实验环境和人体表面微生物检查

实验室环境和人体表面微生物的检查摘要：微生物多种多样，无处不在。

本次试验初次学习了如何配制培养基和灭菌，并接种了实验室环境和人体表面的微生物，经过一周的培养，用肉眼观察处在各种环境下的微生物菌落的形态特征。

证明了实验室环境和人体表面存在多种多样的微生物，让我们意识到“无菌”和灭菌的重要性，建立“无菌概念”和练习掌握一套过硬的“无菌操作技术”。

关键词：微生物环境培养菌落1前言1.1实验目的：1、证实实验室环境与人体表面存在微生物。

2、体会无菌操作的重要性。

3、观察不同类群微生物的菌落形态特征。

4、练习掌握无菌操作技术。

1.2实验原理：通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上经过培养繁殖形成肉眼可见的菌落。

2材料与方法2.1材料2.1.1溶液及试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂条、无菌水，NaOH溶液及HCl溶液2.1.2仪器和其他用具培样皿、三角瓶、试管、烧杯、接种环、酒精灯、记号笔、牛皮纸、灭菌棉签、试管架、废物缸等。

2.2方法与步骤2.2.1 牛肉膏蛋白胨培养基制备（见表1）。

步骤：称量→熔化→调PH表1：牛肉膏蛋白胨培养基实际用量（注：调PH到 7.0~7.2）试剂牛肉膏蛋白胨NaCl 琼脂水用量 1.5g 5g 2.5g 10g 500ml2.2.2 实验步骤步骤内容备注1高压灭菌：1.将三角瓶与装入5-10ml无菌水的2支试管塞入棉塞并用牛皮纸线绳包扎，将20个培养皿用牛皮纸包好；2.放入灭菌锅开始灭菌。

121℃灭菌20min2琼脂平板制备：1.将培养基冷却后，右手拿三角瓶，左手拿出棉塞，并快速将瓶口靠近火焰。

2.右手拿锥形瓶，左手拇指与食指将培养皿打开一道缝隙，右手将三角瓶的培养基倒入培养皿中，左手立即盖上培养皿盖。

3.冷到培养皿，接种时，三角瓶口和半开的培养皿均要保持在火焰旁，保证无杂菌进入。

却培养皿。

3接种：1.取棉签并用无菌水蘸湿。

2.用湿棉签分别擦拭手掌，桌面，门把手等（详见表2），并将6个培养皿置于空气中不同的时间。

一、实验名称皮肤细菌检查二、实验目的1. 了解皮肤细菌的种类及分布情况。

2. 掌握皮肤细菌检查的基本方法。

3. 提高微生物学实验技能。

三、实验原理皮肤是人体最大的器官，具有保护、分泌、排泄、调节体温等功能。

皮肤表面存在大量的微生物，包括细菌、真菌、病毒等。

其中，细菌是皮肤微生物群落中最主要的组成部分。

皮肤细菌检查是通过采集皮肤标本，对细菌进行分离、培养、鉴定等过程，以了解皮肤细菌的种类及分布情况。

四、实验材料与仪器1. 实验材料：皮肤标本、营养琼脂平板、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌剪刀、无菌镊子、酒精灯、高压蒸汽灭菌器、显微镜等。

2. 实验仪器：恒温培养箱、酒精灯、接种环、接种针、试管、烧杯、玻璃棒、培养皿等。

五、实验步骤1. 标本采集：取无菌棉签，蘸取无菌生理盐水，在患者皮肤表面轻轻涂抹，收集皮肤标本。

2. 标本制备：将采集的皮肤标本置于无菌生理盐水中，充分振荡，制成均匀的悬液。

3. 接种：取营养琼脂平板，用无菌镊子夹取接种环，蘸取悬液，在平板上均匀涂布。

4. 高压蒸汽灭菌：将接种后的平板放入高压蒸汽灭菌器中，121℃灭菌15分钟。

5. 培养与观察：将灭菌后的平板倒置放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。

6. 鉴定：观察菌落特征，进行初步鉴定。

7. 结果记录：将观察到的菌落特征及初步鉴定结果记录在实验报告单上。

六、实验结果1. 菌落特征：观察到的菌落呈圆形、白色、表面光滑、边缘整齐，部分菌落有溶血现象。

2. 初步鉴定：根据菌落特征，初步判断为金黄色葡萄球菌。

七、实验讨论1. 皮肤细菌种类繁多，本次实验主要观察金黄色葡萄球菌，说明金黄色葡萄球菌在皮肤表面较为常见。

2. 实验过程中，应注意无菌操作，避免污染。

3. 本实验采用营养琼脂平板培养，有利于观察菌落特征，为细菌鉴定提供依据。

4. 皮肤细菌检查对了解皮肤健康状况具有重要意义，有助于预防和治疗皮肤感染性疾病。

八、实验总结通过本次实验，我们掌握了皮肤细菌检查的基本方法，了解了皮肤细菌的种类及分布情况。

姓名*** 班级********* 学号************** 同组者：***********************科目微生物学实验题目实验室环境和人体表面微生物的检查组别***实验室环境和人体表面的微生物检查【实验目的】1.证明实验室和人体表面存在微生物2.观察并描述不同类群微生物的形态特征，区分细菌与霉菌3.比较不同条件下细菌的数量类型4.体会无菌操作与划线分离操作【实验原理】显微镜技术是观察到微生物的其中一种方法，这是通过放大微生物个体，使我们能够看到它们。

另一种方法是通过“放大”成菌落，使我们看到它们的存在，即通过培养的方法是肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个菌聚集在一起的肉眼可见的菌落。

高温对微生物具有致死效应，因此在微生物的转接过程中，一般在火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环，以达到灭菌的目的，但一定要保证其冷却后方可进行转接，以免烫死微生物。

细菌的培养一般用牛肉膏蛋白胨培养基，这是一种应用十分广泛的天然培养基，其中牛肉膏为微生物提供碳源，磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。

培养基配好后，用稀酸或稀碱将其pH调至所需酸碱度或自然pH。

在培养固体培养基时还要加入一定量琼脂做凝固剂。

高压蒸汽灭菌。

高压蒸汽灭菌是将灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾儿产生蒸汽。

待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时，由于蒸汽不能溢出，儿增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100°C的温度。

导致菌体蛋白质凝固变性儿达到灭菌的目的。

在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。

一般培养基用0.1MPa(相当于15Ib/in2或1.05kg/cm2)，121℃，15～30min可达到彻底灭菌的目的。

实验三环境微生物的检测一、实验目的1.了解周围环境中微生物的分布情况;2.懂得无菌操作在微生物实验中的重要性;3.了解四大类微生物的菌落特征;二、实验原理在我们周围的环境中存在着种类繁多的、数量庞大的微生物;土壤、江河湖海、尘埃、空气、各种物体的表面以及人和动物体的口腔、呼吸道、消化道等都存在着各种微生物;由于它们体积微小,人们用肉眼无法观察到它们个体的存在;但是只要稍加留意,我们就可以在发霉的面包、朽木上看到某些微生物群体;这些现象表明,自然界只要有微生物可以利用的物质和环境条件,微生物就可以在其上生长繁殖;据此,我们在实验室里就可以用培养基来培养微生物;培养基是用人工配制的、适合微生物生长繁殖和产生代谢产物用的混合养料;其中含有微生物所需要的六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、生长因子、气体和水分;此外,根据不同的微生物的要求,在配制培养基时还需用酸液或碱液调节至适宜的pH;配制好的培养基必须进行灭菌;所谓灭菌是指采用各类的物理或化学因素,使物体内外的所有微生物丧失其生长繁殖能力的措施;经过灭菌后的物体是无菌的;消毒是与灭菌完全不同的概念,它是指用较温和的物理因素杀死物体表面和内部病原微生物的一种常用的卫生措施;灭菌的方法较多,广泛使用的是高温灭菌,其中最常用的是高压蒸汽灭菌法;此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的;在cm2的蒸汽压力下,温度可达121℃;一般只要维持15~20min,就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子;微生物的接种技术是生物科学研究中的一项最基本操作技术;为了确保纯种不被杂菌污染,在整个接种过程中,必须进行严格的无菌操作;在实验过程中必须牢固树立无菌概念,经常保持实验台及周围环境的清洁,严格无菌操作,避免杂菌的污染,这是保证实验成功的必要条件;如将微生物接种到适合其生长的固体培养基表面,在适宜的温度下一般细菌37℃：霉菌等28℃,培养一段时间一般24~48h后,少量分散的菌体或孢子就可生长繁殖成肉眼可见的细胞群体,此即菌落;如平板上的菌落是由单个细胞或单个孢子生长繁殖而成的,就是一个纯种细胞群或克隆；若培养后大量菌落聚集在一起形成的为菌苔;不同种的微生物可形成大小、形态各异的菌落,根据微生物菌落形态的不同,可初步鉴别出四大类微生物：细菌、放线菌、酵母菌和霉菌;细菌的菌落呈圆形、较小而薄、透明或不透明、质地“细腻”,有的具有色泽,有的边缘不整齐,有的表面湿润、光滑,有的表面干燥有褶皱;此外,细菌常因分解含氮化合物而产生臭味;酵母菌的菌落通常比细菌菌落大,圆形、厚、不透明、色素单一,多为乳白,少数为橙或红色;酵母菌因普遍能发酵含碳有机物产醇,故菌落多伴有酒香味;防线菌菌落小而致密,或坚硬、或呈粉状;不少放线菌还产生特殊的土腥味;霉菌菌落大而疏松、或大而紧密;气生菌丝会发育形成一定形状、构造和色泽的子实器官,所以菌落表面往往有肉眼可见的构造和颜色;三、实验材料人体表和空气中的微生物;四、实验器材与试剂1.器材恒温培养箱、无菌平皿、电炉、酒精灯、火柴、无菌棉签和记号笔;2.试剂牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、酵母膏葡萄糖培养基简称YPD、高氏一号培养基和查氏培养基;五、实验操作I.融化培养基将装有无菌培养基的三角瓶置水浴中煮沸,待培养基融化后取出,当冷至50~60℃左右时,进行下一步;II、倒平板有持皿法和叠皿法,操作要点如下：1.持皿法1将无菌培养皿叠放在酒精灯左侧,以便拿取;2点燃酒精灯;3酒精灯旁,左手握三角瓶底部,倾斜三角瓶,右手旋松棉塞,用右手小指与小尾鱼际即小指边缘夹住棉塞并将其拔出切勿将棉塞放在桌上,随之将瓶口在火焰上过一下不可灼烧,以防爆裂,以杀死可能沾在瓶口的杂菌;然后将三角瓶从左手换至右手用拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部;操作中瓶口应保持在火焰2~3cm,瓶口始终向着火焰,以防空气中微生物的污染;左手拿起一套平皿,用无名指和小指托住皿底,用中指和拇指夹住皿盖,食指于皿盖上为支点,在火焰旁,打开皿盖,让三角瓶伸入,随后倒入培养基;一般倒入15ml左右培养基即可铺满整个皿底;盖上皿盖,置水平位置待凝;然后将三角瓶移至左手,瓶口在次过火并塞紧瓶盖;2. 叠皿法此法适于在超干净台上操作,基本步骤同持皿法;不同之处是左手不必持皿,而是将瓶皿叠放在酒精灯的左侧并靠近火焰;按上述方法用右手拿三角瓶,左手打开最上面的皿盖,倒入培养基,盖上皿盖后即移至水平位置待凝;再依次倒下面的平皿;操作中瓶口始终向着火焰,以防空气中微生物的污染;III、贴标签待培养基完全凝固后,在皿底帖上标签,注明检测类型,组别及日期也可用记号笔书写在皿底IV、检测方法环境中微生物种类多样,检测方法也各异,先选几种列举如下：1.空气检测实验室空气中的微生物时,只要打开无菌平板的皿盖,让其暴露在空气中一段时间5~10min然后将皿盖盖上即可;2.桌面检测实验台桌面微生物是,可用一根无菌棉签,先在无菌平板的图4-1 含菌棉签平板划线示意图左：开启皿盖法右：划线示意图一个区域内湿润和试划几下,然后用其擦抹桌面等物体表面,在以此棉签在平板的另一区域作来回划线接种如图4-1;本操作应以无菌操作要求进行,即在火焰旁用左手拿起平板,用中指无名指和小指托住皿底部,用食指和大拇指夹住皿盖并开成一缝,右手持棉签在培养基表面划线接种,无菌棉签湿润和试剂区可作为无菌对照;3.头发移去放在桌面上的无菌平板的皿盖,是头发部位位于平板的上方,并用手指拨动头发数次,在盖上皿盖即可;4.手指可用未洗的手指先在无菌平板的培养基一侧约一半的面积作划线接种,并在皿底作好标记;然后用肥皂、流水洗手,用洗净的手指于平板培养基的另一侧作同样的划线接种,盖好皿盖;待培养后比较两杂菌生长的情况;5.口腔打开无菌平板培养基的皿盖,使口对着平板培养基的表面,以咳嗽或打喷嚏的方式接种,然后盖上皿盖;V、培养将以上各种检测平板倒置于28℃培养箱中培养,至下周实验时观察并计数各平板上的菌落数;VI、观察注意观察不同类型菌落的大小、外形和颜色等特征,将观察结果记录在实验报告上;VII、清洗观察记录完毕后,将含菌平板放在沸水中煮30min以上,杀死培养基表面生长的各种微生物,然后清洗并晾干培养皿;六、思考题1.通过本实验后,谈谈你对微生物的分布以及数量的认识;2.本实验中那些步骤属无菌操作为什么3.如何描述菌落的形态特征。

实验1实验室环境和人体表面的微生物检查一、实验目的1、证实实验室环境和人体表面存在微生物。

2、观察不同类群微生物的菌落形态特征。

3、比较不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。

4、体会无菌操作的重要性。

二、基本原理通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个聚集在一起的肉眼可见的菌落。

平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37℃温度下培养，1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。

每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点。

因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。

三、实验器材1、培养基牛肉膏蛋白胨培养基2、溶液和试剂无菌水3、仪器和其他用品平板，试管，灭菌棉签（装在试管内），试管架，漏斗，止水夹，煤气灯或酒精灯，记号笔，接种环，标签纸，废液缸等。

四、实验操作1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备：（1）称量：准确称取牛肉膏1.8克、蛋白胨6.0克、Nacl3.0克放入烧杯中。

（2）熔化：在上述烧杯中加入少于所需的水量（所需水量为600ml），用玻璃棒搅匀，补充水到所需的总体积600ml。

（3）调pH：用1mol/LNaOH和1mol/LHCl进行调节，直至溶液pH达到7.0~7.2。

（4）分装：将其中300ml溶液装入500ml三角瓶中，向三角瓶中加入6.0克琼脂，向烧杯剩余液体中加入6.0克琼脂，在石棉网上加热烧杯，使琼脂溶解，将烧杯中溶液分装到10支试管中，每支试管中加入体积为试管总体积的1/5左右。

（5）加塞：在三角瓶口上塞上棉塞，防止外界微生物进入造成污染。

（6）包扎：加塞后，在棉塞外包一层牛皮纸，将全部试管用麻绳捆好（还有一支装有无菌水的试管），同样的方法把三角瓶包好，扎好。

用记号笔注明培养及名称、组别、配制日期。

（7）灭菌：将上述培养基以0.1MPa，121℃，90min高压蒸汽灭菌。

微生物学实验实验一实验室环境和人体表面微生物的检查实验二油镜的使用和细菌的简单染色实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色实验四微生物大小的测定和酵母菌死活细胞的鉴定实验五培养基的配制与消毒灭菌实验六土壤微生物的分离纯化与鉴定实验七食品微生物检验 (一)细菌总数测定实验八食品微生物检验（二）大肠菌群数测定实验九大肠杆菌生长曲线的测定实验十IMViC与硫化氢试验实验一、实验室环境和人体表微生物的检查1.一、目的：1.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量与类型；2.观察不同类型微生物的菌落形态特征；3.体会无菌操作的重要性。

2.二、原理：1.微生物无孔不入，无处不在。

2.微生物→营养琼脂平板→菌落或菌苔。

（37 ℃倒置培养24 h）3.描述：菌落的大小、表面光滑或粗糙、干燥或湿润、隆起或扁平、边缘整齐或锯齿状、菌落透明或不透明、颜色以及质地均匀与否、疏松或紧密等，以便检查环境中细菌的类?秃褪 俊?4.细胞、放线菌、酵母菌和霉菌四大类型都可能存在，本实验重点观察细菌。

3.三、器材：1.培养基：营养琼脂平板（牛肉膏蛋白胨培养基）2.器具：无菌水、灭菌棉签、接种环（针）、酒精灯等。

4.四、步骤：1.标记。

组号/姓名、日期、样品来源。

2.接种。

3.倒置培养，37℃ 24 h4.观察结果。

5.五、结果6.样品来源菌落数菌落类型特征描写本实验室（流动空气30 min）1 大小形态干湿扁/隆透明度颜色边缘23接种室（不流动空气30min）洗手前洗手后头发屑指甲垢实验台门把1.六、思考题：1.人多的实验室与少人走动的实验室比较，平板上的菌落数和菌落类型有区别吗？试解释。

2.通过本实验，在防止培养物的污染和防止细菌的扩散方面，你有何体会？3.4.实验二油镜的使用和细菌的简单染色一、实验目的1、学习和掌握油镜的原理和使用技术。

2、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。

二、实验原理1．油镜使用原理：光镜的几种物镜中以油镜的放大倍数最大，尤其适用于微生物学研究。