ＩＬ－6及ＩＬ－6Ｒ和Ｓｕｒｖｉｖｉｎ在胃癌组织中的表达及意
义
【摘要】目的：探讨胃癌组织中的白细胞介素6(IL-6)及其受体（IL-6R）、survivin的表达及其相互关系。
方法：应用原位杂交技术检测86例胃癌标本中IL-6及其受体mRNA 的表达；应用免疫组织化学方法（S-P法）检测86例胃癌变标本中survivin蛋白的表达。
结果：胃癌组织中Survivin蛋白、IL-6及IL-6R 阳性表达率分别为58.1%（50/86）、74.4%（64/86）、73.3%（63/86）。
Survivin 蛋白与IL-6及其受体的表达与胃癌的组织分化、浸润深度、淋巴结转移密切相关(P＜0.05)，但与患者的性别、年龄差异均无显著性(P＞0.05)；Survivin的表达与IL-6呈正相关(P＜0.01)。
结论: IL-6 及IL-6R和Survivin是反应胃癌发生发展的较好指标；具有抑制胃癌细胞凋亡的作用。
【关键词】胃癌；IL-6；Survivin；凋亡；原位杂交；免疫组织化学
胃癌是我国最为常见的恶性肿瘤之一，其发病机制的研究具有非常重要的意义。
正常胃黏膜上皮细胞存在着程序性死亡(即凋亡)，藉以清除衰老的细胞，维持黏膜细胞的生理平衡，细胞增殖/凋亡比值加大是胃癌发生的重要因素之一。
Survivin又名生存素或生存蛋白，是凋亡抑制蛋白家族的成员，在大多数肿瘤组织中均可检测到生存素的表达。
IL-6是一种多功能的细胞因子，其表达与许多肿瘤的临床生物学行为有着非常密切的关系。
因此，本研究拟分别采用原位杂交技术和免疫组织化学方法，探讨IL-6及其受体和Survivin在胃癌组织中的表达，他们在胃癌发生发展中的作用及相互之间的关系。
1 资料和方法
1.1 一般资料：选取吉首大学附属医院2002年3月～2004年10月间手术切除的胃癌标本86例，男54例，女32例，年龄29～74岁，平均（50.30±6.98）岁，所有标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，常规HE染色，以显微镜观察为准，其中高-中分化腺癌24例，低分化腺癌31例，黏液腺癌20例，印戒细胞癌11例；有淋巴结转移68例，无淋巴结转移18例；浸润到黏膜及黏膜下层4例，肌层23例，全层59例。
另取25例胃癌断端(距癌组织＞5 cm)作为对照(经HE染色镜检证实无癌组织及癌前病变)。
1.2 方法：采用原位杂交方法检测IL-6和IL-6R mRNA的表达情况，IL-6和IL-6R原位杂交试剂盒购自北京中杉生物技术公司，常规设立阴性对照：每批实验用2×SSC代替探针作为阴性对照。
采用免疫组化SP法，切片经常规脱蜡、
水化后，用3%过氧化氢灭活内源性氧化酶，微波抗原修复后，余步骤按试剂盒说明书进行，以PBS代替一抗作为阴性对照，Survivin鼠抗人多克隆抗体，购于福州迈新生物有限公司。
SP试剂盒、DAB 显色剂购于北京中杉生物技术公司。
1.3 结果判定：染色强度记分: 无色计为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；再以阳性细胞数占肿瘤细胞总数的百分比来记分：当阳性细胞数小于总数的5%时计为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，大于50%为3分。
染色强度得分与阳性细胞数得分相乘，0分计为阴性“-”，1～3分计为弱阳性“+”，4～5分计为中度阳性“++”，大于或等于6分计为强阳性“+++”。
1.4 统计学方法：运用SPSS 软件包进行统计学分析。
数据用χ2检验及Spearman相关分析，以P＜0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 IL-6和IL-6R mRNA 在胃癌中的表达：IL-6和IL-6R定位于胞质(见图1)，IL-6在正常胃黏膜、高-中分化腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌、印戒细胞癌中的阳性表达率分别为12%、62.5%、77.4%、80%、81.8%；IL-6R的阳性表达率分别为16%、54.1%、74.2%、85%、90.9%（见表1）。
经统计学分析，IL-6及IL-6R的表达与胃癌的组织分化、淋巴结转移、浸润深度具有密切相关性(P＜0.05)，但与患者的年龄、性别均无关(P＞0.05)。
2.2 Survivin在胃癌中的表达：Survivin在断端胃黏膜上皮中没有表达，但在胃癌组织中，Survivin呈弥漫性胞质着色（见图2），阳性表达率为58.1%(50/86)，Survivin阳性表达与肿瘤组织分化、浸润深度、淋巴结转移等密切相关(P＜0.05)(见表1)，但与患者的年龄、性别均无关(P＞0.05)。
2.3 Survivin与IL-6在胃癌组织中的表达关系：IL-6阳性表达组中，Survivin 阳性表达率60.1%（41/64），IL-6阴性表达组中，Survivin阴性表达率59.1%，差异有显著性(P＜0.05)(见表2)，Spearman等级相关分析表明：Survivin的表达与IL-6呈正相关。
3 讨论
胃癌是最为常见的恶性肿瘤之一，在我国的发病率很高，据统计其发病率居我国消化道肿瘤的第一位，全身肿瘤的第三位。
现已公认，恶性肿瘤的发病与细胞增殖与凋亡失调有密切关系，而细胞凋亡受多种基因的调控，其中Survivin是迄今发现的最强的凋亡抑制因子[1]，近年来，在胃癌的发生发展中的作用已得到广泛关注。
本研究通过免疫组织化学方法对胃黏膜不同病变中Survivin的表达进行检测，探讨其在胃癌发生发展中的变化规律及临床意义，结果显示Survivin 的表达与胃癌的组织分化、淋巴结转移、浸润深度等有关，但与患者性别、年龄均无关。
与孙善明[2]及Miyachi[3]的结果一致，说明在胃癌组织中Survivin的表达上调，能抑制胃癌细胞凋亡，从而促进胃癌发生深部浸润和淋巴道转移。
因此，在临床上，Survivin有望成为胃癌早期诊断的标志物或治疗胃癌的新靶点。
但Tsuburaya等[4]认为Survivin的表达与肿瘤浸润深度呈负相关，而与组织分级、淋巴结转移无关。
其原因可能与survivin 的不同结构形式和作用机制有关，有待于进一步研究。
IL-6是迄今发现的功能最为广泛的细胞因子之一，可以促进多种细胞的增殖和分化，其多能性是由广泛表达于多种细胞表面的IL-6受体所介导的。
IL-6可以通过其受体活化细胞内的一系列信号蛋白分子从而实现IL-6反应基因的诱导表达。
肿瘤的发生发展与许多细胞因子的作用也密不可分，本研究采用原位杂交技术对胃黏膜不同病变中IL-6 及其受体的表达进行检测，探讨IL-6及IL-6R在胃癌发生发展中的作用。
结果显示IL-6 及IL-6R的表达与胃癌的组织分化、淋巴结转移、浸润深度等有关，IL-6与IL-6R的表达有明显一致性，呈协同表达趋势，而且IL-6与Survivin的表达呈明显正相关。
因此，我们推测IL-6可能作为一种自分泌生长因子，通过与自身靶细胞的IL-6R相结合，激活胞内JAK/STAT 信号传导途径[5]，活化Stat3，诱导Survivin的表达上调[6]，促进靶细胞生长乃至过度增殖，抑制其凋亡，从而导致肿瘤形成。
参考文献：
[1] Shin S，Sung BJ，Cho YS，et al. An anti-apoptoctic protein human survivin is a direct inhibitor of caspase-3 and -7[J]. Biochemistry，2001，40(4)：1117.
[2] 孙善明，赵炳燕，钟延美，等.胃癌组织中Survivin、PCNA的表达及临床意义[J].齐齐哈尔医学院学报，2007，28(17)：2056.
[3] Miyachi K，Sasaki K，Onodera S，et al. Correlation between Survivin mRNA Expression and Lymph Node Metastasis in Gastric Cancer [J].Gastric Cancer，2003，6(4)：217.
[4] Tsuburaya A，Noguchi Y，Yoshikawa T.An Anti-apoptosis Gene，Sur-vivin and Telomerase Expression in Gastric Cancer[J]. Hepatogastro-enterology，2002，49(46)：1150.
[5] 俞丽芬，范嵘，孔雷，等.IL-6在人胃癌细胞株AGS中生物学效应及其信号传导途径[J].上海第二医科大学学报，2005，25(6)：545.
[6] Konnikova L，Kotecki M，Kruger MM，et al.Knockdown of STAT3 ex-pression by RNAi induces apoptosis in astrocytoma cells[J].BMC Cancer，2003，3(1)：23.。
