等奥硝唑氯化钠注射液细菌内毒素检测94··

一、验证目的确保氯化钠注射液细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。

二、适用范围适用于本公司氯化钠注射液的细菌内毒素检测方法。

四、内容1 实验材料及用具1.1电子天平1.2电热恒温干燥箱1.3试管恒温仪1.4水银温度计1.5旋涡混合器1.6鲎试剂供应商:批号：灵敏度：规格：1.7细菌内毒素国家标准品供应商:中国药品生物制品检定所提供批号：效价：1.8细菌内毒素检查用水供应商:批号：规格：1.9实验用具:移液管、凝集管、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、时钟、75%酒精棉、剪刀、砂轮。

2 实验准备2.1玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充分浸泡，然后取出将洗液空干，用生活饮用水将残留洗液彻底洗净，再用注射用水反复冲洗三遍以上，空干后放入适宜的密闭金属容器中，然后放置入电热恒温干燥箱。

2.2除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置电热恒温干燥箱后，将电热恒温干燥箱调至250℃，待电热恒温干燥箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少1 小时。

达到规定时间后，关断电源，待电热恒温干燥箱温度自然降至室温。

在不打开金属容器的情况下，可在两天内使用,否则须再次干烤。

3 具体验证步骤3.1鲎试剂灵敏度复核3.1.1目的考察鲎试剂的灵敏度是否准确，并考察检验人员操作方法是否正确及实验条件是否符合规定。

3.1.2操作方法3.1.2.1细菌内毒素标准溶液的制备将1支细菌内毒素标准品（140EU/支）完全溶解于1ml细菌内毒素检查用水中(置漩涡混合器上混合15分钟)，其浓度为140EU/ml，用这个浓度连续稀释制备1.0EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml (每步稀释过程均应在旋涡混合器上混合30秒钟)四个浓度的细菌内毒素标准浓度。

3.1.2.2鲎试剂灵敏度复核操作取18支（0.1ml/支）待验证灵敏度的鲎试剂，加入适量的细菌内毒素检查用水，复溶备用。

细菌内毒素检测（凝胶法）标准操作目的：规范细菌内毒素的检测操作，保证细胞质量。

范围：适用于所有从治疗中心发放的细胞（包括CIK、DC、干细胞等）内毒素限量检测。

责任人：质量检测人员材料：一、电热干燥箱除外源性内毒素用，温度应能达到180℃。

二、恒温水浴箱或适宜的恒温器（37℃±1℃）。

三、水银温度计，精度在1℃以下，量程不小于50℃。

四、旋涡混合器。

五、可调式移液器六、0.25EU/ml鲎试剂。

七、细菌内毒素工作品。

八、凝胶法细菌内毒素检查用水。

九、实验用具无热原吸头（1000μl、200μl）、带铝盖的凝集管（10mm×75mm）、试管架、计时器、75%酒精棉球、封口膜、剪刀、镊子、砂轮。

所用玻璃器皿使用前须经250℃干烤至少1小时或180℃干烤至少4小时。

操作方法一、取样1、细胞发放前3天，取细胞培养液约2ml，分装于2个带铝盖的凝集管中各约1ml左右，如不立即试验4℃存放（可存放多长时间）。

2、细胞发放当天，取细胞生理盐水混悬液约2ml，分装于2个带铝盖的凝集管中各约1ml左右，如不立即试验4℃存放。

（可存放多长时间）。

3、取样应以无菌操作技术取样，所用器材在使用前应无热原或已去除热原。

二、鲎试剂灵敏度复核鲎试剂灵敏度复核的目的是考察鲎试剂的灵敏度是否正确、考察检验人员操作方法是否正确及实验条件是否符合规定。

在使用一批新的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核实验。

（一）实验操作1、细菌内毒素工作品溶液的制备取细菌内毒素工作品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，开启过程中应防止玻璃屑落入瓶内。

按照工作品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。

然后用倍倍稀释方式进行稀释，即0.5ml各浓度工作品溶液+0.5ml检查用水（以下稀释方式同此法），制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液，即2.0λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核的鲎试剂的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。

氯化钾注射液细菌内毒素检查方法探讨摘要本文用鲎试剂灵敏度的复核，确定其灵敏度，然后进行供试品的干扰实验和供试品的细菌内毒素检查。

结果此种方法可信，并以家兔法作比较，结果一致。

表明细菌内毒素检查法可提高热原检查的效率和灵敏度，对实际工作有一定价值。

关键词氯化钾注射液，细菌内毒素，鲎试剂氯化钾注射液也是临床上的常用药之一，收载于中国药典1995年版二部［1］，并规定其热原检查采用家兔法，热原检查又是本药品的重要检查项。

为此我们采用细菌内毒素检查法检测氯化钾注射液热原的可行性进行了研究，现将实验作以下报道。

1 实验材料1.1 药品氯化钾注射液：规格1 g／10 ml，泗水制药厂生产，鲎试剂（TAL）：灵敏度0.25 EU／ml，批号990824，规格0.1 ml／支，细菌内毒素工作标准品；批号990716，规格10 EU／支，细菌内毒素检查用水（BET）：批号981215，规格5 ml／支。

以上均由湛江安度斯生物有限公司提供。

细菌内毒素国家标准品，批号981，规格9000 EU／支，由中国药品生物制品检定所提供。

1.2 动物新西兰兔由山东省动物实验中心提供2 方法［2］与结果2.1 鲎试剂（TAL）灵敏度的复核按中国药典1995年版二部1998增补本［3］规定方法进行灵敏度复核，将细菌内毒素国家标准品，用细菌内毒素检查用水1 ml先溶解，在旋涡混合器上混合15 min后，然后再用细菌内毒素检查用水稀释成2 λ、λ、1／2 λ及1／4 λ的系列溶液，即0.5、0.25、0.125、0.0625 EU．ml-1浓度的系列溶液，结果(见表1)。

表1 鲎试剂灵敏度复核本批鲎试剂灵敏度0.25 EU．ml-1，经复核灵敏度为0.125 EU．ml-1，在其标示值0.5～2 λ之间，符合中国药典规定。

2.2 干扰试验2.2.1 内毒素理论限值（L）的确定，根据热原检查剂量计算出相应的限值（L)［4］，计算公式为：L＝K／M其中K为家兔和人的致热阈值（5 EU．kg-1），家兔注射剂量3 mg／ml，10 ml．kg-1来计算出氯化钾注射液的内毒素理论限值（L≤0.25 EU／1.5 mg）(或L≤1.25 EU／0.75 mg）。

外翻肠囊法研究奥硝唑对映体在大鼠不同肠段的吸收特性王嫦鹤;刘雪峰;王莉;耿庆光【摘要】目的：考察奥硝唑在大鼠各肠段的吸收特性及奥硝唑两手性对映体在大鼠不同肠段吸收的差异性。

方法采用大鼠外翻肠囊法，以HPLC手性色谱柱法测定奥硝唑在不同肠段的吸收量以及S‐奥硝唑及R‐奥硝唑的同一肠段肠吸收量，并分别计算吸收速率常数（Ka ）和表观渗透系数（Papp ），同法考察了P‐蛋白抑制剂（维拉帕米和环孢素A）对奥硝唑肠吸收特性的影响。

结果奥硝唑在不同肠段吸收均呈线性，符合零级药物吸收速率，吸收趋势为空肠＞回肠＞结肠。

在空肠段两对映体以近于1∶1的比例同时吸收，吸收速率不存在显著差异，随着供试液中奥硝唑质量浓度的上升，Ka呈线性增加（R2＞0．99），Paap基本保持不变，P‐蛋白抑制剂对奥硝唑的肠吸收没有显著性影响（P＞0．05）。

结论奥硝唑在不同肠段的吸收有差异，空肠部位是吸收的最佳部位（P＜0．05），S‐奥硝唑与R‐奥硝唑在肠道中吸收速率不存在显著差异，吸收以被动扩散机制为主，奥硝唑不是P‐糖蛋白的底物。

%Objective To study the absorption characteristics of ornidazole and the absorption difference of ornidazole enantiomers at different intestine segments by isolated in vitro‐everted sac intestine model ,and to investigate the effe ct of P‐inhibitors to ornidazole intestinal absorption .Methods Rat in vitro‐everted intestine sac was used to determine the characteristics of ornidazole . The concentration of ornidazole and its enantiomers at different intestine segments were determined by HPLC equipped with chiral chromatographic column .Then the constant of absorption rate(Ka ) and the apparent permeability coefficient (Papp ) were calculat‐ed .Same method was applied ininvestigating the impact of the P‐glycoprotein inhibitors(verapam il and cyclosporin A) on the ab‐sorption of ornidazole in intestinalsegments .Results The absorption of ornidazole in different intestinal segments showed a linear absorption and complied with the zero order kinetics .The descending order of ornidazole absorption wasjejunum ,ileum and colon . There was no significant difference among the absorption rate of the two enantiomers .Ka increased linearly (R2 >0 .99) and Paap re‐mained unchanged with the rise of concentration for ornidazole in solution at jejunu m .P‐protein inhibitors had no significant effect on the intestinal absorption(P>0 .05) .Conclusion The absorption of ornidazole in different intestinal segments was different and the Ka and Paap at jejunum were significantly higher than that at the other segments of intestine (P<0 .05) .There was no signifi‐cant difference between S‐ornidazole and R‐ornidazole in the intestinal absorption rate and met the passive transport mechanism . Ornidazole would not be the substrate of P‐protein inhibitor .【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2016(031)004【总页数】4页(P371-374)【关键词】奥硝唑;肠外翻;对映体;P-糖蛋白【作者】王嫦鹤;刘雪峰;王莉;耿庆光【作者单位】陕西省食品药品检验所，西安 710061;陕西省食品药品检验所，西安 710061;陕西省食品药品检验所，西安 710061;陕西省食品药品检验所，西安710061【正文语种】中文【中图分类】R945·药物分析·奥硝唑是硝基咪唑类药物，结构中有一个手性中心，故有一对手性对映体。

范围：氯化钠注射液职责：检验室对本规程的实施负责正文：1.性状——本品为无色或几乎无色的澄明液体。

2.鉴别2.1取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。

2.2取本品加醋酸氧铀锌试液生成黄色沉淀。

2.3取本品加硝酸使成酸性后，加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加硝酸，沉淀复生成。

2.4取本品少量，置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热，同时取碘化钾淀粉试纸放置试管口应显蓝色。

3.检查3.1PH值——取本品，依法检查，应为5.0—7.0。

3.1.1执行SOP-QM-418《pH值测定标准操作规程》。

3.1.2执行SOP-EM-304《PHS-3C型酸度计标准操作规程》。

3.2重金属取本品50ml,蒸发至约20ml，放冷，加醋酸盐缓冲液(PH3.5)2ml与水适量使成25ml，依法检查，含重金属不得过千万分之三。

3.2.1执行SOP-QM-402《重金属检查标准操作规程》中的第一法。

3.3不溶性微粒——取本品1瓶,依法检查,应符合规定。

即≥10µm微粒数应≤10粒/ml，≥25µm 的微粒数应≤1粒/ml。

3.3.1执行SOP-QM-412《不溶性微粒检测标准操作规程》。

3.3.2执行SOP-EM-301《GWJ-3型注射液微粒分析仪标准操作规程》。

3.4细菌内毒素——取本品，依法检查，每1ml中含内毒素量不得过0.5EU。

3.4.1执行SOP-QM-415《细菌内毒素检查标准操作规程》。

3.5装量——取本品，依法检查，应符合规定。

3.5.1执行SOP-QM-401《最低装量检查标准操作规程》。

3.6澄明度——取本品，依法检查，漏检率不得大于3﹪。

3.6.1执行SOP-QM-413《澄明度检查标准操作规程》。

3.7无菌——取本品，依法检查，应无菌。

3.7.1执行SOP-QM-414《无菌检查标准操作规程》。

4.含量测定4.1精密量取本品10ml，加水40ml、2%糊精溶液5ml 与荧光黄指示液5--8滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。

氯化钠（供注射用）细菌内毒素检查标准操作规程1.供试品溶液的制备：取本品1g，加12ml细菌内毒素检查用水，振摇使其充分溶解，作为供试品溶液。

2.标准对照溶液的制备：将细菌内毒素工作标准品用1.0ml细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，然后根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），用细菌内毒素检查用水制成2λ浓度的溶液即为标准对照溶液。

每稀释一步均应在旋涡混合仪上混匀30秒。

3.供试品阳性对照液配制：取上述供试品溶液1ml，再加1ml浓度为4λ的标准对照溶液，混匀，即得供试品阳性对照液。

4.取鲎试剂8支(规格0.1ml,灵敏度0.25EU)，其中2支分别注入0.2ml细菌内毒素检查用水，作为阴性对照；其余6支分别注入0.1ml细菌内毒素检查用水,取2支分别加入供试品溶液0.1ml,作为供试品组；取2支分别加入供试品阳性对照液0.1ml,作为供试品阳性对照组；其余2支分别加入浓度为2λ的标准对照溶液0.1ml,作为阳性对照组。

5.保温：封闭管口，将溶液轻轻混匀后，垂直放入37℃±1℃的恒温水浴锅中，保温60±2分钟，然后取出观察结果。

6.确认结果判定：将安瓿从恒温水浴锅中轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。

保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。

若阴性对照管均为阴性，供试品阳性对照管均为阳性，阳性对照管均为阳性，试验有效；供试品管均为阴性，判供试品符合规定；供试品管均为阳性，判供试品不符合规定；供试品管中1管为阴性，1管为阳性，需进行复试。

7.标准：每1g含细菌内毒素不得超过5EU。

一、验证目的确保氯化钠注射液细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。

二、适用范围适用于本公司氯化钠注射液的细菌内毒素检测方法。

四、内容1 实验材料及用具1.1电子天平1.2电热恒温干燥箱1.3试管恒温仪1.4水银温度计1.5旋涡混合器1.6鲎试剂供应商:批号：灵敏度：规格：1.7细菌内毒素国家标准品供应商:中国药品生物制品检定所提供批号：效价：1.8细菌内毒素检查用水供应商:批号：规格：1.9实验用具:移液管、凝集管、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、时钟、75%酒精棉、剪刀、砂轮。

2 实验准备2.1玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充分浸泡，然后取出将洗液空干，用生活饮用水将残留洗液彻底洗净，再用注射用水反复冲洗三遍以上，空干后放入适宜的密闭金属容器中，然后放置入电热恒温干燥箱。

2.2除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置电热恒温干燥箱后，将电热恒温干燥箱调至250℃，待电热恒温干燥箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少1 小时。

达到规定时间后，关断电源，待电热恒温干燥箱温度自然降至室温。

在不打开金属容器的情况下，可在两天内使用,否则须再次干烤。

3 具体验证步骤3.1鲎试剂灵敏度复核3.1.1目的考察鲎试剂的灵敏度是否准确，并考察检验人员操作方法是否正确及实验条件是否符合规定。

3.1.2操作方法3.1.2.1细菌内毒素标准溶液的制备将1支细菌内毒素标准品（140EU/支）完全溶解于1ml细菌内毒素检查用水中(置漩涡混合器上混合15分钟)，其浓度为140EU/ml，用这个浓度连续稀释制备1.0EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml (每步稀释过程均应在旋涡混合器上混合30秒钟)四个浓度的细菌内毒素标准浓度。

3.1.2.2鲎试剂灵敏度复核操作取18支（0.1ml/支）待验证灵敏度的鲎试剂，加入适量的细菌内毒素检查用水，复溶备用。

奥硝唑氯化钠注射液以下内容仅供参考，请以药品包装盒中的说明书为准。

妊娠：前三个月慎用哺乳：慎用儿童：儿童慎用，建议3岁以下儿童不用奥硝唑氯化钠注射液说明书【药品名称】通用名称：奥硝唑氯化钠注射液英文名称：Ornidazole and Sodium Chloride Injection汉语拼音：Aoxiaozuo Luhuana Zhusheye【成分】活性成：奥硝唑辅料：氯化钠、枸橼酸、注射用水【性状】本品为无色至微黄色的澄明液体。

【适应症】1．用于治疗由脆弱拟杆菌、狄氏拟杆菌、卵园拟杆菌、多形拟杆菌、普通拟杆菌、梭状芽胞杆菌、真杆菌、消化球菌和消化链球菌、幽门螺杆菌、黑色素拟杆菌、梭杆菌、CO2噬织维菌、牙龈类杆菌等敏感厌氧菌所引起的多种感染性疾病，包括：(1)腹部感染：腹膜炎、腹内脓肿、肝脓肿等；(2)盆腔感染：子宫内膜炎、子宫肌炎、输卵管或卵巢脓肿、盆腔软组织感染、嗜血杆菌阴道炎等；(3)口腔感染：牙周炎、根尖周炎、冠周炎、急性溃疡性龈炎等；(4)外科感染：伤口感染、表皮脓肿、褥疮溃疡感染、蜂窝组织炎、气性坏疽等；(5)脑部感染：脑膜炎、脑脓肿；(6)败血症、菌血症等严重厌氧菌感染等。

2．用于手术前预防感染和手术后厌氧菌感染的治疗。

3．治疗消化系统严重阿米巴虫病，如阿米巴痢疾、阿米巴肝脓肿等。

【规格】100ml:奥硝唑0.25g与氯化钠0.9g【用法用量】静脉滴注，每瓶滴注时间不少于30分钟，用量如下：1．术前术后预防用药：成人手术前1-2小时静滴1g奥硝唑，术后12小时静滴0.5g，术后24小时静滴0.5g。

2.治疗厌氧菌引起的感染：成人起始剂量为0.5-1g，然后每12小时静滴0.5g。

3．治疗严重阿米巴病：起始剂量为0.5-1g，然后每12小时0.5g，连用3-6天。

4．儿童剂量为每日20-30mg/kg体重，每12小时静滴一次，滴注时间30分钟。

【不良反应】本品通常具有良好的耐受性，用药期间会出现下列反应：1．消化系统：包括轻度胃部不适、胃痛、口腔异味等；2．神经系统：包括头晕及困倦、眩晕等；3．过敏反应：如皮疹、瘙痒等；4．其他：白细胞减少等。

奥硝唑氯化钠注射液细菌内毒素检测
丁青龙;李莹;周其;蔡春亚
【期刊名称】《抗感染药学》
【年(卷),期】2008(5)2
【摘要】目的:考察奥硝唑氯化钠注射液的细菌内毒素检查法。

方法:采用不同厂家、不同批号、不同灵敏度的鲎试剂对奥硝唑氯化钠注射液进行干扰试验。

结果:奥硝
唑氯化钠注射液经7倍稀释后,用鲎试剂浓度(C)为0.25 Eu/mL,对细菌内毒素检查
无干扰。

结论:奥硝唑氯化钠注射液的热原检查可以被内毒素检查法取代。

【总页数】2页(P94-95)
【关键词】奥硝唑;鲎试剂;细菌内毒素
【作者】丁青龙;李莹;周其;蔡春亚
【作者单位】全军心理疾病防治中心药物研究室;南京中医药大学
【正文语种】中文
【中图分类】R97
【相关文献】
1.奥硝唑氯化钠注射液的细菌内毒素检测 [J], 孙伟
2.奥硝唑氯化钠注射液细菌内毒素检查法的实验 [J], 林瑞来;罗丽英
3.左旋奥硝唑氯化钠注射液细菌内毒素检查 [J], 陈忆冰;李健和;黎银波;彭六保
4.奥硝唑氯化钠注射液细菌内毒素的检测 [J], 奉涛;邓中平
5.奥硝唑氯化钠注射液细菌内毒素的检测 [J], 尹银嘉;方淑贤;杜光
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