64 种注射用药品细菌内毒素检查法的方法学研究

内毒素限值 ( EU ∃ mg 1 ) 0 15 50 12 2 5 15 0 30 0 5
承担工作 样品厂家数量 药检所 黑龙江所 陕西所 湖北所 武汉所 山东所 大连所 陕西所 宁夏所 广州所 山东所 新疆所 安徽所 1 ( 3) 3 ( 3) 4 ( 10) 2 ( 8) 3 ( 6) 1 ( 6) ( 样品批次 ) 1 ( 6)
813 2 个药检所的实验结果都表明, 样品可以通过 稀释等方法, 排除对内毒素检查法的干扰作用, 并 能够使用灵敏度为 0 125EU ∃ mL 的鲎试剂进行 内毒素检测的品种, 即认为该品种适用于细菌内毒素
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检查方法, 由中检所汇总, 报送国家药典委员会。 3 研究结果 本次研究结果表明, 84 个注射剂品种中, 2 个 药检所均获得样品 ( 部分品种由于生产厂家较少因 此 2 个药检所得到的样品为相同厂家但不同批次的 样品 ) 且实验结果符合上述原则可建立细菌内毒素 检查法的 , 或只有 1 个药检所获得样品但实验结果 也符合上述原则可建立细菌内毒素检查法的品种共 有 58 个; 2 个药检所实验结果差异较大或 存在其 它问题的品种有 6 个 ; 另有部分品种由于生产厂家 较少 , 市场上很难找到样品, 因此未找到样品无法 进行研究的品种 20 个。 样品对于细菌内毒素检查法无明显的 干扰作 用, 不需要特别处理 , 可使用任意灵敏度的鲎试剂 进行检验的品种共有 34 个 , 结 果见表 1 。样品对 细菌内毒素检查法存在一定的干扰作用 , 但经过稀 释或其他方法可排除干扰 , 可建立内毒素检查法的 品种共 24 个。具体品种名称及排除干扰方法等详 见表 2。样品对细菌内毒素检查法存在较强的干扰 作用 , 并且经过一般的方法无法排除干扰, 或存在 其他问题 , 需要进一步研究的品种共 6 个, 具体品 种名称及存在的问题详见表 3。
[ 1] *
中国 药典
2005
中仍使用家兔热原法的 25 个注射用药品及
临床上通过静脉方式给药的 59 个注射用小针剂进 行内毒素方法学研究 , 品种总数为 84 个。 2 2 参加研究的单位及研究方式 全国 34 个省 ( 市) 药检所的药理室参与了此 项工作, 原则上要求每个品种由1 ( 1) 1 ( 3)
0 21 1
可使用灵敏度为 0 25EU ∃ mL 1 鲎试剂进行检验。 可使用灵敏度为 0 25EU ∃ mL 1 鲎试剂进行检验。
表 3 存在问题需进一步研究 的的品种
药品名称 盐酸尼卡 地 平葡萄糖 注 射液 内毒素限值 ( E U ∃ mg 1 ) 0 5 承担工作 药检所 海南所 样品厂家数量 ( 样品批次 ) 3( 8) 最大不干扰浓度或 最小不干扰稀释倍数 ( mg ∃ mL 1 ) 原液无干扰作 用 , 部分 样 品的 2 倍稀 释液有干 扰, 4 倍 稀 释 液 存 在干 扰 , 8 倍稀 释 液 不 干 扰 , 16 倍 稀释液又出 现干扰作 用。 无法确定不干扰倍数。 辽宁所 注射用氨 力 农 2 青岛所 山东所 2( 6) 16 倍稀释后无干扰作用 0 03 0 25 青岛所试验结果为需使用 灵敏度为 0 06EU ∃ mL 1 的鲎试剂才能排除干扰进 行试验 , 而山东所结 果为 可使用灵敏度为 0 5 EU ∃ mL 1 的鲎试 剂试验即 无 干扰作用。 2 个药检所实验结果差异较大 , 需进行进 精氨酸 盐酸多巴 胺 注射液 10 5 武汉所 陕西所 新疆所 1( 3) 3( 8) 3 125 1 25 0 0167 一步研究。 样品不易 溶于 水 , 只 能 使 用 灵敏 度 为 0 03EU ∃ mL 1 鲎试剂才能排除干扰。 样品 pH 在 3 0~ 4 5 之 间 , 需 先将 样品 pH 调 至 7 0 左右后检 验。 但不 同厂家 生产 的样 品与 鲎 试 剂反应不 一致 , 江苏 的 2 批有 抑制作用 , 需稀释 至 0 0167mg ∃ mL 1 后 才能 排除 干扰 , 只能 使用 灵 敏 钆喷酸葡 胺 注射液 0 5 广州所 北京所 2( 12) 8倍 8倍 度为 0 06EU ∃ mL 1 的鲎试剂。 样品对于不同厂家的鲎试剂反应不一致, 有的稀释 4 倍后可进行实验; 有的稀释 8 倍后才可排除干扰 , 只 能使用灵敏度为 0 06 EU ∃ mL 1 的鲎试剂进行检验。 葛根素注 射 液 0 125 安徽所 海南所 6( 15) 2 08 0 6 使用相同鲎试剂对同 一厂家 的不同 批号样 品进 行 实验 , 结果差异大。 有的鲎试剂 在 1 25mg ∃ mL 1 无干扰 , 有的鲎试 剂 在 0 6 mg ∃ mL 1 无干 扰 , 需 使用 灵 敏 度 为 0 06 EU ∃ m L 1 以上鲎试剂。 总结 样品与鲎试剂的反应不稳定 , 无法 确定不干扰稀 释 倍数。不适于建立内毒素检查法。
作者简介 : 蔡彤 , 硕士 , 主管药师 ; T el : ( 010) 67095381; E mail: t eddyct@ 163 com 通讯作者 : 高华 , 博士 , 研究员 ; T el : ( 010) 67095231; E mail: hu ag55@ 163 com
中国药事 2010 年第 24 卷第 8 期 检所进行方法学研究, 共同完成。 要求各药检所对于每个品种尽量在市场上抽取 2 个药品生产厂家、每个厂家 3 个批号的样品, 并 对每批样品进行凝胶法干扰实验 , 以确定样品是否 对鲎试剂与内毒素的反应存在干扰作用, 并确定该 品种不干扰的最小稀释倍数或最大稀释浓度。实验 方法按照 中国药典 2005 年版二部附录 ∀ 细菌 内毒素检查法# [ 1] 进行。 品种的内毒素限值由负责该品种的 2 个药检所 按药典规定公式 ( L = K/ M, 其中 M 为人每小时 每公斤体重的最大用药剂量 , 根据药典委员会编制 的 临床用药须知 或 化学药品说明书 中规定 的剂量确定) 进行计算。对于在国外药典中已使用 内毒素检查法的品种, 还需参考同年版的 美国药 典 [ 2] 及 英国药典 [ 3] , 比较计算出的限值与国外 药典中该品种的限值, 取其中更为严格的作为该品 种的限值。最后由中检所进行复核, 最终确定此品 种的内毒素限值。 考虑到鲎试剂的质量存在差异, 不同的鲎试剂 对样品的检测结果有时会有所不同, 因此要求每个 品种每个批次的样品须使用 2 个鲎试剂厂家生产的 鲎试剂同时进行干扰实验, 以确定能否普遍适用于 我国市售的鲎试剂。并且为保证实验的稳定性及重 现性, 所有试剂 ( 细菌内毒素标准品、鲎试剂和内 毒素检查用水 ) 均由中检所统一安排提供。 2 3 结果判定标准
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中国药事 2010 年第 24 卷第 8 期
64 种注射用药品细菌内毒素检查法的方法学研究
蔡 彤, 张国来, 高 华
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( 中国药品生物制品检定所 , 北京
100050)
摘要: 目的 对 中国药典 2005 年版二部中使用热原检查项的注射剂类药品及临床上通过静脉方式给 药的部分注射用小针剂进行细菌内毒素检查法的方法学研究, 以确定这些品种建立内毒素检查法的可行 性 , 以及其检查限值的定值 。方法 通过 34 个省市药检所药理室的协作研究, 采用细菌内毒素凝胶法, 对 每个品种抽取的样品进行干扰实验。结果 确定了每个品种的不干扰浓度或稀释倍数, 并以此判断该品种 能否使用细菌内毒素检查法进行检验 。 结论 58 个品种可采用内毒素检查法 , 6 个品种需进行进一步研究。 关键词 : 注射用药品 ; 细菌内毒素 ; 方法学研究 文献标识码: A 文章编号 : 1002 7777 ( 2010) 08 0812 05
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中国药事 2010 年第 24 卷第 8 期
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( 续表 2)
药品名称 注射 用 头 孢 替 唑 钠 枸橼 酸 芬 太 尼 注 射液 尼莫地平注射液 甲氧 氯 普 胺 注 射 液 酒石 酸 美 托 洛 尔 注射液 注射 用 氢 化 可 的 松琥珀酸钠 磷酸 川 芎 嗪 注 射 液 甲氨蝶呤注射液 盐酸四环素
中图分类号: R944 1; R927 12
Study of Bacterial Endotoxin Test on 64 Drugs for Injection Cai T ong , Zhang Guo lai, Gao H ua ( Nat io nal Inst it ut e f or t he Co nt rol of P harm aceut ical and Biolo gical P roducts, Beijing 100050) ABSTRACT: Objective T o scr een t he drugs fo r injection w it h py rog en t est and injectio ns f or intr av enous in Ch P( 2005) Vo l !, t o evaluat e t he possibilit y fo r t he replacement wit h bact er ial endot o xin t est, and t o invest igat e the m et hodolog y o f the bact erial endot ox in t est for all kinds of inject ions required f or pyro gen t est in Ch P ( 2005) Vo l ! Methods Int erference t est s w ere done on each sample of inject ions by using bact er ial endot ox in g el met ho d T he sam ples w ere pro vided by t he co llabo rat ion of Phar maco logy Divisions of Inst it ut e f or Drug Cont ro l in 34 pro vinces or cities Results Determined t he no interf er ence co ncent rat io n or t he minim um no int er ference dilut io n of each dr ug and w het her t he drug is valid f or bacterial endot ox in t est Conclusion 58 drug s fo r inject io n are valid f or bact erial endot ox in t est , and 6 dr ug s f or inject ion ar e not suit able for bact er ial endo t oxin t est KEY WORDS: 1 前言 细菌内毒素检查法作为检测 GM P 生产条件下 药品中内毒素含量的方法, 在全世界已得到广泛的 应用。我国使用细菌内毒素检查进行检验的注射用 药品在 中国药典 2005 年版中已达到 205 个品 年版 种 , 但收载品种的数量较之美国、欧洲等国家还是 存在一定差距。为进一步提高药品的质量、扩大细 菌内毒素检查法的使用范围、更好的控制药品的安 全性, 由国家药典委员会组织, 中国药品生物制品 检定所 ( 简称 ∀ 中检所# ) 牵头 , 组织全国 34 个省 市药检所药理室, 对 中国药典 2005 年版中的部分 injection; bacterial endot ox in t est ; m et hodolog y st udy 注射用药品继续开展细菌内毒素方法学的研究工作, 为 中国药典 2010 年版的修订提供了参考。 2 研究工作过程 2 1 品种的选择 本次研究工 作主要是 针对