辛基酚、壬基酚联合毒作用对雄性大鼠精子影响的实验研究

龙源期刊网 雌二醇强化壬基酚雄性毒性机理研究作者：张盼月张光明郎朗来源：《湖南大学学报·自然科学版》2012年第11期摘要：为了揭示壬基酚进入生物体内后对雄性的毒性作用机制，以典型天然激素雌二醇（E2）为代表，以大鼠睾丸支持细胞为对象，研究了壬基酚与E2共存时对雄性生殖细胞的毒性并考察了其作用机理.研究结果表明，壬基酚与E2均能促进睾丸支持细胞增殖，表现出较强的雄性毒性，混合后呈现明显的强化效应，比二者单独作用高.对细胞中特征蛋白波形蛋白的检测发现，E2不影响波形蛋白的表达，壬基酚可提高其表达，而混合物可明显提高其表达.机理分析表明，在丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路的3条通路中，ERK通路是E2强化壬基酚毒性的关键通路.壬基酚降低ERK蛋白的表达，E2轻微降低ERK蛋白的表达，混合后反而诱导ERK蛋白的表达.壬基酚能够显著诱导p JNK蛋白、p38蛋白的表达，但与E2混合后，诱导作用减弱.转录因子分析表明，由于ERK通路被激活，壬基酚和E2混合物可极大地强化转录因子c Myc蛋白和cyclinD1蛋白的表达.关键词：雌二醇（E2）；壬基酚；睾丸支持细胞；波形蛋白；ERK通路；毒性中图分类号：X703.1 文献标识码：AMechanisms of Enhancing Male Toxicityof Nonylphenol by 17Estradiol环境激素是一类特殊污染物质，它们进入生物体后，激活或抑制内分泌系统的功能，能引起生殖系统损伤和神经损伤、诱发多种癌症、破坏免疫系统[1].近年来，大量文献报道人类的生育能力尤其是男性生育能力下降明显，男性不育和生殖系统发育异常明显增加[2].研究表明，这些现象的发生均可能与各种环境激素的存在有关[1].我国环境污染较为严重，多地均检出多种环境激素[3]，而男性不育症在我国也持续增长.其中壬基酚（Nonylphenol，NP）是广泛检出的一种环境激素[4]，其内分泌干扰毒性已被大量的野外观察和实验研究证实，能够对雄性动物产生一系列生殖毒性[5-6]，但具体机制仍然不是很清楚.湖南大学学报（自然科学版）2012年第11期张盼月等：雌二醇强化壬基酚雄性毒性机理研究生物体内含有天然激素，环境中的壬基酚进入生物体后，与天然激素共同发挥作用，可能存在拮抗、协同和叠加等效应.因此，将壬基酚与天然激素混合，研究其复合效应，对了解壬基酚的雄性毒性具有重要意义，而相关的报导基本是空白.本文选择雌二醇（E2）作为天然激素的代表，E2是典型的雌激素，是人类雌激素中生物活性最强的一种；选择大鼠作为生物体的代表，大鼠是毒理研究中常用的生物.将壬基酚与E2混合，考察其雄性毒性，并对其作用机制进行探讨.1 材料与方法。

雌二醇强化壬基酚雄性毒性机理研究张盼月;张光明;郎朗【期刊名称】《湖南大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(039)011【摘要】为了揭示壬基酚进入生物体内后对雄性的毒性作用机制,以典型天然激素雌二醇(E2)为代表,以大鼠睾丸支持细胞为对象,研究了壬基酚与E2共存时对雄性生殖细胞的毒性并考察了其作用机理.研究结果表明,壬基酚与E2均能促进睾丸支持细胞增殖,表现出较强的雄性毒性,混合后呈现明显的强化效应,比二者单独作用高.对细胞中特征蛋白-波形蛋白的检测发现,E2不影响波形蛋白的表达,壬基酚可提高其表达,而混合物可明显提高其表达.机理分析表明,在丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的3条通路中,ERK通路是E2强化壬基酚毒性的关键通路.壬基酚降低ERK蛋白的表达,E2轻微降低ERK蛋白的表达,混合后反而诱导ERK蛋白的表达.壬基酚能够显著诱导p-JNK蛋白、p38蛋白的表达,但与E2混合后,诱导作用减弱.转录因子分析表明,由于ERK通路被激活,壬基酚和E2混合物可极大地强化转录因子c-Myc蛋白和cyclinD1蛋白的表达.%In order to examine the male toxicity of nonylphenol after it enters the body, the estrogenci-ty and potential mechanisms of mixture of nonylphenol and 17-Estradiol (E2) , a typical natural estrin on rat sertoli cells, was studied. The results indicated that nonylphenol and E2 could promote the growth of sertoli cells, showing certain male toxicity, and their mixture showed significant enhancement effect. Furthermore, E2 did not impact the expression of vimentin protein, a key protein in sertoli cells. Nonylphenol increased its expression, and themixture significantly increased its expression. Mechanism study showed that, among the three pathways of MAPK channel, ERK protein was the key for E2 enhancing nonylphenol male toxicity. Both nonylphenol and E2 decreased the expression of ERK protein, but the mixture increased its expression. Nonylphenol noticeably promoted the expression of p-JNK protein and p38 protein,which was weakened when mixed with E2. Consequently, as the result of ERK channel activation, the mixture of nonylphenol and E2 significantly increased the expression of transcription factors, c-Myc proteins and cyclinDl proteins.【总页数】4页(P78-81)【作者】张盼月;张光明;郎朗【作者单位】湖南大学环境科学与工程学院,湖南长沙 410082;中国人民大学环境学院,北京100872;哈尔滨商业大学生命与环境科学研究中心,黑龙江哈尔滨150028【正文语种】中文【中图分类】X703.1【相关文献】1.壬基酚对雄性孔雀鱼的慢性毒性效应 [J], 陈吉华;付荣恕2.辛基酚、壬基酚联合毒作用对雄性大鼠精子影响的实验研究 [J], 陆璐;杨晓燕;李晖3.壬基酚对雄性黑斑蛙生殖毒性的研究 [J], 黄敏毅;李妍姝;穆青;段仁燕;董佳佳4.壬基酚对三角褐指藻的毒性效应及其机理 [J], 李根;管超;安民;段舜山5.壬基酚对雄性仔鼠生殖毒性的研究 [J], 许洁;范奇元;周远忠;胡斌丽;申旭波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

14生物技术世界 BIOTECHWORLD1 BPA 的基本性质及毒性双酚A学名2,2-二(4-羟基苯基)丙烷(BPA),添加BPA可以使塑料产品具有无色透明、轻巧和防冲击等特性,目前主要存在太空杯、塑料水杯、一次性纸杯等[1]。

BPA在高温及酸碱环境中易从食品包装材料和塑料容器等中溢出,渗入食品和饮料,进而由消化道吸收入血[1]。

BPA的毒性作用有潜伏期长、剂量小的特点,其化学结构与雌激素类似,可与雌激素受体结合发挥一定的雌激素样作用及抗雄激素样作用[2]。

动物实验显示,BPA对胚胎发育、生殖系统、内分泌均有毒性影响,并可能具有遗传毒性。

2 BPA 的毒性实验研究2.1 对睾丸组织细胞的影响①对生精细胞的影响Aikawa给大鼠皮下注射BPA10周后,观察到精子畸形率升高,活动能力下降。

给CD－1大鼠注射则发现精子细胞顶体颗粒和细胞核发生了异常改变,精子穿越透明带的能力受损,畸形率升高,提示生育力降低的组织学依据;支持细胞和精子细胞间的基质特化结构也部分或全部消失。

当给孕期母鼠喂食BPA后,其雄性仔鼠成熟后精曲小管上皮组织形态异常,精曲小管网腔变窄,生精细胞在精曲小管上皮中异常分布,小管中心出现非结晶体及致密细胞的沉积,同时成熟精子细胞数减少[3]。

②对间质细胞的影响NTumba-BynT等学者[4]研究人类胎儿期和小鼠胎儿期的睾丸间质细胞暴露于不同浓度的BPA中的作用,发现10-8M浓度的BPA 即可抑制人类睾丸间质细胞分泌睾酮,从而抑制生精细胞的生精作用,但10-5M浓度的BPA才可对胎儿期的小鼠起作用。

BPA还可降低人类睾丸内胰岛素样蛋白(INSL3)基因的表达,而胰岛素样蛋白可以通过激活cAMP途径促进间质细胞分泌睾酮。

③对支持细胞的影响将SPF级雄性SD大鼠的睾丸支持细胞制成细胞悬液,设不同浓度BPA染毒组,观察睾丸支持细胞的增殖、细胞周期情况。

结果显示,随着BPA染毒剂量增加,睾丸支持细胞存活率降低;G0/G1期细胞构成比增加,S期和M期细胞构成比降低,PCNA(一种核蛋白,能与DNA多聚酶σ结合)的表达受到抑制,提示支持细胞的DNA合成受阻,DNA复制的活跃程度减弱;Vimentin的表达也受到抑制说明BPA可以干扰细胞骨架的功能。

壬基酚对雄性大鼠生精功能及相关激素和酶的影响冯凯琳;张鹏洲;申去非;陈莉;冯欲静;张莉【期刊名称】《解放军药学学报》【年(卷),期】2012(28)3【摘要】Objective To study the effect of nonylphenol used at various doses on the spermatogenesis function, serum hormone and testis enzyme of male rats. Methods 48 SD male rats were randomly divided into four groups-, control group, high-dose nonylphenol (200 mg/kg) group, middle-dose nonylphenol (100 mg/kg) group and low-dose nonylphenol (50 mg/kg) group. And then the rats had their stomachs perfused nonylphenols oil solution for 28 straight days,and the control group rats with oil solution. 28 days later,rats were killed and the serum sample was taken to assay levels of T,CORT,FSH and LH by radioimmunoassay. The testis and epididymis of rats were removed quickly. The right testis was used to prepare the tissue homogenate. The level of SOD,MDA,GSH and LDH was determined with spectrophotography. The left testis was used to analyze the percentage of chromosone aberration of primary spermatocytes. Results After 28 days,compared with control group,T, FSH and LH levels of the serum of nonylphenol rats decreased and the hormone level of high-dose (200 mg/kg) group decreased significantly ( P < 0.05). With the dosage increase, the activity of SOD and GSH, the level of MDA increased, so did the activity of LDH. The sperm counts and activityrate of 200 mg/kg nonylphenol rats were below those of the control group. The rate of sperm malformation and chromosome aberration of primary spermatocytes was enhanced markedly. Conclusion Nonylphenol has obvious reproductive toxicity,associated with the reduced level of T,FSH and LH,and the increased activity of GSH and LDH.%目的初步研究不同剂量壬基酚对雄性大鼠的生精功能及血清激素和睾丸内相关酶的影响.方法雄性大鼠48只,随机分为4组,即对照组、壬基酚低、中、高( 50、100、200 mg/kg)剂量组,对照组每日灌胃给予植物油(0.15ml/100 g),给药组每日灌胃给予壬基酚油溶液,连续28 d.染毒28 d后处死大鼠,取血,放免法检测血清睾酮(T)、皮质酮(CORT)、促卵泡刺激素(FSH)以及黄体生成素(LH)水平.摘取右侧睾丸制备组织匀浆,采用分光光度法测定SOD、MDA、GSH以及LDH的活性.取左侧睾丸分析初级精母细胞染色体畸形率.取附睾,检测附睾尾精子数量、精子活动率和精子畸形率.结果染毒28 d后,与对照组相比,壬基酚组大鼠血清T、FSH和LH水平降低,其中高剂量组降低显著(P＜0.05).CORT升高,但无显著性差异.另外,随染毒剂量增加,大鼠睾丸组织SOD活力、GSH和MDA水平呈现逐渐上升趋势,各染毒组LDH活性升高.壬基酚组大鼠精子数、精子活动率显著低于对照组,精子畸形率显著高于对照组,初级精母细胞染色体畸变率高于对照组.结论壬基酚对雄性大鼠有明显的生殖毒性.其可能通过降低大鼠血清T、FSH和LH水平,增加睾丸组织GSH和LDH活力产生作用.【总页数】4页(P189-192)【作者】冯凯琳;张鹏洲;申去非;陈莉;冯欲静;张莉【作者单位】300162 天津,武警后勤学院附属医院放射科;300162 天津,武警后勤学院预防医学系生药学与药剂学教研室;300162 天津,武警后勤学院预防医学系生药学与药剂学教研室;300162 天津,武警后勤学院预防医学系生药学与药剂学教研室;300162 天津,武警后勤学院预防医学系生药学与药剂学教研室;300162 天津,武警后勤学院预防医学系生药学与药剂学教研室【正文语种】中文【中图分类】R965【相关文献】1.壬基酚胁迫对幼龄泥鳅雌激素活性及抗氧化酶活力的影响 [J], 戚珍珠;雷忻;王文强;张静静;田鹏飞;王萌;行文珍2.辛基酚、壬基酚联合毒作用对雄性大鼠精子影响的实验研究 [J], 陆璐;杨晓燕;李晖3.酒精对雄性大鼠生精功能和生殖激素的影响 [J], 解丽君;赵松;胡文媛4.双酚A与壬基酚混合染毒对小鼠生精功能的影响 [J], 崔金山;张玉敏;段志文;李海山5.环境雌激素壬基酚对小鼠生精功能的影响 [J], 刘艳;崔金山;张玉敏;段志文;李海山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

壬基酚对环境中动物危害的研究进展胡燕金;许梦漾;龚剑;王超;祝丽娜【期刊名称】《环境科技》【年(卷),期】2012(025)004【摘要】近年的研究发现,环境中的NP污染日趋严重.作为一类内分泌干扰物,NP 对水陆环境中的动植物都有毒害性并产生内分泌干扰效应,对人类健康也有不可忽视的影响.目前关于NP对动物危害的研究已广泛开展起来,研究对象主要集中在鱼类、两栖类和实验室动物上.由于其作用机理的复杂性和现有分析方法的局限性,关于NP对人体的潜在危害的研究还不够深入.因此,在控制NP的环境释放放和寻找其替代品的同时,仍需加强该类化合物对动物和人的作用机理研究,进一步评价其产生的生态风险.【总页数】6页(P53-58)【作者】胡燕金;许梦漾;龚剑;王超;祝丽娜【作者单位】广州大学环境科学与工程学院广州市污染控制与同位素重点实验室珠江三角洲水质安全与保护重点实验室,广东广州 510006;广州大学环境科学与工程学院广州市污染控制与同位素重点实验室珠江三角洲水质安全与保护重点实验室,广东广州 510006;广州大学环境科学与工程学院广州市污染控制与同位素重点实验室珠江三角洲水质安全与保护重点实验室,广东广州 510006;广州大学环境科学与工程学院广州市污染控制与同位素重点实验室珠江三角洲水质安全与保护重点实验室,广东广州 510006;广州大学环境科学与工程学院广州市污染控制与同位素重点实验室珠江三角洲水质安全与保护重点实验室,广东广州 510006【正文语种】中文【中图分类】X5【相关文献】1.壬基酚在环境中的分布与迁移研究进展 [J], 王磊;安乐生;余光明;赵宽2.环境中壬基酚聚氧乙烯醚及其降解产物的研究进展 [J], 何站敏;焦竑南;谢元华;朱彤;刘闯;杨肖3.壬基酚在水环境中污染现状研究进展 [J], 周杰;杨雪松(综述);许洁(审校)4.环境内分泌干扰物辛基酚、壬基酚及短链壬基酚聚氧乙烯醚残留同步检测方法[J], 杨锚;曹维强;王淼;佘永新;李腾飞;王静;王珊珊;金芬;金茂俊;邵华5.黄河(兰州段)水环境中壬基酚及壬基酚聚氧乙烯醚污染的初步研究 [J], 侯绍刚;徐建;汪磊;孙红文;戴树桂;刘昕宇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

壬基酚对大鼠子代睾丸卵泡刺激素受体表达的影响作者：张友兰范奇元王国秀张仁义来源：《中国医药导报》2009年第14期[摘要] 目的：研究壬基酚（nonylphenol，NP）对大鼠子代睾丸卵泡刺激素受体（FSHR）mRNA表达的影响。

方法：将40只雌性SD大鼠随机分为5组，NP低、中、高剂量组、阴性对照组和阳性对照组。

NP各剂量组在妊娠第14～19天给予20、40、80 mg/（kg·d）壬基酚灌胃，阴性对照组给予同体积的花生油，阳性对照组给予30 μg/（kg·d）雌二醇，孕第19天取胎鼠睾丸，用实时荧光定量PCR检测睾丸中FSHR mRNA的表达。

结果：与阴性对照组比较，低剂量组表达升高，但随着剂量的增加，FSHR mRNA表达下降，差异有统计学意义。

结论：壬基酚可致大鼠子代生殖毒性，影响FSHR的转录水平，导致生精障碍。

[关键词] 大鼠；子代睾丸；壬基酚；FSHR[中图分类号] R285.5[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2009）05（b）-012-02Effects of nonylphenol on the expression of FSHR in rat embryonic testesZHANG Youlan, FAN Qiyuan*, WANG Guoxiu, ZHANG Renyi(Department of Preventive Medicine, Zunyi Medical College, Zunyi 563003, China)[Abstract] Objective: To study the effects of nonylphenol (NP) on the expression of FSHR mRNA in rat embryonic testes in vivo. Methods: 40 female SD rats were randomly divided into five groups, low, middle and high dose NP groups, negative control group and positive control group; and low, middle and high dose NP groups were intragastrically administered with 20, 40 and 80 mg/(kg·d) NP after 14 to 19 days of pregnancy, negative control group was administered with peanut oil with same volume, and positive control group was administered with 30 μg/（kg·d） Estrogen. Embryonic testes were collected at the nineteenth day after pregnancy. The expression of FSHR mRNA was determined by Real-time PCR. Results: The expression of FSHR mRNA in low dose group was increased compared with negative control group, but with the increase of NP dose, the expression of FSHR mRNA decreased, and it showed a significant difference. Conclusion: NP could result in the reproductive toxicity of rats, affects the transcriptional level of FSHR, and further results in spermatogenesis dysfunction.[Key words] Rat; Embryonic testes; NP; FSHR壬基酚（nonylphenol，NP）是全球商用第二大类非离子表面活性剂壬基酚聚氧乙烯醚（NPES）的主要降解产物[1]。

环境内分泌干扰物辛基酚的研究作者：陶永军章英来源：《医学信息》2014年第20期摘要：综述了国内外对环境内分泌干扰物辛基酚的研究进展，介绍了辛基酚的化学性质及应用，重点阐述了辛基酚的危害、环境污染及人群暴露概况，指出我国应尽快开展相关的基础研究，准确评估我国食品污染及人群中辛基酚的暴露状况，有效监控和消除环境内分泌干扰物是我们的当务之急。

关键词：环境内分泌干扰物；辛基酚环境内分泌干扰物是一类能通过与甾类激素受体作用，模仿或阻止甾类激素自然循环过程中转录激活作用[1]，从而影响人与动物体内激素的正常功能的化合物。

辛基酚是一种具有雌激素作用的环境内分泌干扰物，亦被联合国环境规划署列为主要的持久性有毒化学污染物之一，具有很强的生物积累性、三致效应及内分泌干扰性[2]。

由于辛基酚是一种重要的精细化工原料，广泛用于洗涤剂、个人护理产品、化妆品等，与人类生命活动联系密切，因此，其对环境及人类健康的危害引起了学术界及公众的极大关注。

1化学性质辛基酚（Octylphenol，OP），又名对叔辛基苯酚，分子量为206.32，是一种白色片状或屑状晶体化合物，可溶于大多数有机溶剂，不溶水。

2危害2.1生殖系统的影响国外目前已有的雌激素活性评估方法一致认为辛基酚在烷基酚类化合物中雌激素活性最强，其雌激素活性大约是17β雌二醇的10-4倍[3]。

宫向红等研究了辛基酚对鲤鱼的雌激素效应，结果表明，暴露剂量为10μg/L时，雄鱼肝脏匀浆与血清中均能检出卵黄蛋白原，具有明显的雌激素效应[4]。

Aydogan等研究了辛基酚对雄性大鼠生殖系统的危害，结果表明，雄性大鼠在胎儿时期暴露于辛基酚，待其出生并生长成熟后，其生殖系统仍受不利影响，尤其是精子的结构发生异常[5]。

2.2促癌作用Katsuda等研究了辛基酚对子宫癌的影响，结果表明，高剂量对成年鼠暴露辛基酚，可引起子宫增重，促进子宫癌的发生[6]。

Kawaguchi等研究了辛基酚对乳腺癌的影响，结果表明，少剂量对胎儿时期的鼠暴露辛基酚，会诱导乳腺肿瘤的发生[7]。

黄丹菲,杜鹏程,冷雪萍,等．壬基酚与辛基酚单独及联合暴露对大鼠肠道损伤的影响[J]．南昌大学学报(理科版),２０２３,４７(６):５７０Ｇ５７７．HU A N GDF,D UPC,L E N GXP,e t a l．S e p a r a t e a n d c o m b i n e d e f f e c t s o f n o n y l p h e n o l a n d o c t y l p h e n o l e x p o s u r e i n r a t i n t e s t i n a l i n j u r y[J]．J o u r n a l o fN a n c h a n g U n i v e r s i t y(N a t u r a l S c i e n c e),２０２３,４７(６):５７０Ｇ５７７．壬基酚与辛基酚单独及联合暴露对大鼠肠道损伤的影响黄丹菲,杜鹏程,冷雪萍,王惠妹,李颖芝,高家铭(南昌大学食品科学与资源挖掘全国重点实验室,江西南大国创院食品科技有限公司,江西南昌㊀３３００４７)㊀㊀摘要:两种典型环境内分泌干扰物 壬基酚(N o n y l p h e n o l,N P)与辛基酚(O c t y l p h e n o l,O P),常常同时存在于自然环境中,经口摄入为它们进入人体内的主要途径.因此,N P与O P可能会对消化系统产生影响.目的:研究N P与O P单独及联合暴露对大鼠肠道损伤的影响.方法:将不同浓度的N P与O P单独或联合灌胃大鼠２８天后,观察各组大鼠肠道氧化应激㊁通透性㊁炎症及肠道细胞凋亡情况.结果发现:N P与O P单独或联合暴露均会导致结肠组织结构破坏,紧密连接C l a u d i nＧ１和O c c l u d i n蛋白表达水平下降,抗氧化酶活性发生改变,细胞因子I LＧ１β㊁T N FＧα与I F NＧγ表达水平上升,凋亡相关蛋白C a s p a s eＧ３㊁C a s s p a s eＧ１２㊁B a x和B c lＧ２表达水平增加.结论:N P 与O P单独或联合暴露均可通过改变肠道通透性㊁诱导大鼠肠道促炎细胞因子产生㊁降低抗氧化酶表达并诱导肠道细胞凋亡而对大鼠肠道造成不同程度的损伤.本研究对于全面评估环境内分泌干扰物联合暴露的健康风险,探索有效的预防干预措施,以及修订完善相关的卫生标准限值,具有重要意义.关键词:壬基酚;辛基酚;环境内分泌干扰物;肠道屏障中图分类号:R５７４㊀㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀㊀㊀㊀文章编号:１００６Ｇ０４６４(２０２３)０６Ｇ０５７０Ｇ０８S e p a r a t e a n d c o m b i n e d e f f e c t s o f n o n y l p h e n o l a n d o c t y l p h e n o l e x p o s u r e i n r a t i n t e s t i n a l i n j u r y HU A N G D a n f e i,D U P e n g c h e n g,L E N G X u e p i n g,WA N G H u i m e i,L IY i n g z h i,G A OJ i a m i n g (S t a t eK e y L a b o r a t o r y o fF o o dS c i e n c e a n dR e s o u r c e s,I n t e r n a t i o n a l I n s t i t u t e o fF o o d I n n o v a t i o nC o．,L t d．,N a n c h a n g U n i v e r s i t y,N a n c h a n g３３００４７,C h i n a)A b s t r a c t:N o n y l p h e n o l(N P)a n d o c t y l p h e n o l(O P)a r e t w o t y p i c a l e n v i r o n m e n t a l e n d o c r i n e d i s r u p t o r s o f t e n c o e x i s t e d i n t h e e n v i r o n m e n t,a n d t h e i r o r a l i n g e s t i o nm a y i m p a c t t h e d i g e s t i v e s y s t e m．OB J EC T I V E:T h i s s t u d y a i m e d t o i n v e s t i g a t e t h e s e p aＧr a t e a n d c o m b i n e de f f e c t s o fN Pa n dO Pe x p o s u r e o n r a t i n t e s t i n a l i n j u r y．M E T HOD S:R a t sw e r e a d m i n i s t e r e dv a r y i n g c o n c e nＧt r a t i o n s o fN Pa n dO P i n d i v i d u a l l y o r i n c o m b i n a t i o n v i a g a v a g e f o r a d u r a t i o n o f２８d a y s,a n d i n t e s t i n a l o x i d a t i v e s t r e s s,i n f l a mＧm a t i o n,i n t e s t i n a l p e r m e a b i l i t y a n d i n t e s t i n a l c e l l a p o p t o s i s i ne a c h g r o u p w e r e o b s e r v e d．RE S U L T S:I n d i v i d u a l o r c o m b i n e d e xＧp o s u r e t oN Pa n dO P l e d t o s t r u c t u r a l d a m a g e t o t h e c o l o n i c i n t e s t i n a l b a r r i e r,a l t e r e d a n t i o x i d a n t e n z y m e a c t i v i t y i n t h e c o l o n, i n c r e a s e d e x p r e s s i o no f c y t o k i n e s I LＧ１β,T N FＧαa n d IF NＧγ,a n d i n c r e a s e de x p r e s s i o no f a p o p t o t i c p r o t e i n sC a s p a s eＧ３,C a s s p a s eＧ１２,B a xa n dB c lＧ２．C O N C L U S I O N S:T h e e x p o s u r e t oN Pa n dO P,w h e t h e r i n d i v i d u a l l y o r i nc o m b i n a t i o n,r e s u l t e d i n i n c r e a s e d p r oＧi n f l a mm a t o r y c y t o k i n e p r o d u c t i o n,d e c r e a s e d a n t i o x i d a n t e n z y m e e x p r e s s i o n,a n d i n d u c e d a p o p t o s i s i n t h e r a t i n t e s t i n e,l e a dＧi n g t o d i f f e r e n t d e g r e e s o f d a m a g e．T h i s s t u d y m a y o f f e r a t h e o r e t i c a l f o u n d a t i o n f o r t h e p r e v e n t i o n a n d c o n t r o l o f d a m a g e c a u s e d b y e n v i r o n m e n t a l e n d o c r i n e d i s r u p t o r s．K e y W o r d s:n o n y l p h e n o l;o c t y l p h e n o l;e n d o c r i n e d i s r u p t o r;i n t e s t i n a l b a r r i e r㊀㊀作为一类重要的非离子表面活性剂,烷基酚聚氧乙烯醚(A l k y l p h e n o l e t h o x y l a t e s,A P E s)系列产品主要由烷基酚和环氧乙烷聚合而成[１],广泛用于洗涤产品和纺织助剂中,大部分通过各种途径最终进入水环境中.A P E s进入环境后的生物降解代谢产物主要为壬基酚(N o n y l p h e n o l,N P)与辛基酚(O c t y l p h e n o l,O P)(各约占８５％与１５％)属于环境激素类化学物,能够模拟或部分模拟雌激素样作用第４７卷第６期２０２３年１２月㊀㊀㊀㊀㊀㊀南昌大学学报(理科版)J o u r n a l o fN a n c h a n g U n i v e r s i t y(N a t u r a l S c i e n c e)V o l．４７N o．６D e c．２０２３㊀收稿日期:２０２３Ｇ０６Ｇ１０.基金项目:江西省研究生创新专项资金项目(Y C２０１９ＧS０６７),国家自然科学基金资助项目(３１８６０４７１).作者简介:黄丹菲(１９８３－),女,研究员.EＧm a i l:h u a n g d a n f e i＠n c u．e d u．c n.而产生 雌性效应 ,从而影响机体内分泌及生殖系统.N P与O P常在环境中共存,且具有持久性,目前在地下水㊁沉积物和泥土中均已检测到它们的存在[２,３].此外,N P和O P可在生物体内蓄积,它们可以进入食物链并逐级累积[４].已有实验表明除明显的雌激素效应外,它们还可对生物体的免疫㊁内分泌及神经系统产生危害作用[５－９],而当两者同时存在还可能产生协同效应[１０].可以说,N P与O P已成为新型污染物的典型代表受到广泛关注.肠道组织是将机体内环境与肠腔内环境分开的复杂场所,正常的肠黏膜屏障功能可有效防止致病性细菌及抗原等物质的侵入.健康的肠黏膜屏障功能主要依赖于正常的肠道机械屏障㊁免疫屏障㊁肠道菌群㊁肠道分泌物(如消化酶㊁胃酸及黏液等)和肠道蠕动等[１１].当外环境中有害物质通过肠道进入机体后,最先威胁的就是肠黏膜屏障[１２].目前认为与肠黏膜屏障损伤相关的机制主要包括:肠黏膜缺血缺氧㊁细胞凋亡㊁氧自由基㊁细胞因子和炎症分子作用等.已有研究证实,过量氧自由基可引起肠上皮细胞损伤和凋亡,从而破坏肠机械屏障完整性.大量炎症细胞因子可加重黏膜异常免疫反应,损伤肠黏膜免疫屏障[１３].已有研究证实经口摄入是机体接触N P与O P的重要途径,因此很有必要研究它们对于肠道健康的影响.本文以正常大鼠为研究对象,从肠道氧化应激㊁炎症及肠道细胞凋亡等角度探讨N P与O P单独或联合暴露致大鼠肠道屏障损伤的作用.１㊀材料与方法１．１㊀材料与试剂雄性S p r a g u eＧD a w l e y(S D)大鼠,S P F级４－５周龄,１８０－２２０g,购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司(证书编号:S C X K[湘]２０１６－０００２).本实验动物实验操作均已获南昌大学动物伦理审查委员会许可(N o:S Y K XＧ２０１５Ｇ０００１)且遵循N I H关于实验动物的饲养和使用规则.壬基酚(C A S号:８４８５２Ｇ１５Ｇ３)购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司;４Ｇ叔辛基酚(C A S号:１４０Ｇ６６Ｇ９)来自德国S i g m a公司;所用抗体均购于英国A b c a m公司和中国北京中杉金桥生物技术有限公司;DＧ乳酸和抗氧化相关检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所;其他相关检测试剂盒均购于南京森贝伽生物科技有限公司和武汉云克隆科技股份有限公司.１．２㊀实验方法１．２．１㊀动物实验设计与分组S P F级４－５周龄S p r a g u eＧD a w l e y(S D)雄性大鼠８４只,适应性饲养(保持１２h明暗交替光照,湿度(５５ʃ１０)％,温度(２３ʃ２)ħ一周后用于正式实验.按体重随机分为７组(每组１２只),根据毒理学给药剂量设定的一般原则,参照N P㊁O P的L D５０,设定高㊁低剂量组.对大鼠进行N P㊁O P单独染毒以及二者联合染毒,具体分组如下:①２０m g/k g b w N P与２０m g/k g b w O P联合低剂量组(N O L 组);②１００m g/k g b w N P与１２０m g/k g b w O P联合高剂量组(N OH组);③２０m g/k g b w N P低剂量组(N P L组);④１００m g/k g b w N P高剂量组(N P H组);⑤２０m g/k g b w O P低剂量组(O P L组);⑥１２０m g/k g b w O P高剂量组(O P H 组);⑦正常组(C o n t r o l组).每天灌胃１次,持续４周.每天称重并观察灌胃后的大鼠状态及饮食饮水情况.末次灌胃后２４h,摘眼球取血,离心后得到血清,放入－８０ħ冰箱保存,以备后续实验.各组大鼠脱颈处死后,立即解剖取小肠及结肠组织,去除内容物并用生理盐水冲洗干净后放入－８０ħ冰箱保存.１．２．２㊀大鼠一般情况观察每天观察大鼠毛色㊁精神状态及活动等情况,并记录各组大鼠体重.１．２．３㊀肠道病理观察取各组大鼠结肠组织２－３c m,除去肠壁上的脂肪后放入福尔马林中固定.用石蜡包埋㊁切片,经脱蜡后水洗.用苏木素染色切片３－５m i n,水洗㊁分化液分化㊁经返蓝液返蓝后流水冲洗.将切片进一步经酒精脱水后入伊红染液染色,二甲苯透明处理后,中性树胶封片.采用A P E R I O L V１病理切片扫描系统拍照.１．２．４㊀小肠组织氧化损伤测定称取１００m g左右小肠组织加入生理盐水,组织重量与生理盐水之比为１ ９(m:v),在高速组织匀浆机中进行研磨(６０H z,１２０s),离心(２５００r p m,１０m i n)后取上清,按试剂盒说明书进行超氧化物歧化酶(S u p e r o x i d ed i s m u t a s e,S O D)㊁过氧化氢酶(C a t a l a s e,C A T)和丙二醛(M a l o n d i a l d e h y d e, M D A)的测定.１．２．５㊀结肠组织细胞因子测定称取各组大鼠一定质量的结肠组织样本,加入P B S按照试剂盒说明书的要求制成合适浓度的组织匀浆液,离心后收集各样本上清液.测定I LＧ１β㊁１７５第６期㊀㊀㊀㊀㊀黄丹菲等:壬基酚与辛基酚单独及联合暴露对大鼠肠道损伤的影响T N FＧα与I F NＧγ的含量.１．２．６㊀肠道屏障损伤检测分别取各组大鼠一定量血清样本及结肠组织样本,制成合适浓度的P B S匀浆液.按照试剂盒说明书,测定结肠组织匀浆中二胺氧化酶(D i a m i n eo x iＧd a s e,D A O)和内毒素以及血清中DＧ乳酸的含量.１．２．７㊀肠道组织中相关蛋白表达水平的测定取各组大鼠一定量小肠组织,提取各组织样本总蛋白.测定各样本蛋白含量后,添加S D S上样缓冲液,１００ħ加热变性５m i n.将反应后各样品上样于S D SＧP A G E凝胶,采用不同浓度分离胶对蛋白进行分离.电泳完成后,将目的蛋白所在胶条切下,通过转印系统将蛋白转移至P V D F膜,将P V D F膜置于５％B S A封闭液常温温育１h后,浸泡在一抗缓冲液中４ħ孵育一晚,洗掉膜上游离一抗后,于相应二抗缓冲液中常温孵育１h.加入化学发光试剂进行显色后通过B i oＧR A DC h e m iX R S＋凝胶成像系统测定紧密连接蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平.１．３㊀数据处理与分析本研究所得到的数据均以平均值ʃ标准差表示,采用S P S SS t a t i s t i c s２６．０㊁O r i g i n２０１８等相关软件进行数据整理㊁统计分析及图表绘制.２㊀结果与讨论２．１㊀大鼠体重变化体重变化情况是反映大鼠健康状况的一个重要指标.如表１所示,N O H联合高剂量组㊁N P H组和O P H 组的大鼠体质量增长率显著低于正常组大鼠,尤其是N O H 联合高剂量组体重增长率最低.提示N P与O P单独或联合暴露均对大鼠健康产生较大影响.另外,观察发现,各N P与O P单独或联合暴露组大鼠相较于正常组大鼠均出现精神萎靡不振,活动减少,皮毛不顺滑甚至脱毛等现象,再次提示N P与O P日常暴露具有潜在的重大风险.表１㊀大鼠体重增长情况T a b．１㊀W e i g h t g a i no f r a t s i n e a c h g r o u p组别初始体重/g终体重/g增长率/％N O L组２８９．６７ʃ１１．４２４３８．８２ʃ１７．６３５１．４９ʃ５．４１a N OH组２９１．５５ʃ１６．６４３６３．５２ʃ４５．２４２４．６８ʃ１０．０８e f N P L组２８７．３１ʃ６．２２４３２．１６ʃ１７．０５５０．４２ʃ４．９２a b N P H组２８４．９５ʃ８．１４３９７．４８ʃ３２．７５３９．４９ʃ１０．８３c d O P L组２８７．６４ʃ７．３４４２４．９４ʃ２１．１７４７．７３ʃ４．９８a b c O P H组２８９．０８ʃ２．６１４０２．９２ʃ２７．００３９．３８ʃ９．３６c d 正常组２９３．２５ʃ７．４５４３７．９３ʃ１８．３１４９．３４ʃ５．５９a b ㊀㊀数据以平均值ʃ标准差表示(n＝１２),字母不同代表差异显著(P＜０．０５).２．２㊀N P与O P单独或联合暴露对大鼠结肠组织结构的影响观察发现,正常组结肠结构完整,细胞形态无异常,无明显炎性浸润;与各低剂量组相比,N O H联合高剂量组㊁N P H组以及O P H组大鼠结肠组织损伤程度均更为严重,尤其N O H联合高剂量组大鼠结肠组织出现明显黏膜损伤,局部出现腺体排列紊乱和炎性细胞浸润,肠壁增厚(如图１箭头所示).提示N P与O P暴露可损伤肠道组织结构,破坏肠道屏障.高剂量及联合暴露损伤作用更为显著.(a)(b)(c)(d)50μm(e)(f)(g)(a)N O L;(b)N OH;(c)N P L;(d)N P H;(e)O P L;(f)O P H;(g)正常组.图１㊀苏木精伊红染色法观察各组大鼠结肠组织F i g．１㊀T h e c o l o n i c s e c t i o n sw e r e o b s e r v e db y h e m a t o x y l i n e o s i n s t a i n i n g(H&E)２７５ 南昌大学学报(理科版)２０２３年㊀２．３㊀N P 与O P 单独或联合暴露对大鼠小肠组织中抗氧化酶活性的影响已有多项研究证明,氧化应激是影响肠道健康的关键因素[１４].C A T 可催化H ２O ２生成水和氧气;S O D 是最有效的胞内酶促抗氧化剂之一,可清除O ２－,阻止氧自由基链式反应扩大,从而抑制细胞内氧化应激,在维持氧化还原稳态中起着重要作用[１５].当机体内自由基Ｇ抗氧化系统的动态平衡被打破,组织内活性氧浓度过高时会引起脂质氧化,其反应终产物为M D A [１６].因此,通过测定S O D 和C A T 活力及MD A 水平可以判定组织中氧化应激的状态.如表２所示,与正常组相比,N P 与O P 单独或联合暴露各组大鼠小肠组织中S O D 和C A T 水平均出现显著性下降,N O H 组㊁N P L 组㊁N P H 组㊁O P L 组和O P H 组的M D A 水平均明显上升,提示N P 与O P 单独或联合暴露均可影响大鼠结肠组织中相关抗氧化酶活性,导致小肠组织发生脂质过氧化,诱导肠道的氧化应激.进一步证明脂质过氧化和氧自由基引起的氧化损伤在N P 与O P 暴露致肠损伤中发挥一定作用.这与许多研究中报道的环境中的内分泌干扰物可通过破坏机体中氧环境的平衡来影响机体的健康是一致的[１７－１８].表２㊀N P 与O P 暴露大鼠肠道中M D A 水平和S O D 及C A T 活性T a b ．２㊀E f f e c t s o fN Pa n dO Pe x po s u r e o n t h e l e v e l o f M D Aa n da c t i v i t i e s o f S O D ,C A T i n r a t分组S O D/(U /m gpr o t )C A T/(U /m gpr o t )M D A/(U /m gpr o t )N O L 组２２．２７ʃ３．８７c０．７２ʃ０．２８c０．２５ʃ０．０５d eN OH 组１１．１３ʃ４．３５e １．２９ʃ０．７２b c ０．６４ʃ０．１８a b N P L 组１８．６１ʃ３．８７c d１．６０ʃ０．４b c０．４９ʃ０．０７cN P H 组１３．８９ʃ３．４４d e１．２４ʃ０．６５b c０．６７ʃ０．０７aO P L 组１６．２８ʃ２．５５c d e１．２９ʃ０．８２a b０．５４ʃ０．１２b cO P H 组１６．２５ʃ３．５６c d e１．８４ʃ０．１６a０．６２ʃ０．１５a b正常组３９．６５ʃ１１．５９a２．０９ʃ１．１１a b０．１６ʃ０．０５e㊀㊀数据以平均值ʃ标准差表示(n ＝１２),字母不同代表差异显著(P ＜０．０５).２．４㊀N P 与O P 单独或联合暴露对大鼠结肠中I L Ｇ１β㊁T N F Ｇα以及I F N Ｇγ水平的影响健康状态下的适度炎症反应有利于肠道清除病原及受损组织的修复,但当炎症因子过度表达时,会对诱发肠道上皮屏障功能障碍和通透性增加,从而加剧肠道损伤,引发多种肠道系统疾病[１９,２０].I L Ｇ１β㊁T N F Ｇα与I F N Ｇγ均为介导炎症反应的重要因子,且已证实都在紧密连接完整性调控中起着关键作用,它们常协同参与肠道炎症发生发展过程[２１].促炎因子I L Ｇ１β可促进中性粒细胞等炎性细胞聚集在肠道病变部位,从而加剧炎症反应和肠道损伤[２２].I F N Ｇγ是一种具有广谱抗病毒作用的糖蛋白,被认为可改变肌动蛋白Ｇ肌球蛋白细胞骨架与紧密连接蛋白的相互作用,从而影响肠道屏障功能[２３].T N F Ｇα与I F N Ｇγ相互作用会改变肠道的上皮细胞的屏障功能,能够通过紧密连接蛋白的分离对肠道完整性产生不利影响[２４,２５].由图２(a)可知,与正常组相比,N P 与O P 单独或联合暴露后的大鼠7006005004003002001000I L -1β/(p g ·m g -1)OPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组dababcdbcaa(a)㊀㊀(a )I L Ｇ１β4.03.53.02.52.01.51.00.50T N F -α/(n g ·m g -1)OPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组a(b)ddbccdbcdb㊀㊀(b )T N F Ｇα3.02.52.01.51.00.50T N F -γ/(n g ·m g -1)OPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组a(c)bcbcbbcbc㊀㊀(c )I F N Ｇγ数据以平均值ʃ标准差表示(n ＝１２),字母不同代表差异显著(P ＜０．０５).图２㊀N P 与O P 暴露对各组大鼠炎症细胞因子表达的影响F i g ．２㊀E f f e c t s o fN Pa n dO Pe x p o s u r e o n e x p r e s s i o no f i n f l a m m a t o r y c yt o k i n e s i n r a t s３７５ 第６期㊀㊀㊀㊀㊀黄丹菲等:壬基酚与辛基酚单独及联合暴露对大鼠肠道损伤的影响结肠内的I L Ｇ１β的含量均出现显著的上升,N O L 联合低剂量组㊁N O H 联合高剂量组和O P L 组的T N F Ｇα表达显著性上升.N O H 联合高剂量组的I F N Ｇγ表达水平显著高于其他组.由此可以推测,N P 与O P 均可能导致结肠部位炎症的发生,导致细胞死亡,从而进一步加重肠道组织损伤和炎症.高剂量及联合暴露损伤作用更为显著.２．５㊀N P 与O P 单独或联合暴露对大鼠结肠中D A O ㊁内毒素以及D Ｇ乳酸的影响当肠道屏障受损时,死亡革兰氏阴性菌细胞壁中内毒素可释放到肠道中进入机体循环导致炎症反应加剧.D A O 主要存在于哺乳动物肠上层绒毛细胞中,可高活性催化组胺和多种多胺的代谢,当肠黏膜上皮细胞损伤或坏死后,D A O 被释放到血液和肠腔内,使得D A O 活性升高[２６].D Ｇ乳酸是肠道内多种细菌发酵的代谢产物,当肠道机械屏障受损,肠道通透性增高时,D Ｇ乳酸可透过肠道进入血液循环,使血液中D Ｇ乳酸含量升高[２７].因此,我们通过测定大鼠肠黏膜产物D A O 及肠道内毒素水平并结合血中肠道细菌代谢产物D Ｇ乳酸的含量来了解其肠屏障功能及通透性的变化.由图３可知,与正常组相比,N P 与O P 单独或联合暴露均使得结肠组织中的D A O 水平显著上升;N P L 联合低剂量组㊁N O H 联合高剂量组㊁O P L 组及O P H 组的结肠组织内毒素水平显著上升;N P 与O P 单独或联合暴露均可使血清中D Ｇ乳酸含量显著上升.由此我们可以推测:N P 与O P 单独或联合暴露均会增加肠黏膜的通透性,破坏肠道机械物理屏障功能.D A O /(n g ·m g -1)OPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组dabbca(a)ccc2.52.01.51.00.502.01.51.00.50E n d o t o x i n /(n g ·m g -1)OPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组a(b)baaaabab D -l a c t a t e /(m m o l ·m L -1)OPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组a(c)bc121086420cababab ab(a )D A O(b )e n d o t o x i n (c )D Ｇl a c t a t e数据以平均值ʃ标准差表示(n ＝１２),字母不同代表差异显著(P ＜０．０５).图３㊀N P 与O P 暴露对结肠道屏障损伤相关指标的影响F i g ．３㊀E f f e c t s o fN Pa n dO Pe x p o s u r e o n i n d i c t o r s r e l a t e d t on o d a l i n t e s t i n a l b a r r i e r d a m a ge of r a t s ２．６㊀N P 与O P 对肠道紧密连接蛋白表达的影响紧密连接蛋白在肠道黏膜屏障中发挥重大作用.C l a u d i n s 蛋白家族是位于上皮细胞层细胞间紧密连接的细胞Ｇ细胞粘附分子,作为C l a u d i n s 蛋白家族的重要亚型,C l a u d i n Ｇ１主要负责在肠道维持细胞间紧密连接完整性[２８].O c c l u d i n 作为最早被发现的紧密连接蛋白,其对调控肠道中大分子物质进入具有重要作用[２９].为了研究N P 与O P 对大鼠肠道通透性影响的机制,采用W e s t e r nB l o t i n g 法分析了肠道组织紧密连接蛋白C l a u d i n Ｇ１和O c c l u d i n 的表达.由图４可知,与正常组相比,N P ㊁O P 单独或联合作用均会降低紧密连接蛋白C l a u d i n Ｇ１和O c c l u Ｇd i n 蛋白表达水平,提示小肠肠道紧密连接的破坏.２．７㊀N P 与O P 对肠道凋亡相关蛋白C a s p a se Ｇ３㊁C a s pa s e Ｇ１２㊁B a x 和B c l Ｇ２表达的影响肠道屏障功能障碍的另一个机制可能与过度肠组织细胞凋亡相关[３０].C a s pa s e 家族在调控机体细胞凋亡方面发挥着作用[３１].C a s pa s e Ｇ３是调控细胞凋亡的重要因子,发挥着极其重要作用,被科学家称为调控细胞凋亡过程中的 开关 ,若被激活,细胞凋OPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组Occludin Claudin-1β-actin(a)(a )C l a u d i n Ｇ１和O c c l u d i n 蛋白表达C l a u d i n -1/β-a c t i n r a t i oOPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组a(b)1.00.80.60.40.20ccccbd(b )C l a u d i n Ｇ１定量分析４７５ 南昌大学学报(理科版)２０２３年㊀O c c l u d i n /β-a c t i n r a t i oOPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组a(c)1.21.00.80.60.40.20bdbccdecd(c )O c c l u d i n 定量分析数据以平均值ʃ标准差表示(n ＝６),字母不同代表差异显著(P ＜０．０５).图４㊀N P 与O P 暴露对小肠组织紧密连接蛋白表达的影响F i g ．４㊀E f f e c t s o fN Pa n dO Pe x p o s u r e o n e x p r e s s i o n o f t i g h t ju n c t i o n p r o t e i n s i n s m a l l i n t e s t i n e o f r a t s 亡程序将不可避免启动[３２].C a s pa s e Ｇ１２在内质网应激介导的细胞凋亡过程中也起着至关重要的作用[３３].在凋亡调控过程中,B c l Ｇ２和B a x 是一对功能相互对立的基因,已有多项研究认为B c l Ｇ２/B a x 蛋白表达水平的比率关系将最终决定细胞的存亡[３４].本研究采用W e s t e r nB l o t i n g 法对小肠中细胞凋亡相关的蛋白表达情况进行测定.如图５所示;与正常组相比,N O L 联合低剂量组㊁N O H 联合高剂量组和N P L 组的C a s pa s e Ｇ３上升显著;N O L 联合低剂量组㊁N P H 联合低剂量组和N P L 组的C a s pa s e Ｇ１２显著上升;N O L 联合低剂量组㊁N O H 联合高剂量组㊁N P H 组和O P H 组的B c l Ｇ２/B a x 的值下降明显.由此可以看出N P 与O P 可能会对细胞的凋亡产生影响.C a s p a s c -12/β-a c t i n r a t i oOPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组a a (d)abbbab4.03.53.02.52.01.51.00.50B a x /β-a c t i n r a t i oOPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组aa(e)bb3.02.52.01.51.00.50ccb Bc l -2/B a x r a t i oOPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组a(g)bb1.41.21.00.80.60.40.20aaaaB c l -2/β-a c t i n r a t i o OPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组a(f)bb1.41.21.00.80.60.40.20edccOPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组Caspase-12Caspase-3β-actin(a)OPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组Bcl-2Bax β-actin(b)C a s p a s c -3β/a c t i n r a t i oOPH OPL NPH NPL NOH NOL 正常组aa(c)a aab b543210a :C a s p a s e Ｇ３㊁C a s p a s e Ｇ１２蛋白表达;b :Bc l Ｇ２㊁B a x 蛋白表达;c :C a s p a s e Ｇ３定量分析;d :C a s pa s e Ｇ１２定量分析;e :B a x 定量分析;f :B c l Ｇ２定量分析;g:B c l Ｇ２/B a x 比值.数据以平均值ʃ标准差表示(n ＝６),字母不同代表差异显著(P ＜０．０５).图５㊀N P 与O P 暴露对小肠组织凋亡相关蛋白表达的影响(n ＝６)F i g ．５㊀E f f e c t s o fN Pa n dO Pe x p o s u r e o n e x p r e s s i o no f a p o pt o s i s Ｇr e l a t e d p r o t e i n s i n s m a l l i n t e s t i n e o f r a t s５７５ 第６期㊀㊀㊀㊀㊀黄丹菲等:壬基酚与辛基酚单独及联合暴露对大鼠肠道损伤的影响３㊀结论㊀㊀综上所述,本研究结果证实N P与O P暴露可使结肠组织结构破坏严重;组织中抗氧化酶活性降低;紧密连接蛋白C l a u d i nＧ１和O c c l u d i n表达显著下降;炎症相关细胞因子I LＧ１β㊁T N FＧα和I N FＧγ含量显著上升;D A O㊁内毒素和DＧ乳酸显著上升;小肠组织凋亡相关蛋白表达上升,高剂量及联合暴露作用更为显著.从而证实N P与O P单独或联合暴露可通过影响肠道组织结构㊁通透性㊁氧化应激㊁炎症及细胞凋亡等对大鼠肠道造成不同程度的损伤.本研究结果对深入研究环境内分泌干扰物促进肠道相关疾病发生的机制,全面评估环境内分泌干扰物联合暴露的健康风险,探索有效的预防干预措施,以及修订完善相关的卫生标准限值,具有重要意义.参考文献:[１]㊀李亨,罗娅君,黄田钫,等．烷基酚聚氧乙烯醚的微生物降解研究进展[J]．环境工程,２０１９,３７(７):１８３Ｇ１８９．[２]奚晔,夏天,詹铭．超高效液相色谱串联质谱法测定饮用水中壬基酚㊁辛基酚[J]．上海预防医学,２０１７,２９(０８):６２８Ｇ６３０．[３]HO N G Y,F E N G C,Y A NZ,e t a l．N o n y l p h e n o l o c c u rＧr e n c e,d i s t r i b u t i o n,t o x i c i t y a n da n a l y t i c a l m e t h o d si nf r e s h w a t e r[J]．E n v i r o n m e n t a l c h e m i s t r y l e t t e r s,２０２０,１８:２０９５Ｇ２１０６．[４]丽莎,姜杰,陈慧玲,等．固相萃取Ｇ液相色谱/串联质谱法测定尿中１０种双酚类物质和壬基酚及辛基酚化合物[J]．预防医学情报杂志,２０２０,３６(０２):２１２Ｇ２１８．[５]K A HNLG,P H I L I P P A TC,N A K A Y AMASF,e t a l．E n d o c r i n eＧd i s r u p t i n g c h e m i c a l s:i m p l i c a t i o n sf o r h uＧm a nh e a l t h[J]．T h e l a n c e td i a b e t e s&e n d o c r i n o l o g y,２０２０(８):７０３Ｇ７１８．[６]李芬芬．大粒车前子多糖抗炎与缓解壬基酚毒性作用及其机制研究[D]．南昌:南昌大学,２０２０．[７]Y I L MA ZB,T E R E K E C IH,S A N D A LS,e ta l．E n d oＧc r i n ed i s r u p t i n g c he m i c a l s:e x p o s u r e,ef f e c t so nh u m a nh e a l t h,m e c h a n i s m o fa c t i o n,m o d e l sf o rt e s t i n g a n ds t r a t e g i e s f o r p r e v e n t i o n[J]．R e v i e w si ne n d o c r i n e&m e t a b o l i c d i s o r d e r s．２０２０,２１(１):１２７Ｇ１４７．[８]L I U Q,L IF,L I U W,e t a l．T r a n s c r i p t i o n a l e x p r e s s i o na n a l y s i s r e v e a l s m u l t i p l ee f f e c t so fn o n y l p h e n o l e x p oＧs u r e o ns c a l l o p i mm u n es y s t e m[J]．F i s h&s h e l l f i s hi mm u n o l o g y,２０２２,１２３:２９０Ｇ２９７．[９]S C I A R R I L L O R,D IL M,V A L I A N T ES,e t a l．O c t y lＧP h e n o l(O P)a l o n e a n d i nc o m b i n a t i o nw i t hN o n y l P h eＧn o l(N P)a l t e r st h es t r u c t u r ea n dt h e f u n c t i o no f t h yＧr o i d g l a n do f t h e l i z a r dP o d a r c i s s i c u l u s[J]．A r c h i v e s o fe n v i r o n m e n t a l c o n t a m i n a t i o na n dt o x i c o l o g y,２０２１,８０(３):５６７Ｇ５７８．[１０]S E N T H I L K UMA R A N S,K A V I T HA C,R AM E S H M,e t a l．T o x i c i t y s t u d i e so fn o n y l p h e n o l a n do c t y l p h eＧn o l:h o r m o n a l,h e m a t o l o g i c a l a n db i o c h e m i c a l e f f e c t s i nC l a r i a s g a r i e p i n u s[J]．J o u r n a lo fa p p l i e dt o x i c o l o g y,２０１１,３１(８):７５２Ｇ７６１．[１１]S E O K,S E OJ,Y E U NJ,e t a l．T h e r o l e o fm u c o s a l b a rＧr i e r s i nh u m a n g u th e a l t h[J]．A r c h i v e so fP h a r m a c a lR e s e a r c h,２０２１,４４:３２５Ｇ３４１．[１２]S C HO U L T ZI,K E I T AÅV．C e l l u l a ra n d m o l e c u l a r t h e r a p e u t i c t a r g e t si ni n f l a mm a t o r y b o w e ld i s e a s eＧf oＧc u s i n g o n i n t e s t i n a l b a r r i e r f u n c t i o n[J]．C e l l s,２０１９,８:１９３．[１３]WA N G Y H．C u r r e n t p r o g r e s s o f r e s e a r c ho n i n t e s t i n a lb ac t e r i a lt r a n s l o c a t i o n[J]．M i c r o b i a l P a t h o g e n e s i s,２０２１,１５２:１０４６５２．[１４]C H E N G Y,Y A N G C,T A N ZL,e t a l．C h a n g e so f i nＧt e s t i n a lo x i d a t i v es t r e s s,i n f l a mm a t i o n,a n d g e n ee xＧp r e s s i o n i nn e o n a t a l d i a r r h o e a k i d s[J]．F r o n t i e r s i nv e tＧe r i n a r y s c i e n c e,２０２１,８:５９８６９１．[１５]MU N T E A N U IG,A P E T R E IC．A n a l y t i c a l m e t h o d s u s e d i nd e t e r m i n i n g a n t i o x i d a n t a c t i v i t y:Ar e v i e w[J]．I n t e r n a t i o n a l j o u r n a lo f m o l e c u l a rs c i e n c e s,２０２１,２２(７):３３８０．[１６]D R A P E R H H,HA D L E Y M．M a l o n d i a l d e h y d ed e t e rＧm i n a t i o na s i n d e xo f l i p i d p e r o x i d a t i o n[J]．M e t h o d s i nE n z y m o l o g y,１９９０,１８６:４２１Ｇ４３１．[１７]李健,司丽芳,位志国,等．辛基酚对成年雄性小鼠血浆和脾脏抗氧化功能的影响[J]．动物医学进展,２０１２,３３(０３):２９Ｇ３２．[１８]L IX Y,W E IF,G A OJS,e ta l．O x i d a t i v es t r e s sa n dh e p a t o t o x i c i t y o fR a n a c h e n s i n e n s i s e x p o s e d t o l o wd oＧs e so fo c t y l p h e n o l[J]．E n v i r o n m e n t a lt o x i c o l o g y a n dp h a r m a c o l o g y,２０１８,６４:８６Ｇ９３．[１９]O N Y I A HJC,C O L G A N SP．C y t o k i n e r e s p o n s e sa n de p i t h e l i a lf u n c t i o n i nt h e i n t e s t i n a lm u c o s a[J]．C e l l u l a ra n dm o l e c u l a r l i f e s c i e n c e s,２０１６,７３(２２):４２０３Ｇ４２１２．[２０]G A R R E T T WS,G O R D O NJ I,G L I M C H E RLH．H oＧm e o s t a s i sa n di n f l a mm a t i o ni nt h ei n t e s t i n e[J]．C e l l,２０１０,１４０(６):８５９Ｇ８７０．[２１]A lＧS A D IR,B O I V I N M,MA T．M e c h a n i s mo f c y t o k i n e m o d u l a t i o no f e p i t h e l i a l t i g h t j u n c t i o nb a r r i e r[J]．F r o nＧt i e r s i nb i o s c i e n c e:a j o u r n a l a n dv i r t u a l l i b r a r y,２００９,１４:２７６５．[２２]K AM I N S K YL W,A lＧS A D IR,MA T Y．I lＧ１βa n dt h ei n t e s t i n a l e p i t h e l i a l t i g h t j u n c t i o nb a r r i e r[J]．F r o n t i e r s６７５ 南昌大学学报(理科版)２０２３年㊀i n i mm u n o l o g y,２０２１,１２:７６７４５６．[２３]M I Z U T A N IY,T A K A G IN,N A G A T A H,e t a l．I n t e rＧf e r o nＧγd o w n r eg u l a t e s t i gh t j u 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