DNA聚合酶 引物
DNA的变性和复性
相关知识的温习
加热或强酸、碱性作 变 性 用可以使 DNA双螺旋的氢 键断裂,双链解离,形成单链 DNA,这称为 DNA的变性。 解除变性的条件后, 变 性的单链可以重新结合起
↓化学偶联(化学激活形成肽键)
-NH-CH(Rn)CO-NH-CH(Rn+1)CO-NH-CH(Rn+2)CO肽键 肽键
(四)非天然型共价缔合
利用双功能试剂可以将不同的蛋白质连在一起。
常用的方法是将双功能的接头与两个蛋白质分子
中的赖氨酸残基侧链相连接。 另外通过主链肟键也可以产生尾-尾或头-尾相连 的蛋白质嵌合体。如:将一个特异性N末端醛衍生物 与一个C末端活化的蛋白质亲核物通过主链肟键相连
法称为氨基修饰。
1.多位点取代修饰 (1)常规的氨基保护(可取代α-氨基和ε-氨基,无选 2.单一的或限制性修饰 择性): 取代基(物)与氨基共价结合将氨基暂时屏蔽, 以防止其他反应试剂对氨基的作用。
Boc 是典型的酸不稳定取代基, 可用无水三氟乙酸去除。 常用的两种取代基 Msc 是典型的碱不稳定取代基, 可用强碱去除。
+ NH3(或Gln、Asn) →
蛋白—NH—CH(Rn)CO—NH2
尤其是当Gln、Asn为反应物时,可产生特异性的肽酰胺化产物,且产
率非常高。这一方法很有希望代替天然酰胺化系统而用于大规模生产。
(三)巯基的化学修饰
通过蛋白质分子中半胱氨酸巯基的氧化与还原,可
以将少数的取代基团引入到蛋白质分子的确定位臵。
③ PCR法的定点突变
通过改变引物中的某些碱基而改变基因序列,达到 有目的改造蛋白质结构、研究蛋白质的结构和功能之间
关系的目的。