抗菌活性的测定

抗菌测试检测标准
抗菌测试是评价物质抑制或杀灭细菌或其他微生物能力的方法。

下面是常见的抗菌测试方法和相关的标准：
1. 纸片扩散法（Disk diffusion method）：根据CLSI（Clinical and Laboratory Standards Institute）标准进行抗菌活性测试。

该
标准包括了对不同细菌株和药物的测试方法和结果解读标准。

2. 最小抑菌浓度法（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）：根据CLSI或欧洲常用测试方法（EUCAST，European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing）进行细菌的
药敏性测试。

该测试可以确定药物对细菌的最低有效抑制浓度。

3. K-B法（Kirby-Bauer method）：也是一种常用的纸片扩散法，测定细菌对抗生素的药敏感性。

除了上述各种抗菌测试方法外，还有许多其他的标准和指南可供参考，例如：
- 美国药典（USP，United States Pharmacopeia）中的相关方法
规范。

- 欧洲抗菌药物开发委员会（EUCAST）的药敏性测试指南。

- 中国药典（ChP，Chinese Pharmacopoeia）中的抗菌药物相关标准。

这些标准和指南提供了在实验室中进行抗菌测试的具体步骤和结果的解释。

根据不同的应用领域和目的，选择合适的标准进行抗菌测试非常重要。

一、实验目的1. 了解磺胺嘧啶的药理作用和抗菌活性。

2. 掌握磺胺嘧啶的抗菌谱及其对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抑制作用。

3. 研究磺胺嘧啶的抗菌机制及临床应用。

二、实验原理磺胺嘧啶（Sulfadiazine）是一种广谱抗菌药，属于磺胺类药物。

其抗菌机制是通过抑制细菌的二氢叶酸合成酶，从而阻止细菌体内叶酸的合成，进而影响细菌的生长和繁殖。

磺胺嘧啶对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑制作用，主要用于治疗流行性脑膜炎、肺炎、淋病等感染。

三、实验材料1. 实验仪器：显微镜、细菌培养箱、菌落计数器、培养皿、接种环等。

2. 实验试剂：磺胺嘧啶、对氨基苯甲酸、氯化钠、磷酸盐缓冲液、营养琼脂等。

3. 实验菌株：金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌等。

四、实验方法1. 抗菌活性测定（1）将金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌分别接种于营养琼脂平板上，培养过夜。

（2）用无菌接种环分别取适量细菌悬液，均匀涂布于琼脂平板上。

（3）在平板上均匀涂布一定浓度的磺胺嘧啶溶液。

（4）将平板倒置，放入细菌培养箱中培养24小时。

（5）观察并记录磺胺嘧啶对各种细菌的抑制作用。

2. 抗菌机制研究（1）将金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌分别接种于含有对氨基苯甲酸的培养基中，培养过夜。

（2）向培养基中加入一定浓度的磺胺嘧啶，观察并记录细菌的生长情况。

（3）通过比较含有和不含对氨基苯甲酸的培养基中细菌的生长情况，研究磺胺嘧啶的抗菌机制。

五、实验结果1. 抗菌活性测定磺胺嘧啶对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌均有抑制作用，且抑制作用随药物浓度的增加而增强。

2. 抗菌机制研究磺胺嘧啶能够抑制细菌的生长，其抗菌机制可能与抑制二氢叶酸合成酶有关。

在含有对氨基苯甲酸的培养基中，磺胺嘧啶的抑制作用减弱，进一步证实了其抗菌机制。

六、讨论1. 磺胺嘧啶是一种广谱抗菌药，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑制作用。

抗菌测试检测标准摘要：1.抗菌测试的背景和意义2.抗菌测试的主要方法3.我国对抗菌测试的标准要求4.抗菌测试在实际应用中的重要性5.未来抗菌测试的发展趋势正文：抗菌测试是在医学、卫生、日用品、建筑材料等领域中广泛应用的一种检测技术。

它可以用于检测物品或材料是否具有抗菌性能，为产品研发、生产、质量控制等提供科学依据。

目前，抗菌测试的主要方法有抑菌圈法、滤膜法、琼脂平板法等。

抑菌圈法是通过测定测试物质在平板培养基上形成的抑菌圈的大小来判断其抗菌活性。

滤膜法则是将测试物质涂布在滤膜上，通过测定滤膜对细菌的阻拦效果来评价其抗菌性能。

琼脂平板法则是将测试物质加入培养基中，观察细菌在含有测试物质的培养基上的生长情况，从而判断其抗菌效果。

我国对抗菌测试的标准要求非常严格，我国相关标准规定了各种测试方法的实验步骤、评价指标、实验条件等，确保了测试结果的科学性和准确性。

同时，我国还积极参与国际标准的制定，为国际抗菌测试领域的发展做出贡献。

抗菌测试在实际应用中具有重要意义。

例如，在医疗卫生领域，抗菌药物的合理使用对于治疗感染性疾病至关重要。

在日用品领域，抗菌性能是许多产品的重要卖点，如抗菌毛巾、抗菌餐具等。

在建筑材料领域，抗菌性能可以有效防止建筑物内部的细菌滋生，提高居住者的生活质量。

未来，随着科技的发展，抗菌测试将更加精确、快速、便捷。

例如，基于生物传感技术的抗菌测试方法已经取得了突破性进展，有望在不久的将来投入实际应用。

此外，随着大数据和人工智能技术的发展，抗菌测试的数据处理和分析也将更加智能化。

总之，抗菌测试作为一项重要的检测技术，在各个领域具有广泛的应用前景。

平板霉素类似物生物活性评价平板霉素对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和耐万古霉素肠球菌(VREF)等耐药菌具有很好的抑制活性。

抗菌活性的测试主要针对MRSA和VREF进行测定和相比。

最小抑制浓度（MIC）被确定抑制细菌生长的最低浓度。

通过生物活性数据的反馈，进一步指导平板霉素类似物的合成方向，希望获得活性更高、药效活性更好的抗耐药菌抗生素和药物先导化合物。

纸片扩散法测定抗生素敏感试验及MIC：1.原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。

纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。

在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制,从而形成透明的抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度,并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关关系,即抑菌圈愈大,MIC愈小。

2.仪器及试剂仪器：纸片、试管、移液枪、烘箱、培养皿、培养箱、镊子、pH试纸、量筒、天平、高压灭菌锅、三角瓶、打孔器、超净工作台试剂：样品溶液、培养基3.菌液的配置从琼脂平板挑取新鲜分离的菌落数个或从保存的斜面上移种至3～5mL LB肉汤培养液中37℃培养2～8h，以待生长至轻微或中等浊度。

也可直接从孵育18～24h的琼脂平板上挑去纯菌落制成肉汤。

为保证药敏试验的准确度和精度，必须对接种菌液的浓度做相应的控制。

因此，将菌液稀释并校正浊度至0.5麦氏标准浓度，稀释时使用无菌肉汤或生理盐水，此时菌液的浓度约为1.5×108CFU/mL。

4.接种平板在超净工作台中，用量筒量取15mL配置好的灭菌培养基，倒在平板中，冷却凝固。

吸取稀释好的菌液500μL于洁净的灭菌试管中，加入4500μL的培养基，冷却到不烫手，摇匀，均匀倾倒置已凝固的平板表面，放置冷却至凝固。

5.粘贴药敏纸片用纸片分配器或无菌镊子取纸片（直径6mm，厚度1mm），贴于平板表面，并用镊子尖轻压一下纸片，使其贴平。

每张纸片的间距不小于24mm，纸片的中心距平板的边缘不小于15mm。

抗菌检测标准JIS Z 2801解析日本工业标准JIS Z2801是为规范抗菌制品抗菌效果的评价方法而制定的，同时也是目前使用最为广泛的测试评估方法。

该标准只描述抗菌效果和试验方法，通过对抗菌加工制品（包括中间品）表面的细菌进行标准的抗菌试验，来评价其抗菌效果。

其中主要检测细菌的抗菌效果，对于抗真菌和除臭效果的检测，本标准并没涉及。

该方法主要是在涂层表面接种细菌细胞悬液并通过无菌聚丙烯膜或无菌载玻片使其紧密接触一定时间，通常为24h。

只要求（但不限于）测试两种菌株，金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）和大肠杆菌（ATCC 1229）。

抗菌活性值是由抗菌产品和未经处理的产品在24小时接触后的活细胞数的对数差值决定。

该标准里面详细规定了试验检测的适用范围、术语定义、抗菌效果评定、试验方法、试验菌种、药品材料和器具、灭菌方法、细菌培养基、试验步骤、活菌数计算、试验结果记录等方面的内容，既全面且严谨。

测试方法摘要：1.试验片的制备：从制品平整部切取50mm±2mm（厚度10mm 以下）的正方形，作为标准尺寸的试验片，准备6个无加工的试验片和3 个抗菌加工的试验片。

2.在接种过程中，将各个试验片分别放入灭菌的平皿中，实验面朝上。

然后将0.4 毫升的试验菌液滴到每个试验片上，再用薄膜覆盖，压平以使菌液散开。

空白的6 个试验片，使用3 个试验片在接种后立即测定活性细胞数，剩下的3 个在接种24 小时后再测定活性细胞数。

3.以下我们就下图的测试结果，进行分析。

Sample 是抗菌样品，Control Sample 是空白样。

第一个列是测试菌种，第二列是细菌的浓度，第三列就是细菌数，分别是刚接种和24 小时后的细菌数。

通过计算而得的抗菌活性值。

该数值表示为抗菌加工制品和无抗菌加工制品在细菌接种培养后计算的活菌数的对数差值。

这个公式如下:R=log(B/A)-log(C/A)=log(B/C)式中：R:抗菌活性值A:无抗菌加工试验片接种后直接得到的活性细胞数平均值B:无抗菌加工试验片接种后放置24h 得到的活性细胞数平均值C:抗菌加工试验片接种后放置24h 得到的活性细胞数平均值用该公式计算上表中测试金黄色葡萄球菌的抗菌活性值为R=log(7.4*105/1.9*102)=3.6>2，这个结果表示抗菌活性值大于2，通过该菌种的抗菌测试，也就是平常所说的抗菌效率达到99%以上，因为当抗菌活性值为2的时候抗菌率就达到99%。

十三种样品抗真菌活性测定1实验仪器及试剂仪器：ZHJH-C1112C型垂直流超净工作台（上海智城分析仪器制造有限公司）、全自动不锈钢立式电热蒸汽压力消毒器（上海三申医疗器械有限公司）、LRH-250A-G型生化培养箱（广东省医疗器械厂）、FA1004型上皿电子天平（上海天平仪器厂）、96孔板、试管、移液枪（0-200 μL）、接种针、酒精灯等。

试剂：酮康唑（纯度为99.7％，Sigma公司）、甲醇（分析纯，天津科密欧化学试剂公司）、葡萄糖、琼脂、KH2PO4、MgSO4、柠檬酸、VB1。

2实验材料供试菌种：小麦赤霉病菌（Gibberelle zeae）、番茄灰霉疫病菌（Botrytis cinerea）、烟草疫霉菌（Phytophthora nicotianae）和白色念珠菌（Candida albicans），以上菌株均为本实验室保存菌种。

供试化合物：…………………………………………改良CPDA培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，KH2PO4 3 g，MgSO4 1.5 g，柠檬酸0.1 g，VB1 10 mg，蒸馏水1000 mL，pH 6.5（固体培养基加20 g琼脂），121 ℃灭菌20 min。

3实验方法3.1菌种的活化配制CPDA培养基，分装于试管中，每管约5 mL，121 ℃灭菌30 min，取出倾斜放置，自然冷却凝固成斜面。

然后，于无菌条件下用接种针于保藏菌种斜面挑取菌丝体用直线法将菌种接种于晾好的斜面上，于培养箱中28 ℃活化72 h备用。

3.2 菌悬液的制备取活化好的供试菌，接于200mL液体培养基中，于28 ℃、150 rpm摇床培养72 h至菌液浓度均匀，再将浓度均匀的菌悬液与45 ℃固体培养基以1：50的体积比混合均匀，得到供试菌悬液。

3.3 对照药品溶液及样品溶液的制备（1）阳性对照药品为酮康唑，用甲醇将其溶解，配制成1 mg/mL的储备液。

采用2倍稀释法稀释样品，得到一系列浓度对照溶液（250 μg/ mL、125 μg/ mL、62.50 μg/ mL、31.25 μg/ mL、15.62 μg/ mL、7.81 μg/ mL、3.91 μg/ mL）。

（一）常用抗菌、防霉测试方法:
1. JIS Z 2801-2000 塑胶抗菌产品抗菌活性和效果的试验；
2.ISO22196-2007 塑胶抗菌产品抗菌活性和效果的试验；
3.AATCC 100-2004 抗菌整理织物的评价；
4.AATCC 147-2004 抗菌织物性能的评价；
5.ISO 20743-2007 纺织品抗菌活性的测定；
6.JIS Z 1902-2002 纺织品抗菌活性的测定；
7.FZ/T 73023-2006纺织品抗菌性能评价；
8.ASTM E2149-2001 动态条件下抗菌剂活性测定的试验方法
（二）其他防霉测试方法 :
1.JIS L 2911-2000 塑胶制品抗真菌测试方法；
2.AATCC 30-2004 织物及制品的抗真菌性能及评价；
3.ASTM G21-2002 合成高分子材料真菌性能的测定；隆威实业生产并代理品牌纺织品抗菌剂、防霉抗菌剂、抗菌防臭剂、抗菌防腐剂、防霉片、防霉干燥包、防霉干燥棒、防霉纸，产品主要应用化纤、混纺、棉纤维织物面料上，能够通过相应的检测标准.。

一、实验目的1. 学习抗菌中药的提取方法，掌握常用提取溶剂及提取工艺。

2. 了解抗菌中药活性成分的检测方法，评估其抗菌活性。

3. 分析不同提取工艺对抗菌中药活性的影响。

二、实验原理抗菌中药的提取主要是通过溶剂法将植物中的有效成分提取出来。

根据植物成分的溶解性质，常用的提取溶剂有水、醇、酸、碱等。

本实验采用水提醇沉法提取抗菌中药，该方法能较好地保留有效成分，同时降低杂质含量。

抗菌中药的活性成分检测方法有多种，本实验采用抑菌圈法测定抗菌中药的抗菌活性。

该方法简单易行，结果准确可靠。

三、实验材料1. 药材：金银花、黄连、黄芩、连翘等。

2. 试剂：氯化钠、硫酸铜、氢氧化钠、乙醇等。

3. 仪器：电热恒温水浴锅、显微镜、抑菌圈测定仪等。

四、实验方法1. 提取工艺（1）取金银花、黄连、黄芩、连翘等药材，粉碎成粗粉。

（2）将粗粉置于提取罐中，加入适量水，加热提取1小时。

（3）过滤，取滤液，加入乙醇，使醇沉。

（4）过滤，收集沉淀，晾干，得到抗菌中药提取物。

2. 抗菌活性测定（1）将抗菌中药提取物溶解于无菌生理盐水中，配制成一定浓度的溶液。

（2）取无菌琼脂平板，加入金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株，均匀涂布。

（3）将抗菌中药溶液滴加于平板表面，直径约为6mm。

（4）37℃恒温培养24小时，观察抑菌圈大小。

五、实验结果与分析1. 不同提取工艺对抗菌中药活性的影响（1）水提醇沉法：提取得到的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株的抑菌圈直径分别为10mm、8mm。

（2）醇提水沉法：提取得到的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株的抑菌圈直径分别为7mm、5mm。

（3）酸提碱沉法：提取得到的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等菌株的抑菌圈直径分别为6mm、4mm。

结果表明，水提醇沉法提取的抗菌中药活性成分含量较高，抗菌活性较强。

2. 抗菌中药提取物对不同菌株的抗菌活性（1）金黄色葡萄球菌：水提醇沉法提取的抗菌中药提取物在金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为10mm，具有较好的抗菌活性。

一、摘要抗菌肽是一类具有广谱抗菌活性的小分子肽，具有高效、低毒、不易产生耐药性等优点。

本实验旨在通过高效液相色谱（HPLC）技术分离纯化抗菌肽，并通过抑菌圈法测定其抗菌活性。

实验结果表明，成功分离纯化了抗菌肽，并测定了其最小抑菌浓度（MIC）。

二、引言抗菌肽是一类具有广谱抗菌活性的小分子肽，广泛存在于各种生物体内，如昆虫、鱼类、两栖动物和哺乳动物等。

抗菌肽具有高效、低毒、不易产生耐药性等优点，因此在抗菌药物的研究和开发中具有广阔的应用前景。

本实验通过HPLC技术分离纯化抗菌肽，并对其抗菌活性进行测定。

三、实验材料与方法1. 实验材料抗菌肽粗提物：购自某生物科技公司；金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌：购自某微生物研究所；甲醇、乙腈：色谱纯；其他试剂：分析纯。

2. 实验仪器高效液相色谱仪（HPLC）：某品牌；细菌培养箱：某品牌；无菌操作台：某品牌；电子天平：某品牌；抑菌圈测定仪：某品牌。

3. 实验方法（1）抗菌肽的分离纯化将抗菌肽粗提物溶解于适量甲醇中，采用反相高效液相色谱法进行分离纯化。

色谱柱：C18柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：乙腈-水（梯度洗脱）；流速：1.0mL/min；检测波长：215nm。

（2）抗菌活性的测定采用抑菌圈法测定抗菌肽的抗菌活性。

将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌分别接种于琼脂平板上，待菌落长成后，将抗菌肽溶液滴加于平板上，37℃恒温培养24小时，观察抑菌圈的大小。

四、实验结果与分析1. 抗菌肽的分离纯化通过HPLC技术分离纯化抗菌肽，得到单一峰，证明抗菌肽已成功分离纯化。

2. 抗菌活性的测定（1）金黄色葡萄球菌抗菌肽对金黄色葡萄球菌的MIC为10-7mol/L，抑菌圈直径为16mm。

（2）大肠杆菌抗菌肽对大肠杆菌的MIC为10-6mol/L，抑菌圈直径为15mm。

（3）白色念珠菌抗菌肽对白色念珠菌的MIC为10-6mol/L，抑菌圈直径为14mm。

塑料制品抗菌检测标准
塑料制品的抗菌检测标准通常根据使用目的和应用领域的不同而有所差异。

以下是一些常见的塑料制品抗菌检测标准：
1. ASTM E2149-13a：标准测定杀菌或抑制菌生长的塑料制品的活性。

该标准测试方法可用于测定抗菌制剂对塑料材料的抑菌效果。

2. JIS Z 2801：塑料制品中抗菌活性的测定-试验方法和评价。

该标准为日本标准，用于评估塑料制品中添加的抗菌剂对特定菌种的抗菌效果。

3. ISO 22196：表面抗菌性能的测定-聚合物材料和制品。

该标准为国际标准，用于评估塑料制品表面的抗菌性能，并提供了一种测定菌落形成的抑制率的方法。

4. GB/T 27934-2011：固体表面抗菌性能测定-评价塑料材料和制品的抗菌性能。

该标准为中国标准，用于评估塑料制品表面的抗菌性能，并提供了一种测定菌落形成的抑制率的方法。

以上是一些常见的塑料制品抗菌检测标准，具体的标准要根据具体的应用和需求进行选择。