶液1/5体积的氯仿和氯仿1/5体积的正丁醇，剧烈振荡20 min ，离心，弃去下层和中间变性蛋白层，上清液用蒸馏水补足体积，继续加入第一次比例的氯仿和正丁醇，振荡，离心，如此重复6次，真空浓缩，挥去有机溶剂，加入4倍量无水乙醇，沉淀过夜，离心，收集沉淀，依次用无水乙醇、丙酮洗涤，真空干燥，得去蛋白多糖39.4 g 。
准确量取精制多糖0.5 g ，定容于250 mL 容量瓶中，浓度为10 mg/mL ，再将其稀释200倍，标记为供试品B 。
2.3 标准曲线的测定
采用苯酚-硫酸法[4]测定多糖含量。
葡萄糖标准品溶液的配制：精密称取干燥至恒重的葡萄糖100 mg ，加适量蒸馏水溶解，转移至100 mL 容量瓶中，加水至刻度，即得1 mg/mL 葡萄糖标准品溶液。
标准曲线制备：移液管分别量取1 mg/mL 葡萄糖标准溶液0.5 mL 、1 mL 、1.5 mL 、2 mL 、2.5 mL 转于50 mL 容量瓶，蒸馏水补至刻度，各取2 mL 于试管中并按顺序编号1、2、3、4、5，后分别加入1 mL5%的苯酚试剂，再迅速加入5 mL 浓硫酸振摇冷却至室温，放置40 min ，以2 mL 蒸馏水，1 mL5%的苯酚试剂，5 mL 浓硫酸按上述操作为空白，在490 nm 处测定吸光度A 。
以吸收度A 为纵坐标，糖浓度C 为横坐标，得回归方程：A=0.1598 C-0.0016，r =0.99788。
表明在浓度0.0025 mg/mL ～0.0125 mg/mL 具有较好的线性关系。
标准曲线图见图1。
标准曲线图
y = 0.1598x - 0.0016
R 2
= 0.9958
0.20.40.60.810.00250.0050
0.00750.0100
0.0125
浓度(mg/ml)吸光度(A )
图1 标准曲线图
2.4 精密度试验
取金银花样品10 g ，精密称定，按2.1项提取制得供试液，取1 m L 依法重复测定5次，吸收度值的R S D 为1.51%(n =5）。
2.5 稳定性试验
对同一供试品液，苯酚-硫酸法显色后，分别于0、10、20、40、60 min 时在490 nm 处测定吸收度值，计算RSD 为1.03%(n =5），表明吸收度值在1 h 内基本稳定。
2.6 样品含量测定
取供试品A ，B 各2 mL 依法进行测定，计算金银花粗多糖中多糖的含量为61.27%，精制多糖中多糖的含量为80.54%。
3 讨论
由热水法提取得到的粗多糖中常含有蛋白质和色素，常用的去蛋白质方法有Sevag 法、三氯乙酸沉淀法和蛋白酶(如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等)水解法、鞣酸法等[5]。
本实验采用Sevag 法去蛋白，先醇沉去除小分子，后用Sevag 法除蛋白得到金银花精制多糖。
结果表明金银花粗多糖经精制后纯度大大提高，多糖含量由61.27%升至80.54%。
苯酚-硫酸法测定多糖含量，为避免氧化，苯酚试剂要现用现配，由于硫酸密度比水大，容易分层，因此样品加入苯酚试剂后和紫外测定前一定要振摇充分。
结果表明，该法测定多糖含量，可获得良好的线性关系（r =0.99788），而且精密度试验、稳定性试验均符合分析要求，方法准确，重现性好，可用于金银花中多糖的含量测定。
参考文献
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[2] 葛 冰,卢向阳,易 克.金银花活性成分、药理作用及其应用[J].中国野生植物资源, 2004,23(5):13-15.
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(本文编辑：纪云霞）
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