第4章 细菌药敏试验及其耐药表型检测

推测其他药物的敏感性
青霉素 氨苄西林，美洛西林
替卡西林
头孢噻吩
肠杆菌科
头孢拉定，头孢氨苄 头孢克罗
奈啶酸 万古霉素
2019/1/28
肠杆菌科 所有
所有氟喹诺酮类 替考拉宁
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药敏试验-稀释法
以一定浓度的抗菌药物与含有被试菌株的培养基进
行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀释），经培 养后观察其最低抑菌浓度。
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不同国家的判定折点 －可能不同
原因：
用药剂量不同，服药的间隔不同
用常规用量治疗有效 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的
MIC 5倍以上。

耐药（Resistance）
用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度
敏感性分类（2）

中介 (Intermediate)
MIC接近血、体液中药物的浓度，治
疗反应率低于敏感株
药物生理浓集部位有效 (尿-FQ) 加大用药剂量可能有效
围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交 点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度。
E test 法
细菌生长 区
E test 塑料 条
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椭圆形 细菌生长 抑制区 判读抑菌浓度 （MIC ug/ml)

细菌
抗菌药物
嗜麦芽窄食单胞 甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、左氧氟沙星、米诺环素、氯霉素、头孢他啶、替卡西林/克拉维
菌
酸）
肠球菌属
氨苄西林、替考拉宁、环丙沙星或左氧氟沙星、万古霉素、红霉素、高浓度庆大霉素 （CN120）或高浓度链霉素（STH300）、青霉素、利奈唑胺、呋喃妥因（尿标本）
肺炎链球菌
苯唑西林、红霉素、左氧氟沙星、莫西沙星、青霉素b(MIC)、头孢噻肟或头孢曲松b (MIC)、万古霉素、美罗培南（脑脊液标本）
• 抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度，并与 该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系。 即抑菌圈愈大，MIC愈小。
纸片扩散法
试验方法 1 于纯培养平板上，挑取相同的菌落4~5个 2 用无菌生理盐水制成0.5麦氏单位（真菌为2.0麦氏单位）的
细菌悬液
纸片扩散法
3.用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液；
MIC与抑菌圈直径的线性关系
Log2. MIC
R v
I
S
耐药
中介 敏感
抑菌圈直径（mm)
现有主要标准
• 临床实验室标准化委员会（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）
• 欧洲抗菌药物敏感性试验委员会 EUCAST • 参考标准 ISO 20776-1 （国际微量肉汤稀释法的参考方
氨苄西林/舒巴坦、头孢呋辛、头孢唑啉、头孢西丁、庆大霉素、妥布霉素、青霉素、利 福平、磷霉素、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、环丙沙星或左氧氟沙星、克林霉素、红霉素、苯 唑西林、替考拉宁、万古霉素(MIC)、利奈唑胺、呋喃妥因（尿标本）
头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮、氨曲南、替卡西林/克拉维酸、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉 西林/他唑巴坦、左氧氟沙星或环丙沙星、阿米卡星、亚胺培南或美罗培南、妥布霉素、 庆大霉素、哌拉西林、多粘菌素

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判读抑菌浓度
（MIC ug/ml)
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E test 法特点
优点
连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好 （相关系数为0.9）.可测MIC。
操作简单，影响因素少，稳定性高。
缺点：E试条较昂贵; 不适用于生长缓慢的苛养菌。
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四、联合药物敏感试验
联合药物意义
盖有15--20个对倍稀释浓度的宽度范围。
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将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育，围
绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交
点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的MIC。
依照CLSI标准判断其敏感、耐药、中介。
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有菌生长区 无菌生长区
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椭圆形细菌 生长抑制区
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四种方法
比例法 放射同位素法 绝对浓度法 耐药率法
•直接法：直接采用图片阳 性的体液标本。（须经充 分消化五杂菌）
•间接法：经分离纯培养后 的次代培养菌。
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间接比例法（WHO推荐）
Middlebrook7H10琼脂 培养3周
无药
药1
药2
药3
不含药的对照格菌落数应为50~150 敏感：含药格无结核杆菌生长，
抗菌药物与细菌 纸片含量 抑菌圈直径：mm 相应MIC μg/ml 耐药 中介度 敏感 耐药 敏感
丁胺卡那霉素 氨苄青霉素
测肠杆菌 测葡萄球菌 测嗜血杆菌 测肠球菌
30μg ≤14 15-16 ≥ 17 ≥32 ≤16
10μg 10μg 10μg 10μg

药敏试验的分类
纸片扩散法
将抗菌药物纸片贴在接种了待测 菌的琼脂平板上，通过测量抑菌 圈大小来确定细菌对药物的敏感
程度。
稀释法
通过不同浓度的抗菌药物与细菌在 琼脂平板上接触，观察细菌生长情 况，以判断药物的抑菌浓度。
E-test法
将抗菌药物浓度梯度试纸贴在接种 了待测菌的琼脂平板上，根据抑菌 圈边缘与试纸条的交汇点读出最低 抑菌浓度值。
点，是临床常用的药敏试验方法之一。
04
药敏试验的结果解读
结果判读标准
敏感（Susceptible）
01
表示细菌对药物敏感，通常为≤2μg/ml或≤10μg/ml，具体标
准根据药物种类和实验方法而异。
中介（Intermediate）
02
表示细菌对药物中度敏感，通常为2μg/ml＜MIC＜10μg/ml或
某些细菌可以产生酶类，将药物分解 或灭活，从而降低或消除药物的抗菌 作用。
抗菌药物作用靶点的修饰
细菌通过增加或改变靶点蛋白的数量 或修饰状态，降低药物与靶点的结合 能力。
03
药敏试验的方法
纸片扩散法
总结词
一种常用的药敏试验方法
详细描述
纸片扩散法是一种简便、快捷的药敏试验方法，通过将含有一定浓度的抗菌药 物的纸片贴在接种了待测菌的琼脂平板上，观察细菌周围的抑菌圈大小，判断 细菌对药物的敏感程度。
细菌药敏试验及其耐药表型检测课 件
目录
• 细菌药敏试验概述 • 细菌耐药性及耐药表型 • 药敏试验的方法 • 药敏试验的结果解读 • 耐药表型检测的应用 • 展望与未来发展方向
01
细菌药敏试验概述
药敏试验的定义
• 药敏试验：指通过实验室方法检测细菌对抗生素等抗菌药物的敏感程度，为临床医生提供抗菌药物选择依据的过程。