生物化学实验报告-酵母RNA的提取与鉴定

实验七酵母rna的提取及鉴定.doc一、实验原理RNA是核酸的一种，在细胞中负责遗传信息的传递和蛋白质的合成。

RNA可分为信使RNA(mRNA)、核糖体RNA(rRNA)和转运RNA(tRNA)等多种类型，酵母菌中大部分RNA是rRNA 和tRNA，也存在少量的mRNA。

提取酵母RNA需要破解细胞壁和细胞膜等结构，并且细胞内含有大量核酸酶，因此提取纯度较高的RNA比较困难。

RNA的提取可以通过化学方法和物理方法两种方式实现。

化学方法主要是利用离子交换、酚-氯仿提取、硅胶柱层析等技术，较为复杂且需要一定的技术经验；物理方法主要是利用超声波、玻璃珠破碎法等技术，可以快速有效地提取RNA。

本实验采用物理法加化学法结合的方法提取酵母RNA，并通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA的纯度和完整性。

二、实验步骤2.1 材料准备(1) 酵母菌法国版工业菌株(Saccharomyces cerevisiae);(2) TRIzol试剂盒(Thermo Fisher Scientific公司);(3) 稀释HCl溶液(3 mol/L);(4) 75%(w/v)的酸性酚;(5) 氯仿;(6) 层析级异丙醇;(7) 等电聚丙烯酰胺缓冲液(pH 7.0，0.025 mol/L Tris/HCl，0.192 mol/L草酸二钠，0.0025 mol/LEDTA)。

2.2 RNA提取(1) 取一支含3 mL YPD液体培养基的酵母菌液，在恒温摇床上培养至OD600=0.8-1.0。

收集菌体，迅速离心10 min，将菌体沉淀在低温下保存。

(2) 在无菌条件下，向2mL微离心管中加入500μl冰冻的脚本称重的玻璃珠，加入250μl TRIzol试剂，加入500μl氯仿混合液(高速离心样品质量的20%)。

(3) 用冰缓慢振荡离心管10次，将离心管放置于室温下2min，加入250μl乙醇混合液(浓度为75%)搅拌溶解沉淀。

(4) 将悬液转到色谱柱上(色谱柱预先加入2 g等体积的硅胶)，离心管内加入250μl TRIzol试剂并重复以上操作，将悬液转移到同一色谱柱上。

实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三是关于酵母核糖核酸（RNA）的提取和测定的实验。

1. 提取酵母RNA：
a. 取一份含有酵母的培养基培养液，将其转移到离心管中。

b. 将离心管在12000转/分钟的速度下离心5分钟，将沉淀（酵母细胞）收集到离心管底部。

c. 弃去上清液，加入适量的稀释RNA保护剂，如TRIZOL 或RNeasy试剂。

d. 快速颠倒离心管以完全溶解酵母细胞，并使RNA与纯化试剂进行结合。

e. 加入氯仿溶液，再次快速颠倒离心管混合，形成水相和有机相层。

f. 离心管在12000转/分钟的速度下离心15分钟，使两个相分离。

g. 将水相（含有RNA）转移到新的离心管中，并加入同等体积的异丙醇。

h. 用洗涤液和乙醚混合洗涤RNA样品，最后用无水乙醚洗涤RNA。

i. 最后，将RNA用无水乙醚洗涤并直接转移到无附加盐的水中得到纯化的RNA样品。

2. 测定酵母RNA：
a. 使用分光光度计在260nm波长下测量纯化的RNA溶液的吸光度。

b. 根据吸光度读数，用以下公式计算RNA的浓度：浓度（μg/mL）= 吸光度读数 ×稀释倍数 × 50。

c. 可选的是用琼脂糖凝胶电泳分析纯化的RNA样品，以确定RNA的完整性和纯度。

这是一个简单的方法，用于提取和测定酵母中的RNA。

根据需要，还可以使用其他提取试剂和测定方法。

综合性实验四 酵母RNA的提取及组分鉴定
一、目的与要求 了解RNA提取的原理，掌握RNA组分鉴定的方法
二、实验原理 酵母细胞中所含的核酸主要是RNA,DNA含量很少，故本实验采用酵母提取RNA。由于酵母细胞中所含的核蛋白不溶于水和稀酸，但能溶于稀碱，所以先用稀碱加热煮沸处理，使RNA成为可溶性的钠盐而与酵母中其它的成分分离。然后加乙醇沉淀溶液中的RNA，最后加酸将其完全水解，并用下列方法鉴定其中组分： (一) 钼酸铵试剂与无机磷酸结合生成的磷钼酸易被还原生成钼蓝，以鉴定核酸中的磷。 (二) 3,5-二羟基甲苯与核糖在浓酸中共热呈绿色，以鉴定核糖的存在。 (三) 嘌呤碱与硝酸银共热产生褐色的嘌呤银沉淀，以鉴定嘌呤的存在。
(二) RNA的水解 两管沉淀物中各加入1.5mol/L H2SO4 2.5ml后合并，沸水浴10min，使其充分水解。 (三) RNA组分鉴定（取试管3支编号） 1. 磷酸试验：1号管，取钼酸铵试剂10滴，加RNA水解液10滴摇匀，再加4%维生素C 6滴混匀后，置沸水浴中加热5～10min，观察颜色变化。 2. 核糖试验：2号管，取3,5-二羟基甲苯试剂6滴，加RNA水解液10滴摇匀后，置沸水浴中加热5～10min，观察颜色变化。 3. 嘌呤试验：3号管，取5% AgNO3 10滴，加氨水2-3滴（至沉淀消散后），再加RNA水解液10滴摇匀后，置沸水浴中加热约5～10min，观察颜色变化。
四、结果与计算 管水中加热时要时常摇动试管； (三) 硝酸银中加氨水应逐滴加入，白色沉淀消散后再加水解液。
思考题 1．本实验为什么要选用酵母作为提取RNA的实验原料？ 2．实验过程中酵母细胞为什么要充分研磨？
三、操作步骤 (一) 酵母中RNA的制备 1. 取0.5g干酵母置研钵中，加入0.04mol/L NaOH 4ml，磨3～5min，使其成匀浆； 2. 将酵母匀浆倒入1支大试管中，在沸水中加热30min； 3. 把大试管中匀浆分别放入2支小试管中，配平； 4. 2000r/min离心15min，将两上清液分别倒入另两小试管中，弃去沉淀； 5. 各加3mol/L HAc 2滴，立即摇匀酸化，用石蕊试纸检查。 6. 上述溶液猛力摇匀后，徐徐倒入两支各盛有2.5ml酸性乙醇的试管中，即有白色沉淀析出。 7. 2000r/min离心15min，倾去上清液，作下一步实验。

酵母RNA的提取和含量测定一、实验原理1、RNA的提取工业上提取RNA通常选用低成本、适于大规模操作的稀碱法或浓盐法，这两种方法提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备单核苷酸的原料，工艺较简单。

酵母细胞富含核酸，且核酸主要为RNA，含量为干菌体的2.7%-10%，而DNA 含量较少，仅为0.3%-0.5%，故常用酵母作提取RNA的原料。

稀碱法是用NaOH使酵母细胞壁变性、裂解，然后用酸中和。

偏酸性条件下RNA进入水相，而蛋白质和菌体沉淀。

除去蛋白质和菌体的溶液用乙醇沉淀RNA 或调pH至等电点（2.5）附近使RNA沉淀。

2、RNA含量的测定（苔黑酚法）RNA与浓盐酸共热时，即发生降解。

分子中的核糖转变为α-呋喃甲醛（糠醛），后者在氯化铁催化下与苔黑酚（3,5-二羟甲基苯）作用生成绿色复合物，可在670nm下用比色法测定含量。

在RNA浓度为10~100μg/mL范围内，产物浓度与吸光度呈线性关系。

本法特异性较差，凡属戊糖均有此反应。

某些己糖在持续加热后生成的羟甲基糖醛也能与苔黑酚反应，产生显色复合物。

微量DNA无影响，较多DNA存在时，亦有干扰作用。

可以利用RNA和DNA显色复合物的最大吸光吸收不同，且在不同时间显示最大色度加以区分。

反应2min后，DNA在600nm呈现最大光吸收，而RNA在反应15min后，在670nm呈现最大光吸收。

二、实验器材1、仪器：电子天平、抽滤瓶、布氏漏斗、离心机、烧杯若干、量筒(10mL、50mL)、pH试纸（1~14）、5mL吸管；试管*8、紫外分光光度计、水浴锅。

2、试剂：市售干酵母粉、0.2%氢氧化钠溶液、乙酸（A.R）、95%乙醇、无水乙醚（A.R）；标准RNA溶液（100μg/mL）、苔黑酚-三氯化铁试剂。

三、操作记录1、RNA的提取称取8.05g干酵母粉于100mL烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40mL，沸水浴加热30min，加热过程中经常搅拌冷却，加入乙酸数滴，使提取液呈微酸性（pH5~6），离心10~15min（4000r/min）。

结果讨论与结论
01
根据分光光度计的读数分析，实验组的RNA浓度较高且纯度良 好，而对照组的RNA浓度较低，可能受到了其他物质的干扰。
02
通过电泳结果观察，实验组的RNA完整性较好，而对照组 的RNA可能受到了降解。
03
综合以上结果，可以得出实验组分离得到的酵母RNA质量较高 ，适合用于后续的分子生物学实验。而对照组的RNA质量较差
条带。
RNA的组分鉴定
01
02
03
将提取的RNA进行反转 录，合成cDNA。
利用PCR仪对cDNA进行 扩增，并进行电泳检测
。
根据电泳结果判断RNA 的完整性，并分析其组
分。
04
结果分析
分光光度计的读数分析
实验组
在260nm和280nm处的吸光度分别 为0.85和0.78，表明RNA浓度较高， 纯度良好。
实验中遇到的问题和解决方案
问题1
解决方案
问题2
酵母细胞破碎不完全， 导致提取的RNA不纯。
采用更剧烈的破碎方法， 如超声破碎，以提高细
胞破碎率。
电泳过程中出现条带模 糊。
解决方案
优化电泳条件，如调整 缓冲液浓度和电泳温度
等。
对实验的改进建议和展望
01
改进建议1
在细胞破碎步骤中，尝试使用不同的破碎方法以提高破碎效率和RNA提
了解RNA的组成成分
了解RNA的基本组成
RNA由核糖核苷酸组成，包括腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和尿 嘧啶四种碱基，以及磷酸和核糖。
学习通过电泳分离RNA组分
通过电泳技术可以将RNA分离成不同大小的组分，如rRNA 、mRNA和tRNA等。
学习并掌握分光光度计的使用方法

酵母RNA的提取
目录
• 实验准备 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验结论 • 参考文献
01 实验准备
实验材料
01
02
03
04
新鲜酵母样品
确保酵母样品新鲜且无污染， 以保证RNA提取的质量。
无菌水
用于清洗实验器具和稀释提取 液。
离心管和离心机
用于离心分离酵母细胞和上清 液。
滤纸和过滤器
用于过滤上清液和去除杂质。
价值的信息。
05 参考文献
参考文献
01
[请在此处插入参考文献1]
02
[请在此处插入参考文献2]
[请在此处插入参考文献3]
03
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
破碎条件优化
为了获得最佳的破碎效果，可能 需要优化破碎条件，如破碎时间 、破碎次数、破碎温度等。
沉淀与洗涤
沉淀
在破碎后的酵母细胞液中加入适量的沉淀剂，如异丙醇或乙醇，使RNA沉淀下 来。
洗涤
将沉淀物洗涤干净，去除杂质和残留的沉淀剂。洗涤过程中需注意洗涤液的更 换和洗涤次数。
RNA的提取与纯化
提取RNA
将沉淀物溶解在适量的缓冲液中，通过离心或过滤的方法将 RNA从细胞残渣中分离出来。
纯化RNA
去除提取液中的蛋白质、DNA等杂质，获得纯度较高的RNA 。纯化方法包括凝胶电泳、离心机分离、酶解等方法。
03 结果分析
RNA浓度测定
总结词：准确测量
详细描述：使用紫外分光光度计测定提取的RNA溶液的吸光度，根据标准曲线计 算RNA浓度。
实验结果可重复
通过实验操作，成功从酵母细胞中提 取出RNA，且质量较高，无明显杂质。

实验三酵母RNA的提取、测定及组成成分的分析Ⅰ酵母RNA的提取——浓盐法【目的和要求】了解用浓盐法提纯RNA的基本原理和方法【基本原理】核酸是一类不稳定的生物大分子，在制备过程中很容易发生降解。

因此，要使制得的核酸尽可能保持其在生物体内的天然状态，制备核酸必须采取温和的条件，例如避免过酸碱，避免剧烈的搅拌，防止核酸降解酶类的作用。

由于RNA种类较多，所以制备方法也各异。

工业上制备RNA一般选用成本较低、适宜于大规模操作的稀碱法和浓盐法。

稀碱法是用1%NaOH溶液，将细胞壁溶解，用酸中和，升高温度使蛋白质变性，将蛋白质与核酸分离，然后除去菌体，将pH调至RNA的等电点(pH2.5)，使RNA沉淀出来。

稀碱法的优点是抽提时间短，但RNA在此条件下不稳定，容易分解。

浓盐法是用10%NaCL溶液改变细胞膜的通透性，使核酸从细胞内释放出来。

用浓盐法提取RNA，则就注意掌握温度，避免在20～70℃之间停留时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率。

利用加热至90～100℃，使蛋白质变性，破坏该酶类，有利于RNA的提取。

若要提取接近天然状态RNA，可采用苯酚法或氯仿-异戊醇法去蛋白，然后用乙醇沉淀RNA。

离心收集。

本实验采用浓盐法（10% NaCL）【操作方法】1．提取称取干酵母粉2g于50mL三角瓶内。

加10% Nacl溶液10mL，搅拌均匀，然后于沸水浴中提取半小时。

2．分离将上述提取液取出，用自来水冷却，分装在离心管内，以3500r/min离心10min，使提取液与菌体残渣等分离。

3．沉淀RNA将离心得到的上清液倾于50mL烧杯内，并置于放有冰块250mL烧杯中冷却。

待溶液冷至10℃以下时，在搅拌下小心地用6mol/L HCL溶液调节pH至2.0～2.5。

随着pH值的下降，溶液中白色沉淀逐渐增加，到等电点时沉淀量最多（注意严格控制pH值）。

调好后继续于冰浴中静置10min，使沉淀充分，颗粒变大。

酵母rna的提取实验报告酵母RNA的提取实验报告。

实验目的，通过实验研究酵母RNA的提取方法，为后续的基因表达调控研究提供技术支持。

实验材料与方法：1. 实验材料，酵母细胞培养物、TRIzol试剂、异丙醇、氯仿、乙醇、DEPC水等。

2. 样品制备，取酵母培养物，离心收集酵母细胞，冰上洗涤去除培养基。

3. 细胞破碎，向酵母细胞中加入TRIzol试剂，用离心管摇匀，静置离心管5分钟。

4. RNA提取，加入氯仿，摇匀，离心分离上清液，上清液转移至新离心管中，加入异丙醇沉淀RNA。

5. RNA沉淀，离心沉淀RNA，弃上清液，加入乙醇洗涤RNA，再次离心沉淀RNA。

6. RNA溶解，用DEPC水溶解RNA，测定纯度和浓度。

实验结果：1. 细胞破碎，经过加入TRIzol试剂处理后，酵母细胞成功破碎，形成混浊的混合液。

2. RNA提取，通过氯仿萃取法，成功分离出上清液中的RNA，得到透明的上清液。

3. RNA沉淀，加入异丙醇后，观察到RNA在离心管底部形成白色沉淀。

4. RNA溶解，最终得到溶解度较高的RNA样品，纯度和浓度符合实验要求。

实验分析：本次实验采用的酵母RNA提取方法较为简单，通过TRIzol试剂的使用，成功实现了酵母细胞的破碎和RNA的提取。

氯仿的加入有效分离出RNA，异丙醇的沉淀步骤也取得了良好的效果。

最终得到的RNA样品纯度高，浓度适宜，可以用于后续的实验研究。

实验结论：本实验成功建立了一种适用于酵母细胞的RNA提取方法，为后续的基因表达调控研究提供了可靠的技术支持。

该方法操作简便，提取效果良好，适用于大规模样品的提取工作。

参考文献：1. Chomczynski P, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal Biochem. 1987Apr;162(1):156-9.2. Schmitt ME, Brown TA, Trumpower BL. A rapid and simple method for preparation of RNA from Saccharomyces cerevisiae. Nucleic Acids Res. 1990 Jan25;18(10):3091-2.。

实验四酵母RNA的提取一、原理酵母含有丰富的核酸，其中DNA较少，而RNA较多(约占干重的3-10%)，加之菌体收集容易，所以多用酵母作为提取RNA的材料。

本实验用浓盐法提取RNA，基本过程和原理是：用10%氯化钠使核糖核蛋白中的RNA解聚并溶于盐溶液中，离心除去菌体残渣及变性蛋白质后，调节溶液的pH值至RNA的等电点，RNA即可沉淀析出。

本法提取的RNA已变性并有部分降解，工业上常将其进一步水解，以制备核苷酸、核苷和碱基等。

如要避免RNA降解，可用苯酚法提取。

通过鉴定RNA的组成成分可对RNA定性。

磷酸：磷酸可与钼酸铵作用生成磷钼酸，后者在还原剂的作用下被还原为蓝色的钼蓝。

嘌呤碱：它们能与硝酸银作用产生白色的嘌呤银化物沉淀。

核糖：核糖与酸共热生成糠醛，后者与苔黑酚反应生成绿色化合物。

二、试剂与仪器(一)试剂：1．干酵母2．10%氯化钠溶液3．6摩尔/升盐酸溶液4．乙醚5．10%硫酸溶液6．钼酸铵试剂：2克钼酸铵溶于100毫升10%硫酸7．10%维生素C溶液8．0.1摩尔/升硝酸银溶液9．1摩尔/升氨水。

10．Fe3+-HCL试剂：0.99克硫酸高铁铵〔NH4Fe(S04)2·12H20〕溶1000毫升浓盐酸中。

11.5%苔黑酚乙醇溶液。

(二)仪器：1．沸水浴2．离心机三、操作：1.酵母RNA的提取①干酵母约0.3克置于离心管内，加入10%氯化钠5毫升，搅匀后置沸水浴加热10分钟。

②取出离心管，流水猝冷后，3000rpm离心10分钟，上层即为RNA提取液，下层为菌体残渣及变性蛋白质沉淀。

③将上层清液小心倾入另一离心管中，逐滴加6摩尔/升盐酸，边加边搅拌，随着pH下降，RNA逐渐沉淀析出，当调节pH至2.O-2.5(接近RNA等电点)时，沉淀最多，此时，静置几分钟，然后在3000rpm离心10分钟。

收集RNA沉淀。

用少量乙醚洗涤以除去脂类和色素等杂质。

2.RNA的水解在上述RNA沉淀中，加入10%硫酸5毫升，搅匀，沸水浴加热5分钟，使RNA水解。

酵母rna提取实验报告酵母RNA提取实验报告引言RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，它可以用于分析基因表达、克隆和测序等多种应用。

酵母RNA作为一种常见的模式生物体，在研究中也经常需要进行RNA提取实验。

本实验旨在通过酵母细胞提取RNA的方法，探索酵母RNA的纯化和分析技术。

材料和方法1. 酵母细胞培养液2. 离心管3. 离心机4. 细胞破碎液5. 氯仿6. 异丙醇7. 乙醇8. DEPC水9. 热盖式混合器10. 磁珠11. 离心管架12. 离心管架13. 紫外可见分光光度计实验步骤1. 收集酵母细胞并离心2. 加入细胞破碎液并用热盖式混合器破碎细胞3. 加入氯仿并离心，收集上清液4. 加入异丙醇和磁珠，混合悬浮5. 使用离心管架将磁珠沉淀，去除上清液6. 加入乙醇洗涤磁珠7. 用DEPC水溶解RNA8. 使用紫外可见分光光度计检测RNA浓度和纯度结果通过本实验方法，成功提取了酵母细胞中的RNA，并且得到了较高的纯度和浓度。

实验结果表明，所提取的RNA可用于后续的实验分析和研究。

讨论本实验采用了经典的酵母RNA提取方法，通过破碎细胞、沉淀RNA、洗涤和溶解等步骤，成功地提取了酵母细胞中的RNA。

实验结果表明，所提取的RNA具有较高的纯度和浓度，可以满足后续实验的需要。

然而，也需要注意到在实验过程中可能存在的污染和损失，需要进一步优化实验条件和技术。

结论通过本次实验，我们成功地提取了酵母细胞中的RNA，并得到了较高的纯度和浓度。

这为我们进一步研究酵母基因表达和调控提供了重要的实验基础。

同时，也为其他研究人员在酵母RNA提取方面提供了一种可靠的实验方法和参考。

总结酵母RNA提取实验是分子生物学研究中的重要步骤，通过本次实验，我们成功地提取了酵母细胞中的RNA，并得到了较高的纯度和浓度。

这为我们的研究提供了重要的实验基础和技术支持。

希望通过我们的努力，能够为相关领域的研究工作做出一定的贡献。

2.5％鉬酸铵：
2.5g鉬酸铵溶于100mL水中；
10％抗坏血酸溶液：10g抗坏血酸溶于100mL水，棕色并保存溶液；
临用时将三种溶液和水按下列比例混合：
17％硫酸：
2.5％鉬酸铵：10％抗坏血酸：
水＝1：1：1：2（V/V）。
二、材料
干酵母粉。
三、器材
移液管
2.0mL（×1）,1mL（×4）；移液枪；量筒10mL（×1）,50mL（×1）；滴管；水浴锅；低速离心机；研钵；天平。操作方法
二、RNA组份鉴定
将所提取的核酸转移到试管中，加入
1.5M硫酸5mL,沸水浴加热10分钟制成水解液，然后进行组份鉴定。
1．嘌呤碱：
取水解液1mL加入过量浓氨水。然后加入1mL
0.1M硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱银化合物沉淀。
2．核糖：
取水解液1mL，三氯化铁浓盐酸溶液2mL和苔黑酚乙醇溶液
0.2mL。放沸水浴中10min。注意观察核糖是否变成绿色。
一、酵母RNA提取
称5g干酵母粉悬浮于30mL
0.04M NaOH溶液中并在研钵中研磨均匀。悬浮液转入大试管，沸水浴加热30min，冷却，转入离心管。3000r/min，离心10分钟后，将上清慢慢倾入10mL酸性乙醇，边加边搅动。加毕，静置，待RNA沉淀完全后，3000r/min离心5min。弃去上清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，第一次洗涤后3000r/min离心5min，第二次洗涤后过滤，将沉淀转移到滤纸上，沉淀在空气中干燥。称量所得RNA粗品的重量，计算：
实验六酵母
目的要求
（1）了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。
（2）了解核酸的组分并掌握其鉴定方法。
实验原理
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后,上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH

酵母rna的提取实验报告实验目的：本实验旨在通过提取酵母细胞中的RNA，研究酵母细胞的基因表达情况。

实验步骤：1. 准备工作：将所需试剂及设备准备好。

包括酵母细胞培养液、收集酵母细胞的离心管、琼脂糖、Rnase-free水、DTE溶液、Tris-HCl缓冲液、氯仿、异丙醇、盐溶液等。

2. 收集酵母细胞：将酵母培养液离心，将细胞沉淀至离心管中。

使用离心机将细胞沉淀。

3. 细胞破碎：向离心管中加入30μL DTE溶液，充分混合。

将离心管置于冰上，加入等体积的琼脂糖。

轻轻翻转管子，使细胞与琼脂糖充分混合。

继续在冰上离心。

4. 分层：将离心管放入冰上15分钟，离心10000g，4°C，15分钟，将上清转移至新离心管中。

5. 分液：加入等体积的Tris-HCl缓冲液，混合均匀。

加入等体积的氯仿，轻轻翻转混合。

在冰上离心15分钟，以分离上层水相和下层有机相。

6. 收集RNA：将上层水相转移至新离心管中，加入等体积的异丙醇，充分混合。

在-20°C放置30分钟，使RNA充分沉淀。

离心12000g，4°C，15分钟，将上清抽离。

7. 洗涤：加入70%乙醇洗涤一次，离心12000g，4°C，5分钟，弃上清。

重复此步骤一次。

8. 干燥：将离心管开盖，室温下干燥15分钟。

加入Rnase-free水，重悬RNA。

实验结果：完成实验后，得到1μg/μL浓度的酵母RNA。

使用NanoDrop 光度计检测RNA纯度，A260/A280比值为2.0，显示RNA被成功提取。

使用琼脂糖凝胶电泳分析酵母RNA，显示主要为2个明显的条带，符合预期。

实验结论：本实验成功地提取了酵母细胞中的RNA，并证实RNA的纯度和完整性。

这为进一步研究酵母细胞的基因表达提供了基础。

【精品】酵母RNA的提取与鉴定
酵母是广泛应用于生物学研究的模式生物之一，因为它们具有较小的基因组，短的生命周期和适应性强。

在酵母研究中，提取RNA是常见的操作，因为RNA是在基因表达调控中起重要作用的分子之一。

本文将介绍酵母RNA的提取方法和鉴定实验。

1. 准备样品：将酵母转移到含有5 mL YPD培养基的试管中，在30°C下培养过夜。

2. 收集细胞：将培养的酵母细胞移至1.5 mL离心管中，离心2分钟，2000rpm。

将上清液倒掉。

3. 细胞破碎：加入300 ul裂解缓冲液含有β-丙硫氨酸（β-mercaptoethanol），使每个细胞含有至少0.5 mM β-丙硫氨酸。

用盐或玻璃珠打碎细胞，破碎细胞的进程中需要冷却架。

破碎细胞，离心2分钟，13000rpm。

4. 取RNA：将上清液转移到一个新的1.5 mL离心管中，加入等体积的酚/氯仿，混合搅拌，离心10分钟，13000rpm。

RNA会出现在水相中，将水相转移到一个新的离心管中。

6. 干燥：将离心管在室温下风干10-15分钟，或将RNA转移到新的离心管或板中，在室温下干燥。

1. 电泳：将提取的RNA在2%琼脂糖凝胶中电泳，根据RNA的分子量判断RNA提取过程中是否有降解。

2. 比色法：用比色法测定RNA的浓度，通常比色法可以快速精确地测定核酸浓度。

3. 分光光度法：分光光度法可以通过测量RNA的260 nm和280 nm吸收值，计算出RNA 纯度。

总之，提取酵母RNA是简单易行的，对于酵母基因表达研究是至关重要的，可以应用多种方法进行RNA鉴定。

定磷试剂含有还原剂抗坏血酸，抗坏血 酸很容易被空气中的氧所氧化，使定磷 试剂失效。因此可以改用钼酸铵试剂定 磷。核酸分子中的有机磷经强酸消化后 形成无机磷，在酸性条件下,无机磷与 钼酸铵结合形成黄色磷钼酸铵沉淀。
【思考题】
01 如何得到高产量RNA粗制品？ 02 验证RNA中核糖的办法，可否用以检验脱氧核糖，为什么？ 03 用你所学过的化学知识,分析3种催化剂：
【操作步骤】
RNA的提取：将5g酵母悬浮30mL0.04mol/L氢氧化钠 溶液中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至100毫 升锥形瓶中。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心 (3000r/min)15分钟，将上清液缓缓倾入15 mL酸性乙 醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸 沉淀完全后，离心(3000r/min)3分钟。弃去清液。用 95％乙醇洗涤沉淀两次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙 醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。
标准曲线的制作
按上表编号及加入试剂。加毕，摇匀，置沸 水浴加热25min，取出后冷水冷却，以零号 管作对照,于670nm波长处测定各管光吸收 值。取测定的平均值,以RNA浓度为横坐标, 光吸收为纵坐标作图,绘制标准曲线。
样品的测定
取两支试管,各加入2.0mL样品注液,再加 2.0mL地衣酚-Cu2+试剂，如前述进行 测定.
RNA含量的计算
根据测得的光吸收值,从标准曲线上查出 相当该光吸收的RNA含量，计算出制品 中RNA的百分含量。
第一步
第二步
【注意事项】
01 样 品 中 蛋 白 质 含 量 较 高 时 , 应 先 用 5 % 三 氯 乙 酸 溶 液 沉 淀 蛋白质后再测定。
02 本 法 特 异 性 较 差 , 凡 属 戊 糖 均 有 反 应. 微 量 D NA 无 影 响 , 较 多DNA存在时,亦有干扰作用。如在试剂中加入适量 CuCl2 .2H2O可减少DNA的干扰。此外,利用RNA和 DNA显色复合物的最大光吸收不同,且在不同时间显示 最大色度加以区分。反应2min后,DNA在600nm呈现 最大光吸收,而RNA则在反应15min后,在670nm下呈 现最大光吸收。

扰，蛋白质、粘多糖可干扰鉴定。
试剂旳配制
❖地衣酚(苔黑酚) —三氯化铁试剂
将100mg苔黑酚溶于100ml浓盐酸中，再加 入100mgFeCl3·6H2O(或等量CuO)。此液需临 用时配制。
试验环节
1、酵母RNA旳提取
称5g干酵母粉于150 ml三角烧瓶中，加50ml 0.2％旳 NaOH，沸水浴中搅拌提取30 min。冷 却后滴加乙酸使其略偏酸性(pH5~6)。
离心(4000 r／min，15 min)，清除沉淀。 向上清液中加入30 ml 95％乙醇，稍搅拌后静置。 待完全沉淀后离心(4000 r／min，15 min) ，去 上清液。沉淀加10 ml 95％乙醇，搅拌后再次离 心。沉淀再依次用10 ml旳无水乙醇、乙醚(×2) 洗涤, 得RNA粗品。
试验环节
❖ 地衣酚反应特异性较差，凡戊糖都有此反应。
所以地衣酚试验不能作为RNA与DNA鉴别旳根 据。
酵母RNA旳提取与鉴定
试验目旳
❖ 掌握稀碱法分离酵母RNA旳原理与操作
过程。
❖ 了解RNA旳组分并掌握定性鉴定旳详细
措施。
试验原理
❖因为RNA旳起源和种类诸多，因而提取制备措施
也各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。
➢ 苯酚法是试验室最常用旳。组织匀浆用苯酚处理
并离心后，RNA即溶于上层被苯酚饱和旳水相中， DNA和蛋白质则留在苯酚层中，向水层加入乙醇 后，RNA即以白色絮状沉淀析出。
2．RNA旳鉴定
取沉淀约0.2 g，加2 ml 10％H2SO4→沸水浴 中加热2 min→加1.5 ml地衣酚试剂→沸水浴中加 热→观察颜色变化。
注意事项
❖ 稀碱法提取旳RNA为变性RNA，可用于RNA组

实验4 酵母RNA的分离及组分鉴定酵母RNA是由酵母细胞合成的核糖核酸，包含了酵母细胞的遗传信息，并参与了细胞的生理代谢过程。

本实验旨在通过离心分离和酸性酚/氯仿法提取，纯化酵母RNA，并通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳等方法对酵母RNA进行组分鉴定。

一、材料与方法1.材料酵母细胞、DTT、Tris、EDTA、NaCl、硝酸、醋酸等。

2.方法1)制备样品a.在液氮中将酵母细胞粉磨成细粉；b.称取10mg酵母细胞粉末加入1ml去离子水中，振荡混匀，制成1mg/ml的酵母细胞悬液。

2)离心分离a.取1ml稀释后的酵母细胞悬液，离心10000rpm/10min，弃去上清液；b.用10μl无菌去离子水重悬沉淀，制成1mg/ml的RNA悬液。

3)RNA的提取和纯化a.取1ml离心沉淀物加入700μl去离子水，混合均匀，加入100μl10%SDS和100μl 酸性酚(pH4.5)混合，振荡15min；b.加入300μl氯仿，振荡混合，离心12,000g/10min；c.取上层水相(约600μl)，加入等量异丙醇混合，振荡；d.离心12,000g/5min，弃去上清液，将胶状RNA沉淀用70%酒精重悬，制成1mg/ml的RNA溶液。

4)鉴定RNAa.测定RNA含量和纯度b.通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA条带。

c.用紫外吸收光谱测定RNA吸收光谱曲线。

5)结果分析a.通过鉴定RNA的吸收峰和电泳图谱来分析RNA组分。

二、实验结果1.酵母RNA提取和纯化效果良好，制得1mg/ml的RNA溶液。

2.根据紫外吸收光谱结果，可以看到RNA在260nm的吸收峰高于280nm，证明纯化后的RNA具有良好的纯度。

3.琼脂糖凝胶电泳显示，RNA溶液中有一个清晰的28S条带和一个模糊的18S条带，证明RNA转录水平较高。

三、讨论和结论通过离心分离和酸性酚/氯仿法提取纯化酵母RNA，可以得到高质量和高纯度的RNA样品。

此外，琼脂糖凝胶电泳和紫外吸收光谱可以对RNA组分和质量进行鉴定，为后续的RNA研究提供了有价值的基础数据。

一、实验目的1. 掌握稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程。

2. 了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。

二、实验原理酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。

RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。

用碱液提取的RNA有不同程度的降解。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：2g干酵母粉。

2. 试剂：0.04M NaOH溶液、石英砂、乙酸、95%乙醇、RNA酶抑制剂、DEPC水、RNA提取试剂盒、电泳试剂盒、凝胶成像系统等。

四、实验步骤1. RNA的提取（1）称取2g干酵母粉于研钵中，加入石英砂研磨。

（2）将研磨好的酵母粉转移至2mL离心管中，加入0.04M NaOH溶液1mL，沸水浴加热30分钟，经常搅拌。

（3）将加热后的离心管冷却至室温，加入乙酸数滴，使溶液pH值约为5.0。

（4）加入95%乙醇1mL，混匀，室温静置10分钟。

（5）将离心管置于4℃冰箱中，以12,000r/min离心10分钟。

（6）弃去上清液，加入DEPC水500μL，溶解RNA沉淀。

2. RNA组分鉴定（1）取50μL提取的RNA溶液，加入1μL RNA酶抑制剂，混匀。

（2）取5μL上述溶液，加入5μL电泳缓冲液，混匀。

（3）将混合液加入1%琼脂糖凝胶中，进行电泳。

（4）用凝胶成像系统观察电泳结果，鉴定RNA组分。

五、实验结果与分析1. 电泳结果显示，提取的RNA呈特征性条带，表明RNA提取成功。

2. 通过对RNA组分进行鉴定，发现提取的RNA主要由rRNA、mRNA和tRNA组成，符合酵母RNA的组分特点。

六、实验结论通过本实验，我们成功掌握了稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程，并了解了RNA的组分。

实验结果表明，提取的RNA成分符合酵母RNA的组分特点，说明实验操作正确。

七、实验讨论1. 在RNA提取过程中，注意防止RNA酶的污染，避免RNA降解。

2. 在实验操作过程中，严格控制pH值和温度，以保证RNA提取的纯度和完整性。