新建 面膜实验 (2)
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一.面膜指标检测
1.含菌量的检测
1.1 配制固体培养基200ml。
配制含盐量为0.85%的无菌水200ml,分装99ml于锥形瓶,9ml于试管10支。
分别高压蒸汽121℃灭菌20min。
1.2配制面膜悬液
量取1ml或1g面膜样品,加入99ml无菌生理盐水,充分震荡10min,确保面膜充分分散,制得10-2稀释面膜。
量取10-2稀释样品1ml加入9ml无菌水,震荡混匀制得10-3稀释样品。
重复上述操作分别制得10-3—10-6稀释液。
1.3倒平板接种样品
融化培养基后按无菌操作方法倒制12块培养基平板,每个培养皿中覆盖皿底2-4mm培养基,待凝固。
培养皿中分别加入不同浓度的稀释样品0.2ml,涂布均匀。
每个稀释液制备三个平板并贴好标签后倒置。
36.5℃保温箱培养48h。
1.4计数
数出每个稀释液培养皿中菌落数,计算平均数(不计无效数据),按公式计算原面膜样品每毫升含菌量。
面膜样品1ml含菌量=∑(各浓度样品平均菌落数× 5 ×稀释倍数)/6
2.还原力检测
参照Nichole还原力测定方法。
量取3mlPH6.6磷酸盐缓冲液,分别加入1g啤酒糟面膜样品,2.5ml 1%铁氰化钾,充分混匀。
→50℃恒温20min→加入2.5ml10%三氯乙酸→3000r/min离心10min→取上清液1ml稀释10倍后加入0.1%氯化铁0.5mL混合均匀→700nm 测定吸光度。
并以不同浓度维生素C做一组对照试验测得吸光度值,供面膜还原力测定参考。
3.清除自由基能力的检测
采用Smirnoff方法测定还原力。
量取2ml4.5mmol/LFeso4与2ml4.5mmol/L水杨酸-乙醇溶液混匀→加入不同浓度稀释液0.2mL→加入2mL4.4mmol/L双氧水混匀→37℃水浴30min→用蒸馏水做参比溶液,510nm下测吸光度值。
并与抗坏血酸清除自由基的能力进行比较,得到清除自由基的能力值。
清处力(%)=[AO-(AX-AXo)]/Ao*100%
Ao:2mlFeso4 + 2ml水杨酸-乙醇溶液+0.2mlH2O2
AX:2mlFeso4+2ml水杨酸-乙醇溶液+0.2mL不同浓度的稀释样品+2mLH2O2 AXO:2mLFeso4+2mL水杨酸-乙醇溶液+0.2mL不同浓度稀释样品+2mL蒸馏水。