白芍水提物对cAMP_磷酸二酯酶活性影响及其抗炎效果观察_陈益山
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白芍水提物对cAMP-磷酸二酯酶活性影响及其抗炎效果观察陈益山1,2,巩忠福3,姜代勋2,李佳1,2,陈丽1,2,任超1,2,穆祥1,2,陈武1,2(1.兽医学(中医药)北京市重点实验室,北京昌平102206; 2.北京农学院动物科学技术学院,北京昌平102206; 3.中国兽医药品监察所,北京海淀100081)摘要:检测白芍水提物对中性粒细胞cAM P-磷酸二酯酶(PDE)活性影响,并观察其对大鼠角叉菜胶致足肿胀和大鼠佐剂性关节炎病理模型的作用,探讨其抗炎机理和效果。
结果显示,白芍水提物对中性粒细胞cA M P-PDE活性具有极显著的抑制作用(P<0.001),并能显著抑制(P<0.05)大鼠角叉菜胶致足肿胀和大鼠佐剂性关节炎足肿胀。
研究表明,白芍水提物可能通过抑制cAM P-P DE活性,升高炎症细胞cA M P水平发挥抗炎作用,其抗炎成分有待于进一步研究。
关键词:白芍;磷酸二酯酶;抗炎中图分类号:S853.74文献标识码:A文章编号:0529-6005(2010)08-0020-03Effects of Baishao aqu eous extract on cAMP-PDE activity andthe ant-i inflammationCH EN Y-i shan1,2,GONG Zhong-fu3,JIANG Da-i xun2,LI Jia1,2,CH EN Li1,2,REN Chao1,2,M U Xiang1,2,CH EN Wu1,2(1.Beijng K ey L abo rato ry of V eterinar y M edicine(T raditio nal Chinese M edicine and Pharmaco log y),Beijing102206,China;2.Department of A nimal Science and T echno lo gy,Beijing U niversity o f Ag riculture,Beijing102206,China;3.China Institute o f Veter inary Drug Co nt rol,Beijing100081,China)Abstract:T o appro ach the effects and mechanism o f ant-i inflamm ation by detecting the activity of cy-clic adenosine m onophosphate phosphodiesterase(cAMP-PDE)in neutro phils w ith Baishao aqueous ex-tract,and observ ing the effection on hind paw sw elling level in rat paw-sw elling model by carrageenan and adjuv ant-induced arthritis m odel.The results show ed that Baishao aqueo us ex tract had a sig nificant inhib-i tion on cAM P-PDE activity(P<0.001),and on hind paw sw elling level in rat paw-sw elling m odel by carra-geenan and adjuvan-t induced arthritis model(P<0.05).The research show ed that Baishao equeous extract收稿日期:2009-05-06基金项目:国家自然科学基金项目(30671542);北京市教委科技重点项目(KZ200810020008);北京市教委科技面上项目(KM20101002 0012)作者简介:陈益山(1982-),男,硕士,从事现代中药药理研究, E-mail:cys8320@通讯作者:陈武,E-mail:tcvmchenw u@h [3]Wiktor T J,Flamand A,Koprow ski H.U se of monoc lonal ant-ibodies in diagnosis of rabi es virus infection and di fferentiation of ra-bies and rabies-related viruses[J].J Vi rol Methods,1980,1:33-46.[4]Rup precht C E,Dietzschold B,W unner W H,e t al.Antigenicrelation ships of Lyssaviruses.[M]//Baer G M.T he n aturalh istory of rabies.Boca Raton:CRC Pres s,1991:69-100.[5]Bourh y H,Kissi B.M olecular diversity of th e Lyssavirus g e-nu s[J].Virology,1993,194:70-81.[6]H eaton P R,Johnstone P,M acElhinney L M,et al.Hem-i nestedPCR assay for the detec tion of s ix genotypes of rabies and rabies-related viruses[J].J Clin M icrobiol,1997,35:2763-2766.[7]Gould R A,Hyatt A D,Lu nt R,et al.Characteriz ation of an ovel L yssavirus isolated fr om Pteropid bats in Australia[J].Viru s Res,1998,54:165-187.[8]Badrane H,Bahloul C,Perrin P,et al.E vid ence of tw o Lys-savirus phylogroups w ith distinct path ogenicity and im munoge-nicity[J].J Virol,2001,75:3268-3276.[9]Lentz T L,Wilson P T,H aw rot E,et al.Amino acid sequencesimi larity betw een rabies virus glycoprotei n and snake venon cura-remi ntic neuratoxi ns[J].Science,1984,226:847-848.[10]Lodm ell D L,Smith J S,Esposito J J.Cross-protection ofmice against a global s pectru m of rab ies virus variants[J].V-ir ology,1995,69(8):4957-4962.[11]卢圣栋.现代分子生物学实验技术[M].北京:中国协和医科大学出版社,1993:382-386.[12]萨姆布鲁克J,弗里奇E F,尼阿蒂斯T.分子克隆实验指南[M].2版1金冬雁,黎孟枫,侯云德,等译.北京:科学出版社,1998:888-898.20中国兽医杂志2010年(第46卷)第8期Chin es e Journal of Veterinary M edicinehad ant-i inflam mation by inhibiting the activ ity of cA MP-PDE,r aising the lev el of cA MP.T he ant-i in-flamm ator y ingredients in Baishao equeo us extract need further inv estig ation.Key words:Paeonia lactiflo ra Pall;pho spho diester ase(PDE);ant-i inflammationC orresponding author:CH EN Wu白芍为毛茛科植物芍药(P aeonia lactif lor a Pall)的干燥根,具有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗之功效[1]。
药理研究表明,其有抗炎、解痉、护肝、免疫调节等作用。
研究表明,临床上常见炎症性疾病多与中性粒细胞的炎性反应密切相关[2-3],而磷酸二酯酶(PDE)可以通过调节细胞内cAM P水平发挥抗炎作用[4],本试验通过检测白芍水提物对中性粒细胞PDE活性和炎症病理模型的影响,分析其抗炎的相关机理与效果。
1材料与方法1.1实验动物SD雄性大鼠60只,体重150~180 g,购于中国科学院遗传与发育研究所实验动物中心。
1.2主要试剂cAMP、Rolipram、角叉菜胶、弗氏完全佐剂(Sig ma公司),PBS(pH值7.4),钙镁PBS (pH值7.4),中药白芍饮片(北京同仁堂药店)。
1.3白芍水提物的制备白芍水提物的制备方法参照韩太云等人的方法[5],将购买的白芍饮片用蒸馏水淋洗1次,加蒸馏水煎煮2次,煎液减压浓缩至1g/mL生药。
加无水乙醇使其浓度达到70%,边加边搅拌,4e放置24h,取上清液用氢氧化钠调pH值为7.5~8.0,放置12h,取上清液挥发掉乙醇,将药液浓缩至1g/m L生药。
放置12h,离心取上清液浓缩干燥,得白芍水提物。
1.4中性粒细胞cAM P-PDE活性检测中性粒细胞cAM P-PDE活性影响的检测方法参考张冰等的方法[6]。
cAMP浓度为100L mol/L,白芍水提物的反应浓度为10m g/mL,阳性对照为Rolipram,反应浓度为100L m ol/L,均用PBS配制。
空白组: cAM P40L L,对照组:cAMP40L L、酶样品20L L,白芍水提物组:cAMP40L L、白芍水提物10L L、酶样品20L L,Rolipram组:CAMP40L L、Rolipram10.0 L L、酶样品20L L,所有体系加PBS补足100L L。
1.5大鼠角叉菜胶致足肿胀模型试验将大鼠随机分成6组,每组10只。
白芍水提物设高、中、低3个浓度,分别小鼠腹腔注射白芍水提物10g/kg、5 g/kg、2.5g/kg体重;阳性对照组,腹腔注射Ro lip-r am2.75mg/kg体重;正常对照组和模型组,腹腔注射等容积的生理盐水。