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“斑马鱼胚胎”资料文集目录一、不同寄主植物桑寄生水提物对斑马鱼胚胎心脏发育毒性及机制研究二、17乙炔雌二醇对斑马鱼胚胎发育的致畸作用及其基因靶位三、斑马鱼胚胎集成测试技术在复合污染毒性评估中的应用四、雄激素1,4雄烯二酮和雄烯二酮对斑马鱼胚胎昼夜节律和下丘脑垂体性腺轴通路中基因转录表达的影响五、不同形态微塑料和汞对斑马鱼胚胎发育毒性联合作用研究六、斑马鱼胚胎模型评价内分泌干扰物的类雌激素效应不同寄主植物桑寄生水提物对斑马鱼胚胎心脏发育毒性及机制研究本文旨在研究不同寄主植物桑寄生水提物对斑马鱼胚胎心脏发育的毒性及作用机制。
采用浸泡法将桑寄生水提物暴露于斑马鱼胚胎，观察胚胎发育情况，并通过分子生物学手段探讨其作用机制。
结果表明，不同寄主植物的桑寄生水提物对斑马鱼胚胎心脏发育具有不同程度的毒性，其毒性可能与其成分及含量有关。
同时，发现这些水提物可能通过影响相关基因的表达，进而影响斑马鱼胚胎心脏发育。
本研究为桑寄生的安全性评价及资源利用提供了科学依据。
桑寄生是一种常见的植物寄生虫，能寄生于多种植物上，其生长过程中会从寄主植物中获取营养。
近年来，桑寄生作为一种中药材受到了广泛关注，但其活性成分及对生物体的影响仍不明确。
斑马鱼作为一种理想的生物模型，具有与人类相似的生理特征，其胚胎发育过程透明可见，便于观察。
因此，本研究选用斑马鱼作为实验模型，研究不同寄主植物桑寄生水提物对胚胎心脏发育的毒性及作用机制。
分别收集寄生于不同植物的桑寄生样品，按照文献报道的方法制备水提物。
将桑寄生水提物配置成不同浓度，采用浸泡法处理斑马鱼胚胎。
分别在暴露后72小时观察胚胎发育情况，记录心脏发育相关指标。
采用实时荧光定量PCR技术，检测处理组和对照组胚胎中相关基因的表达水平。
不同寄主植物桑寄生水提物对斑马鱼胚胎心脏发育的影响实验结果表明，不同寄主植物的桑寄生水提物对斑马鱼胚胎心脏发育具有不同程度的毒性。
随着暴露时间的延长，心脏发育相关指标逐渐受到影响。
斑马鱼动物模型的应用斑马鱼（Danio rerio）属于辐鳍亚纲（Actinopterygii）鲤科（Cyprinidae）短担尼鱼属（Danio）的一种硬骨鱼，原产于南亚，是一种常见的热带观赏鱼，因其体侧具有斑马一样暗蓝与银色相间的纹条而得名。
斑马鱼个体小，易于饲养，成体长4-5cm，雄鱼体修长，雌鱼体肥大。
可在有限空间里养殖相当大的群体，可满足样本需求量大的研究。
斑马鱼发育迅速，在28.5℃培养条件下受精后约40min完成第一次有丝分裂，之后大约每隔15min分裂一次，24h后主要器官原基形成，相当于28d的人类胚胎，幼鱼孵出后约3个月达到性成熟。
雌雄鱼通过调控光周期控制14:10（光照:黑暗）产卵时间，成熟鱼每周可产卵一次，一尾雌鱼每次可产卵100-300枚。
胚胎体外受精，体外发育，胚体透明，易于观察。
受精卵直径约1mm，易于进行显微注射和细胞移植等操作。
一、斑马鱼的品系经过30多年的研究应用和系统发展，已有约20个斑马鱼品系，斑马鱼基因数据库-ZFIN （http://zfin/org）里有相关的资料可供查询和下载。
目前研究中常用的斑马鱼野生型品系主要为AB 品系、Tuebingen（Tu）品系、WIK 品系，斑马鱼基因组计划所用品系是Tu。
AB 品系是实验室常用的斑马鱼品系，由单倍体细胞经早期加压法获得。
Tu品系斑马鱼具有胚胎致死突变基因，用于基因组测序前敲除该致死突变基因。
WIK品系较Tu品系具有更多的形态多样性。
此外，还保存有3000多个突变品系和100多个转基因品系。
这些品系资源对于利用斑马鱼开展各种科学研究起着很大的推动作用。
二、斑马鱼突变品系的筛选斑马鱼突变的方法主要有三种：已基亚硝脲（ENU）化学诱导、γ或χ射线照射和插入诱变。
ENU是一种DNA烃基化试剂，在生殖细胞减数分裂前诱导碱基对的替换，诱导产生的突变率为0.1%-0.2%，涉及单个基因的突变。
射线照射导致染色体大片段的缺失或染色体重排，产生突变率达1%。
斑马鱼泄殖腔发育的研究进展
谢贝
【期刊名称】《安徽农业科学》
【年(卷),期】2013(041)008
【摘要】近年来,肛门缺陷相关的遗传疾病越来越受到关注,斑马鱼泄殖腔包含肛门,研究泄殖腔的发育机制有助于增强对这类遗传病的了解.综述了斑马鱼泄殖腔的发育过程、相关信号通路以及一些标记基因等,以期为相关疾病预防和治疗提供理论依据.
【总页数】2页(P3414,3477)
【作者】谢贝
【作者单位】西南大学淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室,重庆400715【正文语种】中文
【中图分类】S965.819
【相关文献】
1.斑马鱼造血系统发育与人类血液系统疾病研究进展 [J], 夏海雄;何志旭;舒莉萍
2.草甘膦对斑马鱼生殖发育的毒性研究进展 [J], 杜太峰;郑树楷;黄苑妮;包冕;吴库生
3.斑马鱼发育毒性与致畸性相关实验研究进展 [J], 戴明珠; 黄燕烽; 彭逸; 张双阳; 张立将; 李春启
4.斑马鱼模型在胚胎心脏发育研究进展 [J], 马双
5.生物活性物质对斑马鱼急性毒性和发育毒性的研究进展 [J], 许中石;刘佳杰;陈辰;陈天逸
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斑马鱼在生命科学研究中的应用斑马鱼是一种小型的热带淡水鱼类，它在生命科学研究中有着广泛的应用。
作为模式生物，这种鱼类可用于研究各种生物过程的机制，包括发育、再生和感染等。
在本文中，我们将探讨斑马鱼在生命科学研究中的应用及其重要性。
一、斑马鱼的基本特征和优点斑马鱼在生物学界是一个备受瞩目的模式生物。
这种鱼类的大小约为3.5厘米，一般寿命为2-3年。
它的简单型态和发育机理使得斑马鱼成为生命科学领域的重要研究对象。
此外，斑马鱼的优点还包括：1. 短周期快速成熟：斑马鱼的生殖周期短，每年可以产卵多次，而且发育迅速，只需要2-3天就可以孵化。
这个特性可以为研究人员提供大量的实验数据。
2. 生殖方式丰富：斑马鱼的生殖方式又泳动复杂和单纯的交配两种方式，这两种方式的存在又许多研究的方向。
3. 透明且可观察性强：斑马鱼在早期发育阶段为透明，这样质子在显微镜下容易被观察。
此外，它的胚胎发育过程短，只需两天就可以完成。
4. 基因治疗研究利器：斑马鱼拥有大量与人类同源的基因，可用于研究与人类相关的疾病和药物疗法。
5. 容易饲养: 斑马鱼简单易饲养，成本低，数量多。
二、斑马鱼在研究发育和遗传方面的应用斑马鱼因其胚胎发育阶段的透明，被广泛用于发育研究。
斑马鱼的早期胚胎非常透明，这使得它们的神经发育可以被轻松观察。
科学家们可以将神经标记物标记到斑马鱼的内皮细胞和神经系统细胞中，以观察它们的运动情况。
这种研究方法在研究神经退化疾病以及癌症等疾病方面有着重要的应用价值。
斑马鱼还可用于研究遗传学。
由于斑马鱼基因与人类基因非常相似，因此它们被广泛用于研究基因组的相互作用和表达。
举个例子，研究人员可以将人类基因序列植入斑马鱼基因组中，以研究人类基因的功能及其与其他基因和环境之间的相互作用。
这种方法被称为转基因鱼。
三、斑马鱼在药物发现和治疗研究中的应用斑马鱼可用于新药发现和针对性药物治疗研究。
在此方面具体的例子包括斑马鱼在研究新型抗生素和癌症治疗药物方面的应用。
斑马鱼的胚胎发育与影响因素鲁东⼤学⽣命科学学院学院20 10 －20 11 学年第⼆学期学院______________ 专业_____________ 年级________ 班________ 学号_____________姓名______________密封线学⽣须将⽂字写在此线以下《发育⽣物学》课程论⽂课程号：2522080.关键词：斑马鱼；发育；葡萄糖；溶液浓度；温度；TCDD⼀、斑马鱼简介斑马鱼(zebra fish)，⼜名蓝条鱼、花条鱼、斑马担尼鱼。
斑马鱼是⼀种常见的热带鱼。
斑马鱼体型纤细，成体长3-4cm，对⽔质要求不⾼。
孵出后约3个⽉达到性成熟，成熟鱼每隔⼏天可产卵⼀次。
卵⼦体外受精，体外发育，胚胎发育同步且速度快，胚体透明。
发育温度要求在25-31℃之间。
斑马鱼由于个体⼩，养殖花费少，能⼤规模繁育，且具许多优点，吸引了众多研究者的注意。
经过30多年的研究应⽤和系统发展，已有约20个斑马鱼品系，斑马鱼基因数据库⾥有相关斑马鱼的资料可供查询和下载，⽅便了研究。
斑马鱼的细胞标记技术、组织移植技术、突变技术、单倍体育种技术、转基因技术、基因活性抑制技术等已经成熟，且有数以千计的斑马鱼胚胎突变体，是研究胚胎发育分⼦机制的优良资源，有的还可做为⼈类疾病模型。
斑马鱼已经成为最受重视的脊椎动物发育⽣物学模式之⼀，在其它学科上的利⽤也显⽰很⼤的潜⼒.⼆、斑马鱼的发育过程1〕卵⼦的发⽣斑马鱼卵⼦发⽣过程中乱母细胞的发育是不同步的。
在卵⼦发⽣早期，核内许多⼩核仁开始富集，其数⽬在接下来的时期中可以达到1500个，他们分布在和的外围和靠近内部核膜。
斑马鱼卵⼦发⽣过程⼀般分为5个时期，即StageⅠ-Ⅴ;有时也将StageⅡ和Ⅲ作为⼀个时期将卵⼦发⽣分为4个时期。
各个时期的基本特征是：StageⅠ是原始滤泡⽣长阶段，乱母细胞没有卵黄，是⼀个有细胞质包围着升值滤泡的圆形球体。
其染⾊体去浓缩并出现灯刷装状表型，此时DNA⾼度延伸，形成⼀个具有典型形态学上的包含RNA和蛋⽩质的恻环。
山东科学ＳＨＡＮＤＯＮＧＳＣＩＥＮＣＥ第３７卷第２期２０２４年４月出版Ｖｏｌ.３７Ｎｏ.２Ａｐｒ.２０２４收稿日期:２０２４￣０１￣２２基金项目:山东省科技型中小企业创新能力提升工程项目(２０２２ＴＳＧＣ２００３)ꎻ山东省中央引导地方科技发展资金项目(ＹＤＺＸ２０２２１６４)ꎻ济南市 新高校２０条 资助项目引进创新团队计划(２０２２２８０３５)ꎻ齐鲁工业大学(山东省科学院)科教产融合试点工程重大创新专项(２０２２ＪＢＺ０１￣０６)作者简介:夏青(１９８８ )ꎬ男ꎬ博士ꎬ副研究员ꎬ研究方向为中药药效物质与作用机制ꎮＥ￣ｍａｉｌ:ｓｄｘｑ１０２１＠１６３.ｃｏｍ∗通信作者ꎬ刘可春ꎬ男ꎬ研究员ꎬ研究方向为药物筛选ꎮＥ￣ｍａｉｌ:ｈｌｉｕｋｃｈ＠ｓｄａｓ.ｏｒｇ模式生物斑马鱼在化妆品功效评价中的应用进展及发展趋势分析夏青ꎬ臧晓涵ꎬ王勇澄ꎬ张云ꎬ李培海ꎬ张轩铭ꎬ刘可春∗(齐鲁工业大学(山东省科学院)山东省科学院生物研究所山东省人类疾病斑马鱼模型与药物筛选工程技术研究中心ꎬ山东济南２５００１４)摘要:斑马鱼模型在药物筛选㊁药理和毒理等研究领域已得到广泛应用ꎮ近年来ꎬ随着«化妆品功效宣称评价规范»等文件的实施ꎬ化妆品功效宣称进入强监管时代ꎬ对功效评价模型和方法的科学性提出了更高的要求ꎮ斑马鱼皮肤结构与人类高度相似ꎬ胚胎透明ꎬ易观察ꎬ且斑马鱼功效评价实验具有样品用量少㊁周期短㊁高通量的优势ꎬ目前已成为化妆品功效评价领域的研究热点ꎮ本文基于文献计量学方法ꎬ统计了近十年斑马鱼用于化妆品功效评价的相关文献ꎬ综述了斑马鱼在化妆品功效评价中的应用进展ꎬ并分析了其发展动态和趋势ꎬ为促进斑马鱼模型在化妆品领域中的应用提供参考ꎮ关键词:斑马鱼ꎻ化妆品ꎻ功效评价中图分类号:Ｒ１㊀㊀㊀文献标志码:Ａ㊀㊀㊀文章编号:１００２￣４０２６(２０２４)０２￣００３６￣１１开放科学(资源服务)标志码(ＯＳＩＤ):ＰｒｏｇｒｅｓｓａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｔｒｅｎｄｓｉｎｔｈｅｕｓｅｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈａｓａｍｏｄｅｌｏｒｇａｎｉｓｍｆｏｒｅｖａｌｕａｔｉｎｇｃｏｓｍｅｔｉｃｅｆｆｉｃａｃｙＸＩＡＱｉｎｇꎬＺＡＮＧＸｉａｏｈａｎꎬＷＡＮＧＹｏｎｇｃｈｅｎｇꎬＺＨＡＮＧＹｕｎꎬＬＩＰｅｉｈａｉꎬＺＨＡＮＧＸｕａｎｍｉｎｇꎬＬＩＵＫｅｃｈｕｎ∗(ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＺｅｂｒａｆｉｓｈＭｏｄｅｌｆｏｒＨｕｍａｎＤｉｓｅａｓｅｓａｎｄＤｒｕｇＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅꎬＢｉｏｌｏｇｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅꎬＱｉｌｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ(ＳｈａｎｄｏｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ)ꎬＪｉｎａｎ２５００１４ꎬＣｈｉｎａ)ＡｂｓｔｒａｃｔʒＺｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌｓｈａｖｅｂｅｅｎｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｖａｒｉｏｕｓｆｉｅｌｄｓｓｕｃｈａｓｄｒｕｇｓｃｒｅｅｎｉｎｇꎬｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬａｎｄｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙｒｅｓｅａｒｃｈ.ＩｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓꎬｗｉｔｈｔｈｅｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓｓｕｃｈａｓｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄｆｏｒｔｈｅＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＣｏｓｍｅｔｉｃＥｆｆｉｃａｃｙＣｌａｉｍｓꎬｃｏｓｍｅｔｉｃｅｆｆｉｃａｃｙｃｌａｉｍｓｈａｖｅｅｎｔｅｒｅｄｉｎｔｏａｎｅｒａｏｆｓｔｒｉｃｔｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎꎬｗｈｉｃｈｈａｓｌｅｄｔｏｈｉｇｈｅｒｓｔａｎｄａｒｄｓｆｏｒｔｈｅｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｎａｔｕｒｅｏｆｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎｍｏｄｅｌｓａｎｄｍｅｔｈｏｄｓ.Ｔｈｅｓｋｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈｉｓｈｉｇｈｌｙｓｉｍｉｌａｒｔｏｔｈａｔｏｆｈｕｍａｎｓꎬｗｉｔｈｚｅｂｒａｆｉｓｈａｌｓｏｈａｖｉｎｇｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｅｍｂｒｙｏｓｔｈａｔａｒｅｅａｓｙｔｏｏｂｓｅｒｖｅ.Ｍｏｒｅｏｖｅｒꎬｅｆｆｉｃａｃｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｕｓｉｎｇｚｅｂｒａｆｉｓｈｏｆｆｅｒａｄｖａｎｔａｇｅｓｓｕｃｈａｓｍｉｎｉｍａｌｓａｍｐｌｅｄｏｓａｇｅꎬｓｈｏｒｔｅｎｅｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｙｃｌｅｓꎬａｎｄｈｉｇｈ￣ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔｃａｐａｃｉｔｙ.Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｔｌｙꎬｚｅｂｒａｆｉｓｈｈａｖｅｂｅｃｏｍｅａｐｏｐｕｌａｒｒｅｓｅａｒｃｈｔｏｐｉｃｉｎｔｈｅｆｉｅｌｄｏｆｃｏｓｍｅｔｉｃｅｆｆｉｃａｃｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎ.Ｂａｓｅｄｏｎｂｉｂｌｉｏｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｓꎬｔｈｉｓｓｔｕｄｙａｎａｌｙｚｅｓｔｈｅｒｅｌｅｖａｎｔｌｉｔｅｒａｔｕｒｅｏｎｔｈｅｕｓｅｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈｔｏｅｖａｌｕａｔｅｃｏｓｍｅｔｉｃｅｆｆｉｃａｃｙｏｖｅｒｔｈｅｐａｓｔｄｅｃａｄｅ.Ｔｈｅｓｔｕｄｙｐｒｏｖｉｄｅｓａｎｏｖｅｒｖｉｅｗｏｆｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈｉｎｃｏｓｍｅｔｉｃｅｆｆｉｃａｃｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎꎬａｎｄｅｘａｍｉｎｅｓｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｄｙｎａｍｉｃｓａｎｄｔｒｅｎｄｓｔｈｒｏｕｇｈｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓ.Ｔｈｉｓｉｓｓｏａｓｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌｓｉｎｔｈｅｃｏｓｍｅｔｉｃｓｉｎｄｕｓｔｒｙ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓʒｚｅｂｒａｆｉｓｈꎻｃｏｓｍｅｔｉｃｓꎻｅｆｆｉｃａｃｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎ㊀㊀随着人们生活质量不断提高及对于美的追求日益提升ꎬ化妆品已经成为日常生活的必需品ꎮ我国是全球最大的化妆品市场之一ꎬ２０２０年护肤品市场规模达到２６３０亿元ꎮ功效宣称是化妆品功效的描述性说明ꎬ也是消费者选择化妆品的重要依据ꎮ«化妆品监督管理条例»[１]«化妆品功效宣称评价规范»等文件指出ꎬ化妆品的功效宣称应当有充分的科学证据ꎬ注册人或者备案人应当在国家药品监督管理局指定的网站上公布证据摘要ꎬ并接受社会监督ꎮ图１㊀人类皮肤结构与斑马鱼皮肤结构Ｆｉｇ.１㊀Ｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｈｕｍａｎｓｋｉｎａｎｄｚｅｂｒａｆｉｓｈｓｋｉｎ斑马鱼是化妆品功效评价的新兴模型ꎮ斑马鱼与人类基因同源性高达８７％ꎬ胚胎透明ꎬ易观察[３]ꎮ利用斑马鱼开展功效评价具有样品用量少㊁实验周期短㊁高通量等优势ꎮ更重要的是ꎬ斑马鱼皮肤结构和功能与人类高度相似ꎬ由表皮㊁真皮和皮下组织构成ꎬ包含基底层㊁棘层㊁颗粒层㊁透明层等(见图１㊁表１)[４]ꎮ斑马鱼与人类具有类似的创伤愈合和疤痕增生过程[５]ꎬ参与皮肤发育和胶原蛋白合成的相关基因与人类具有高度的同源性[４ꎬ６]ꎮ近年来ꎬ随着化妆品功效宣称监管体系的不断完善ꎬ斑马鱼广泛应用于化妆品功效评价ꎬ认可度与接受度不断提高ꎬ截至目前已有３２项现行的相关团体标准ꎬ相关功效评价方法已应用于化妆品配方筛选㊁工艺优化㊁功效验证㊁机制研究等各个方面ꎮ表１㊀斑马鱼与人体皮肤结构对比表皮层保护膜保护ꎬ抗菌角化上皮浅表层稳定ꎬ气体交换ꎬ防震动颗粒层中间层棒状细胞ꎬ离子细胞ꎬ感觉细胞ꎬ黏液细胞ꎬ未分化上皮细胞棘层基底层通过半桥粒附着在真皮上基底层透明层含有层黏连蛋白和整合素透明层致密层含有胶原蛋白致密层半桥粒连接基底层细胞与下方基底膜半桥粒桥粒连接相邻上皮细胞桥粒侧线运动和震动的感觉器官内耳毛细胞(位于耳蜗内)真皮层黑素细胞色素沉着ꎬ抗紫外线辐射黑素细胞鳞保护ꎬ钙源毛发皮下组织脂肪细胞隔热ꎬ储存热量ꎬ有助皮下创伤愈合脂肪细胞㊀㊀本文查阅了近十年斑马鱼用于化妆品功效评价的相关文献ꎬ利用文献计量学方法对文献发表时间分布㊁研究主体㊁研究内容及热点等进行分析ꎬ并对斑马鱼模型在化妆品功效评价中的应用进展进行综述ꎬ梳理该领域的发展脉络和研究趋势ꎬ为斑马鱼模型在化妆品功效评价领域更科学㊁合理的应用和发展提供参考ꎮ１㊀斑马鱼模型应用于化妆品功效评价的发展趋势分析１.１㊀数据来源与分析方法以中国知网(ＣＮＫＩ)㊁万方数据知识服务平台为中文来源数据库ꎬ中国知网检索式为 主题:(斑马鱼化妆品) ꎬ检索时间设定为２０１３ ２０２３ꎻ万方数据知识服务平台检索式为 全部:(斑马鱼化妆品) ꎬ检索时间设定为２０１３ ２０２３ꎮ以ＷｅｂｏｆＳｃｉｅｎｃｅ核心集数据库为英文文献检索平台ꎬ检索式为 Ｔｏｐｉｃ:(ｚｅｂｒａｆｉｓｈｃｏｓｍｅｔｉｃｓ) ꎬ检索时间设定为２０１３￣０１￣０１至２０２４￣０１￣０１ꎮ利用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ(ｖ８.０.２.２６３)和ＶＯＳｖｉｅｗｅｒ(Ｖｅｒｓｉｏｎ１.６.２０)软件对文献进行可视化分析ꎮ其中ꎬ文献产出时间分布图由ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ(ｖ８.０.２.２６３)软件绘制ꎬ关键词共现图谱和国家合作网络关系图谱由ＶＯＳｖｉｅｗｅｒ(Ｖｅｒｓｉｏｎ１.６.２０)软件获得ꎮ１.２㊀结果与分析１.２.１㊀发文量分析从中国知网中共获得中文文献４４篇ꎬ万方数据知识服务平台共获得中文文献１５１篇ꎬＷｅｂｏｆＳｃｉｅｎｃｅ核心集数据库共获得英文文献２１４篇ꎬ排除非斑马鱼模型研究的文献㊁与化妆品功效评价无关的文献㊁重复文献以及无法进行评估的文献ꎬ最终计入分析统计的文献中ꎬ共计中文文献１６３篇ꎬ英文文献１９０篇ꎬ所有计入分析统计的文献全文可查ꎮ如图２所示ꎬ近十年来基于斑马鱼模型的化妆品研究发文量逐年上升ꎬ２０１３ ２０１７年间ꎬ中英文文献产出总量较少ꎬ均少于２０篇ꎬ说明以斑马鱼为模型的化妆品功效研究处于初期探索阶段ꎬ关注度较低ꎮ自２０１８年起ꎬ每年发文总量均不低于３０篇ꎬ整体呈现快速上升趋势ꎬ斑马鱼在化妆品功效研究方面的研究价值已引起重视ꎬ在２０２２年研究热度达到顶峰ꎬ中英文发文量达到７９篇ꎮ虽然２０２３年研究热度稍有降低ꎬ但中英文发文总数也达到６５篇ꎮ随着２０２１年５月１日«化妆品功效宣称评价规范»[２]的正式实施ꎬ预计以斑马鱼为模型进行化妆品的功效评价在未来几年将继续保持高水平研究ꎮ图２㊀文献发文量趋势图Ｆｉｇ.２㊀Ｔｒｅｎｄｃｈａｒｔｓｏｆｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ１.２.２㊀国家合作分析对所获得的英文文献进行国家合作分析ꎬ将发文量在４篇以上的国家计入统计分析ꎬ共纳入１５个国家ꎬ在计入统计的全部的文献中ꎬ我国英文文献发文量共计７９篇ꎬ占比高达３４.０％ꎬ与其他国家对比占据显著优势ꎮ排在第二位的是韩国ꎬ发文量共计４０篇ꎬ占比１７.２％ꎮ印度㊁美国㊁土耳其㊁意大利和沙特阿拉伯ꎬ发文量均多于１０篇ꎬ英文发文量占比分别为７.８％㊁６.９％㊁５.６％㊁５.６％和４.３％ꎮ此外ꎬ英国㊁巴西等国家英文发文量均不足１０篇ꎮ如图３所示ꎬ利用ＶＯＳｖｉｅｗｅｒ绘制国家合作分析图ꎬ展示各国家之间的合作关系ꎬ每个节点代表１个国家ꎬ节点大小代表出现的相对频率高低ꎬ节点间的连线粗细对应国家之间合作关系的强弱ꎬ节点颜色对应发文时间ꎮ从图中可以看出ꎬ近几年我国化妆品领域英文文献发文量在几个国家中居于首位ꎬ与印度㊁美国和巴基斯坦等多个国家都建立了合作关系ꎬ但各国之间联系不够密切ꎬ说明国家间需要加强合作交流ꎬ为化妆品原料发掘与功效评价提供新动力ꎮ图３㊀国家合作网络关系Ｆｉｇ.３㊀Ｔｈｅｎｅｔｗｏｒｋｏｆｉｎｔｅｒ￣ｓｔａｔｅｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅｒｅｌａｔｉｏｎｓ１.２.３㊀关键词共现分析关键词是一篇文章核心和主题的集中体现ꎮ以共现频次表示关键词之间的关联性ꎬ统计该领域的高频关键词ꎬ揭示当前的热点研究方向ꎮ在本文中ꎬ以关键词出现３次为统计分析标准ꎬ每个节点代表一个关键词ꎬ节点间连线代表关键词之间的共现关系ꎬ连线越粗ꎬ代表关键词共同出现的频率越高ꎮ中文文献共纳入１４个关键词ꎬ英文文献纳入４２个关键词ꎬ中文文献分析结果(图４(ａ))显示主要热点方向为美白㊁保湿㊁抗氧化ꎬ热点活性物质为大麻叶提取物和库拉索芦荟花ꎮ由中文关键词共现网络图可知ꎬ目前的化妆品市场中ꎬ人们更愿意相信植物提取物的护肤美妆功能ꎬ对美白和保湿等功效的化妆品需求量正在提高ꎮ英文文献中主要发文方向为抗氧化㊁抗炎与抑制黑色素生成ꎮ由英文关键词共现网络图(图４(ｂ))可知ꎬ氧化应激相关研究是斑马鱼模型在化妆品功效评价中的研究热点之一ꎬ与氧化应激相关的高频关键词有抗氧化剂㊁抗氧化活性㊁抗凋亡等ꎮ关键词节点最多的为化妆品美白功效评价ꎬ可以发现该部分的高频关键词为黑色素生成㊁黑色素瘤和抑制酪氨酸酶活性等ꎮ图４㊀关键词共现网络图Ｆｉｇ.４㊀Ｃｏ￣ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅｎｅｔｗｏｒｋｇｒａｐｈｓｏｆｋｅｙｗｏｒｄｓ２㊀斑马鱼模型在化妆品功效评价中的发展动态２.１㊀斑马鱼模型在美白功效评价中的应用当皮肤受到过度的紫外线照射等外源刺激时ꎬ黑色素生成稳态遭到破坏ꎬ导致黑色素积累ꎬ肤色变黑[７]ꎮ斑马鱼皮肤真皮层含有与人类相似的黑色素细胞ꎬ黑色素形成机理与人类高度一致ꎬ主要由苯丙氨基酸和酪氨酸在酪氨酸酶(ＴＹＲ)的催化作用下氧化生成多巴醌ꎬ并在二羟基吲哚羧酸氧化酶(ＴＲＰ￣１)㊁多巴色素异构酶(ＴＲＰ￣２)等作用下形成黑色素[８￣９](图５(ａ))ꎮ基于斑马鱼模型的美白功效评价方法已得到广泛应用ꎬ主要检测指标包括黑色素生成面积㊁黑色素含量㊁酪氨酸酶活力㊁黑色素合成相关基因表达水平等(图５(ｂ))ꎮ图５㊀斑马鱼模型美白功效评价Ｆｉｇ.５㊀Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇｏｆｗｈｉｔｅｎｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈｍｏｄｅｌ由广州开发区黄埔化妆品产业协会起草的Ｔ/ＨＰＣＩＡ００５ ２０２２团体标准[１０]ꎬ提到了一种以黑色素生成和酪氨酸酶活性评价受试物美白功效的方法ꎬ实验方法是破碎鱼胚ꎬ提取黑色素沉淀ꎬ通过黑色素含量和酪氨酸酶在７４５ｎｍ处的吸光度变化来评价化妆品美白功效ꎮＨａ等[１１]以受精后３５ｈ的黑色素生成水平为指标ꎬ评价了多种１ꎬ３￣噻嗪衍生物的抗黑色素生成作用ꎬ同时通过光谱法测定受精后４８ｈ斑马鱼匀浆蛋白提取物的酪氨酸酶活性和黑色素含量ꎬ发现化合物ＴＺ￣６(４￣羟基￣２ꎬ６￣二甲基￣５ꎬ６￣二氢￣４Ｈ￣１ꎬ３￣噻嗪)能够显著降低斑马鱼胚胎眼睛和背部的黑色素生成ꎬ以剂量依赖性的方式降低总黑色素含量和酪氨酸酶活性ꎬ当ＴＺ￣６浓度达到６００μｍｏｌ/Ｌ时ꎬ对黑色素的抑制作用甚至高于０.２ｍｍｏｌ/Ｌ的苯硫脲(目前实验室公认的斑马鱼黑色素抑制剂)ꎮ金蒙等[１２]通过拍摄斑马鱼侧视图ꎬ检测斑马鱼体内黑色素颗粒的分布与含量ꎬ采用斑马鱼胚胎ＮａＯＨ裂解法测定黑色素相对含量ꎬ多巴氧化法测定酪氨酸酶活性ꎬ在油茶花㊁油茶叶㊁油茶蒲和油茶粕四种油茶副产品提取物中ꎬ筛选到最具美白潜力的油茶花提取物ꎮ此外ꎬ基于此方法还评价了库拉索芦荟花[１３]㊁芦笋[１４]㊁马齿苋多糖[１５]和超分子壬二酸[１６]等的美白功效ꎮＭａｈｅｎｄｒａ等[１７]发现大叶桃花心木种子的乙醇粗提物(ＳＭＣＥ)和己烷馏分(ＳＭＨＦ)能够影响组织蛋白酶表达ꎬ进而影响斑马鱼的色素系统ꎬ研究发现ＳＭＨＦ会抑制肌动蛋白表达ꎬＳＭＣＥ会降低角蛋白４和延伸因子ＥＦ￣１α的含量ꎬ表明ＳＭＨＦ和ＳＭＣＥ通过干扰正常的视网膜发育影响眼部色素沉积ꎮ短期的紫外线暴露会引起皮肤角质层中黑色素的氧化与重新分布ꎮＨｕ等[１８]用紫外线照射处理斑马鱼幼鱼引起黑色素沉积ꎬ结果证实灵芝多糖可以通过抑制ｃＡＭＰ/ＰＫＡ和ＲＯＳ/ＭＡＰＫ信号通路来拮抗紫外线照射诱导的黑色素积累ꎮＪｅｏｎ等[１９]以斑马鱼为模型ꎬ结合细胞实验ꎬ发现姜黄素能够下调黑色素生成相关基因ｔｙｒ㊁ｍｉｔｆ㊁ｔｒｐ￣１和ｔｒｐ￣２的表达ꎬ通过ＭＣ１Ｒ信号通路调节黑色素生成ꎮ２.２㊀斑马鱼模型在保湿功效评价中的应用真皮在表皮下面ꎬ主要由纤维组织㊁基质和细胞组成ꎮ若真皮含水量下降ꎬ皮肤会出现干燥㊁弹性下降㊁皱纹增多等现象ꎮ补水保湿ꎬ不仅是为了补充皮肤表层的水分ꎬ更为重要的是调节渗透压平衡ꎬ维持表皮细胞内环境的稳定状态ꎬ使皮肤保持水润光泽[２０]ꎮ目前常用于研究化妆品保湿功效的斑马鱼模型为２％ＮａＣｌ诱导的斑马鱼尾部渗透压失衡模型(图６)ꎮ图６㊀斑马鱼尾部渗透压失衡模型Ｆｉｇ.６㊀Ｍｏｄｅｌｏｆｏｓｍｏｔｉｃｐｒｅｓｓｕｒｅｉｍｂａｌａｎｃｅｉｎａｚｅｂｒａｆｉｓｈｃａｕｄａｌｆｉｎ㊀㊀何林燕等[２１]用２％的ＮａＣｌ诱导７２ｈ的斑马鱼尾部脱水皱缩ꎬ侧体位拍照后用ＩｍａｇｅＪ统计ꎬ以尾部长度收缩率为评价指标ꎬ发现２５％㊁５０％㊁７５％和１００％的库拉索芦荟叶样品能够显著缓解高渗环境下斑马鱼尾部皱缩ꎬ具有良好的保湿作用ꎮ陈丹丹等[２２]发现山茶花提取物能够改善斑马鱼脱水后尾部长度的收缩率ꎬ说明０.００５％山茶花提取物对ＮａＣｌ诱导的脱水反应有一定的抑制作用ꎮ目前关于斑马鱼在化妆品保湿功效评价中应用的文献较少ꎬ但目前已有相关的团体标准发布ꎮ由山东省科学院生物研究所牵头起草的«基于斑马鱼模型的化妆品保湿功效评价方法»团体标准[２３]中ꎬ提出检测样品处理后斑马鱼尾鳍面积变化ꎬ以及水通道蛋白相关基因ａｑｐ１ａ和ａｑｐ３ａ的表达量变化ꎬ可以作为评价样品保湿功效的方法ꎮ２.３㊀斑马鱼模型在抗氧化活性评价中的应用皮肤的紫外线损伤以及氧化代谢失衡ꎬ会导致皮肤组织和细胞产生氧化损伤ꎬ细胞内活性氧(ＲＯＳ)含量超过基础水平时ꎬ细胞对氧化应激的防御能力减弱ꎬ造成细胞结构破坏ꎬＤＮＡ损伤ꎬ增加基质金属蛋白酶(ＭＭＰ)降解真皮层中的胶原蛋白和弹性蛋白[２４]ꎬ具体表现为皮肤出现皱纹㊁干燥角质化㊁衰老等症状ꎮ目前化妆品抗氧化功效评价的常用模型有紫外光照射模型㊁Ｏ３氧化损伤模型㊁柴油颗粒物模拟的污染损伤模型[２５]ꎮ但目前评价模型多为细胞模型或人体模型ꎬ细胞模型结构简单造成假阳性多ꎬ人体试验成本高㊁志愿者少ꎮ斑马鱼具有完善的ＲＯＳ稳态调控系统ꎬ是适用于抗氧化研究的生物模型[２６]ꎬ常用的检测指标如图７所示ꎮ现行的１０项化妆品抗皱㊁紧致团体标准中指出ꎬ以斑马鱼为模型评价化妆品的抗氧化功效ꎬ主要检测方法包括ＳＡ￣β￣半乳糖苷酶活性检测㊁Ｉ型胶原蛋白基因与弹性蛋白基因表达量检测㊁总自由基清除能力检测等ꎮ图７㊀抗氧化活性评价Ｆｉｇ.７㊀Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙ孙晨等[２７]利用０.５ｍｍｏｌ/ＬＨ２Ｏ２溶液诱导受精后８ｈ的Ｔｇ(ｋｒｔ４:ＮＴＲ￣ｈＫｉｋＧＲ)皮肤荧光斑马鱼氧化损伤模型ꎬ结果发现Ｈ２Ｏ２溶液作用于斑马鱼后ꎬ鱼体抗氧化能力减弱ꎬ角质细胞凋亡ꎬ表现为皮肤表面绿色荧光点数量减少ꎬ紫河车冻干粉(ＰＨＦＡＥ)能够缓解角质细胞的凋亡ꎬＲＯＳ探针检测发现ＰＨＦＡＥ会降低活性氧(ＲＯＳ)含量ꎬ提高斑马鱼抗氧化能力ꎮ张淼等[２８]采用Ｈ２Ｏ２诱导建立斑马鱼衰老模型ꎬ发现岩藻黄素能抑制Ｈ２Ｏ２诱导的斑马鱼胚胎ＳＡ￣β￣半乳糖苷酶活性的增高ꎬ降低丙二醛(ＭＤＡ)含量ꎬ提高超氧化歧化酶(ＳＯＤ)活性ꎬ抑制ＲＯＳ过量增多ꎮ多次传代或诱导衰老的细胞中ＳＡ￣β￣半乳糖苷酶活性很高ꎬ可作为衰老的一种标志物[２９]ꎬＭＤＡ是一种被广泛接受的氧化应激生物标志物[３０]ꎬＳＯＤ具有抗氧化功效ꎬ能够清除ＲＯＳ和氧阴离子自由基(Ｏ２－)ꎬ减少体内氧化组织损伤[３１]ꎮＷａｎｇ等[３２]利用５天㊁１个月㊁４个月㊁１９个月的斑马鱼研究白藜芦醇的抗衰老作用ꎬ发现白藜芦醇能够增加衰老斑马鱼的线粒体自噬ꎬ上调衰老斑马鱼中ｍｆｎ２和ｆｉｓ１以及ｐｉｎｋ１的表达ꎬ下调Ａｋｔ/ｍＴＯＲ通路ꎬ上调ａｍｐｋ㊁ｓｉｒｔ１和ｐｇｃ１α的表达ꎬ激活Ａｍｐｋ/Ｓｉｒｔ１/Ｐｇｃ１α通路ꎮ２.４㊀斑马鱼模型在抗炎活性评价中的应用皮肤敏感可由外部刺激以及内在因素诱发ꎬ是一种涉及皮肤屏障㊁皮肤神经系统㊁皮肤免疫细胞的复杂过程[３３]ꎮ皮肤在抵御内外刺激时ꎬ免疫细胞释放炎症因子ꎬ可能导致色素沉着㊁衰老㊁敏感㊁痤疮等皮肤问题[３４]ꎮ具有舒缓㊁祛痘等功效的化妆品可通过缓解皮肤炎症发挥作用ꎮ斑马鱼的免疫系统与人类高度相似ꎬ对感染和组织损伤的天然免疫反应迅速ꎬ且容易诱发炎症ꎬ是评价化妆品原料㊁配方或产品舒缓和祛痘功效的一种有效手段ꎮ常用的斑马鱼炎症模型的诱导方法包括ＣｕＳＯ４诱导㊁脂多糖(ＬＰＳ)诱导以及断尾(机械损伤)诱导等[３５](图８)ꎮＣｕＳＯ４诱导模型是通过铜离子诱导免疫细胞迁移到神经丘ꎬ引起神经炎症ꎻＬＰＳ诱导模型主要是通过促进巨噬细胞过度分泌促炎因子ꎬ引起全身炎症ꎻ断尾炎症模型是通过物理方式造成局部损伤ꎬ引发免疫细胞的免疫应答ꎬ促使炎症细胞聚集ꎮ图８㊀抗炎活性评价Ｆｉｇ.８㊀Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉ￣ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙＳｕｎ等[３６]利用斑马鱼ＣｕＳＯ４诱导模型和断尾模型研究了枯芩和子芩的抗炎活性ꎬ利用Ｔｇ(Ｌｙｚ:ＥＧＦＰ)斑马鱼转基因系可视化中性粒细胞聚集情况ꎬ以斑马鱼体内炎症细胞迁移数来量化中性粒细胞的迁移程度ꎬ结果表明４０μｍｏｌ/Ｌ的ＣｕＳＯ４会诱导炎症细胞向侧线迁移ꎬ尾部横切会使中性粒细胞和巨噬细胞向损伤区迁移ꎬ枯芩和子芩样品能够明显改善ＣｕＳＯ４诱导的炎症迁移以及创伤引起的伤口剖面炎症ꎬ具有良好的抗炎活性ꎮＺｈｅｎｇ等[３７]利用三种斑马鱼炎症模型研究了中药组方生脉饮的体内抗炎作用及潜在机制ꎬ利用Ｔｇ(ＭＰＯ:ＧＦＰ)斑马鱼可视化中性粒细胞聚集情况ꎬ结果显示生脉饮醇提物能够显著调节ＣｕＳＯ４和ＬＰＳ引起的炎症反应ꎬ改善创伤引起的伤口剖面炎症ꎬ通过ｑ￣ＰＣＲ分析ＮＦ￣κＢ和ＳＴＡＴ３信号传导通路的ｐ６５㊁ＩκＢα和ｓｔａｔ３等相关基因ꎬ表明生脉饮是通过抑制ＮＦ￣κＢ和ＳＴＡＴ３信号通路的激活发挥抗炎作用ꎮ基于斑马鱼炎症模型已发现了如青蒿黄酮类化合物[３８]㊁米糠油提取物[３９]㊁南极地衣甲醇提取物[４０]㊁穿心莲二萜内酯[４１]和佛手柑素[４２]等许多具备抗炎潜在开发利用价值的活性物质ꎮ已发表的文献中ꎬ斑马鱼炎症模型主要用于抗炎活性筛选与机制研究ꎬ用于化妆品功效评价的研究较少ꎮ但目前基于斑马鱼模型抗炎机理评价化妆品舒缓㊁祛痘㊁温和(无刺激)功效的团体标准已有１３项ꎬ标准中应用的模型除了常用的三种抗炎模型外ꎬ还有痤疮丙酸杆菌诱导斑马鱼炎症模型㊁十二烷基磺酸钠(ＳＤＳ)诱发表皮炎症细胞浸润模型等ꎮ２.５㊀斑马鱼模型在其他化妆品功效评价中的应用胶原蛋白作为皮肤内的一种组织结构蛋白ꎬ含有大量亲水性保湿因子ꎬ能够保持皮肤紧致与弹性ꎬ促进皮肤的重建与修复ꎬ但胶原蛋白往往会随着年龄的增长以及过度的紫外线暴露而流失ꎬ从而产生皱纹[４３]ꎮ叶琳琳等[４４]制备了一款含三叶鬼针草提取物的眼膜ꎬ用０.５％的三叶鬼针草提取物处理斑马鱼胚胎２４ｈꎬ发现斑马鱼中与胶原蛋白和弹性蛋白合成相关的基因ｃｏｌ１ａ１ａ和ｅｌｎ１相对表达量均显著上调ꎬ说明含三叶鬼针草提取物的眼膜具备抗皱㊁紧致功效ꎮ斑马鱼再生能力极强ꎬ伤口愈合机制与人类相似[４５]ꎬ是研究化妆品修护功效的潜力模型ꎬ辛建雄等[４６]利用斑马鱼断尾模型以再生尾鳍长度计算修复促进率ꎬ发现１ｍｇ/ｍＬ纤连蛋白冻干粉具有促进斑马鱼尾鳍修复的功效ꎮ何健华等[４７]基于斑马鱼行为学研究方法以５００μｍｏｌ/Ｌ十二烷基硫酸钠作用１５ｍｉｎ诱导建立斑马鱼刺激模型ꎬ以３０ｓ内斑马鱼胚胎的自旋运动频率量化刺激强度ꎬ评价化妆品原料甘草酸二钾和黄芩素的舒缓功效ꎬ结果表明两种物质均能有效缓解斑马鱼胚胎刺激ꎬ具有良好的舒缓功效ꎬ同时利用该模型发现α￣红没药醇㊁丹皮酚㊁积雪草苷和原花青素均具有缓解斑马鱼胚胎刺激的作用ꎮ此外ꎬ基于斑马鱼模型的化妆品控油功效评价已有相关的团体标准发布ꎬＴ/ＱＬＭＺ７ ２０２３团体标准[４８]中提到ꎬ皮脂腺控制人体皮肤油脂分泌主要与５α￣还原酶相关ꎬ检测受精后６ｄ的斑马鱼５α￣还原酶合成的关键基因ｓｒｄ５ａ１㊁ｓｒｄ５ａ２表达量可对化妆品的控油功效进行评价ꎮ３㊀讨论功效是消费者选择化妆品的主要依据ꎬ也是化妆品最主要的生命力ꎮ目前ꎬ化妆品功效宣称已进入强监管时代ꎬ但是化妆品功效评价技术体系仍不完善ꎬ严重阻碍化妆品行业的高质量发展ꎬ亟需加强基础研究ꎬ形成科学㊁合理㊁可重现的功效评价技术体系ꎮ斑马鱼的疾病特征㊁病因以及分子机制等与临床相关且高度保守ꎬ使其在发育生物学和药物临床前研究中被广泛应用ꎮ其中ꎬ抑制黑色素生成㊁抗炎㊁抗氧化㊁抗衰老㊁修复等与化妆品功效密切相关的药理模型ꎬ在药物筛选㊁中药功效评价等领域已得到较为充分的验证ꎮ自２０１８年起ꎬ以斑马鱼为模型的化妆品功效评价相关文献㊁标准等发表量呈快速上升趋势ꎬ成为化妆品功效评价领域的新兴和热点模型ꎮ斑马鱼用于评价美白㊁保湿㊁抗皱㊁紧致㊁祛痘㊁舒缓㊁温和(无刺激)等化妆品功效的３５０余篇文献相继发表ꎮ以斑马鱼为模型ꎬ评价化妆品美白㊁抗皱㊁控油㊁修护等功效的３２项团体标准陆续发布ꎮ我国在该研究领域处于核心地位ꎬ但国家间联系不够紧密ꎮ随着«化妆品功效宣称评价规范»[２]的正式实施以及功效评价技术服务市场需求的不断攀升ꎬ斑马鱼在化妆品功效评价领域的应用会继续保持高水平发展ꎮ本文通过分析斑马鱼模型在化妆品功效评价中的发展动态和趋势ꎬ建议将来加强以下几方面的研究: (１)加强斑马鱼模型与化妆品功效的相关性研究ꎮ目前ꎬ基于斑马鱼模型的化妆品功效评价方法多数由药理活性评价方法转化而来ꎬ例如选用ＣｕＳＯ４㊁断尾机械损伤或ＬＰＳ诱导的炎症模型ꎬ以抗炎活性相关指标评价化妆品祛痘㊁舒缓㊁去屑㊁修护等功效[４９￣５０]ꎮ虽然化妆品可能通过抗炎活性发挥上述功效ꎬ但以抗炎为指标评价化妆品是否具有上述功效具有一定的片面性ꎮ建议根据每个功效的特点ꎬ开发专属性和特异性更强的评价方法ꎮ例如ꎬ以痤疮丙酸杆菌诱导建立斑马鱼炎症模型ꎬ通过检测抗炎活性及抑菌率等指标评价化妆品祛痘功效ꎻ以抑制炎症和缓解刺痛等复合指标评价化妆品舒缓功效等ꎮ(２)完善斑马鱼功效评价体系和技术标准ꎮ斑马鱼模型在化妆品功效评价领域中的应用尚处于起步和快速发展阶段ꎬ国内外学者基于功效评价原理及斑马鱼的特点ꎬ开发了一系列方法但目前仍不完善ꎮ斑马鱼美白功效评价是目前较为成熟的方法之一ꎬ相关文献及标准较多ꎮ较为常用的评价指标包括黑色素生成面积㊁黑色素含量㊁酪氨酸酶活力㊁黑色素合成相关基因表达水平等ꎮ在开展美白功效评价时ꎬ有学者分别选用受精后９㊁２２ｈ或６ｄ等不同鱼龄的斑马鱼ꎬ化妆品处理４５㊁４８㊁７２ｈꎬ从头部图像㊁鱼体侧视图或顶视图等不同角度和区域统计黑色素面积[５１￣５３]ꎮ由此可见ꎬ斑马鱼功效评价方法亟待开展规范化和标准化研究ꎬ以提升化妆品功效评价的准确性和科学性ꎮ(３)加强斑马鱼模型在化妆品研发和生产全过程中的应用研究ꎮ功效评价贯穿于原料开发㊁配方设计与生产工艺优化等化妆品研发的各个环节ꎮ由于化妆品种类较多ꎬ包括水㊁乳㊁霜㊁粉㊁膜等不同剂型[５４]ꎬ斑马鱼模型在各类化妆品功效评价中的适用性以及操作规范等均需进一步研究ꎮ(４)加强功效机制研究㊁技术推广和科普等ꎮ阐明功效机制ꎬ是明确化妆品功效的重要前提ꎮ目前ꎬ斑马鱼模型在功效表型评价方面的应用较多ꎬ但研究化妆品功效机制的报道很少ꎬ有必要进一步结合现代技术加强机制研究ꎮ虽然斑马鱼模型在化妆品功效评价领域知名度和认可度不断提高ꎬ但相比体外细胞和人体试验ꎬ斑马鱼在化妆品功效评价中的应用仍需进一步推广ꎮ尤其应该加强科普工作ꎬ使广大科研工作者和消费者进一步了解斑马鱼模型在化妆品功效评价中的适用性和科学性ꎬ促进斑马鱼模型在该领域的发展ꎮ参考文献:[１]中华人民共和国国务院.化妆品监督管理条例[ＥＢ/ＯＬ].[２０２３￣１２￣２０].ｈｔｔｐｓ://ｆｌｋ.ｎｐｃ.ｇｏｖ.ｃｎ/ｄｅｔａｉｌ２.ｈｔｍｌＺｍＹ４ＭＤｇｗＯＤＥ３ＮｍＱ１Ｙ２ＪｊＺＴＡｘＮｚＺｋＮｚＮｊＺＤＪｌＹＴＡｚＹ２Ｕ.[２]国家药品监督管理局.化妆品功效宣称评价规范[ＥＢ/ＯＬ].[２０２３￣１２￣２０].ｈｔｔｐｓ://ｂａｉｋｅ.ｂａｉｄｕ.ｃｏｍ/ｉｔｅｍ/化妆品功效宣称评价规范/５６７２９５２２?ｆｒ＝ｇｅ＿ａｌａ.[３]ＨＯＵＹＹꎬＬＩＵＸＸꎬＱＩＮＹＬꎬｅｔａｌ.Ｚｅｂｒａｆｉｓｈａｓｍｏｄｅｌｏｒｇａｎｉｓｍｓｆｏｒｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｖａｌｕａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅｆｉｅｌｄｏｆｆｏｏｄｓｃｉｅｎｃｅ[Ｊ].ＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＲｅｖｉｅｗｓｉｎＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＦｏｏｄＳａｆｅｔｙꎬ２０２３ꎬ２２(５):３４８１￣３５０５.ＤＯＩ:１０.１１１１/１５４１￣４３３７.１３２１３. 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转基因动物（transgenic animal）是指基因组中整合有外源基因的一类动物，整入动物基因的外源基因被称为转基因（transgene）。
嵌合体动物（chimera mosaic animal）是只有部分组织细胞的基因组中整合有外源基因的动物，称为嵌合体动物（chimera mosaic animal）。
这类动物只有当外源基因整合入的“部分组织细胞”恰为生殖细胞时，才能将其携带的外源基因遗传给子代，一般用胚胎干细胞法或逆转录病毒载体法制备的第一代转基因动物均为嵌合体动物，而显微注射法得到的第一代转基因动物中，也有20％为嵌合体动物。
转基因动物是指动物所有细胞均整合有外源基因，则具有将外源基因遗传给子代的能力，通常被称为转基因动物。
转基因动物技术是常规分子生物学技术的延伸和拓展，它不仅为人们研究生命科学提供了一个更有效的工具，而且随着转基因动物技术的发展，转基因产品将会广泛渗透到医疗、卫生、农产品和食品中。
转基因技术是生物学领域最新重大进展之一，已能渗透到生物学、医学、畜牧学等学科的广泛领域。
转基因动物已成为探讨基因调控机理、致癌基因作用和免疫系统反应的有力工具。
同时人类遗传病的转基因动物模型的建立，为遗传病的基因治疗打下坚实的理论和实验基础。
转基因技术涉及外源基因的组建、载体、受体、基因导入技术、供转基因胚胎发育的体外培养系统和宿主动物等方面的内容。
鱼类是脊椎动物中最丰富多样性的类群，估计达30000 种。
这种多样性反映在诸如形态、行为、生殖、发育、世代时间和对环境的耐受等各种特征的广泛差异，从而使各种转基因鱼模型的常规制作既是挑战，又是机遇。
有的鱼类的卵是透明的，能直接对发育进行监察，有的情况下对活体内报告基因的表达进行判断。
有些鱼的种类还可能进行其他的遗传操作来诱导单倍体、三倍体和纯合子产雌品系。
尽管鱼的种类很多，但作研究用的却要少的多。
因为野生种群的持续减少，为帮助满足高质量蛋白质需要，水产养殖较常用鱼是鲶鱼、虹鳟鱼、罗非鱼、大西洋鲑和鲤鱼。
斑马鱼早期内胚层发育及其分子调控机制
钱林溪;钟涛;宋后燕
【期刊名称】《生命的化学》
【年(卷),期】2005(25)4
【摘要】斑马鱼已成为研究脊椎动物胚胎发育的理想模式生物,它具有体外受精、发育周期快、胚体透明等优点,此外其胚胎发育过程中的信号通路与哺乳动物有很高的同源性。
该文阐述了斑马鱼早期内胚层发育的过程及其分子调控机制。
【总页数】3页(P297-299)
【关键词】斑马鱼;内胚层;分子调控机制;胚胎发育
【作者】钱林溪;钟涛;宋后燕
【作者单位】复旦大学分子医学教育部重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】R394.1
【相关文献】
1.斑马鱼早期内胚层发育及分子调控 [J], 王淏
2.文昌鱼内胚层发育相关核心调控基因的表达 [J], 何春鹏;管锐;田田;陆祖宏
3.斑马鱼(Danio rerio)早期胚胎发育分子调节机制研究进展 [J], 黄勇;蔡正旺
4.典型酚类污染物内分泌干扰效应研究
——对斑马鱼发育及核受体介导基因调控的分子影响 [J], 宋静文;靳亚茹;刘红玲5.斑马鱼外胚层早期发育及其某些调控机制 [J], 高广文;钟涛;宋后燕
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斑马鱼调控早期生殖细胞发育的分子机制研究斑马鱼是一种被广泛应用于生命科学研究的试验动物，因为其繁殖能力、生长速度、消化系统的相似性和其生命早期发育的透明性。
近年来，随着对斑马鱼基因组的解析，越来越多的科学家选择斑马鱼作为研究对象来深入了解一系列生物学问题。
其中，斑马鱼调控早期生殖细胞发育的分子机制是生命科学界热点之一。
早期生殖细胞是人和动物体内的细胞群体，它们是性生殖的先驱细胞，在胚胎发育过程中形成生殖系统，最终发育成为精子或卵子。
早期生殖细胞发育异常会导致生殖系统的疾病和不育。
斑马鱼之所以成为研究早期生殖细胞发育的理想模式动物，是因为它们早期生殖细胞的发育过程与人类非常相似。
随着分子生物学的迅猛发展，越来越多的分子机制类似于信号调节途径和转录调控元件等被揭示。
这些分子机制调节着早期生殖细胞如何分化定位和是否能成功发育成为精子或卵子。
以下就让我们一起来了解一些调控早期生殖细胞发育的分子机制。
首先，转录因子是调节早期生殖细胞发育的关键因素之一。
转录因子是一种能够在基因排列中寻找目标基因并结合其编码的DNA序列，调控基因表达的分子。
在斑马鱼中，转录因子一般通过维持干细胞免疫表型、调控性别决定和维持早期生殖细胞细胞群的定位等方面发挥作用。
典型反例包括：在统治了自我更新和分裂决策的转录因子nanog的缺失下，斑马鱼早期生殖细胞无法生成。
其次，信号通路是调控早期生殖细胞发育的另一种重要因素。
信号通路是一组分子性的细胞内通讯系统，在细胞内部调节各种生物过程。
在斑马鱼中，信号通路在早期生殖细胞发育中扮演着极其重要的角色。
例如，Wnt信号通路在斑马鱼中调节着早期生殖细胞的迁移和分裂。
这个通路一旦被打乱，就会导致早期生殖细胞的错位迁移和失去其功能，甚至最终导致细胞死亡。
此外，在性染色体上寻找的性别决定因素（即X和Y染色体）也是调节早期生殖细胞分化的关键。
在斑马鱼中，sexl基因编码雄性特定的启动子结合转录因子，在早期生殖细胞发育阶段发挥作用。
1 毕业论文 论文题目： 斑马鱼的内分泌系统的研究 学生姓名： 王华飞 学 号： 1113030228 所在院系： 生物工程学院 专业名称： 生物技术 届 别： 2015届 指导教师： 陈锦云
淮南师范学院教务处 2
目 录 前言：.............................................................. 4 1、作为模式生物斑马鱼的优点......................................... 4 2、斑马鱼内分泌系统研究在医学方面的发展............................. 4 2.1斑马鱼模型能在医学上的应用原因............................... 5 2.2 用斑马鱼突变体构来建疾病模型 ................................ 5 2.3.神经学研究的模式生物 ........................................ 5 3、斑马鱼内分泌系统研究在环境检测中的应用........................... 7 3.1斑马鱼能用与环境检测的原理................................... 7 3.2筛选环境中的内分泌干扰物..................................... 7 4、斑马鱼内分泌系统研究在新药研究方向的应用......................... 8 4.1斑马鱼内分泌系统模型在新药筛选中的应用....................... 8 4.2在动物生殖内分泌学中的应用................................... 9 5、人工内分泌统的基础.............................................. 10 5.1人工内分泌系统的原理........................................ 10 5.2人工内分泌系统在未来研究中的展望............................ 11 参考文献：......................................................... 11 3
斑马鱼内分泌系统的研究进展 学生： 王华飞 （指导老师：陈锦云） （淮南师范学院生物工程学院）
摘要：本文综述了模式生物斑马鱼内分泌系统的研究进展。研究人员把斑马鱼的研究主要归纳为以下几个方面：1.突变体做为模型来研究人类的内分泌疾病;2.了解了其发病机制并且研制出了新药;3.斑马鱼内分泌系统的研究还在环境检测及毒理学方面有着重要的应用;4.最后展望在未来科技中人工内分泌系统。 关键词：斑马鱼；人工内分泌系统；医学；环境；药物
Study on the endocrine system in zebrafish Abstract: This paper reviews the research progress of zebrafish endocrine system. Researchers to zebrafish studies are summarized as the following aspects: 1. The mutant do as a model to study human endocrine disease; 2. Understanding the pathogenesis and the development of a new drug; 3. Zebrafish endocrine system research is still in the environment detection and toxicological aspects of has a important application. 4. Finally, the prospect in the future science and technology artificial endocrine system Keywords: zebrafish; artificial endocrine system; medical environment; drug; 4
前言： 斑马鱼(Danio Rerio) 属于鲤科担尼鱼属，民间俗称花条鱼、蓝条鱼，产于一些亚洲国家西北地区的一种用于观赏的淡水鱼类。斑马鱼它体型小，对生活的水质环境没有特殊的要求，繁殖能力强，成鱼的体长在2~5厘米。它的卵子在体外受精，胚胎能够在体外发育，不仅胚胎透明易观察而且同步生长速度快。由于其胚胎透明在解剖镜下可以观察到胚胎发育的全过程。具备上述优点的斑马鱼作为常用的研究的模式生物已在生物学研究崭露头角，美国俄勒冈大学的科学家George Streisigner是第一个将斑马鱼做为研究遗传材料用于试验中。 斑马鱼模型被广泛的应用于胚胎发育、器官再生、细胞迁移，行为学以及神经性疾病等学术领域。近年来在环境毒理学检测、新药物研发、生物医学等领域的研究中斑马鱼这一优良的实验材料被广泛的运用到实验中。这是因为斑马鱼突变体具有很多优点能使其成为多种疾病模型的研究材料，本文主要记述现有的斑马鱼内分泌系统研究方向及其发展前景。 1、作为模式生物斑马鱼的优点 在最近生物医学研究领域，斑马鱼逐渐的成为研究疾病的明星模型动物。主要的研究学科包括形态发生学、神经科学、发育生物学、器官再生学、衰老机制、新药筛选等等。斑马鱼能成为被广泛用于实验的动物模型是因为其易于饲养、遗传筛选，后代繁育数量大，胚胎具有光透性[1]。斑马鱼作为模式生物其研究结果同样可以适用于人体，是因为人类基因和斑马鱼在某些基因的结构域中有着87%的同源性。用斑马鱼做遗传学科的实验材料比起小鼠和果蝇等模式生物最大的优势是可以获得体内高分辨率的对比图片，但是由于找不到合适转基因工具和酶无法进行基因敲除实验的操作。因为技术方面的落后制约了斑马鱼前期的研究发展。然而，现阶段研究斑马鱼地方法以趋于成熟。例如可以使用斑马鱼品系中的MAZe种和锌指核酸酶(用于基因敲除的高效酶)、脑彩虹转基因技术等新研发出的高科技工具，通过研斑马鱼复杂的发育过程可以破解人类内分泌系统疾病的病因。[2]另外，人类和斑马鱼在遗传途径方面存在着相似性其基因组也有很多的同源性。利用现阶段的技术平台斑马鱼可以带替小鼠等哺乳动物做药物筛选。 2、斑马鱼内分泌系统研究在医学方面的发展 5
2.1斑马鱼模型能在医学上的应用原因 当受精卵在分裂一天后，幼鱼的各个脑室、耳、眼、血细胞、体节等均清晰可见，已形成器官和组织的胚胎和人类的相似。人类某些基因组的结构域和斑马鱼具有高度的同源性。现在实验中通过基因敲除技术获得的一些斑马鱼突变体，其表型和人类疾病的症状相似，从研究中可以破解人类疾病的发病机制。[3] 2.2 用斑马鱼突变体构来建疾病模型 实验表明，Sau型突变斑马鱼品系中被破坏的基因功能主要是合成胚胎红细胞血红素，它的血细胞小，血红蛋白含量低的症状和人类先天性铁珠幼红细胞贫血症相似。yqu突变体中UROD基因被敲除后会使会使大量卟啉堆积在红细胞中，使细胞正常生理功能受到影响，机体表现是对光高度敏感，类似与人的红细胞卟啉症。[4]gdk斑马鱼突变体表现型是动脉不能够正常的形成，会导致血液循环窒息和类似于人类的先天性动脉血管收缩综合症;人类重症肌无力症可以用spe突变体来模拟。当代社会肿瘤疾病也是威胁人类健康的重要因素，斑马鱼突变体同样可以构建肿瘤模型。科研人员通过诱变剂诱导表观基因组发生突变机体的筛选，可获得不同类肿瘤发生的突变体。科学家将小鼠的c-myc基因导入到斑马鱼的胸腺细胞中进行过量表达而制备出和人类败血病症状相似的突变体。[5]诱导斑马鱼的抑癌基因P35突变后,容易诱发斑马鱼的神经鞘肿瘤。在研究中将b-myb基因诱导突变后，再将突变体杂合体用MNNG致瘤剂处理,获得突变体比一般的斑马鱼更易发生殖器官细胞瘤、消化系统瘤、动脉血管瘤等肿瘤。 2.3.神经学研究的模式生物 当证明斑马鱼主要的机体生化调节途径和基因组学数据存在相关关联后，生物神经学实验中广泛用斑马鱼做实验材料。随着基因敲除和转基因技术的应用斑马鱼的品系逐渐的丰富起来。成熟的靶基因定位技术、基因测序和和基因芯片技术的应用，使斑马鱼逐渐成为生物神经学研究的模型。斑马鱼的发育时间短，能在24hpf内形成神经管并且可以在27hpf处产生触感。它能在短时间内发育出不太成熟的神经丛系统。在早期的中枢神经系统中间脑内具有完善的丘脑—垂体结构，端脑发育简单。斑马鱼脑部的中脑皮层是最复杂的脑皮层，运动中枢（后脑）存在菱脑中；另外，斑马鱼脊柱中的脊髓也非常的粗壮。综上所述斑马鱼是研究生物神经学、动物行为学，鱼类发育学的经典模型。如何破解微观基因表达调控 6
和动物宏观行为之间的关系；需要通过研究脊椎动物行为学方面在应对相关的环境所产生的刺激中寻找答案。研究用斑马鱼做为模型的行为学包括觅食、逃避、偏好性、偏侧性。当斑马鱼胚胎发育到17冲时会形成自发摆尾游泳运动,在到27冲时胚胎对外界刺激作出常规的跳跃式游泳行为。刚孵化后的幼鱼会出现爆发式游泳,4dPf后自发的滑行游泳动作出现。到6dP时幼鱼出现形态较为完美的常规游泳行为,并伴随出现目标导向行为的视觉运动反应等等。几天后幼鱼集成视觉、触觉、味觉、身体信号形成更复杂的摄食行为并伴随决定和选择等高级脑功能行为的出现。在研究斑马鱼的运动回路中，斑马鱼发生游泳逃避行为时，脑干中逃避神经网所起作用是收集分析各种传递来的电信号,使机体产生远离刺激源的游泳行为。斑马鱼是如何应对于发生在身体不同部位的刺激尼？它依靠变换不同的游泳方向来调整的,这些发生在不同位置的刺激使位于机体不同位置的亚神经元网被激活，然后位于后脑两侧的M细胞接受刺激后大脑作出调整方向的反应。对自由游泳的斑马鱼进行药物成瘾实验，通过喂食斑马鱼含有安非他明的食物一段时间后，它会产生对某个方向有特殊青睐的游泳行为。在判断斑马鱼是否对其它药物瘾实验中同样可以采用位置偏好这个方法。 现代医学研究中再生医学占有重要的地位，最近几年再生医学研究发展迅猛其相关的产业和学科都成为朝阳产业和前沿科；它再发展中不仅融入了新技术还包含了新的学术思想。其主要涉及再生组织器官技术、克隆技术、异种器官移植、新型生物材料、器官再生药物，干细胞移植学等诸多学科。这也体现了再生医学与其它学科的交叉也表明了再生医学的重要性。科研人员认为在未来的发展研究中再生医学还需要开发新的技术和理论。其研究成果将被用来攻克困扰人类很长时间的疑难病症，诸如遗传疾病、多种恶性肿瘤、异体器官移植，器官坏死的修复治疗带来了新的曙光。因此，为了创造更多的经济价值需要投入更多的资源进行再生医学的研究。组织器官再生现象很久以前就引起了科学家的讨论；在不同种生物之间存在着非常大的差异，例如高等脊椎动物比低等脊椎动物强；同种生物间年龄小的比年龄大的再生能力强。斑马鱼的心脏、肝脏、脊髓等器官具有很强的再生能力。因此，通过斑马鱼器官再生过程的研究将获取大量的有用信息, 在再生医学领域具有里程碑的意义，为破解人类再生缺陷机制打下坚实的基础。科学家将对斑马鱼在心脏、脊髓、肝脏等再生医学研究方面做更深层次的研究。
