项目7药物体外抗菌试验技术_PPT幻灯片
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药物的体外抗菌试验
常用的体外抑菌试验
琼脂扩散法
滤纸片法 挖沟法
连续稀释法
琼脂扩散法
原理： 药物可以在琼脂培养基中自由扩散，形成一定浓度的含药 区域。 由于各种微生物对不同药物或同一药物不同浓度的敏感性 不同，因而形成一定大小的抑菌圈或抑菌距离，根据其大小， 可以了解药物的抗菌作用大小或是微生物对试验药物的敏感性。
适用于在一个平板上试验一种药物对几种不 同试验菌的抗菌作用。
琼脂扩散法具有方法简便，技术要求不 高，易掌握操作的特点。但精确度不高，一 般能用于定性或初步判断其作用的强弱。 液体稀释法是一种测定药物的抗菌作用 定量方法，较琼脂扩散法精确，因而运用较 普遍 。
连续稀释法 可用于测定药物的最低抑菌浓度（MIC）和 最低杀菌浓度（MBC）。可以用液体培养基， 也可用固体培养基。 凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该 药的最低抑菌浓度 （Minimal inhibitory concentration，MIC）。 以培养后无细菌生长的最高药物稀释度为最 小杀菌浓度（Minimal bactericidal concentration，MBC）。
滤纸片法： 制成含菌平板后，将滤纸片蘸取药液置 于平板上，培养后观察结果，量取抑菌圈直 径以此判断试验药物抑菌作用的强弱。
用于新药的初筛及临床的药敏试验。
挖沟法： 1、在琼脂平板上挖沟，沟两边垂直划线接种 各种试验菌，沟内加入药液。 2、培养后，根据沟两边所生长的试验菌离沟 的距离来判断药物对试验菌的抗菌作用强弱。
联合抗菌试验的常用方法 一、纸条试验（paper strip test）
即在已接种实验菌的平板表面垂直放置两条浸有一 种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱 或无影响来判断它们在联合应用时的效应。 图20-2是纸条实验的示意图。
实验七体外抑菌实验
03 实验结果
抑菌圈测量
抑菌圈大小
根据实验结果，测量并记 录各菌株对应的抑菌圈直 径，以评估抗菌物质的抑 菌效果。
抑菌圈对比
将不同菌株的抑菌圈进行 对比，分析抗菌物质对不 同菌株的抑制作用差异。
抑菌圈标准化
为确保实验结果的可靠性， 将抑菌圈直径标准化，以 消除实验操作和设备差异 对结果的影响。
数据记录与分析
数据整理
将实验过程中测量的数据整理成表格， 便于后续分析和对比。
数据分析
显著性检验
采用统计学方法对实验数据进行显著 性检验，以确定抗菌物质对各菌株的 抑制效果是否具有统计学上的显著差 异。
根据抑菌圈大小和其他相关指标，分 析抗菌物质对不同菌株的抑制作用。
结果展示
图表展示
利用图表（如柱状图、折线图等）直观展示实验结果，便于观察和分析。
实验操作步骤
1. 菌悬液制备
将实验菌种接种于适宜的培养基中， 培养至对数生长期，制备成一定浓度 的菌悬液。
2. 抗菌药物稀释
将抗菌药物用生理盐水或无菌水稀释 至所需浓度。
3. 抗菌活性测试
将菌悬液与稀释后的抗菌药物混合， 观察抗菌药物的抑菌效果。
4. ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ果记录
记录抑菌圈的大小、透明度等指标， 分析抗菌药物的抑菌效果。
结论总结
根据实验结果和数据分析，总结抗菌物质对各菌株的抑制作用，并给出相应的 结论和建议。
04 结论
结果总结
实验结果显示，不同浓度的抗菌剂对不同细菌的抑菌 效果存在差异。在一定浓度范围内，随着抗菌剂浓度
的增加，抑菌效果逐渐增强。
实验中使用的抗菌剂对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 的抑菌效果不同，表明不同细菌对抗菌剂的敏感性存
药物的抗菌试验
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药物的抗菌试验
FIC指数 0 ． 5为协同作用；0．5－1为相加 作用； 1～2为无关作用；＞2为拮抗 作用。
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药物的抗菌试验
•[棋盘法的设计] •棋盘法的主要优点在于甲、乙两药的每个药物浓度 都有单独的和与另一个药物不同浓度的联合，因此能
精确测定两种抗菌药物在适当浓度的比例下所产生的 相互作用。
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药物的抗菌试验
•三、影响抗菌试验的因素
•1. 菌种 • 在抗菌试验中所用到的菌种，必需是国 家卫生部生物制品检定所菌各保藏中心专门提 供的标准菌株。在特殊情况下，也可以采用临 床新分离的并经过鉴定、纯化及合理保藏的菌 株。而且我们要用到的试验菌种应该选择是对 数期生长的菌。因为那时菌种生命力最旺盛， 这对于我试验测定的结果也会准确些。
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药物的抗菌试验
•二、药物的体内抗菌试验
• 药物的体内抗菌试验又称为动物实验治疗试验或保 护力试验。当抗菌药物进入机体后，其效力的发挥要受 体内各种因素的影响。如血液及组织内的蛋白质或磷脂、 脓汁内的核酸均与药物结合，降低药物的活性；坏死组 织内的酸性环境也能影响药物的活性。机体内的微生物， 代谢活动较低，对药物的敏感性降低，有时还可形成细 胞壁缺陷型细菌，对某些药物不敏感。机体内各组织中 药物的吸收，分布不同，使药物的浓度难以恒定。因此 在评定新药的药效时除做体外抗菌试验外还需要做体内 的抗菌试验。
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药物的抗菌试验
•1. 活菌计数法 •将定量的试验菌加入到一定浓度的定量药物中，作 用一定时间后，取样进行活菌数计数，从存活的微生 物数量计算出药物对试验菌的致死率，从而判断药物 的杀菌能力。 •活菌计数一般是将定量的药物与试验菌作用后混合 液稀释后，混入琼脂培养基做成平板，培养后数平板 上形成的菌落数，由于一个菌落是由一个细菌繁殖而 来的，所以可以用菌数乘以稀释倍数，计算出混合液 中存活的细菌数。或者也可以用微孔滤膜过滤药物与 试验菌的混合液，洗净药液，将滤膜放在平板上培养 后数菌落数。
体外抗菌实验PPT精选文档
第二十章 药物的体外抗菌试验
1
药物的体外抗菌试验
药物的体外抗菌试验是在体外测定微 生物对药物敏感程度的试验，
已广泛地应用于科研、生产和临床。如抗菌 药物的筛选、提取过程中的追踪、抗菌谱的定、 药物含量的测定、药物血浓度测定、指导临床用 药的药敏试验等。
抗菌试验包括抑荫试验和杀菌试验。
抑菌：即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微 生物，在药物除去后微生物又能生长. 杀菌：即能杀死微 生物，当药物除去后，微生 物也不能再生长繁殖。
2
第一节 常用的体外抑菌试验
连续稀释法：
可用于测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀 菌浓度(MBC)。可以用液体培养基，也可用固体培 养基。
1．液体培养基连续稀释法 2．固体培养基连续稀释法
分平板法和斜面 法。
3
琼脂扩散法：
是利用药物可以在琼脂培养基中扩散，在药 物有效浓度的范围内形成抑菌圈或抑菌距离，以 抑菌圈直径或抑菌距离的大小来评价药物抗菌作 用强弱。
7
第三节 联合抗菌试验
在药学上作中，常需检查两种抗菌药物 在联合应用时的相互作用以及抗菌药物与不 同pH值或不同离子溶液的相互影响。如加强 药物抗菌作用的为协同(synergism)；减弱药 物作用的为拮抗(antagonism)；相互无影响的 为无关(indjfference)；作用为二者之和的为累 加(addition)。
8
纸条试验
即在已接种试验菌的平板表面垂直放置两条各浸有 一种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱或 无影响来判断它们在联合应用时的效应。
梯度平板纸条试验
需先制备含药的梯度平板。将试验菌悬液涂布于 平板表面，取滤纸条浸透另一待检药液，按梯度平板 中药物浓度递减的方向置于平板表面。培养后，如该 待检药液对平板内的药物有加强作用，则可见沿纸条 两边的抑菌区被扩大。
1
药物的体外抗菌试验
药物的体外抗菌试验是在体外测定微 生物对药物敏感程度的试验，
已广泛地应用于科研、生产和临床。如抗菌 药物的筛选、提取过程中的追踪、抗菌谱的定、 药物含量的测定、药物血浓度测定、指导临床用 药的药敏试验等。
抗菌试验包括抑荫试验和杀菌试验。
抑菌：即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微 生物，在药物除去后微生物又能生长. 杀菌：即能杀死微 生物，当药物除去后，微生 物也不能再生长繁殖。
2
第一节 常用的体外抑菌试验
连续稀释法：
可用于测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀 菌浓度(MBC)。可以用液体培养基，也可用固体培 养基。
1．液体培养基连续稀释法 2．固体培养基连续稀释法
分平板法和斜面 法。
3
琼脂扩散法：
是利用药物可以在琼脂培养基中扩散，在药 物有效浓度的范围内形成抑菌圈或抑菌距离，以 抑菌圈直径或抑菌距离的大小来评价药物抗菌作 用强弱。
7
第三节 联合抗菌试验
在药学上作中，常需检查两种抗菌药物 在联合应用时的相互作用以及抗菌药物与不 同pH值或不同离子溶液的相互影响。如加强 药物抗菌作用的为协同(synergism)；减弱药 物作用的为拮抗(antagonism)；相互无影响的 为无关(indjfference)；作用为二者之和的为累 加(addition)。
8
纸条试验
即在已接种试验菌的平板表面垂直放置两条各浸有 一种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱或 无影响来判断它们在联合应用时的效应。
梯度平板纸条试验
需先制备含药的梯度平板。将试验菌悬液涂布于 平板表面，取滤纸条浸透另一待检药液，按梯度平板 中药物浓度递减的方向置于平板表面。培养后，如该 待检药液对平板内的药物有加强作用，则可见沿纸条 两边的抑菌区被扩大。
药物的抗菌试验
药物的抗菌试验
•药物及浓度
•
•链霉素 •（µg／ml）
•
64
•
32
•
16
•
8
•
4
•青霉素G单药对照
青霉素G(IU／m1) 4 2 1 0.5 0.25
-- -- -- -- -- -- -
---++ ++ ++
链霉素单药对照
+ + 细菌对照
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•-：无细菌生长 +：有细菌生长 •FIC指数=1／1+16／16=2——无关
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药物的抗菌试验
பைடு நூலகம்
•三、影响抗菌试验的因素
•1. 菌种 • 在抗菌试验中所用到的菌种，必需是国 家卫生部生物制品检定所菌各保藏中心专门提 供的标准菌株。在特殊情况下，也可以采用临 床新分离的并经过鉴定、纯化及合理保藏的菌 株。而且我们要用到的试验菌种应该选择是对 数期生长的菌。因为那时菌种生命力最旺盛， 这对于我试验测定的结果也会准确些。
•在进行棋盘法之前应先测定两种抗菌药物单独对受 试菌的MIC，然后以两药MIC的8倍、4倍、2倍、1倍 以及MIC的1/2、1/4、1/8浓度（或4倍、2倍、1倍、 1/2、1/4浓度）分别进行联合。可见举例，如表—1的 青霉素G与链霉素联合药敏实验和表2的TMP+SMZ的 联合作用。
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药物的抗菌试验
•器材及试剂: •药敏片：含各种抗生素的市售产品 •培养基平板：普通牛肉膏蛋白胨固体培养基，待 检细菌的培养物。 •眼科镊、无菌棉拭子、酒精灯等。
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药物的抗菌试验
药物的体外抗菌试验[荟萃精制]
![药物的体外抗菌试验[荟萃精制]](https://img.taocdn.com/s1/m/c51cad740722192e4536f65a.png)
行业培训
20
抗菌试验的影响因素
2、培养基
❖ 抗菌试验的培养基应按试验菌的需求配制，如链球 菌常用含血清的肉汤培养基，抗真菌药物试验需用 沙氏培养基。
❖ 培养基的酸碱度、电解质、还原性物质等均可影响 试验结果，实验时应尽可能排除各种影响实验结果 因素的掺入。
❖ 经无菌检查合格。 行业培训
21
抗菌试验的影响因素
9
行业培训
10
❖ 琼脂扩散法具有方法简便，技术要求不 高，易掌握操作的特点。但精确度不高，一 般能用于定性或初步判断其作用的强弱。
❖ 液体稀释法是一种测定药物的抗菌作用 定量方法，较琼脂扩散法精确，因而运用较 普遍 。
行业培训
11
连续稀释法
❖ 可用于测定药物的最低抑菌浓度（MIC）和 最低杀菌浓度（MBC）。可以用液体培养基， 也可用固体培养基。
23
❖ 在实际工作中，往往可见到体外实验有 作用的药物，进入机体后由于各种原因而失 效，有的药物毒性很大也不能用于临床。
行业培训
24
行业培训
15
联合抗菌试验的常用方法
一、纸条试验（paper strip test）
即在已接种实验菌的平板表面垂直放置两条浸有一 种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱 或无影响来判断它们在联合应用时的效应。 图20-2是纸条实验的示意图。
行业培训
16
图20-2是纸条实验的示意图。图中A列的两纸条中只有一条含 有抗菌药物，另一条不含抗菌药物；B列的两纸条均含有抗菌
行业培训
18
抗菌试验的影响因素
❖ 1、试验菌： ❖ 用专门的供应机构提供的标准菌株。 ❖ 北京卫生部药品生物制品检定所菌种保藏中
心。 ❖ 试验菌应合理保藏，用前加以纯化及生物学
第二十章 药物的体外抗菌试验
4、对照实验
1）试验菌对照：在无药情况下，应能在培养
基内正常生长。 2）已知药物对照：已知的抗菌药物对标准的敏 感菌株应出现预期的抗菌效应，对已知的抗药 菌应不出现抗菌效应。 3）溶剂及稀释液对照：抗菌药物配制时所用 的溶剂及稀释液应无抗菌作用。
表20-1石炭酸系数测定
浓度 石炭酸 1:90 1:0 1:10 1:150 1:170 1:200 1:225 1:250 1:275 作用时间 5 10 + + + + + +
消毒剂
15 -
根据5分钟不能杀菌，10分钟能杀菌的最大稀释 度为标准来计算，则石炭酸系数=250/100=2.5
或根据三个相同杀菌结果的稀释度比值的平均值 来计算,则: 石炭酸系数 =(225/90+250/100+275/110)/3=2.5 石炭酸系数愈大,则被测消毒剂的效力愈高.但石 炭酸系数的应用有一定局限性,因为某一消毒剂 对伤寒沙门菌的石炭酸系数的大小并不能完全 代表它对其他细菌作用的强弱.
抑菌：即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微 生物，在药物除去后微生物又能生长； 杀菌：即能杀死微生物，当药物除去后，微生物 也不能再生长繁殖。 两者并非绝对，只是在一定条件下相对而言。
第一节
常用的体外抑菌实验
体外抑菌实验是最常用的抗菌实验，方法简便， 需时短，用药量少，不需要动物和特殊设备， 一般在玻璃器皿中进行。 常用的方法有连续稀释法和琼脂扩散法。
2）斜面法
是固体培养基上连续稀释法的一种，是将系列 浓度的各药分别混入固体培养基中制成斜面， 在斜面上接种一定量的实验菌，然后观察是否 有菌生长，判断MIC值。
二、琼脂扩散法（agar diffusion test ）
项目七 药物体外抗菌实验技术
只适用于同类消毒剂的杀菌效力测定,对非酚 类、季铵盐及不稳定的次氯酸盐等均不能给 予正确评价.
三、联合抗菌试验
在药学中，常需要检查两种抗菌药物在联合应用时 的相互作用以及抗菌药物与不同PH值或不同离子溶液的 相互影响。
加强药物抗菌作用的为协同（synergism）；
减弱药物作用的为拮抗（antagonism）；
操作步骤
A 配置不同浓度的石碳酸稀释液、消毒剂稀释液
B
量取石碳酸和消毒剂稀释液于无菌试管中， 20℃恒温水浴
C 各管内依次加入伤寒杆菌或大肠杆菌培 养液0.5ml，管上标明5min处理、10min 处理字样，加入后准确计时。
D
到标定时间后取出一接种环的混合液接种于一 支5ml（或10ml）的肉汤培养基中，培养一定 时间后，观察并记录结果。+为有菌生长，-为 无菌生长。
原理：
药物可以在琼脂培养基中自由扩散，形成一定浓度的含药 区域。 由于各种微生物对不同药物或同一药物不同浓度的敏感性 不同，因而形成一定大小的抑菌圈或抑菌距离，根据其大小， 可以了解药物的抗菌作用大小或是微生物对试验药物的敏感性。
（1）滤纸片法（103页，3min）： 以倾注法制成含菌平板后，将滤纸片蘸取药液置于平板上，
表1 石炭酸系数测定
浓度 5 作用时间 10 + + 15 -
石炭酸
消毒剂
1:90 1:100 1:110 1:150 1:170 1:200 1:225 1:250 1:275
+ + + +
根据5分钟不能杀菌，10分钟能杀菌的最大稀释度为标准计算： 石炭酸系数=250/100=2.5
注意事项
1 2 3 4 有机物存在时消毒剂容易失去活性; 消毒剂可能影响微生物生长; 随温度变化而影响测定结果;
实验4药物体外抗菌试验PPT课件
考虑药物浓度的影响
在解读结果时，需要考虑药物浓度对抑菌效果的影响。一般来说，药物浓度越高，抑菌效 果越好。因此，在比较不同药物或不同浓度时，需要确保实验条件的一致性。
结合临床实际
在解读结果时，需要结合临床实际考虑药物的抗菌效果。例如，对于某些临床常见细菌， 如果实验结果显示药物具有较好的抗菌作用，那么该药物可能对治疗该细菌感染具有一定 的应用价值。
头孢菌素类
具有广谱抗菌作用，对革 兰氏阳性菌和阴性菌均有 较强抗菌活性。
碳青霉烯类
具有非常强的抗菌作用， 对大多数细菌均有较好的 抗菌效果。
大环内酯类
红霉素
主要对革兰氏阳性菌有抗菌作用 ，对部分革兰氏阴性菌和支原体 也有效。
阿奇霉素
具有广谱抗菌作用，对革兰氏阳 性菌、革兰氏阴性菌和支原体均 有较好抗菌效果。
避免不良反应
联合用药可能会增加不良反应的风险，因此应谨 慎选择药物组合。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
稀释法
总结词
稀释法是通过连续稀释抗菌药物浓度， 观察细菌生长情况，从而判断细菌对 抗菌药物的敏感程度。
详细描述
稀释法是将抗菌药物稀释成不同浓度， 然后将不同浓度的抗菌药物与细菌混 合培养。通过观察细菌的生长情况， 可以判断细菌对抗菌药物的敏感程度。
E-test法
总结词
E-test法是一种基于纸片扩散法的改良方法，通过在平板上涂布抗菌药物的纤维棒，测量抑菌圈的大小判断细菌 对抗菌药物的敏感程度。
测定药物能够抑制细菌生长的最低浓 度，是衡量药物抗菌效果的重要指标。 MIC值越低，说明药物抗菌效果越好。
细菌生长情况
观察细菌在药物作用下的生长情况， 可以评估药物的抗菌效果。如果细菌 生长受到明显抑制，说明药物具有较 好的抗菌作用。
在解读结果时，需要考虑药物浓度对抑菌效果的影响。一般来说，药物浓度越高，抑菌效 果越好。因此，在比较不同药物或不同浓度时，需要确保实验条件的一致性。
结合临床实际
在解读结果时，需要结合临床实际考虑药物的抗菌效果。例如，对于某些临床常见细菌， 如果实验结果显示药物具有较好的抗菌作用，那么该药物可能对治疗该细菌感染具有一定 的应用价值。
头孢菌素类
具有广谱抗菌作用，对革 兰氏阳性菌和阴性菌均有 较强抗菌活性。
碳青霉烯类
具有非常强的抗菌作用， 对大多数细菌均有较好的 抗菌效果。
大环内酯类
红霉素
主要对革兰氏阳性菌有抗菌作用 ，对部分革兰氏阴性菌和支原体 也有效。
阿奇霉素
具有广谱抗菌作用，对革兰氏阳 性菌、革兰氏阴性菌和支原体均 有较好抗菌效果。
避免不良反应
联合用药可能会增加不良反应的风险，因此应谨 慎选择药物组合。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
稀释法
总结词
稀释法是通过连续稀释抗菌药物浓度， 观察细菌生长情况，从而判断细菌对 抗菌药物的敏感程度。
详细描述
稀释法是将抗菌药物稀释成不同浓度， 然后将不同浓度的抗菌药物与细菌混 合培养。通过观察细菌的生长情况， 可以判断细菌对抗菌药物的敏感程度。
E-test法
总结词
E-test法是一种基于纸片扩散法的改良方法，通过在平板上涂布抗菌药物的纤维棒，测量抑菌圈的大小判断细菌 对抗菌药物的敏感程度。
测定药物能够抑制细菌生长的最低浓 度，是衡量药物抗菌效果的重要指标。 MIC值越低，说明药物抗菌效果越好。
细菌生长情况
观察细菌在药物作用下的生长情况， 可以评估药物的抗菌效果。如果细菌 生长受到明显抑制，说明药物具有较 好的抗菌作用。
高级药理学体外抗菌活性试验ppt课件
菌
用无菌胶头滴管往每个牛律杯中 分别加入稀释为50倍和100倍的
活
1280µg/mL待检药品溶液，注意
性
要做到“满而不溢”。盖上陶瓦 盖放入托盘中，小心地移至培养
试
箱，37℃培养24h。用游标卡尺精
验
确测量各个抑菌圈直径（精确到 0.01mm）。
体 二、扩散法
外
抗
结果判定
菌
抑菌圈直径均值：
活
＞20mm为高敏药物
试 将检品管同样求出平均值，根据
验
标准曲线即可求出被检品的效价。
此课件下载可自行编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！
验
示。带入曲线方程可得对应的 MIC。
体
三、比浊法
外
2. 步骤
抗
将标准药液稀释成不同稀释度 1:10,1:15,1:20,1:30,1:40。然后于
菌
大小相同的试管内加入8.8mL肉
活 性
汤培养基，同时接种试验菌液 0.2mL。取上述已稀释好的标准 稀释液1mL加入肉汤菌液试管中。
试
此时的稀释倍数为
性
19mm～15mm为中敏药物
试
15mm～10mm为轻敏药物
验
＜10mm为抗药（不敏感）
体 三、比浊法
外 1. 原理
抗 细菌生长的浑浊度可以用透光度
菌
表示，则log透光度与一定范围内 的抗菌药的剂量呈直线关系，可
活
以制得标准曲线。
性 同样，被测药物所引起的抑制细
试
菌生长程度也可以用log透光度表
菌液，混匀盖塞后，37℃培养16~18h，
观察。相同过程重复三次。
附：琼脂平板为无菌检查；14管为培养
药物的体外抗菌试验
抗菌试验的影响因素
1、试验菌： 用专门的供应机构提供的标准菌株。 北京卫生部药品生物制品检定所菌种保藏中 心。 试验菌应合理保藏，用前加以纯化及生物学 特征鉴定。
所用的试验菌株应处于对数生长期，因此期 的微生物对外界因素变化最敏感。 试验结果的灵敏度在一定程度上与试验菌的 接种量成反比关系，故应选用适宜的接种量。
适用于在一个平板上试验一种药物对几种不 同试验菌的抗菌作用。
琼脂扩散法具有方法简便，技术要求不 高，易掌握操作的特点。但精确度不高，一 般能用于定性或初步判断其作用的强弱。 液体稀释法是一种测定药物的抗菌作用 定量方法，较琼脂扩散法精确，因而运用较 普遍 。
连续稀释法 可用于测定药物的最低抑菌浓度（MIC）和 最低杀菌浓度（MBC）。可以用液体培养基， 也可用固体培养基。 凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该 药的最低抑菌浓度 （Minimal inhibitory concentration，MIC）。 以培养后无细菌生长的最高药物稀释度为最 小杀菌浓度（Minimal bactericidal concentration，MBC）。
抗菌试验的影响因素
2、培养基
抗菌试验的培养基应按试验菌的需求配制，如链球 菌常用含血清的肉汤培养基，抗真菌药物试验需用 沙氏培养基。
培养基的酸碱度、电解质、还原性物质等均可影响
试验结果，实验时应尽可能排除各种影响实验结果
因素的掺入。
经无菌检查合格。
抗菌试验的影响因素
3、抗菌药物
药物的浓度、pH及含有的其他成分均可 影响试验结果，特别是中草药制剂往往含有 色素、杂质和鞣质等，这些均可造成错误结
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3．酚系数测定
是用来测定消毒剂效力的一种指标，是以石炭酸为标准，在相同的实验条件下， 将消毒剂和石炭酸的杀菌力作比较，所得的杀菌效力的比值，石炭酸系数≥2为合格。
（三）联合抗菌试验法
同时应用两种抗菌药物时，两种药物之间既可能 产生相互影响，也可能彼此不影响；产生影响时，既 可能是相互加强(协同作用)，或两药作用出现累加现 象(即两药作用之和)也可能是相互减弱(拮抗作用)， 要确定两种药物之间的作用关系时，通常需用联合抗 菌试验法。 最简便、最常用的方法：纸条或纸片试验法。
可吸收的止血剂：如凝血酶等用于止血并可被组织吸收的各种 药物制剂。
无菌检查法
（一）直接接种法。若被检品是液体，可直接接种于培养基内。 若被检品是固体粉末或冻干制剂，则需用无菌生理盐水溶解，或制成均匀悬液再作检验。若 被检品是无菌敷料，则以无菌操作打开包装，于各部位剪取1cmX3cm大小的样品，再接种到 培养基中。
(二)体外杀菌试验
用途：评价药物对微生物的致死活性
1．最小杀菌浓度的测定
是取MIC终点以上未长菌的各管培养液，分别取出并移种于无菌平板上，培养后凡 平板上无菌生长的药物最低浓度，即为该药物的MBC。对微生物广义而言，也可称之 为最小致死浓度 (MLC)。某药物能杀死微生物的最低浓度。
2．活菌计数法
在—定浓度的定量药物内，加入—定量的试验菌，作用—定时间后取样稀释，再 取—定量的此稀释液混入未凝固的琼脂培养基中，立即倾注成平板，培养后计算菌落 数。由于每个菌落是由—个菌细胞繁殖而来，则菌落数或菌落形成单位CFU)乘以稀释 倍数，再除以稀释液用量，即得该药物与试验菌的混合液中每毫升内存活的细菌数或 CFU，从而可算出该药物对细菌的致死率。
1、灭活法 ２、薄膜过滤法 ３、离子交换树脂法 4、稀释法
第三节 微生物的限度检查
微生物限度检查项目内容：
❖ 微生物限度检查的基本原则 ❖ 染菌量的检查 ✓ 细菌数 ✓ 霉菌数 ❖ 控制菌的检查 ✓ 大肠埃希氏杆菌(大肠杆菌) ✓ 金黄色葡萄球菌 ✓ 沙门氏菌 ✓ 铜绿假单胞菌(绿脓杆菌) ✓ 破伤风杆菌 ❖ 活螨的检验
各种注射剂：用于肌肉、皮下和静脉的各种针剂，包括注射用 的无菌水、输 液、注射剂 原液等。
眼用及外伤用制剂：用于眼科手术、角膜创伤及一般创伤、溃 疡和烧伤等外科用药制剂。
外科用的敷料、器材：如外 科手术用的脱脂棉、纱布、缝合线 及一次性注射器与一次性无菌手术刀片、输血袋等。
植入剂：用于包埋于人体内的药物制剂，如不溶于水的激素、 免疫药物及抗肿瘤药物等无菌的制剂。
（二）油剂的无菌检验
油剂药物与液体培养基不能混溶，故常漂浮于液体培养基表面而影响试验结果。 因此，此类药物做无菌检验时，应在培养基内加入表面活性剂(吐温—80)，使药物均 匀分布于培养基中，以利于细菌的生长和检出。有的药物如青霉素油剂等，由于粘稠 度过大，可先用灭菌植物油或灭菌液体石蜡进行一定倍数的稀释，然后取样接种到含 吐温—80的培养基中，充分摇匀使药物均匀分散在培养基中。
用放大镜或解剖镜观察。
◇漂浮法：将被检药物放入容器内，加饱和盐水至容器的２／
３处，搅匀，取液镜检，或继续加饱和食盐水至容器口，用载 玻片蘸取液面漂浮物镜检。
◇分离法：将药物放在特制分离器或附有筛网的漏斗内，离药
物６cm上放置６０～１００Ｗ的灯泡，照射１～２h.螨有避光 怕热的习性，便沿漏斗细颈向下爬，在漏斗下口处置一装有甘 油水的烧杯，收集爬出的螨，然后在显微镜下观察，根据其形 态特征、足肢游动情况判断是否为活螨。
三、抗菌试验的影响因素
在抗菌试验中应有效控制其影响因素，才能确保试验的科学性和准确性， 主要的影响因素有： ①试验菌 ②培养基 ③供试药物 ④对照试验
需要进行无菌检查的药品、敷料、灭菌器具的 范围：
(药品、敷料按《中国药典》收载的无菌检查法的规定进行， 生物制品应按照《生物制品制造及检定规程》中有关规定进行)
一、染菌量的检查
1. 目的
▪ 细菌数测定我们是为了考察每克或每毫升供试品所污染的活细菌数，来判明供试品 被细菌污染的程度。
▪ 霉菌的测定是考察每克或每毫升供试品所污染的活的霉菌数，以此来判明供试品被 真菌污染的程度。
2. 测定的方法
➢ 细菌总数的测定 营养琼脂平板培养基 +0.001%三苯四唑氯化物（TTC） ➢ 霉菌总数的测定 玫瑰红钠（马丁）培养基
（三）抗菌药物及含防腐剂药物的无菌检验
抗菌药物指药物本身为抗菌剂(如抗生素、磺胺药等)以及在药物制剂中含有部分抗菌 剂(如防腐剂)的药物。抗菌药物及含防腐剂的药物进行无菌检验时，与一般药物不同 之处在于进行无菌检验前，必须用某些方法使抗菌药物或防腐剂消除、失效，才能不 影响对被检药物是否无菌作出确认。
二、控制菌的检查
1. 口服制剂中不能检出大肠杆菌 2. 脏器口服制剂不得检出沙门氏菌和大肠杆菌 3. 一般外用药和眼科制剂不得检出金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌 4. 用创伤、溃疡、止血、深部组织的药材药粉制剂不得检出破伤风杆菌。
活螨的检验
用于口服、创伤、粘膜和腔道的药品均不得检出活螨
◇直接观察法：用肉眼直接观察被检药物上有无白点移动，再
二、药物的体内抗菌试验
体外抗菌试验有效的药物，还需要经过体内抗菌试验证明有 效后，才能推荐应用于临床。
体内抗菌试验即动物的实验治疗或保护力试验。动物实验治疗的方法，大 致是先用致病菌使动物体表或体内感染，造成感染动物模型，然后按不同剂 量、不同给药方法(如腹腔注射、皮下注射、肌肉注射或口服等)以及间隔不同 时间进行实验治疗。实验时还要设立一组动物用生理盐水代替药物进行对照 治疗。然后根据实验组与对照组的动物死亡数或内脏的含菌数，评价药物的 作用和效力。
是用来测定消毒剂效力的一种指标，是以石炭酸为标准，在相同的实验条件下， 将消毒剂和石炭酸的杀菌力作比较，所得的杀菌效力的比值，石炭酸系数≥2为合格。
（三）联合抗菌试验法
同时应用两种抗菌药物时，两种药物之间既可能 产生相互影响，也可能彼此不影响；产生影响时，既 可能是相互加强(协同作用)，或两药作用出现累加现 象(即两药作用之和)也可能是相互减弱(拮抗作用)， 要确定两种药物之间的作用关系时，通常需用联合抗 菌试验法。 最简便、最常用的方法：纸条或纸片试验法。
可吸收的止血剂：如凝血酶等用于止血并可被组织吸收的各种 药物制剂。
无菌检查法
（一）直接接种法。若被检品是液体，可直接接种于培养基内。 若被检品是固体粉末或冻干制剂，则需用无菌生理盐水溶解，或制成均匀悬液再作检验。若 被检品是无菌敷料，则以无菌操作打开包装，于各部位剪取1cmX3cm大小的样品，再接种到 培养基中。
(二)体外杀菌试验
用途：评价药物对微生物的致死活性
1．最小杀菌浓度的测定
是取MIC终点以上未长菌的各管培养液，分别取出并移种于无菌平板上，培养后凡 平板上无菌生长的药物最低浓度，即为该药物的MBC。对微生物广义而言，也可称之 为最小致死浓度 (MLC)。某药物能杀死微生物的最低浓度。
2．活菌计数法
在—定浓度的定量药物内，加入—定量的试验菌，作用—定时间后取样稀释，再 取—定量的此稀释液混入未凝固的琼脂培养基中，立即倾注成平板，培养后计算菌落 数。由于每个菌落是由—个菌细胞繁殖而来，则菌落数或菌落形成单位CFU)乘以稀释 倍数，再除以稀释液用量，即得该药物与试验菌的混合液中每毫升内存活的细菌数或 CFU，从而可算出该药物对细菌的致死率。
1、灭活法 ２、薄膜过滤法 ３、离子交换树脂法 4、稀释法
第三节 微生物的限度检查
微生物限度检查项目内容：
❖ 微生物限度检查的基本原则 ❖ 染菌量的检查 ✓ 细菌数 ✓ 霉菌数 ❖ 控制菌的检查 ✓ 大肠埃希氏杆菌(大肠杆菌) ✓ 金黄色葡萄球菌 ✓ 沙门氏菌 ✓ 铜绿假单胞菌(绿脓杆菌) ✓ 破伤风杆菌 ❖ 活螨的检验
各种注射剂：用于肌肉、皮下和静脉的各种针剂，包括注射用 的无菌水、输 液、注射剂 原液等。
眼用及外伤用制剂：用于眼科手术、角膜创伤及一般创伤、溃 疡和烧伤等外科用药制剂。
外科用的敷料、器材：如外 科手术用的脱脂棉、纱布、缝合线 及一次性注射器与一次性无菌手术刀片、输血袋等。
植入剂：用于包埋于人体内的药物制剂，如不溶于水的激素、 免疫药物及抗肿瘤药物等无菌的制剂。
（二）油剂的无菌检验
油剂药物与液体培养基不能混溶，故常漂浮于液体培养基表面而影响试验结果。 因此，此类药物做无菌检验时，应在培养基内加入表面活性剂(吐温—80)，使药物均 匀分布于培养基中，以利于细菌的生长和检出。有的药物如青霉素油剂等，由于粘稠 度过大，可先用灭菌植物油或灭菌液体石蜡进行一定倍数的稀释，然后取样接种到含 吐温—80的培养基中，充分摇匀使药物均匀分散在培养基中。
用放大镜或解剖镜观察。
◇漂浮法：将被检药物放入容器内，加饱和盐水至容器的２／
３处，搅匀，取液镜检，或继续加饱和食盐水至容器口，用载 玻片蘸取液面漂浮物镜检。
◇分离法：将药物放在特制分离器或附有筛网的漏斗内，离药
物６cm上放置６０～１００Ｗ的灯泡，照射１～２h.螨有避光 怕热的习性，便沿漏斗细颈向下爬，在漏斗下口处置一装有甘 油水的烧杯，收集爬出的螨，然后在显微镜下观察，根据其形 态特征、足肢游动情况判断是否为活螨。
三、抗菌试验的影响因素
在抗菌试验中应有效控制其影响因素，才能确保试验的科学性和准确性， 主要的影响因素有： ①试验菌 ②培养基 ③供试药物 ④对照试验
需要进行无菌检查的药品、敷料、灭菌器具的 范围：
(药品、敷料按《中国药典》收载的无菌检查法的规定进行， 生物制品应按照《生物制品制造及检定规程》中有关规定进行)
一、染菌量的检查
1. 目的
▪ 细菌数测定我们是为了考察每克或每毫升供试品所污染的活细菌数，来判明供试品 被细菌污染的程度。
▪ 霉菌的测定是考察每克或每毫升供试品所污染的活的霉菌数，以此来判明供试品被 真菌污染的程度。
2. 测定的方法
➢ 细菌总数的测定 营养琼脂平板培养基 +0.001%三苯四唑氯化物（TTC） ➢ 霉菌总数的测定 玫瑰红钠（马丁）培养基
（三）抗菌药物及含防腐剂药物的无菌检验
抗菌药物指药物本身为抗菌剂(如抗生素、磺胺药等)以及在药物制剂中含有部分抗菌 剂(如防腐剂)的药物。抗菌药物及含防腐剂的药物进行无菌检验时，与一般药物不同 之处在于进行无菌检验前，必须用某些方法使抗菌药物或防腐剂消除、失效，才能不 影响对被检药物是否无菌作出确认。
二、控制菌的检查
1. 口服制剂中不能检出大肠杆菌 2. 脏器口服制剂不得检出沙门氏菌和大肠杆菌 3. 一般外用药和眼科制剂不得检出金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌 4. 用创伤、溃疡、止血、深部组织的药材药粉制剂不得检出破伤风杆菌。
活螨的检验
用于口服、创伤、粘膜和腔道的药品均不得检出活螨
◇直接观察法：用肉眼直接观察被检药物上有无白点移动，再
二、药物的体内抗菌试验
体外抗菌试验有效的药物，还需要经过体内抗菌试验证明有 效后，才能推荐应用于临床。
体内抗菌试验即动物的实验治疗或保护力试验。动物实验治疗的方法，大 致是先用致病菌使动物体表或体内感染，造成感染动物模型，然后按不同剂 量、不同给药方法(如腹腔注射、皮下注射、肌肉注射或口服等)以及间隔不同 时间进行实验治疗。实验时还要设立一组动物用生理盐水代替药物进行对照 治疗。然后根据实验组与对照组的动物死亡数或内脏的含菌数，评价药物的 作用和效力。