组织学与胚胎学实验指导
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前言
一、组织学与胚胎学实习的目的
实习的目的在于把讲课所学的基本理论与实习标本互相印证,以加深和巩固对理论部分的理解,并通过实习过程培养学生正确的科学作风及基本技术操作,逐步达到独立使用光学显微镜进行观察切片的能力,从而提高独立思考和分析综合的水平,为其他医学课程打下一定的形态学基础。
二、实习的要求
组织学实习主要是以自学为主,进行独立操作的原则,教师只是在实习方法和具体内容上予以指导,为此对参加实习的同学提出以下要求:
1.按时上下课,不得迟到、早退、遵守课堂纪律,穿白大衣。
2.实习前预习“实习指导”,实习时按要求认真观察。
3.用学生证,从显微镜室领取显微镜使用,并填好使用记录本中各项内容。
4.实习时要爱护显微镜及标本,损坏者要求及时报告,并给以赔偿。
5.固定座位,不得随意调动。实习桌少放物件,保持充分的工作空间。
6.班长负责从实验准备室借出切片标本,结束后如数归还。
7.组织学实习的绘图方法,为了加深认识和理解,应掌握绘图显示,镜下观察到的细胞,组织和器官的组织结构并注字。
工具:红蓝彩色铅笔与黑色铅笔各一支,将图画在实验报告纸上。
方法:
1.按照显微示教照片,选择典型。
2.确定画面
3.构画草图
4.着色注字,红色嗜酸性结构,蓝色示嗜碱性结构,黑色铅笔注字。
5.绘图顺序:画管状器官时,应从腔面向外侧画,画实质性器官,应从表面向内部画。
6.在图的左上角,应注明标本名称、取材与染色方法
三、观察切片标本的注意事项
在显微镜下所观察到的形态结构,与理论上所理解不一致时,应从以下几个方面考虑:
1.有机体生活时,机能状态不同:如腺细胞充满分泌物和完全排出后的形态不同,由柱状可以变为扁平或立方。
2.立体和平面,全面与局部和关系:
我们观察的标本是组织,器官的局部一个切面,不同的断面,应仔细体会把切面内容有机联系起来,建立整体观念。
3.在切片制作的过程中常见有以下几种人为现象:
(1)组织的收缩现象:制作切片过程中,应用各种化学药品处理组织,可引起组织的收缩,所以在切片中,常看到一部分组织与另一部分组织分离,或看到细胞与周围有较大的空隙。(2)组织死后变化:动物死亡时间较长,或取材时刀不锋利,使组织受损,组织出现死后变化,在切片中看到细胞结构模糊不清,核固缩等情况。
(3)组织皱褶现象:石蜡切片很薄,在粘片时易皱褶没有展平,经染色后,皱褶处是染色深而厚的一条。
(4)固定液未洗尽,有时存异物,或染色液的渣子。
(5)刀痕,切片刀有缺口,使被切的组织出现直线样空白。
实验一:绪论、细胞学复习
一、光学显微镜的使用方法:
1.拿显微镜时,不能用手随便提起,应以右手握镜臂,左手托镜座,保持镜身平正,轻拿轻放。
2.将显微镜置于身体前方的实验台上,左侧放实习指导,右侧准备绘图。
3.在观察时,调整转椅高度,以便舒适地坐位观察。插上电源,打开显微镜开关,选择适当亮度。
4.观察时把低倍镜(10×接物镜)转到镜筒正下方,将切片至于载物台上,用标本移动器固定,一定要使盖玻片向上,并将要观察之组织对准载物台圆孔的中央,将载物台移到上限。
5.双眼观察,调节接目镜,逆时针转动粗调节器,直至物象清晰为止。切忌不能将载物台从下向上移动调焦。
6.使用高倍镜时(40×接物镜),当低倍镜调清晰后,直接将高倍镜转换过来,用细调节器略加调节就可观察。
7.显微镜观察完毕后,取下切片,将镜头叉开,镜筒降至最低位置关闭开关后,拔出电源插头,送还显微镜室。
8.镜头有灰尘附着时,绝不能用口吹或是用手擦,应以擦镜纸(或细绸布)轻拭之。经常保持显微镜的清洁。
总之,要牢记观察显微镜切片标本的原则,载物台从上向下移动调焦,先用低倍镜观察标本全貌,选择典型,再用高倍镜观察重点微细结构。
二、细胞学复习
(一)标本18 脊神经节
取材:犬
染色:H、E
观察:
[肉眼]椭圆形实质性器官
[低倍镜]外包结缔组织被膜,节内有大小不等的神经细胞称节细胞。其胞体被有髓神经纤维束分隔成群。
[高倍镜]节细胞圆形或卵圆形,胞质嗜酸性,胞质内有细小颗粒状尼氏体,分布均匀嗜碱性。胞核圆形居中,胞膜清晰、核仁明显、染色质着色浅。呈颗粒或线状。节细胞被卫星细胞不完全地包裹。
(二)用幻灯及电镜照片复习细胞超微结构。
绘脊神经节细胞的组织结构图。
实习二、上皮组织
被覆上皮分布在体表或管状,囊状器官的内表面(腔面),在观察上皮时,一般须器官的内表面或外表面寻找。
一、标本56 单层柱状上皮
取材:人的小肠
染色:H、E
观察:
[肉眼]切面为长条状,标本上一侧有指状突起的小肠腔面,在突起上还有更细小的突起叫绒毛。
[低倍镜]绒毛的表面均有一层柱状上皮被复。在柱状上皮之间可看到散在空泡状圆形结构
(有的切面染成深蓝色)即为杯状细胞(腺细胞)。
[高倍镜]选择上皮排列整齐的部位进行观察。
1.柱状上皮细胞:排列成一层,胞质着粉红色。细胞游离面有一薄层,呈暗红色的纵纹样的膜状结构称为纹状缘。胞核位于细胞基底部,为椭圆形,染成蓝紫色,可见核仁。
2.杯状细胞:散在于柱状细胞之间,如高脚酒杯形状,细胞顶端膨大,底部细窄。在顶部圆形部分染色浅(或深蓝色)似空泡状,这是因为杯形细胞产生的分泌颗粒,在制片
过程中被溶解破坏所致。细胞核被挤压在基部,呈倒三角形或不规则形,着色深。
绘单层柱状上皮组织结构图
二、标本31 假复层纤毛柱状上皮
取材:猴气管
染色:H、E
观察:
[肉眼]气管横断面呈椭圆形结构,被复腔面紫色薄层是假复层纤毛柱状上皮。
[低倍镜]在官腔之腔面,假复层纤毛柱状上皮的游离面与基底面都很整齐,但核位置高低不一致,密集着深色。
[高倍镜]上皮细胞密集排列成层,界限不清,大都是柱状细胞,表面有一排细而整齐的纤毛,基底侧细胞核都属于其它类型细胞(梭形细胞、基底细胞)的胞核。由于这些核不在同一平面上。因此显示几层排列的核,似乎是复层,实际上是单层上皮。
上皮细胞的基部与深层结缔组织相接处,有染成粉色均质膜状结构,成为基膜。
三、标本7 复层扁平上皮
取材:人食道
染色:H、E
观察:
[肉眼]食道的横断面,官腔面被覆有染色的上皮为复层扁平(鳞状)上皮。
[低倍镜]复层扁平上皮为多层细胞,各层细胞形态不一,其下方的结缔组织呈不规则的乳头状突起。伸入上皮组织,因此上皮的基底面凹凸不平。
[高倍镜]上皮表层细胞呈扁平形、核亦扁平。上皮依此命名。中间部分细胞为不规则的多角形、核圆。深层(基底)细胞呈单层矮柱状,核卵圆形,胞质中核外染色质多,故为深蓝色。
实习三、结缔组织(一)疏松结缔组织
结缔组织在人体中分布最广,种类也最多,其细胞及间质成分更是十分复杂。因此实习时,必须充分掌握它们的特点及其所执行的功能。重点观察疏松结缔组织。
一、标本26 肠系膜
取材:大白鼠肠系膜
染色:整装铺片。活体注射胎盘蓝、伊红--醛品红染色。
本标本是观察疏松结缔组织中主要是细胞和细胞间质成分,以及它们在自然状态下存在的形式。
观察:
[低倍镜]选择肠系膜较薄的地方,可见到许多纤维与深染的细胞。
纤维:
1.胶原纤维(白纤维):较多,染成粉红色伊红着色,较粗大,弯曲,有分支交织成网。
2.弹性纤维(黄纤维):较少染成紫色,醛品红着色,细而直,有分支吻合成网。
[高倍镜]