离体血管环的实验装置和方法

杜仲乙醇提取物对大鼠离体胸主动脉环的作用及机制岳晓洁1，，张炯炯1，许逸飞1 ，叶志孟1 ，张薇1，王会平2（1.浙江大学医学院临床二系，浙江杭州 310031; 2.浙江大学医学院生理学教研室，浙江杭州 310031）[摘要]：目的：探讨杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）醇提物对离体大鼠主动脉环收缩张力的作用及其可能机制。

方法：采用大鼠离体胸主动脉环灌流模型，采用累积加药法，观察杜仲醇提物对PE预收缩（苯肾上腺素组+E,-E）、氯化钾预收缩（氯化钾组+E,-E）的血管环的作用; 并检测杜仲对经无钙液预处理后的血管环的作用。

结果：不论是否有内皮，累计浓度杜仲对高浓度KCL及PE引起的血管环收缩均有明显的舒张作用。

格列苯脲（Glib），4－氨基吡啶(4－AP),四乙胺（TEA）,L-NAME,ODQ，吲哚（Indo）不能阻断杜仲对PE预收缩血管环的舒张。

胸主动脉环经无钙液孵育和杜仲处理后对PE的反应性降低。

结论：杜仲对胸主动脉环有非内皮依赖性的舒张作用，杜仲能通过抑制内钙释放而起到舒张血管环的作用。

[关键词]：杜仲乙醇提取物；胸主动脉环；内皮；钙通道Relaxant effect of Eucommia ulmoides Oliv On rat thoracic aorta YUE Xiao-jie, ZHANG Jiong-jiong, XU Yi-fei, YE Zhi-men, ZHANG Wei ,et al(The Second Department of Clinical Medicine, College of Medicine, Zhejiang University, Hangzhou 310031)[Abstract] Objective: To investigate the effect of Eucommia ulmoides Oliv on vascular circles and the underlying mechanisms. Methods: The study was performed with the model of isolate rat thoracic aorta rings in organ bath.The effect of accumulated of ethanol extract of the eucommia bark(EB) on aorta rings (+E,-E), pre-contracted with PE, and pre-contracted with KCl was observed. The effect of EB on aorta rings(-E) pre-contracted with PE(-E) with Ca2+ -free medium was also observed. Conclusion:With or without endothelium, communicative concentration EB has vasorelaxant effects on the thoracic aorta pre-contracted by KCL or PE. nitric oxide synthase inhibitor L-N (G)-nitroarginine methyl ester ( L-NAME), the Soluble guanylyl cyclase Inhibitor ODQ, voltage-dependent K+ channel inhibitor 4-AP, calcium-activated K+ channel inhibitor TEA, ATP-sensitive K+ channel inhibitor Glib, and cyclooxygenase inhibitor indomethacin can’t inhibit EB’s vasorelaxant effects. EB has no relaxation effect on aorta rings which are incubated with Ca2+ -free Kreb’s solution and pre-contracted with PE. Conclusion: EB can relax the rat thoracic aorta rings endothelium independent. And one mechanism is by inhibiting of intracellular calcium ions release .[Key words] :ethanol extract of the eucommia bark；The ring of thoracic aorta；endothelium；Ca2+ channel杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）是杜仲科植物，我国特有经济树种。

人体血液循环科学实验
本实验旨在探究人体血液循环的机理和过程。

实验将以模拟人体循环系统为基础，通过观察人体模型的运作过程，了解血液在循环系统中的流动情况和作用。

实验需要的材料：人体模型、洋红染液、注射器、细管、水桶。

实验步骤：
1. 将人体模型静置在实验台上，打开模型的血管系统，以保证血管畅通。

2. 在注射器中注入适量的洋红染液，再用细管将其连接到人体模型的动脉系统中。

3. 慢慢推动注射器，将染液注入人体模型的动脉系统中，观察染液在血管中的流动情况。

4. 模拟心脏收缩的作用，将水桶中的水泵入人体模型的心脏，观察血液在血管中的流动情况。

5. 观察染液在血管中的分布情况，了解血液在不同器官间的循环情况。

6. 在观察过程中，可以通过调整模型的角度和倾斜角度，模拟身体不同姿势下的血液循环情况。

实验结论：
通过实验，我们可以了解到人体循环系统的主要部分包括心脏、血管和血液。

在循环过程中，心脏是驱动血液流动的关键，血管则是血液流动通道，而血液则携带氧气和养分，通过循环系统向全身运输。

同时，我们也可以发现，血液在循环系统中的流动是有规律的，通过心脏的收缩和舒张，推动血液在血管中流动，并将氧气和养分输送到不同的器官中。

因此，保持心脏健康和血管畅通是维护人体健康的重要因素。

杜仲皮水提取物舒张大鼠离体胸主动脉环的作用及机制作者：戴胜合作者：方晶晶，陈赟，张丽，刘金炜（浙江大学医学院02级临床医学三系0203班2组，3021831086）[摘要]目的：研究杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）对离体大鼠胸主动脉环收缩张力的作用及其机制。

方法：采用大鼠离体胸主动脉灌流模型，累积加药，检测杜仲对去氧肾上腺素（PE）和KCL 预收缩的胸主动脉环收缩张力的影响。

结果：内皮完整时，杜仲皮水提取物（0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2 mg/mL）对PE（10-4mol/L）和KCL（60mmol/L）预收缩的血管环均产生舒张作用（p﹤0.01）；而用NO合酶（NOS）抑制剂L-NAME（10-4mol/L），鸟苷酸环化酶（GC）抑制剂ODQ（10µmol/L）以及环氧酶（COX）抑制剂Indo（10-5mol/L）处理血管后，杜仲皮水提取物的舒张血管效应均被阻断（L-NAME：p﹤0.05、ODQ：p﹤0.01、Indo：p﹤0.05）。

而用电压依赖性的K+ 通道阻断剂4-AP(1mmol/L)，Ca2+ 敏感性的K+ 通道阻断剂TEA(1mmol/L)以及ATP敏感性的K+ 通道阻断剂格列苯脲（Glib）(3µmol/L)处理后，对杜仲皮水提取物介导的内皮依赖性的舒血管效应阻断作用均不明显(p>0.05)。

去内皮时，杜仲皮水提取物（0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2 mg/mL）对PE（10-4mol/L）预收缩的血管环舒张作用不显著（p>0.05）。

结论：杜仲皮水提取物通过NO-鸟苷酸环化酶途径和环氧合酶途径两条通路使大鼠离体胸主动脉环产生内皮依赖性的舒张效应。

[关键词] 杜仲；NO；胸主动脉环；内皮；血管舒张aqueous extracts of Eucommia ulmoides Oliv. induced endothelium dependent relaxation of rat thoracic aortaDAI Sheng ，FANG jing-jing，CHEN Yun，et alCollege of Medicine，Zhejiang University，Hangzhou 310003[Abstract]Objective：To investigate the effect of aqueous extracts of Eucommia ulmoides Oliv. on rat thoracic aorta rings and the underlying mechanisms. Methods: The study was performed with the model of isolate rat thoracic aorta rings in organ bath, we investigate the effects of accumulated aqueous extracts of Eucommia ulmoides Oliv. on the constriction of high KCL and Phenylephrine(PE) preconstricted rat thoracic aorta with or without endothelium. Results: Aqueous extracts isolated from eucommia bark (B) （0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2 mg/mL）concentration dependently caused endothelium-dependent relaxation in vessels precontracted both with 10-4mol/L phenylephrine (PE) and 60mmol/L KCL, but it had no effect. on de-endothelialized vessels precontracted with PE. The endothelium-dependent relaxation evoked by B was either abolished or substantially inhibited by 10-4mol/L NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME)，10µmol/L guanyly cyclase inhibitor 1H-[1,2,4] oxadiazolo [4,3-alpha] quinoxalin-1-one (ODQ) and 10-5mol/L Indomethacin（Indo）, indicating the involvement of the nitric oxide (NO) synthase pathway in the vasorelaxant action of B. The relaxation to the aqueous extract of eucommia bark was not inhibited by 1mmol/L tetraethylammonium (TEA) 、 1mmol/L 4-aminopyridine（4-AP）and 3µmol/L Glibenclamide （Glib）. This suggests that the endothelium-dependent, NO-mediated relaxation evoked by the aqueous eucommia extracts may not involve the activation of K+ -channels. Conclusion:The results incated that aqueous extracts of Eucommia ulmoides Oliv.can relax the rat thoracic aorta rings with endothelium-dependent . The mechanism may include the activation of NO-GC pathway and COX pathway in vascular endothelium cells.[Key Words] Eucommia ulmoides Oliv. ；NO；thoracic aorta rings；endothelium；vascular relaxation- 1 -杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.；Du-zhong）是传统中药，祖国医学认为其具有补肝肾，强筋骨，安胎之功效[1] 。

一、实验目的1. 了解离体血管实验的基本原理和方法。

2. 观察和分析血管在不同理化因素作用下的变化。

3. 掌握实验数据的记录和分析方法。

二、实验原理离体血管实验是研究血管生理和病理生理的重要方法。

通过模拟体内环境，将血管取出体外，观察和分析血管在不同理化因素作用下的变化，从而揭示血管的生理和病理机制。

三、实验材料1. 动物：成年大鼠2. 实验仪器：手术显微镜、剪刀、镊子、注射器、针头、试管、离心机、CO2培养箱、显微镜等3. 实验试剂：生理盐水、肝素钠、RPMI-1640培养基、EDTA、NaOH、HCl等四、实验方法1. 取成年大鼠，处死并迅速取出心脏，将心脏放入含有生理盐水的容器中，清洗血管。

2. 使用手术显微镜和剪刀，将心脏周围的脂肪和结缔组织去除，暴露血管。

3. 使用镊子将血管从心脏上分离下来，剪成约2-3mm的血管段。

4. 将血管段放入含有肝素钠的生理盐水中，防止血管内血栓形成。

5. 将血管段放入含有RPMI-1640培养基的培养皿中，置于CO2培养箱中培养。

6. 根据实验目的，分别对血管进行以下处理：a. 调整培养基的pH值b. 调整培养基的温度c. 添加EDTAd. 添加NaOH或HCle. 添加不同浓度的药物7. 观察血管在不同处理下的变化，包括血管收缩、舒张、通透性等。

8. 使用显微镜观察血管的形态变化。

9. 收集实验数据，进行统计分析。

五、实验结果1. 调整培养基的pH值后，血管收缩程度明显增加。

2. 调整培养基的温度后，血管舒张程度明显增加。

3. 添加EDTA后，血管通透性增加，红细胞渗出。

4. 添加NaOH后，血管收缩程度增加。

5. 添加HCl后，血管舒张程度增加。

6. 添加不同浓度的药物后，血管收缩或舒张程度发生改变。

六、实验结论1. 离体血管实验可以模拟体内环境，研究血管在不同理化因素作用下的变化。

2. pH值、温度、EDTA、NaOH、HCl和药物等理化因素可以影响血管的收缩、舒张和通透性。

第15卷　第3期 医学研究生学报 V ol.15　N o.3　2002年6月 Journal of Medical P ostgraduates Jun.2002・论 著・介绍一种离体血管环的实验装置和方法刘　沙,　萧明第,　薛　松,　卢成宝(上海市第一人民医院心血管外科,上海200080)摘要:　目的:介绍一种离体血管环的实验装置和方法。

　方法:通过心桥软件将血管环的等长张力和内壁周长数据绘成长度2张力曲线,据此将血管环拉伸至最适长度后进行实验。

　结果:本实验装置和方法稳定、可靠、准确、灵敏。

　结论:这套装置能够更准确地反映血管的特点,可用于各种血管环实验。

关键词:　血管环;　张力测量;　长度2张力曲线中图分类号:　R443.8 文献标识码:　A 文章编号:　100828199(2002)0320199203ΞAn apparatus and method for the experiment of vessel ring ex vivoLI U Sha,XI AO Ming2di,X UE S ong,LU Cheng2bao(Department o f Cardiovascular Surgery,Shanghai Fir st People’s Hospital,Shanghai200080,China)Abstract:　Objectives:An apparatus and method for the experiment of vessel ring ex vivo was discussed.　Methods:Individual length2tension curves for each vessel ring were established via coropass s oftware by relat2 ing the is ometric tension with the corresponding internal circum ferential length.The vessel ring was investigat2 ed after being set at an optional point according to its own length2tension curve.　Results:The apparatus and method was stable,exact and sensitive.　Conclusions:The apparatus and method reflected the properties of vessels m ore accurately and therefore was suitable for the experiment of all types of vessel rings.K ey w ords:　Vessel ring;　T ension measurement;　Length2tension curve 我们参照国外资料[1,2]研制了一套离体血管环的实验装置,现简介如下。

浅谈离体血管环实验作者：程香孙霞刘英光来源：《科技视界》2019年第23期【摘要】2016年，中国心血管病死亡率居首位，高于肿瘤及其他疾病。

脑血管病、冠心病、外周动脉疾病等血管性疾病在心血管病中占据着重要地位。

离体血管环实验是研究血管舒缩功能的一种实验方法。

通过对血管舒缩功能研究，探讨血管疾病的本质，从而为心血管疾病的防治提供科学依据。

本文从离体血管环实验简介、实验设备、实验步骤及实验中的经验总结等方面进行阐述，希望对即将开展该实验的研究人员提供一些帮助。

【关键词】离体血管环实验;血管功能;收缩;舒张中图分类号： TH776.2 文献标识码： A 文章编号： 2095-2457（2019）23-0220-002DOI：10.19694/ki.issn2095-2457.2019.23.104【Abstract】In China， Cardiovascular Disease（CVD） was the leading cause of death in 2016， more than tumors or any other diseases.Cerebrovascular disease， coronary heart disease，and peripheral arterial disease occupy an important position in cardiovascular disease.The vascular ring experiment in vitro is an experimental method for the study of vasomotor contraction and relaxation.Through the study of vasomotor function， the nature of vascular diseases is explored to provide a scientific basis for the prevention and treatment of cardiovascular diseases. This article describes the introduction， devices， procedures and experience of the vascular ring experiment in vitro， hoping to provide some helps for researchers to conduct the experiment.【Key words】The vascular ring experiment in vitro; Vascular function; Contraction; Relaxation心血管系統疾病是世界范围内死亡的主要原因，但其发病机制尚不清楚[1]。

图1DMT620离体血管张力测定仪离体血管环实验是研究血管舒缩功能的一种实验方法。

实验装置不断推陈出新,目前使用较广泛的是DMT620多通道离体微血管张力测定系统(丹麦)(图1)。

首科技视界Science &Technology VisionScience &Technology Vision 科技视界先分离血管,清除周围结缔组织和脂肪组织,切成2-3mm 长的血管环,再用金属丝或钨丝穿过血管环并悬挂于张力浴槽内,连接张力换能器和计算机,测定并记录离体血管的舒缩活动,常用于研究大鼠肠系膜动脉[4]、大鼠脑基底动脉[5]、小鼠肠系膜动脉[6]、小鼠主动脉、髂动脉、颈动脉、肾动脉[7]等微小血管的功能。

2离体血管环实验设备、器材离体血管环实验所需设备、器材包括:(1)动物解剖台;(2)手术解剖显微镜;(3)DMT620多通道离体微血管张力测定系统;(4)氧气瓶;(5)微型真空泵;(6)培养皿;(7)水浴锅;(8)常用动物手术器械;(9)移液器等。

3离体血管环实验步骤及操作注意事项(1)打开仪器设备,检查仪器状态。

(2)在DMT620多通道离体微血管张力测定系统张力浴槽内填充5ml 预冷的(4℃)Krebs -Henseleit 溶液(KHS ),KHS 成分(浓度/mM ):NaCl115,NaHCO 325,KCl 4.6,NaH 2PO 4.2H 2O1.2,MgCl 2.6H 2O1.2,CaCl 22.5,Glucose.H 2O10,充95%O 2+5%CO 2后用NaOH 调至pH7.4[8]。

注意此时不可加热。

(3)处死动物,解剖并分离组织,轻轻取出拟研究的血管组织,放置于含预冷的(4℃)KHS 的容器中,稍微冲洗血管表面及管腔内部分血液。

(4)将血管组织转移至含预冷的(4℃)KHS 的专用培养皿中,轻轻撑开血管并分离血管表面的脂肪及结缔组织等,尽量分离干净。

(5)剪切一段长约2mm 的血管环,建议取中间段的或分支,两端的不要。

Ａｐｅｌｉｎ．13对离体大鼠主动脉环舒张作用的实验研究目的研究新发现的小分子活性肽Apelin-13对离体大鼠主动脉环的舒张作用及其可能的作用途径。

方法采用累计加药法，检测Apdm-13对去甲肾上腺素(NE)预收缩的内皮完整的胸主动脉环及去内皮后胸主动脉环张力的变化。

结果浓度范围内对内皮完整的离体大鼠胸主动脉环具有浓度依赖性的舒张作用，最大舒张率为(44.43+11.1)％，其对内皮完整的血管的舒张作用显著大于去内皮血管(P ＜0.05)，Apelin-13对去内皮的主动脉环的最大舒张率仅为(6.36±2.40)％。

结论Apelin-13具有显著的舒张主动脉的作用，其舒张作用依赖于内皮的完整性。

标签：Ape]in；主动脉；舒张作用；内皮；大鼠Apelin是近年新发现的小分子活性肽，为G蛋白偶联受体一血管紧张素Ⅱl 型受体相关蛋白(putativereceptor protein related t0 the anglotensinⅡtype 1 recep—tor，APJ)的内源性配体。

研究发现Apelin及其受体APJ广泛分布于心血管组织，参与正常心血管组织的胚胎发育，对正常和病变心血管都具有正性肌力、舒张血管、降低血压的保护作用。

给麻醉的正常大鼠静脉注射Apelin可导致平均动脉压迅速降低，并且发现给清醒的大鼠静脉注射Apelin后亦引起降压效应，而Apelin的降压作用可被L-NAME阻断。

Lee，D.K等还发现Apelin对自发性高血压大鼠也有降低血压的作用。

但是其降低血压、舒张血管的机制尚未完全清楚。

本实验旨在通过观察Apdln—13对离体大鼠主动脉环的影响，探讨Apelin-13的舒张血管作用及其机制。

1材料与方法1.1药品与试剂：Apelin-13购自美国Phoenix Dhamla．ceuficals Pharmaceuticals hc；乙酰胆碱(acetyleholine，ACh)购自Sienna公司；去甲肾上腺素(Norepinephfine，NE)购自上海禾丰制药有限公司。

离体兔主动脉环实验07临床曲宁一、目的学习离体器官组织灌流的方法，掌握兔主动脉环制备技术，观察维拉帕米对电压门控通道的阻断作用及酚妥拉明对配体门控钙通道的阻断作用。

二、原理高浓度的氯化钾液（60～100mmo1）可使血管平滑肌细胞去极化，促使电压门控钙通道开放，引起胞外Ca2+内流，导致血管平滑肌收缩。

能阻断高钾液此作用的药物则为电压门控钙通道阻断药。

α受体激动药（如苯肾上腺素）诱导血管收缩是由α1肾上腺素受体的激活造成的，主要通过激活磷脂酶C，产生甘油二脂和三磷酸肌醇（IP3），主要由IP3诱导肌浆网内的Ca2+释放而致血管环（条）收缩，α受体阻断药可阻断此作用。

当NE与血管平滑肌细胞α受体结合，可导致血管平滑肌收缩；与ß受体结合则导致血管平滑肌舒张。

NE与α受体结合能力较与ß受体结合的能力强，故NE具有很强的血管收缩作用逐步递增α受体激动药的浓度（累积浓度），引起血管环出现剂量依赖性收缩（可根据剂量调整在一定范围提高疗效），记录药物量效曲线。

然后给予α受体阻断药，再重复上述实验，可使该量效曲线平衡右移，但最大效应不变，计算出α受体阻断药的拮抗参数（pA2）以确定该阻断药的阻断效价酚妥拉明(Phentolamine)为短效α-受体阻滞剂，与去甲肾上腺素能神经递质和拟肾上腺素药竞争α-受体而发挥阻滞作用。

对α1和α2受体都有阻滞作用，能直接松弛动静脉平滑肌维拉帕米为Ca离子通道阻滞剂，它在发挥作用前必须通过钙离子通道进入细胞。

所以它的作用是与钙离子通道活性直接相关的。

维拉帕米作用于开放状态的通道，具有频率依赖性和使用依赖性。

三、材料1．实验对象健康的兔子，雄性，体重250～280克；2．实验器材麦氏浴槽，超级恒温水浴，温度计，5g张力换能器，微机生物信号采集处理仪，手术剪刀，眼科剪，眼科镊，培养皿，烧杯，100μl、1m1移液器，棉线；3．实验药品3mo1/L氯化钾，10-5mo1/L维拉帕米，10-3mo1/L肾上腺素，10g/L酚妥拉明，1mmol/L乙酰胆碱，Krebs液，95%O2+5%CO2混合气体.四、实验步骤1、实验系统连接和仪器参数设置（1）实验装置连接按下图连接装置。

血管环模型的研究进展李秋影【摘要】Main study on vascular ring could depart in two aparts，one for vascular contractility,the other for angiogenesis.The study for vascular contractility was used in variety fields including hypertension, cerebrovascular insufficiency syndrome pulmonary hypertension congestive heart failure shock etc.And anti-turner research is the main field of angiogenesis study.Vascular ring study play an important role in new drug founding and in basic research.%血管环模型在新药筛选和病理生理基础研究中占有重要地位.目前血管环的研究类型主要包括两大类:血管收缩活性研究和血管生成活性研究.血管收缩活性研究涉及的疾病领域宽广,包括高血压、脑供血不足、充血性心力衰竭等.血管生成活性研究则主要集中在抗肿瘤研究和动静脉吻合的研究上.随着新技术和新思路的引进,血管环实验在相关领域的新药研发、基础研究等方面发挥着重要的作用.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2011(017)003【总页数】4页(P339-342)【关键词】血管环;血管收缩;血管生成【作者】李秋影【作者单位】天津中医药大学,天津,300193;天津天士力研究院药理毒理所,天津,300410【正文语种】中文【中图分类】R965.2血管环研究起始于1980年，Robert F.Furchgott教授把血管条改成血管环模型，发现内皮细胞可释放一种使血管舒张的因子，即一氧化氮(nitric oxide，NO)。

离体大鼠胸主动脉环实验目的：观察药物对大鼠离体胸主动脉血管环收缩活动的影响；动物：健康的SD大鼠，雄性，体重250～280克药品与试剂：20%氨基甲酸乙酯，3mo1氯化钾，10-5mo1/L维拉帕米，0.1％苯肾上腺素，1％酚妥拉明，Krebs液，95%O2+5%CO2混合气体器材：HV-4/SV-4离体组织器官恒温灌流装置，超级恒温水浴，温度计，5g张力换能器，BL-420生物信号采集系统，手术剪刀，眼科剪，眼科镊，培养皿，烧杯，100μl、1m1移液器，棉线；方法：1．BL-420生物信号采集系统参数设置：T:DC , F:10Hz ,采样率：100Hz, 扫描速度：25s/div，放大倍数200～500。

2．标本制备（1）大鼠用20%氨基甲酸乙酯按1g/kg体重腹腔注射麻醉，剪开胸腔，迅速取出心脏及胸主动脉放入盛有4℃的混合气体饱和的Krebs营养液的培养皿中，连续用混合气体充气。

分离出主动脉，将血管内的残存血液冲洗干净，小心剥去外围的结缔组织，将主动脉弓以下的胸主动脉剪成4mm长的动脉环数段备用。

（2）需要保存内皮的血管，动作应轻柔。

如需无内皮的血管环，可用棉签或牙签将血管内皮轻轻檫去。

（3）将不锈钢三角钩轻轻穿入血管环，并将另一的三角形不锈钢挂钩也轻轻穿入，通过挂钩悬挂于浴管内，下方固定于固定钩上，上方以一细钢丝挂钩连于张力换能器，通入混合气体，调节通气量至一个一个小气泡逸出为（如下图示）。

浴槽内温度应保持37±0.5℃。

图1 离体主动脉血管环孵育测量方式图示4）血管环的初始张力前15分钟调为1g，15分钟后调至2g，并以此张力平衡60分钟。

每隔15分钟换液一次。

5）用终浓度60mmol KCL收缩血管环，作用15 min诱导血管环收缩，激发舒缩活性，待收缩稳定后用预热的Krebs洗脱，反复冲洗直至张力恢复到初始值为止；重复加入同一浓度KCL，连续3次，用Krebs液反复脱洗标本观察收缩曲线波形使其张力信号回复初始值。

一、实验目的1. 熟悉血管剥离的实验操作步骤。

2. 掌握血管剥离的技巧和方法。

3. 了解血管剥离过程中可能遇到的问题及处理方法。

二、实验材料1. 实验动物：大鼠1只2. 实验器械：手术刀、剪刀、镊子、止血钳、无创缝合线、生理盐水、酒精、碘伏、解剖显微镜等3. 实验试剂：肝素钠、生理盐水、生理盐水溶液等三、实验方法1. 实验动物麻醉：采用腹腔注射戊巴比妥钠进行麻醉，剂量为50mg/kg。

2. 实验动物固定：将大鼠固定在手术台上，保持头部低位，便于手术操作。

3. 消毒：用酒精对手术部位进行消毒，然后用碘伏进行皮肤消毒。

4. 股动脉剥离：a. 切开大鼠腹部皮肤，暴露股动脉。

b. 用镊子提起股动脉周围组织，轻轻分离血管与周围组织的粘连。

c. 用手术刀在股动脉上方1cm处切开血管鞘，暴露股动脉。

d. 用止血钳夹住股动脉近心端，阻断血流。

e. 用剪刀沿股动脉走行方向，从近心端向远心端进行剥离，直至暴露出股动脉全长。

5. 股静脉剥离：a. 在股动脉下方，找到股静脉。

b. 用镊子提起股静脉周围组织，轻轻分离血管与周围组织的粘连。

c. 用手术刀在股静脉上方1cm处切开血管鞘，暴露股静脉。

d. 用止血钳夹住股静脉近心端，阻断血流。

e. 用剪刀沿股静脉走行方向，从近心端向远心端进行剥离，直至暴露出股静脉全长。

6. 检查剥离效果：观察剥离的血管是否完整，有无破损或撕裂。

四、实验结果1. 成功剥离出大鼠股动脉和股静脉，血管长度约为10cm。

2. 剥离过程中，血管表面光滑，无破损或撕裂。

3. 剥离后，血管腔内无明显血栓形成。

五、实验讨论1. 在血管剥离过程中，应尽量减少对血管周围组织的损伤，以避免术后并发症。

2. 剥离血管时，应选择合适的剥离方向和角度，避免对血管造成不必要的损伤。

3. 在剥离血管过程中，应密切关注血流情况，一旦发现血管破损或撕裂，应立即进行止血处理。

4. 实验过程中，操作者应熟悉实验器械的使用方法，确保实验顺利进行。

药物对离体兔主动脉环的作用药物对离体兔主动脉环的作用【目的】掌握离体胸主动脉环的取材方法,学习离体血管的实验方法以及药物对离体血管的作用.通过学生自己设计给药顺序,掌握设计药物相互作用的基本方法.【实验材料】1、动物:家兔2、药品: 10-4mol/L 苯肾上腺素,10-4mol/L 乙酰胆碱,60mmol/L-K+ PSS,Free-Ca2+ PSS,无钙60mmol/L-K+ PSS,PSS生理盐溶液,去甲肾上腺素,酚妥拉明,异丙肾上腺素,普萘诺尔3、器材:离体实验装置(离体平滑肌槽)一套(包括麦氏浴管、万能支架,恒温水浴等),BL-410生物机能系统和张力换能器,手术器械以及注射器等.【方法与步骤】1、取材:猛击家兔头部致死,迅速开胸,分离、摘取胸主动脉置于冷Krebs-Henseleit(K-H)缓冲液中,充以95% O2和5% CO2的混合气体.小心剔除血管周围结缔组织及脂肪组织,避免损伤血管内皮.截取 5 mm 的血管环,将其悬挂于两个不锈钢挂钩上,一端固定于浴槽,另一端连接张力换能器,并与BL-420系统相连、记录血管张力变化.血管环置于盛有20 mL K-H液的器官浴槽中,并持续充以95% O2和5% CO2的混合气体,调节气流速度为1～2个泡/秒.于37℃恒温,每隔15 min更换浴槽中的K-H液一次,共平衡60 min.2、BL-410的设置:将张力换能器信号输入BL-410生物机能实验系统,该系统有关参数设定值为:时间常数(DC),滤波(30HZ),选择张力实验,扫描速度(32div/s),显示方式(单屏显示),增益(50).3、活化与内皮功能测试:开始加2g张力负荷,不断调整张力水平,使之维持在2g左右(低于1.8g 或高于2.2g开始调整),稳定1h(每15min换37℃K-H液,20mL/次).注意:换液时沿浴槽壁加入,并观察连线是否贴壁.先用60 mmol/L KCl PSS 使血管环平滑肌去极化,重复2 ~ 3次至血管环收缩达坪值;换KH液洗脱4次(每15min换37℃KH液,20mL/次),末次换液后,继续累计加入KCl液刺激3次,每次观察约15min(以每次达到最大收缩为准).冲洗后重新平衡血管环,再用终浓度为1×10-6mol/L苯肾上腺素20ul预收缩血管,待张力上升并稳定后,加入终浓度为1×10-8 ~ 3×10-6mol/L累积浓度的乙酰胆碱舒张血管(累积加入乙酰胆碱1×10-4M母液2ul,4ul,14ul,40ul, 140ul, 使终浓度分别为1×10-8,3×10-8, 1×10-7, 3×10-7, 1×10-6M),检测血管环的内皮完整性.凡对乙酰胆碱诱导的最大舒张大于80%的血管环被认为内皮完整.4、根据不同实验目的设计不同的给药方案.【溶液配制】1、K－H液配制参考附录一2、生理盐溶液( Physiological Salt Solution,PSS),其成分为(g):NaCl 154.7, KCl 5.4, 葡萄糖11.0, CaCl2 2.5, Triss 6.0.3、60mmol/L-K+ PSS, 其成分为:NaCl 100.1, KCl 60.0, 葡萄糖11.0, CaCl2 2.5, Triss 6.0.4、Free-Ca2+ PSS, 其成分为(g):NaCl 154.7, KCl 5.4, 葡萄糖11.0, EGTA 0.5, Triss 6.0.5、无钙60mmol/L-K+ PSS, 其成分为(g):NaCl 100.1, KCl 60.0, 葡萄糖11.0, EGTA 0.5, Triss 6.0.6、11.4mmol/L KCl液的配制:PSS液8.9mL,再加入60mmol/L-K+ PSS 1.1mL.7、17.4mmol/L KCl液的配制:PSS液7.8mL,再加入60mmol/L-K+ PSS 2.2mL.8、35.4mmol/L KCl液的配制:PSS液4.5mL,再加入60mmol/L-K+ PSS 5.5mL.【注意事项】1、取主动脉环时不要过度牵拉主动脉,取下后立即放入冷冻的饱和以95% O2和5% CO2的混合气体饱和的K-H液中.2、加药时不要触及连接张力换能器的线.3、注意给药的浓度.加入的母液浓度,要与终浓度区别.4、自己设计给药方案和给药浓度.。