纳米金信号放大的SPR适配体生物传感器快速检测血小板源性生长因子的研究

PTCA(PARTB: CHEM. ANAL.)试验与研究DOI ： 10.11973/lhjy-hx202101001基于适配体的纳米金光学探针可视化法快速测定中药材中的啶虫脒尤金坤，魏小红，陈媛媛，叶淑敏，余宇燕，张红艳**(福建中医药大学药学院，福州350122)摘要：以农药啶虫脒适配体作为识别元件，以纳米金作为颜色指示剂，建立了一种基于啶虫脒适配体的纳米金光学探针特异测定中药材中啶虫眯含量的方法。

用甲醇超声提取样品，离心后，上 清液用无水MgS04和iV-丙基乙二胺净化。

纳米金溶液和啶虫脒适配体溶液在室温下反应15 m in后，加入样品溶液，继续反应20 m in,最后加入200 m m o l.L1N aC l溶液，静置5 m in。

在高盐环境中，啶虫眯与适配体发生特异性结合，纳米金表面会因为失去适配体保护而发生聚集，体 系颜色由红色变为蓝色。

采用多功能酶标仪测量上述体系在520,650 n m处的吸光度。

结果显示：啶虫眛的质量浓度在20〜200 pg .L_1内与650 n m处和520 n m处吸光度的比值呈线性关系，检出限为1.13 pg .L M。

对空白中药材进行3个浓度水平的加标回收试验，所得回收率为91.1%〜105%,测定值的相对标准偏差（n=5)为1.1 %~4.8%。

方法用于多种中药材中啶虫脒的测定，在2种中药材中检出了啶虫脒，检出质量分数为329.10，125.22 pg .kg—1。

关键词：纳米金；适配体；可视化法；啶虫脒；中药材中图分类号：0657.32文献标志码：A文章编号：1001-4020(2021)01-0001-06啶虫脒化学名称为N-(N-氰基■乙亚氨基）-N-甲基-2-氯吡啶-5-甲胺，属于氯化烟碱类化合物，是 一种新型杀虫剂，通过作用于昆虫神经系统突触部位的烟碱乙酰胆碱受体，从而干扰刺激的传导，使神 经系统通路堵塞，进而导致乙酰胆碱在突触部位积累，达到杀虫目的，被广泛应用于蚜虫、飞虱、蓟马等 虫害防治中[13]。

金纳米星SERS探针的构筑及其在细胞检测中的应用研究拉曼光谱是一种无损光谱技术,具有指纹识别的特征,能在分子水平获得物质的结构信息。

表面增强拉曼散射(SERS)主要是纳米尺度的粗糙表面所具有的异常光学增强现象,它可以将吸附在材料表面分子的拉曼信号放大102-106倍,与常规拉曼散射相比具有更高的检测灵敏度。

SERS还具有稳定、不易猝灭、不受生物样品自身荧光及水的干扰等特点,非常适于生物样品的检测。

金纳米星是一种由金属核和多个枝角构成的新型纳米材料,不仅在近红外区具有可调制的局域电磁场,而且尖锐枝角的“热点”(Hot Spots)极大地增强了周围电磁场的强度。

本论文基于金纳米星构筑了标记SERS探针(SERS tags)和无标记SERS探针(label-free SERS probes),开展了细胞的SERS检测研究。

本论文具体开展了如下工作：1.采用种子介导生长法制备金纳米星,通过调节反应体系中氯金酸、对苯二酚以及金种子的比例,调控金纳米星的枝角长度和粒径。

利用扫描电子显微镜(SEM)、紫外-可见-近红外(UV-vis-NIR)分光光度计和共聚焦拉曼光谱仪对金纳米星的形貌、光学性质和SERS效应进行了表征,优化反应条件,制得了形貌均一、单分散性好和SERS效应强的金纳米星。

2.以尼罗兰(NBA)和牛血清白蛋白(BSA)分别作为拉曼信号分子和保护层,制备了一种用于细胞成像的标记SERS探针。

聚集实验和CCK-8细胞毒性分析验证了标记SERS探针具有很好稳定性及生物相容性。

将标记SERS探针用于人肺腺癌细胞(A549)和人肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT Ⅱ)的成像。

结果表明标记SERS探针主要分布在细胞质,少量进入细胞核,负载标记SERS探针的细胞产生的拉曼信号强度远高于未负载的细胞。

通过细胞的暗场成像、TEM验证了SERS成像的结果。

3. 以对巯基苯甲酸(4-MBA)作为拉曼信号分子和表皮生长因子受体抗体(anti-EGFR)与金纳米星之间的偶联剂,构筑了一种具有细胞膜靶向功能的标记SERS探针。

纳米金放大SPR技术检测前列腺癌肿瘤标志物free PSA 陈胜华;王文武;向娟【摘要】表面等离子体激元共振（surface plasmon resonance,SPR）是一种基于芯片表面折射率变化的光学检测技术,具有快速、灵敏、免标记等优点,可实时在线地跟踪固液界面反应,在蛋白及核酸等生物分子检测方面具有广阔的应用前景。

但是,传统的SPR检测方法难以检测低分子量、超低浓度的生物分子。

纳米金具有密度大、介电常数大、良好的生物相容性等特点,因此,基于纳米金放大的SPR技术既可以保持生物分子的生物活性,又可以有效突破传统SPR中检测限的限制。

游离前列腺特异性抗原（free prostate-specific antigenf,-PSA）是一种常用于前列腺癌早期诊断的标志物,但由于其在血清中的浓度非常低,给前列腺癌的早期诊断造成困难。

本论文利用基于纳米金放大的SPR技术,设计竞争型免疫模式实现了f-PSA 的超灵敏检测。

%Surface plasmon resonance（SPR） is an optical analytical technique based on the ability to detect dielectric constant changes induced by molecular adsorption on a noble metal film.SPR is attractive owing to several inherent advantages,such as label-free analysis,rapid and high sensitivity and monitor interfacial reactions at solid-liquid interface.Unfortunately,the inability of conventional SPR to measure extremely small changes in refractive index hinders its application in ultra sensitive detection.Gold nanoparticles（AuNPs） have been used to strengthen the SPR signal due to the ability of their high mass,large dielectric constant,and good biocompatibility.Free prostate-specific antigen（f-PSA） is an effective serum marker currently available for the detection of prostate cancer.Detection of low concentration f-PSA isimportant to improve the accuracy of the early diagnosis of prostate cancer.In this paper,competitive immunoassay was designed for ultra sensitive determination of f-PSA based on the technology of AuNPs amplified the SPR response.【期刊名称】《中州大学学报》【年(卷),期】2011(028)005【总页数】4页(P115-118)【关键词】表面等离子体激元共振;游离前列腺特异性抗原;纳米金放大;免疫反应【作者】陈胜华;王文武;向娟【作者单位】中南大学化学化工学院,长沙410083;中州大学化工食品学院,郑州450044;中南大学化学化工学院,长沙410083【正文语种】中文【中图分类】TG1461．绪论肿瘤标志物检测是肿瘤普查、诊断和预后的主要技术手段之一。