分析方法验证方案
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. .word.zl. 异烟肼含量测定分析法验证案
验证原因： 验证类型：
新工程验证
再验证
其它 √ 预验证
回忆性验证
转移验证
√
法描述：
本分析法为中国药典2021版二部法。为确保其检测结果准确，对该分析法的专属性、精细度〔系统精细度、法精细度、中间精细度〕、线性和围、准确度、耐用性进展评价。
验证依据：
中国药典2021年版分析法〔295页〕
验证时间：
2010年07月09日～2010年07月10日
验证工程组成员及职责：
部门 成员 职责
QC 仪器设备确实认
QC 分析法编写
QC 分析测试
QC 数据评估
质量部 审核批准
验证容:- .
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. .word.zl. 序列号 确认测试工程 可承受标准
01
01. 1
01. 2 仪器设备确实认
高效液相色谱仪确实认
天平确实认
符合仪器设备确实认要求
符合仪器设备确实认要求
02
02.1 具体测试容
系统精细度
配置1份异烟肼工作标准溶液，连续进针6次，记录异烟肼峰面积、保存时间。
异烟肼峰面积RSD≤2.0%,保存时间RSD≤2.0%。异烟肼理论塔板数大于4000，拖尾因子在0.9～1.4之间。
02.2 法精细度
平行配制同一批样品的6份样品溶液，每份溶液进样2针，计算样品含量及其相对标准偏差。 样品含量的RSD≤2.0%。
02.3 线性和围
以异烟肼工作标准品溶液的浓度为100%，配制20%、60%、100%、140%、%浓度的工作标准品溶液，每个浓度的标准品溶液进样1次，计算出回归程和相关系数R。 R≥0.999
02.4 准确度
以异烟肼工作标准品溶液的浓度为100%，取同一批样品，配制浓度为80%、100%和120%的样品溶液各3份，每份进样2针。计算其回收率。 该定量法的回收率应为98.0%～102.0%。
02.5 耐用性 理论塔板数大于4000，拖.
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. .word.zl. 配制异烟酸和异烟肼混合溶液，按以下条件改变法，稳定后按顺序进样，计算异烟肼的理论塔板数，混合溶液中异烟酸和异烟肼的相对保存时间RRT。
a. 改变流速为0.9ml/min和1.1ml/min。
b. 改变柱温为23℃和27℃。
c. 改变流动相缓冲液与甲醇配比为83:17和87:13。
d. 同一填料不同色谱柱。 尾因子在0.9～1.4之间,别离度R＞1.5，相对保存时间RRT偏差绝对值不大于20％。
03
03.1
03.2
03.3
03.4 程序及文件
液相色谱仪校正规程
液相色谱仪操作规程
分析天平校正规程
分析天平操作规程
符合要求
符合要求
符合要求
符合要求
验证前准备：
a) 人员培训：
培训人XX 培训时间 培训容
b) 仪器设备、标准品和试剂： .
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. .word.zl. 仪器设备
仪器名称 型号 编号 校验有效期
高效液相色谱仪 MODEL200
标准品和试剂
名称 级别 厂家 批号
c) 样品
名称 厂家 批号
验证过程：
色谱条件
色谱条件 .
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. .word.zl. 色谱柱：agilent ODS-2 长度：250cm ，径：4.6mm ，填料 C18 ，填料粒度：5µm
检测波长：262nm，带宽30
柱温：25℃
进样量：20µl
流速：1.0ml/min
流动相A：0.02mol/l磷酸氢二钠溶液〔用磷酸调pH至6.0〕，流动相B：甲醇
A:B=85:15
停顿时间：12min
1. 系统精细度
1.1. 溶液配制
系统精细度溶液：取异烟肼10mg，置100ml容量瓶中，精细称量，用水溶解并稀释至刻度。
1.2验证过程及结果
系统精细度溶液连续进样6次，记录其异烟肼峰面积、保存时间。
可承受标准：异烟肼峰面积RSD≤2.0%,保存时间RSD≤2.0%。
序号 保存时间(min) 峰面积
1
2
3
4
5
6
RSD%
结论： .
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. .word.zl.
2. 重现性试验〔法精细度〕
2.1. 溶液配制
2.1.1. 对照溶液：取异烟肼工作标准品10mg，精细称量，置100ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。
2.1.2. 法精细度溶液：取异烟肼样品10mg置100ml容量瓶中，精细称定，用水溶解并稀释至刻度。用此法配置同一批号的样品溶液6份。
2.2. 验证程序及结果
工作标准品溶液进2针，样品溶液各进2针。记录异烟肼峰面积，计算样品含量。
可承受标准：异烟肼含量的RSD≤2.0%。
样品批号：
称样量〔mg〕 峰面积
含量％ RSD％
1 2 平均值
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. .word.zl. 结论：
3. 线性和围
3.1. 溶液配制
3.1.1. a供试品溶液：取异烟肼50mg，置100ml容量瓶中，精细称量，用水溶解并稀释至刻度，混匀，即得。
3.1.2. 线性点溶液：精细移取a供试品溶液5ml、2ml、1ml、分别置10ml容量瓶中，用水稀释至刻度，得到浓度约为50ug/ml〔d供试品溶液〕、100ug/ml〔c供试品溶液〕、250ug/ml〔b供试品溶液〕、500ug/ml 〔a供试品溶液〕的线性点溶液，再精细移取1ml b供试品溶液1ml置100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，得到浓度约为2.5ug/ml〔e供试品溶液〕。
3.2. 验证程序及结果
按色谱条件分别对线性点溶液进展分析，每个溶液进样1次。以浓度为X轴，主峰峰面积平均值为Y轴，画出线性图，求出回归程，计算线性相关系数R。
可承受标准：R≥0.999 .
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. .word.zl. 工程 〔X1〕 〔X2〕 〔X3〕 X4〕 〔X5〕
线性点溶液浓度(ug/ml)
异烟肼峰面积
线性围〔ug/ml〕
线性回归程
相关系数R
结论：
4. 准确度
4.1. 溶液配制
4.1.1. 对照溶液：取异烟肼10mg，置100ml容量瓶中，精细称量，用水溶解并稀释至刻度，混匀，即得。
4.1.2. 准确度溶液：以对照溶液浓度为100%，配置80%、100%和120%浓度的准确度溶液。即分别取同一批异烟肼样品8mg、10mg、12mg至100ml容量瓶中，精细称量，用水.
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. .word.zl. 溶解并稀释至刻度。每个浓度的准确度溶液配制3份。
4.2. 验证程序及结果
按照色谱条件分别对对照溶液和准确度溶液进展分析，每个溶液各进2针，按外标法计算准确度溶液中异烟肼含量，计算其回收率。
可承受标准：该定量法的回收率应为98.0%～102.0%。回收率 RSD≤2.0%。
