牛转铁蛋白使用说明书

转铁蛋白受体
铁蛋白受体是一种蛋白质分子，它位于细胞表面，负责与铁离子结合并将其引入细胞内部。

铁蛋白受体主要包括转铁蛋白受体1（TfR1）和转铁蛋白受体2（TfR2）两种类型。

转铁蛋白受体1（TfR1）分布广泛，主要在体内吸收铁的细胞、生长迅速的细胞和癌细胞表面表达。

TfR1通过与转铁蛋白结合，促进铁的内吞作用，将转铁蛋白中的铁离子释放到细胞内。

转铁蛋白受体2（TfR2）主要在肝脏和其他组织的细胞膜上表达，与TfR1不同，它不参与铁的内吞过程，而是通过与转铁蛋白结合，调节体内铁的吸收和代谢。

转铁蛋白受体在铁代谢中起着重要的作用，对维持体内铁平衡至关重要。

研究表明，一些疾病如贫血、铁缺乏症和一些肿瘤等与转铁蛋白受体的异常表达或功能异常有关。

为了研究转铁蛋白受体在疾病中的作用，科学家通常会进行相关转铁蛋白受体的研究，包括对其结构、功能以及与其他信号通路的相互作用等方面的研究。

这些研究有助于深入了解转铁蛋白受体在疾病发生发展中的作用机制，为治疗相关疾病提供新的靶点。

1转铁蛋白的结构与理化性质转铁蛋白是Ｈｏｌｍｂｅｒｇ和Ｌａｕｒｅｌｌ首次发现的［１］。

不同种类的转铁蛋白有不同的物理、化学和免疫特性，但均有两个三价铁离子结合位点［２，３］。

在不同研究中，按其含铁数目，分普通转铁蛋白或铁饱和转铁蛋白、单铁转铁蛋白、脱铁转铁蛋白。

按其构型，分普通型转铁蛋白和异构型转铁蛋白。

转铁蛋白是单链糖基化蛋白，糖基约占６％，由Ｎ端和Ｃ端两个具有高度同源性的结构域组成，两个结构域由一短肽连接，Ｎ端、Ｃ端结构域又由两个大小相同的小亚基构成，小亚基间的间隙是Ｆｅ３＋结合位点，能可逆地结合Ｆｅ３＋［４］。

Ｆｅ３＋与来自两个赖氨酸的氧原子、一个组氨酸的氮原子、一个天门冬氨酸的氧原子和碳酸阴离子中的两个氧原子通过配位键形成一个八面体的几何形状。

除了Ｆｅ３＋，很多其他二价和三价金属离子也可结合到这个结合位。

转铁蛋白二硫键对其结合金属离子以及受体有一定影响。

已经证实人转铁蛋白是由两个结构相似的分别位于Ｎ－端和Ｃ－端的球形结构域组成的单一肽链，含有６７９个氨基酸残基，共有３８个Ｃｙｓ，形成１９对二硫键，其中，Ｎ结构域有８个，Ｃ结构域有１１个［５］。

二硫键对于蛋白质维持其构象起很重要的作用，这不仅可以稳定二级和三级的肽链内部结构，而且可以介导肽链间四级结构的形成［６］。

转铁蛋白的特异吸收光谱是转铁蛋白结合铁离子后的反映［５］，大多数转铁蛋白结合铁后的特异吸收峰在４００～５００ｎｍ之前。

转铁蛋白在生物体内有调节铁离子平衡和能量平衡的双重作用，即转铁蛋白在机体中的铁离子交换的动力学不仅包括物质的量的变化，也包括物质的能量转化。

此外，转铁蛋白特异吸收峰的差异，也可能反映了转铁蛋白分子上结合铁离子部位在结构上的差异。

等电点（ＰⅠ）是蛋白质最典型的物理特性，大多数转铁蛋白的等电点偏酸性，如人血清转铁蛋白等电点为５．９［７］。

转铁蛋白显酸性是由其蛋白质中氨基酸总的电荷决定的，这与转铁蛋白在结合铁的过程中形成Ｆｅ３＋－ＴＲＦ－ＣＯ２－红色三元配合物而传递铁离子的生理功能是吻合的［８］。

人转铁蛋白(TF)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：0.023nmol/L –1.5nmol/L最低检测限：0.006nmol/L特异性：本试剂盒可检测人TF，且与其他相关蛋白无交叉反应。

有效期：6 个月预期应用：ELISA 法定量测定人血清、血浆中TF 含量。

说明1. 试剂盒保存：2-8℃。

2. 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

3. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗TF 抗体的微孔中加入标本或标准品、HRP 标记的抗TF 抗体，经过彻底洗涤后用底物显色。

底物在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的TF 呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1. 酶联板(Assay plate )：一块（96 孔）。

2. 标准品（Standard）：2 瓶(冻干品)。

3. 酶结合物（HRP-conjugate）: 1 x 120μl /瓶。

4. 酶结合物稀释液(HRP-conjugate Diluent) : 1×20ml/瓶。

5. 样品稀释液(Sample Diluent)：2×20ml/瓶。

6. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

7. 浓洗涤液（Wash Buffer）1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。

8. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶。

需要而未提供的试剂和器材1. 标准规格酶标仪2. 高速离心机3. 电热恒温培养箱4. 干净的试管和Eppendof 管5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6. 蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1. 血清：全血标本请于室温放置2 小时或4℃过夜后于1000 x g 离心20 分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

[17 ]
。由于每个 T f 分子 。apo2T f 对 Fe 和
3+ 2+ 3+
可逆地结合两个三价铁离子 ,二硫键对于 T f 结合金 属离子及其受体显得十分重要
2+ 2+ [18 ]
Cu 均有较强的亲和力 ,但 Fe 与 T f 的亲和力大于 Cu 与 T f 的亲和力
[19 ]
3+
, 即使 T f2Cu 和 T f2Fe
,它们的 T f 仍然表现出多态性 , 生理活性也
一被铁饱和 。T f 的两个铁离子位点的结合能力是 不同的 ,因此 ,两个半分子在结构 、 序列和功能上是 有区别的 。Aisen 等 从生理的角度 , 用 Fe 2 NTA ( 氨三乙酸 ) 复合物测定盲鳗血清 T f 的铁结合
[38 ] [39 ,40 ] 3+
第一作者简介 :龙华 ,男 ,1964 年 8 月出生 , 副研 。工作单位 : 湖北省 荆州市中国水产科学研究院长江水产研究所 , 邮编 :
434000 。
键 ,其中 ,N 结构域有 8 个 ,C 结构域有 11 个来自[16 ]。二
硫键对于蛋白质维持其构象起很重要的作用 , 这不 仅可以稳定二级和三级的肽链内部结构 , 而且可以 介导肽链间四级结构的形成
erophilins) 在长期的进化过程中 , 形成了若干分支 ,
[44 ]
输与代谢 ,参与呼吸 、 细胞增殖和免疫系统的调节 , 还能调节铁离子平衡和能量平衡 , 更具有抗菌杀菌 的保护功能 , 因而 T f 具有较全面的蛋白质生理功 能
[36 ]
。
T f 的主要生理功能是把铁离子从吸收和储存
由于不同种的 T f 氨基酸序列有相当大的同源性 ,它 们的空间结构也十分相似 ,形成的结构域也很类似 。 由于 T f 结构域中还存在更小的空间结构单位 ,因而 具有空间结构的稳定性 , 故 T f 有较强的热稳定性 , 这与 T f 进化的保守性和氨基酸序列的保守性是一 [38 ] 致的 。此 外 , 一 些 冷 水 性 鱼 类 ( 鳕 科 、 鲑科 等)