四物汤对脑缺血再灌注小鼠海马结构及脑组织SOD和GSH-PX活力的影响

药理研究Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2017Vol.30No.2四物汤对脑缺血再灌注小鼠海马结构及脑组织SOD和GSH-PX活力的影响*梁涢张家口市第一医院，河北张家口075000［摘要］目的：研究四物汤水提液对脑缺血再灌注小鼠海马组织形态的影响及脑组织SOD和GSH-PX活力的影响，进一步探讨四物汤水提液对脑缺血再灌注保护作用的机制。

方法：将55只雄性健康昆明种小鼠，随机分成脑缺血再灌注模型对照组，假手术组，四物汤水提液高、中、低剂量组，每组11只。

采用Himori法制备小鼠脑缺血再灌注模型，四物汤水提液高、中、低剂量组分别灌胃四物汤水提液(40、20、10g/kg)，连续给药15天，模型对照组及假手术组给予等体积蒸馏水。

于末次给药后1小时，处死小鼠，取海马组织，制作病理标本，光镜下观察小鼠海马组织形态学变化。

取小鼠脑组织，测定SOD和GSH-PX的活力。

结果：与假手术组相比，模型组小鼠海马神经细胞结构明显异常；与模型组比较，四物汤水提液高、中、低剂量组小鼠海马神经细胞结构异常均有改善；与假手术组相比，模型组小鼠脑组织中SOD和GSH-PX的活力均显著降低(P＜0.05)，与模型组比较，四物汤水提液高、中、低剂量组小鼠脑组织中SOD和GSH-PX的活力均有显著提高(P＜0.05)。

结论：四物汤水提液对脑缺血再灌注小鼠海马组织病理改变具有一定的保护作用，其保护作用可能与其抗氧化作用有关。

［关键词］四物汤；脑缺血再灌注；海马结构；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽过氧化物酶［中图分类号］R285.5［文献标识码］A［文章编号］1004-6852(2017)02-0010-03The Effects of SiWu Decoction on Hippocampus and Activity of Brain Tissue SODand GSH-PX in Mice with Cerebral Ischemia-reperfusionLIANG YunThe First Hospital of Zhangjiakou City,Zhangjiakou075000,ChinaObjective:To explore the effects of water extraction of SiWu decoction on hippocampus and activity of brain tissue SOD and GSH-PX in mice with cerebral ischemia-reperfusion,and to discuss protection mechanism of water extraction of SiWu decoction on cerebral ischemia-reperfusion furtherly.Methods:55healthy male mice from Kunming were randomly divided into the model control group,sham operation group,the low, moderate and high dosage groups of water extraction of SiWu decoction,each group eleven mice.mice models with cerebral ischemia-reperfusion were made by using Himori methods,the low,moderate and high dosage groups of waterextraction of SiWu decoction were given intragastric administration of water extraction of SiWu decoction (40,20,10g/kg),continuous medication for15days,the model control group and the sham operation group were given isovolumetric distilled water.After one hour of the last medication,mice were killed,hippocampi were aquired,pathological samples were made,histomorphology changes of mice hippocampi were observed under light microscope.Cerebral tissue were fetched,then the activity of SOD and GSH-PX were measured.Results:Compared with the sham operation group,neuron structure of mice hippocampus in the model group was obvious abnormal; compared with the model group,the abnormal neuron structure of mice hippocampus in the low,moderate and high dosage groups of water extraction of SiWu decoction all improved;compared with the sham operation group,activity of SOD and GSH-PX of cerebral tissue in the model group decreased obviously(P＞0.05),compared with the model group,activity of SOD and GSH-PX of cerebral tissue in the low,moderate and high dosage groups of water extrac-tion of SiWu decoction increased significantly(P＜0.05).Conclusion:Water extract of SiWu decoction has certain protection against of histomorphology changes of hippocampus mice with cerebral ischemia-reperfusion,its protec-tion may has relations with antioxidant function.SiWu decoction;cerebral ischemia-reperfusion;hippocampus formation;SOD;GSH-PX2017年第30卷第2期四物汤出自宋代中医名著《太平惠民和剂局方》。

方由当归、川芎、白芍、熟地黄组成，是治疗各种血病的基本方剂。

最近的研究发现四物汤可用于治疗缺血性视神经病变［1］，治疗更年期综合征［2］，改善卵巢早衰症状［3］。

本实验制备小鼠脑缺血再灌注模型，观察了四物汤水提液对脑缺血再灌注模型小鼠海马组织形态的影响及其对脑缺血再灌注模型小鼠脑组织SOD及GSH-PX活力的影响。

1材料与方法1.1动物健康雄性昆明种小鼠，由河北北方学院动物室提供。

小鼠置于本实验室光线适宜、安静的饲养房内饲养3天后用于实验。

室温(20±2)℃，分笼饲养，每笼饲养11只。

每日清洁一次底垫，自由进食普通小鼠饲料，饮用自来水。

1.2仪器万分之一电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)，Lecia RM2245轮转式切片机(德国莱卡公司)，KD-H烘片机(浙江省金华市科迪仪器设备有限公司)，KD-P摊片机(浙江省金华市科迪仪器设备有限公司)，光学显微镜(日本OLYMPUS公司)，显微照相仪(日本OLYMPUS公司)，Lab Tech全自动紫外可见分光光度计(北京莱伯泰科仪器有限公司)，FSH-2内切式组织可调高速匀浆器(江苏大地自动化仪器厂)，Sigma3K30高速冷冻离心机(德国Sigma公司)。

1.3试剂当归、川芎、白芍、熟地黄购自张家口市天河医药有限公司。

苏木精染液(北京索莱宝科技有限公司)，伊红染液(北京索莱宝科技有限公司)，其他试剂均为国产分析纯，实验用水为三重蒸馏水。

1.4实验方法1.4.1四物汤水提液的制备按照四物汤方组成取当归12g、川芎12g、白芍10g、熟地黄8g，60℃干燥，粉碎为粗粉，加6倍蒸馏水，超声辅助提取3次，30min/次，过滤，合并，浓缩得水提液，生药含量为1.0g/mL。

1.4.2分组与给药1.4.2.1分组昆明种雄性小鼠55只，随机分成5组：假手术组，脑缺血再灌注模型组，四物汤水提液高、中、低剂量组，每组11只。

1.4.2.2给药采用Himori法制备小鼠脑缺血再灌注模型［4］，四物汤水提液高、中、低剂量组分别灌胃给以四物汤水提液(40，20，10g/kg)，模型对照组及假手术组给予等体积蒸馏水，连续给药15天。

2结果2.1海马组织结构观察［5］2.1.1脑标本的制备末次给药后1小时，每组中随机取3只小鼠，腹腔注射4%水合氯醛(0.01mL/g)麻醉，打开胸腔，暴露心脏，经心尖搏动处插管，经左心室插入升主动脉升段，剪开右心耳，先用4℃生理盐水快速冲洗，待右心耳处流出澄清液体，换用4%的多聚甲醛溶液(4℃，pH=7.4)进行灌注固定。

至小鼠四肢强直后，迅速断头，暴露颅骨，打开颅腔，暴露小鼠脑组织。

用眼科剪将与脑组织相连的硬脑膜剥离，取出全脑，滤纸吸去表面水分，去除嗅球、小脑和低位脑干。

在冰上于小鼠海马前后各作一个冠状切面，将小鼠大脑切为3段。

在小鼠脑视交叉至上丘之间的部位分离出海马，依次向后冠状切取2mm厚的海马组织，用4%多聚甲醛溶液固定，将固定24小时的脑组织经过乙醇梯度脱水、二甲苯透明、浸蜡、常规石蜡包埋，展片并烘干，制备包含海马的冠状切片，厚度为5μm。

将制备好的切片进行常规HE染色，中性树胶封片。

光镜400倍观察切片并照相。

2.1.2HE染色结果假手术组小鼠海马神经细胞呈圆形或椭圆形，边界、轮廓清晰，排列整齐致密，染色均一，细胞核无固缩，核仁清晰。