氯霉素眼药水的高效液相色谱分析参考课件

高效液相色谱法测定氯霉素泡腾片中氯霉素含量氯霉素泡腾片为《中国人民解放军医疗机构制剂规范》中收载的外用制剂，属于抗生素类药物，临床上主要用于阴道炎及宫颈糜烂。

本品现行质量标准为《中国人民解放军医疗机构制剂规范》[1]，该标准规定本品每片含氯霉素（C11H12Cl2N2O5）应为标示量的85.0%～115.0%，含量测定采用紫外分光光度法。

《中国药典》2010年版颁布后，氯霉素原料药的含量测定方法采用高效液相色谱法，为提高氯霉素泡腾片的质量标准，有效控制产品质量，本研究参考《中国药典》2010年版及文献方法[2-4]，拟建立高效液相色谱法测定氯霉素泡腾片中氯霉素的含量。

研究结果表明本方法操作简便，专属性好，精密度高，可作为氯霉素泡腾片的含量测定方法。

1 仪器与试药Agilent1100高效液相色谱仪；BT25S电子天平（赛多利斯）；UNICO-2102C型紫外分光光度计（上海UNICO仪器XX公司）；PHS-3E型pH计（上海雷磁）。

甲醇、乙腈为色谱纯（上海星可高纯溶剂XX公司）；庚烷磺酸钠为色谱纯（天津市科密欧化学试剂XX公司）；三乙胺、磷酸二氢钾为分析纯（北京化工厂）。

氯霉素（中国食品药品检定研究院，批号：130555-201203）；氯霉素二醇物（中国药品生物制品检定所，批号：130436-200704）；对硝基苯甲醛（中国药品生物制品检定所，批号：130562-200902）；氯霉素泡腾片（解放军总医院第一附属医院自制，批号130903、130904、130905）。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Kromasil 100-5 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.01 mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液（取磷酸二氢钾6.8 g，用0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1000 mL，再加三乙胺5 mL，混匀，用磷酸调pH值至2.5）-乙腈（70∶30）；柱温：室温；检测波长：274 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

•药剂.氯霉素滴眼液的稳定性研究阮艺静鲁方圆谢峻2,韩晓东3,汪强姜泽慧14（1-马鞍山市食品药品检验中心，安徽马鞍山243302；2.马鞍山市师范高等专科学校食品工程系，安徽马鞍山233300；.内蒙古自治区植物逆境生理与分子生物学重点实验室，内蒙古呼和浩特010018）摘要：目的研究氯霉素滴眼液稳定性的影响因素。

方法设置不同的光照时间、温度和氧化剂浓度，对氯霉素滴眼液进行处理后按法定方法检测。

结果光照使氯霉素含量下降，对硝基苯甲醛含量升高，pH值下降，溶液颜色改变；温度升高使氯霉素含量下降，氯霉素二醇物含量升高；过氧化氢溶液使氯霉素含量下降。

结论光照、高温及氧化均会使氯霉素滴眼液含量下降，有关物质改变。

关键词：氯霉素滴眼液;稳定性；高效液相色谱法中图分类号：R94文献标识码：A文章编号：1006-3765（2021）-00-0000-04Research on Stability of Chloramphenicol Eye DropsRUAN Yi-jing1,LU Fang-yuan1,XIE Jun2,HAN Xico-dong3,WANG Qicng1,JIANG Ze-hul1*(0Ma'anshan Food and Drag Aspectlon CenteaMa'anshan233300,Chlna；2.Department of Food Engineeclng,Ma'ans-han Teacher's College,Ma'anshan243000,China；3.I nner Mongolic Key Laboratoc of Plont Stress PhysC ology and Moloculot Biology,Hohhot010010,China)ABSTRACT：OBJECTIVE To study factora affectina thu stdbility of caioramppeuicol eyu daps.METHODS Stirs staniarn methoPs were rseU to evalraic cOlorampPeuicol eyu yaps aftun beina treuteU with differeui light time, temperatrra ani oxiCaat coaceutatioa.RESULTS Sanlight decreuseU thu couteut of cOlorampPeuicol and pH,ia・creuseU thu cooteut of nitroUeuzaldeUyUe ant cOanaeU thu coloa of solutioa.Thu cooteut of caloramppeuicol decreuseU ant thu couteut of cOloramppeuicol glycol iacreuseU with thu incadso of temperatnrUi Thu couteut of cOloramppeuicol decreuseU with UyUrooeu peroxine solution.CONCLUSION Snnlight,Uigh temperatnre ant oxicatioo lean I o thu droppini of couteut of cOloramppeuicol ant cOanae relateU sunstaaceSlKEY WORDS:Chlorampheaicci Eye Droos;Stanility；HPLC氯霉素滴眼液为眼用处方药，主要用于治疗由大肠杆菌、流感嗜血杆菌、克雷伯菌属、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和其他敏感菌所致眼部感染，比如沙眼、结膜炎、角膜炎、眼睑缘炎等。

制药工程专业基础实验《药物分析》部分氯霉素眼药水的HPLC分析一、实验目的1.学习内标法和外标法测定组分的含量。

2.了解高效液相色谱仪的结构及正确使用。

二、实验内容和要求（一）实验原理高效液相色谱是在经典液相色谱的基础上由于引入了气相色谱的理论而发展起来的。

以液体作为流动相，根据柱填料不同。

可分为吸附，分配，离子交换，凝胶渗透四种高效液相法、本实验采用ODS柱进行反相高效液相色谱。

通过本实验应掌握内标法，外标法定量的原理，方法及优缺点并加强高效液相色谱仪的操作技能训练。

内标物可以消除仪器与操作或制备样本时带来的误差，精密称取样品后，加入一定量的内标物，然后制成适当溶液进样分析。

根据样品和内标物的重量及其相应的峰面积比，求出某组分的含量。

外标法又称校正法或定量进样法。

本法要求能准确地定量进样，配制一系列已知浓度的标准液，在同一操作条件下，按同量注入色谱仪，测量其峰面积（或峰高），作峰面积（或峰高）与浓度的标准曲线.然后在相同条件下，注入同量样品溶液，测量待测组分的峰面积（或峰高），根据标准曲线，计算样品中待测组分的浓度。

氯霉素是抗生素类药物，微溶于水，且具苯环结构，所以可以用反相高效液相色谱法进行分离，并用UV254nm进行检测，甲醇-水作流动相。

三、实验主要仪器设备和材料试剂及仪器高效液相色谱仪，柱ODS柱（15cm×5mm），电子天平，100ml容量瓶，氯霉素标准品，2mg/ml对硝基苯酚（内标）标准贮备液，氯霉素眼药水样品，甲醇等。

氯霉素：广谱抗生素，原在土壤中。

1947年从南美洲委内瑞拉的委内瑞拉链霉菌中提取，1949年实现人工合成四、实验方法、步骤及结果测试（一）实验条件高效液相色谱仪柱ODS柱（15cm×5mm）流动相：内标法甲醇:水（60:40）；外标法甲醇:水（80:20）流速：0.7ml/min波长：254nm采样时间设置：5min进样量：10ul（二）标准贮备液的制备（待修改）1mg/ml氯霉素标准贮备液的配制：精密称取氯霉素100mg至100ml容量瓶中，以甲醇溶解，并稀释至刻度。

HPLC法测定氯霉素滴眼液含量的不确定度分析目的建立HPLC 法测定氯霉素滴眼液含量的不确定度分析的一般方法。

方法建立计算氯霉素滴眼液含量的不确定度的数学模型，找出影响不确定度的因素，并对各个不确定度分量进行评估。

结果计算各变量的不确定度分量，最终给出测量结果的扩展不确定度和置信水平。

含量测定的标准不确定度为0.522%，扩展不确定度为1.0%。

含量测定结果表示为（94.64±1.0）%，包含因子k=2。

結论建立的不确定度评估方法适用于对HPLC 法测定的氯霉素滴眼液含量进行不確定度分析。

[Abstract] Objective To establish the general method of determination of chloramphenicol eye drops by HPLC. Methods A mathematical model for calculating the uncertainty of chloramphenicol eye drops content was established. Factors affecting uncertainty was selected. The uncertainty components were evaluated. Results The uncertainty components of each variable were calculated，and the extended uncertainty and confidence level were given. The standard uncertainty of measurement was 0.522%，and the expanded uncertainty was about 1%. The results were expressed as （94.64±1）%，including factor k = 2. Conclusion The method of uncertainty evaluation is suitable for the determination of the content of Chloramphenicol Eye Drops by HPLC.[Key words] Measurement uncertainty；Chloramphenicol eye drops；HPLC近年来广东省省级及以上食品药品检验实验室均开展了大量的测量不确定度评定工作，但地方市级食品药品检验检测室则对测量不确定度评定工作了解不多。

氯霉素滴眼液实验报告引言氯霉素滴眼液是一种常用的抗菌药物，广泛用于眼科疾病的治疗。

本次实验旨在观察氯霉素滴眼液对细菌生长的抑制作用，并探究不同浓度的氯霉素滴眼液对细菌抑制效果的影响。

实验材料与方法材料：- 氯霉素滴眼液- 细菌培养基- 紫外灯- 试管- 移液管方法：1. 准备不同浓度的氯霉素滴眼液：分别将氯霉素滴眼液与细菌培养基按照1:10、1:20、1:50、1:100的比例混合，制备成不同浓度的氯霉素滴眼液。

2. 制备试验组和对照组：取两个试管，分别加入相同量的细菌培养基。

试验组添加不同浓度的氯霉素滴眼液，对照组不添加氯霉素滴眼液。

3. 接种细菌：将试管加入已培养好的细菌液，轻轻摇晃使细菌与液体均匀混合。

4. 培养细菌：将试管置于恒温恒湿的培养箱中，在37摄氏度下培养24小时。

5. 观察细菌生长情况：在培养后的试管中观察细菌的生长情况，记录细菌的形态和数量。

6. 使用紫外灯观察：将试管放置在紫外灯下，观察细菌的荧光情况。

实验结果在对照组中，细菌呈现良好的生长状态，形态正常。

而在试验组中，随着氯霉素滴眼液浓度的增加，细菌的生长逐渐受到抑制。

当氯霉素滴眼液浓度达到1:100时，细菌的生长明显受到抑制，数量大大减少。

使用紫外灯观察时，对照组细菌无荧光反应，而试验组中浓度较高的氯霉素滴眼液处理后的细菌发出荧光，说明氯霉素对细菌产生了荧光反应。

结论通过本次实验可以得出以下结论：1. 氯霉素滴眼液具有抑制细菌生长的作用，随着浓度的增加，抑菌效果明显增强。

2. 氯霉素滴眼液对细菌的抑制作用可通过荧光观察加以验证。

实验分析与改进本次实验结果表明氯霉素滴眼液具有良好的抑菌效果，但仍存在以下几点需要改进的地方：1. 本实验采用的细菌培养基可能对氯霉素敏感度不同，可尝试使用不同种类的细菌培养基进行实验以获得更准确的结果。

2. 本实验仅观察了氯霉素滴眼液对细菌生长的抑制作用，未对不同细菌品种的敏感度进行进一步研究，下一步可以对不同细菌品种进行筛选，以获得更全面的结果。

[作者单位] 南华大学后勤总公司医疗中心(湖南 衡阳 421000)[作者简介] 王丽辉(1967-),女,湖南双峰人,主管药师,学士,从事制剂质量研究。

[收稿日期] 2005-09-19[文章编号] 1001-7062(2006)02-0141-02 [中图分类号] R 927.2 [文献标识码] B[调查研究]高效液相色谱法同时测定地氯滴眼液中二组分及氯霉素二醇物的含量王丽辉[关键词] 色谱,高压液相;地塞米松,21-磷酸盐;氯霉素;乙二醇;滴眼液地氯滴眼液是我院常用的自制制剂,处方为地塞米松磷酸钠0.25g 、氯霉素2.5g 、硼酸19.0g 和硼砂3.0g,注射用水加至1000mL 。

临床上主要用于治疗沙眼、结膜炎、角膜炎、睑缘炎等,疗效显著。

本文建立地氯滴眼液含量高效液相色谱(H PLC)测定方法,简便、准确,且同时完成了氯霉素二醇物的限度检查,适用于该药品的制剂质量控制和稳定性研究。

1 材料和方法1.1 仪器 HP 1100高效液相色谱仪,VWD 紫外 可见光谱检测器,UV -1601紫外-可见分光光度计。

1.2 药品和试剂 地塞米松磷酸钠对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用),氯霉素标准品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用),氯霉素二醇物对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用),氢化可的松对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用),甲醇(色谱纯,美国TEDIA),地氯滴眼液(本院制剂室),其他试剂均为分析纯。

1.3 液溶的配制1.3.1 标准储备液和内标溶液的配制 精密称取地塞米松磷酸钠对照品25.3mg 、氯霉素标准品251.3mg,二醇物对照品15.1mg,分别用流动相溶解并转移至100mL 量瓶中,分别配成含地塞米松磷酸钠253mg/L 、氯霉素2513mg/L 、二醇物151mg/L 的标准储备液。

精密称取氢化可的松对照品15mg,用流动相溶解,转移至100mL 量瓶中,配成含氢化可的松150mg/L 的溶液。

高效液相色谱法测定氯霉素注射液中氯霉素的含量
吴美芳
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】2007(19)1
【摘要】目的建立一种准确度和灵敏度高,重现性好的氯霉素注射液中氯霉素含量测定的高效液相色谱法.方法采用shim pack VP ODS(150mm*4.6mm,5μm)为分析柱,流动相0.1%庚烷磺酸钠溶液(取0.1%庚烷磺酸钠500mL与二甲基甲酰胺5mL,冰醋酸0.5mL,混匀)∶乙腈(75∶25),检测波长:272nm,流速:1.0mL·min-1.结果氯霉素在0.040～0.200 mg内有良好的线性关系,回收率为99.8%,RSD为0.80%.结论建立的氯霉素含量测定方法简便,准确,灵敏.
【总页数】2页(P39-40)
【作者】吴美芳
【作者单位】宁德市药品检验所,宁德,352100
【正文语种】中文
【中图分类】R927.4
【相关文献】
1.HPLC法测定氯霉素注射液的含量 [J], 杨开金
2.高效液相色谱法测定氯霉素注射液的含量 [J], 曹宁芳;刘鹏鸣
3.HPLC法测定氯霉素注射液的含量 [J], 程红杰
4.高效液相色谱法测定氯霉素注射液中氯霉素含量 [J], 徐蓓蓓
5.紫外分光光度法测定氯霉素注射液的含量 [J], 邓茂刚;刘晓强;许琴瑟;刘家园
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