利用随机扩增多态性DNA指纹技术对猪链球菌进行基因分型
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琼 脂 糖 、Ｐ Ｒ ｕ ｆｒ（ Ｃ Ｂ ｆ ｅ 含 Ｍｇ ） ４ × ｄ Ｐ、Ｄ ２ ０ 、 ＮＴ Ｌ ０ ０ Ｍａ ｋ ｒ Ｓ Ｓ Ｃ ｒ ｅ 、 Ｄ 、 ＴＡＢ 蛋 白酶 Ｋ、 、 ＲＮＡ 酶 、 ０ １ ０条 １ Ｏ聚 寡 核 苷 酸
随 机 引物 、 ｉ 和 酚 和 Ｅ Ｔ 等 ： 购 自北 京 鼎 国 生 物 技 术 Ｔｒ ｓ饱 Ｄ Ａ 均
用 ＲＡＰ Ｄ技 术 对 临 床 分 离 的 ２ Ｏ株 猪 链 球 菌 进 行 分 型 研 究 。
随 着 我 国 工 厂 化 养 猪 业 的 不 断 发 展 ， 链 球 菌病 已 成 为 危 害 养 猪
猪 业 的 一 种 重 要 疾 病 。该 病 一 年 四 季 均 可 发 生 ， 害 不 同 年 龄 侵 的猪 ． 由于 链 球 菌 血 清 型 多 、 原 结 构 复 杂 ， 临 床 上 可 呈 现 不 抗 在 同 的 特 征 ． 败 血 症 、 膜 脑 炎 、 内 膜 炎 、 炎 、 脓 性 淋 巴 结 如 脑 心 肺 化
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中 国 兽 医科 技 Fra bibliotek第 ３ ２卷
第 ７期
２０ ０ ２年
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利 用 随机 扩 增 多态 性 ＤＮ 指 纹 技 术 对 猪 链 球 菌 进 行 基 因分 型 Ａ
倪 宏 波 。 ，欧 阳 素 贞 ，王 兴 龙。 ，鲁 会 军。 ，雷连 成。
泳 （ ｕｓ ｉ ｄ ｇ ｌ ｌｃｒ ｐ ｏ ｅ ｉ， Ｆ Ｅ 、 制 性 酶 切 分 析 （ ｅ ｐ ｌ ｆ ｌ ｅ ｅｅ ｔ ｈ ｒｓ Ｐ Ｇ ） 限 ｅ ｅ ｏ ｓ ｒ— ｓｒ ｔ ｎ ｅ ｄ ｎ ｃｅ ｓ ｉｇ ｒ ｒ ｔ ｇ Ｒ Ｆ 、 增 片 段 长 度 多 态 ｔｉ ｉ ｎ ｏ ｕ ｌａｅ ｆ ｅ ｐ ｉ ｉ ， Ｅ ） 扩 ｃｏ ｎ ｎｎ
关 键 词 ：猪 链 球 菌 ；随 机 扩 增 多态一－ＤＮＡ；指 纹 图 谱 ；基 因分 型 ｔ － ＊ 中 图 分 类 号 ：Ｓ ８ ２ ６ １ ５ ． １ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１ ０ — ４ ９ ２ ０ ） ７ ０ ０ — ４ ０ ０ ６ １ （ ０ ２ ０ —０ ９０
要 的意义 。
１ 材 料 与 方 法
１ １ 菌 株 ．
供 试 菌 株 来 源 于 发 病 猪 场 、 动 物 门 诊 及 黑 龙 江 八 一 农 垦 小
大 学 动 物 科 技 学 院 微 生 物 教 研 室 。所 分 离 菌 株 均 经 形 态 学 、 生 化试 验和血清学试验 鉴定证实 ， 株编号为 １ ２ 。 菌 ～ Ｏ
（ ．黑 龙 江八 一农 垦 大 学 动 物科 技 学 院 ，黑 龙 江 密 山 １ ８ ０ ；２ １ ５ ３ ８ ．安 阳大 学 畜 牧 兽 医 系 ，河 南 安 阳 ４５０ ； ５ ０ ０
３ ．解 放 军 军 需 大 学 动 物 科 学 系 ，吉 林 长 春 １ ０ ６ ） ３ ０ ２
摘 要 ：通 过 优 化 反 应 条 件 和 筛 选 随 机 引 物 ， 用 １ ０条 随 机 引 物 对 分 离 的 ２ 应 ０ Ｏ株 猪 链 球 菌做 随 机 扩 增 多 态 性 Ｄ ＮＡ （ ＡＰ 分 型研 究 。 结 果 表 明 ． ２ Ｒ Ｄ） 有 ７条 引 物 呈 现 良好 的 多 态 性 和 稳 定 性 ， 产 生 稳 定 、 杂 的 指 纹 图谱 。 采 用 Ｓ Ｓ １ ． 可 复 Ｐ Ｓ ００ 软 件 分 析 了不 同 菌 株 之 间 的遗 传 距 离 ． 制 出 了菌 株 间 的 亲缘 关 系树 状 图 ， 果 ． Ｏ株 猪 链 球 菌 被 分 为 ４个 聚 类 群 。 绘 结 ２
１ ２ 试 剂 ．
长 期 以来 ． 球 菌 的 分 型 通 常 是 以 生 物 学 和 抗 原 特 性 为 基 链 础 。 要依靠 其形态 、 养 和生化 特性 、 清学方 法 、 膜 型 、 主 培 血 荚 细 菌 素 及 噬 菌 体 生 物 型 等 方 法 。 近 年 来 ， 内 外 开 始 应 用 分 子 生 国 物 学 技 术 ． 质 粒 指 纹 图 谱 （ ｌｓ ｄｆ ｇ ｒ ｒ ｔ ｇ 、 冲 场 电 如 ｐａｍｉ ｉ ｅｐｉ ｉ ） 脉 ｎ ｎｎ
炎、 节炎、 关 支气 管 肺 炎 等 ， 常 与 其 他 疾 病合 并 感 染 ． 病 率 和 还 发 死 亡 率 较 高 ＿ ｊ 因 此 ． 速 而 准 确 地 对 该 菌 进 行 分 型 ． 仅 为 】 。 快 不 该 病 的 诊 断 、 疗 提 供 依 据 。 且 对 该 病 的 流 行 病 学 调 查 具 有 重 治 而
行 链 球 菌 的 分 型 研 究 。 这 些 技 术 存 在 技 术 复 杂 、 时 、 辨 率 但 耗 分
１ ０条 １ ０ ０聚 寡 核 苷 酸 随 机 引 物 ， 于 北 京 鼎 国生 物 技 术 发 购
收 稿 日期 ： ０ ２ ０ ２ ２ ０ —３２
发 展 公 司 ； ｑＤ Ｔａ ＮＡ 聚合 酶 ： 科 隆 公 司 的 ｐｏ ｇ 分 装 产 品 ； 为 ｒ ｍｅ ｅ 其他常规试 剂 ： 为国产分析纯 。 均
１３ ． 随 机 引 物
性 分 析 （ｍｐｉｅ ｒｇ ｎ ｎ ｔ ｏｙ ｏ ｏｐ ｉ ＡＦ Ｐ 等 进 ａ ｌｉ ｆ ｍｅ ｔｅ ｇｈｐ ｌｍ ｒｒｈｓ ｆｄ ａ ｌ ｍ， Ｌ ）
猪 链 球 菌病 是 由链 球 菌 感 染 引 起 的 猪 的 一 类 疾 病 的 总 称 。
低或重复 性差 等 缺点 。随机 扩增 多 态 性 Ｄ ＮＡ 指 纹 （ａｄ ｍｌ ｒｎ ｏ ｙ ａ ｌｉ ｏｙ ｒ ｈｃＤ ｍｐｉｅ ｐ ｌｍｏｐ ｉ ＮＡ， ＡＰ ） 术 对 以 上 缺 点 有 所 改 善 ， ｆｄ Ｒ Ｄ技 并 具 有 样 品 用 量 少 、 敏 度 高 、 测 容 易 等 优 点 。本 研 究 旨在 利 灵 检
