沙门氏菌诊断血清说明书

目的建立沙门氏菌生化检验操作规程，确保检验数据的准确性。

依据《中国药典》2000版一部附录XIIIC-（80-81页）。

范围本标准适用于沙门氏菌生化检验操作。

责任人QC负责人、化验员。

内容1使用仪器、玻璃器皿、培养基、染色剂及试剂。

1.1仪器：托盘天平1.2玻璃器皿：150ml锥开瓶、试管、载玻片1.3试液：1.3.1靛基质试液：取对二甲基苯甲醛5.0g，加入乙醇75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入（边滴边振摇，以免骤热使溶液色泽变深）即得。

1.3.2 0.9%氯化钠溶液：取氯化钠0.9g，加入蒸馏水100ml，微热使溶解，121℃灭菌30分钟，放冷，备用。

1.4染色剂：1.4.1结晶紫染液：取结晶紫1.0g，加入95%乙醇20ml使溶解，加1%草酸铵水溶液80ml，混匀，静置48小时使用，置密闭棕色瓶中贮存。

1.4.2碘液：取碘化钾2.0g，加水3-5ml使溶解，加入碘片1.0g，使全部溶解后加水稀释至300ml，置密闭棕色瓶贮存。

1.4.3沙黄试液：取沙黄0.25g，加95%乙醇10ml，使完全溶解后，加水100ml。

1.5培养基：1.5.1营养肉汤增菌液：取营养肉汤试药22g，加蒸馏水1000ml微热使溶解，按每瓶100ml分装，121℃灭菌15分钟，备用。

1.5.2四硫磺酸盐增菌液：取四硫磺酸盐试药4.6g，加蒸馏水100ml微热使溶解，121℃灭菌30分钟，备用。

1.5.3胆盐硫化琼脂培养基：取胆盐硫化琼脂培养基试药48g，加蒸馏水1000ml加热溶化后，116℃灭菌30分钟，冷却至60℃灭菌，倾注平皿，备用。

1.5.4曙红亚甲蓝琼脂培养基：取营养琼脂培养基（取营养琼脂试药4g，加水100ml，116℃灭菌备用）加热溶化后，取100ml，冷至60℃按无菌操作加入灭菌的20%乳糖溶液5 ml，曙红钠指示液2ml和亚甲蓝指示液1.5ml，摇匀，倾注平皿。

1.5.5沙门、志贺菌属琼脂：取沙门、志贺菌属琼脂试药60g，加蒸馏水1000ml，放置20分钟，用石棉网微火煮沸使完全溶解，冷至50℃左右倾入无菌平皿中凝固后，备用。

一、概述沙门氏菌是一种寄生在动物肠道内的细菌，可以通过食物和水传播给人类，引起食物中毒和胃肠道疾病。

由于沙门氏菌的血清型众多，正确书写其血清型成为临床医学和科研中的重要问题。

本文将介绍沙门氏菌血清型的正确书写格式及相关注意事项。

二、沙门氏菌血清型的基本概念1. 沙门氏菌的分类沙门氏菌属于革兰氏阴性菌，是一类食源性病原菌，可引起沙门氏菌病和肠炎等疾病。

根据O抗原和H抗原的组合形式，沙门氏菌可分为不同血清型。

2. 沙门氏菌血清型的意义沙门氏菌血清型的不同代表了不同的致病菌株，对于流行病学调查、病原菌追踪及疫苗研制等具有重要意义。

正确书写沙门氏菌血清型是保证实验结果准确性的前提。

三、沙门氏菌血清型的正确书写格式1. 沙门氏菌血清型的表示方法沙门氏菌血清型的表示方法通常为“O抗原+H抗原”，其中O抗原代表细菌的外膜抗原，H抗原代表细菌的鞭毛抗原。

如O4:H12表示该沙门氏菌株的O抗原为4型，H抗原为12型。

2. O抗原和H抗原的书写规范（1）O抗原的书写规范O抗原应以大写字母“O”开头，后跟阿拉伯数字表示型号，如O4。

（2）H抗原的书写规范H抗原应以大写字母“H”开头，后跟阿拉伯数字表示型号，如H12。

3. 血清型书写格式示例正确的沙门氏菌血清型书写格式应为“O抗原+H抗原”，如：O4:H12。

在正式文献、研究报告和临床诊断中，应严格遵循这一格式。

四、关于沙门氏菌血清型书写的注意事项1. 注意大小写在书写沙门氏菌血清型时，应注意O抗原和H抗原的大小写格式。

大写的“O”和“H”有助于准确识别并避免歧义。

2. 注意数字和符号在表示O抗原和H抗原的型号时，应使用阿拉伯数字，并用英文冒号“:”分隔，避免使用其他符号或文字造成混淆。

3. 注意全称和缩写在一些场合，为了简洁与准确，人们可能会采用缩写形式表示沙门氏菌血清型，例如“4:12”表示O4:H12。

但在正式书面文献中，应尽量使用全称以确保准确无误。

五、结语正确书写沙门氏菌血清型对于科研工作和临床诊断具有重要意义。

沙门氏菌检测1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1.1 冰箱：2℃～5℃。

1.2 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃。

1.3 均质器。

1.4 振荡器。

1.5 电子天平：感量0.1g。

1.6 无菌锥形瓶:容量500ml，250ml。

1.7 无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头。

1.8 无菌培养皿：直径90mm。

1.9 无菌试管：3mm× 50mm、10mm× 75mm。

1.10 无菌毛细管。

1.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。

1.12 全自动微生物生化鉴定系统。

2 培养基和试剂2.1 缓冲蛋白胨水（BPW）：见附录中1。

2.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB ）增菌液：见附录中2。

2.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见附录中3。

2.4 亚硫酸铋（BS）琼脂：见附录中4。

2.5 HE琼脂：见附录中5。

2.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD ）琼脂：见附录中6。

2.7 沙门氏菌属显色培养基。

2.8 三糖铁（TSI）琼脂：见附录中7。

2.9 蛋白胨水、靛基质试剂：见附录中8。

2.10 尿素琼脂（pH7.2）：见附录中9。

2.11 氰化钾（KCN ）培养基：见附录中10。

2.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录中11。

2.13 糖发酵管：见附录中12。

2.14 邻硝基酚β-D 半乳糖苷（ONPG）培养基：见附录中13。

2.15 半固体琼脂：见附录中14。

2.16 丙二酸钠培养基：见附录中15。

2.17 沙门氏菌O和H诊断血清。

2.18 生化鉴定试剂盒。

3 操作方法3.1 试验前准备3.1.1 将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、量筒、吸管（1ml、10ml）、稀释剂等移至操作室内。

准备好足够用量，避免操作中出入操作间。

3.1.2 开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置30min。

xx属诊断血清学试验操作程序1.目的制定沙门氏菌属诊断血清使用程序，指导对沙门氏菌属进行血清学分型。

2.原理用沙门氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成，通过凝集试验原理供沙门氏菌属常见菌型定型。

3.试剂及实验设备3.1xx属诊断血清：宁波天润生物药业有限公司生产的规格为11种的沙门氏菌属诊断血清3.2试剂保存：2~8°C避光保存，防止冻结，在有效期内使用。

3.3实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血平板、营养琼脂、电热高温接种灭菌器。

4.程序步骤4.1将诊断血清于冰箱取出后平衡至室温。

4.2选择经初步生化检测符合沙门菌生物特性的疑似菌落。

4.3菌群分析将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，先用O多价A~F群血清进行凝集试验，如阳性，提示待检菌可能属于A~F群范围内，因97%以上的沙门菌都包括在A~F6个O群之内，如果不凝再使用其他O抗血清进行凝集试验，如与其中一种抗血清凝集，待检菌即属于相应的菌群。

若与多价O抗血清不凝集，有如下3种可能：①含有Vi抗原；②A~FO群之外的沙门菌；③沙门氏菌属以外的细菌。

可按下述方法进一步检测，将纯菌落用无菌生理盐水洗下，制成浓菌液，再分成2份。

1份不经处理，为活菌液，另1份放100°C水浴中30min，为加热菌液。

取活菌与Vi抗血清，取加热菌与Vi抗血清凝集，加热菌与Vi抗血清、A~F多价O 抗血清分别进行玻片凝集试验。

根据结果作如下分析：①活菌与Vi抗血清凝集，加热菌与Vi抗血清凝集者，可能属于C群或D 群菌，用O7和O9抗血清定群；②活菌与Vi抗血清不凝，可能属于A~FO群之外的沙门菌或其他菌属细菌，需进行生化试验定属，若符合沙门氏菌属细菌特征，可送CDC鉴定；③加热菌与Vi抗血清凝集，而与A~F多价O抗血清不凝集者，可报告为阴性。

4.4血清型分析菌群确定后，分析被检菌的鞭毛抗原成分。

《畜产品检测技术》电子教材沙门氏菌检测血清学分型（选做）一、血清学分型操作步骤（一）O 抗原的鉴定用A～F多价O 血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做对照。

在生理盐水中自凝者为粗糙型菌株，不能分型。

1.被A～F多价O 血清凝集者，依次用O4；O3、O10；O7；O8；O9；O2和O11因子血清做凝集试验。

根据试验结果，判定O 群。

被O3、O10血清凝集的菌株，再用O10、O15、O34、O19单因子血清做凝集试验，判定E1、E4各亚群，每一个O 抗原成分的最后确定均应根据O 单因子血清的检查结果，没有O单因子血清的要用两个O 复合因子血清进行核对。

2.不被A～F多价O 血清凝集者，先用9种多价O 血清检查，如有其中一种血清凝集，则用这种血清所包括的O 群血清逐一检查，以确定O 群。

每种多价O 血清所包括的O 因子如下:O 多价1 A，B，C，D，E，F群(并包括6，14群)O 多价2 13，16，17，18，21群O 多价3 28，30，35，38，39群O 多价4 40，41，42，43群O 多价5 44，45，47，48群O 多价6 50，51，52，53群O 多价7 55，56，57，58群O 多价8 59，60，61，62群O 多价9 63，65，66，67群（二）H 抗原的鉴定1.属于A～F各O 群的常见菌型，依次用表1所述H 因子血清检查第1相和第2相的H 抗原。

表1A-F群常见菌型 H抗原表2.不常见的菌型，先用8种多价H 血清检查，如有其中一种或两种血清凝集，则再用这一种或两种血清所包括的各种H 因子血清逐一检查，以第1相和第2项的H 抗原。

8种多价H 血清所包括的H 因子如下:H 多价1 a，b，c，d，iH 多价2 eh，enx，enz15，fg，gms，gpu，gp，gq，mt，gz51H 多价3 k，r，y，z，z10，lv，lw，lz13，lz28，lz40H 多价4 1，2；1，5；1，6；1，7；z6H 多价5 z4z23，z4z24，z4z32，z29，z35，z36，z38H 多价6 z39，z41，z42，z44H 多价7 z52，z53，z54，z55H 多价8 z56，z57，z60，z61，z62每一个H 抗原成分的最后确定均应根据H 单因子血清的检查结果，没有H 单因子血清的要用两个H 复合因子血清进行核对。

沙门菌血清学检测标准操作规程
1．目的
规范沙门菌的血清学检测标准操作规程。

2．原理
用已知的沙门菌诊断血清在载玻片上直接与细菌培养物或菌悬液混合，若出现肉眼可见的特异性凝集块，表示该菌即为沙门菌。

3．试剂
沙门菌诊断血清，生理盐水。

4．质控
伤寒沙门菌ATCC50096阳性；大肠埃希菌ATCC25922阴性。

5.操作步骤
5.1 首先用可疑菌与沙门菌O多价血清(A-F)进行凝集，若呈明显凝集，提示被检菌株可能属于A-F6个O群范围之内，再用H因子血清第一相（特异相）定型，最后用H因子第二相（非特异相）辅助定型。

5.2 若生化反应符合沙门菌，但A-F多价血清不凝集，首先考虑是否存在表面抗原（Vi抗原），因为Vi抗原能阻断O抗原与相应抗体发生凝集，加热可将其破坏。

应将细菌制成菌悬液，放入沸水中加热15～30分钟，冷却后再次做凝集试验。

若去除Vi抗原后仍不凝集，此时应考虑是否为A-F
以外菌群，应送专业实验室进行鉴定。

6.结果判断
阴性：试验一侧及对照一侧均为混浊。

阳性：对照一侧均为混浊，试验一侧明显凝集。

自凝：试验一侧及对照一侧凝集。

7.注意事项
伤寒沙门菌菌体表面常有一层Vi抗原。

它能阻抑菌体抗原与抗血清的凝集，从而导致假阴性结果。

此时应将菌悬液于100℃中煮沸1小时，以破坏Vi抗原，然后再做试验。

8.临床意义
主要用于沙门菌属的鉴定。

沙门氏菌血清学分型沙门氏菌是一类常见的致病菌，它可以引起人体多种疾病，如食物中毒、肠道感染等。

沙门氏菌血清学分型是对沙门氏菌进行分类的一种方法，通过对不同血清型别的沙门氏菌进行研究，可以帮助我们了解其流行病学特征和病原学特性，为疾病的防治提供重要依据。

沙门氏菌血清学分型基于沙门氏菌的抗原性质，主要通过凝集反应和补体结合反应来进行分类。

目前常用的分型方法主要有Kauffmann-White方案和Ewing方案，其中Kauffmann-White 方案广泛应用于临床和疫情监测中。

Kauffmann-White方案根据沙门氏菌的鞭毛抗原（H抗原）、鞭毛相联抗原（Hd抗原）和表面抗原（O抗原）的不同组合来进行分类。

其中，鞭毛抗原主要分为H1-H56型，鞭毛相联抗原主要分为Hd1-Hd30型，表面抗原主要分为O1-O181型。

根据不同的抗原组合，可以将沙门氏菌分为不同的血清型别，如O1:H1、O1:H2等。

Ewing方案则是根据沙门氏菌的鞭毛抗原和相联抗原进行分类。

它将鞭毛抗原分为a、b、c等不同的抗原型别，将相联抗原分为z1、z2等不同的抗原型别。

通过对不同的抗原型别进行组合，可以得到不同的血清型别，如a:z1、b:z2等。

沙门氏菌血清学分型的意义在于帮助我们了解不同沙门氏菌的流行情况和传播途径，为疾病的防控提供科学依据。

例如，在食物中毒事件中，通过对沙门氏菌的血清学分型，可以追溯病原菌的来源和传播途径，及时采取措施遏制疫情的扩散。

此外，沙门氏菌血清学分型还可以用于监测菌株的变异和流行趋势，为疫苗研发和疾病防治提供参考。

需要注意的是，沙门氏菌血清学分型虽然在临床和疫情监测中有重要意义，但并不是唯一的分类方法。

近年来，随着分子生物学和基因测序技术的发展，越来越多的研究采用基因分型方法对沙门氏菌进行分类。

这些基因分型方法不依赖于抗原性质，而是通过分析沙门氏菌的遗传信息来进行分类，具有更高的分辨率和准确性。

沙门氏菌血清学分型是对沙门氏菌进行分类的一种方法，通过对不同血清型别的沙门氏菌进行研究，可以了解其流行病学特征和病原学特性，为疾病的防治提供重要依据。