中山大学实验动物中心细胞系

◆学术前沿◆中山大学生命科学学院赖德华副教授团队发现真核生物中心体的关键结构蛋白中心体（基体）的自身结构稳定和其维系的遗传信息稳定均是真核细胞生存发育的重要基础。

在细胞增殖中，中心体的严谨复制和分离在时间和空间上精确受控。

这个过程需要中心粒连接纤维（Linker ）负责连接同一对中心体中的母子中心粒。

Linker 是解释哺乳动物细胞中心体数量控制和遗传模式的关键结构，它的适时存在和解体对细胞周期的正常运作至关重要。

此结构自1981年的电镜研究中发现以来，其组成蛋白一直未被鉴定。

生命科学学院赖德华副教授团队与牛津大学英国皇家学会会员Keith Gull 教授以及英国牛津布鲁克斯大学Flavia Moreira-Leite 研究员合作，另辟途径以布氏锥虫为材料，历时数年鉴定发现锥虫BBLP 是Linker 的组成蛋白。

合作团队通过荧光蛋白融合原位标记技术，发现BBLP 定位于基体和原基体之间。

后续的RNA 干扰等实验发现若BBLP 缺失则导致原基体定位和分配异常，乃至后续基体成熟异常直至细胞死亡。

这些结果证实BBLP 起着连接基体和原基体的Linker 功能，确认其为真核生物的首个Linker 蛋白，填补了真核生物中心体Linker 蛋白未知的空白。

该研究成果揭示了锥虫的基体自身装配和遗传的关键分子机制，促进了真核生物中心体起源与演化的研究。

题为“A specific basal body linker protein provides the connection function for basal body inheritance in trypanosomes ”的研究成果已在美国科学院院刊《Proc Natl Acad Sci USA 》发表。

该研究发现了非洲锥虫病病原体-布氏锥虫（Trypanosoma brucei ）的一种中心体蛋白，发现其起着连接母中心粒（基体）和子中心粒（原基体）的关键功能（图1），正是相关领域生物学家苦苦寻找了近40年的Linker 蛋白，因此被命名为基体Linker 蛋白（BBLP ）。

中山大学实验动物中心细胞库细胞目录一、人类肿瘤细胞株
（三）血液系统
（四）神经系统
（六）其它
二、人类正常细胞株
三、动物肿瘤细胞株
NIT-1
4T1小鼠胰岛素瘤β细胞（NOD/Lt转基因小鼠，SV40巨T抗原）小鼠乳腺癌细胞
四、动物正常细胞株
BRL大鼠正常肝细胞（Buffalo）
RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞（BALB/c小鼠）
NIH/3T3NIH小鼠成纤维细胞(NIH/swiss)
L929小鼠成纤维细胞(C3H/An)
BALB/C-3T3BALB/C小鼠成纤维细胞
MEF早代小鼠胚胎成纤维细胞(KM鼠)
c2c12小鼠成肌细胞系
PA317逆转录病毒包装用的鼠胚胎成纤维细胞
V79中国仓鼠肺细胞
CHO中国仓鼠卵巢细胞
CHO-AA8转入Tet-off调控，含EGFP基因的CHO细胞
Cos-7SV40转化的非洲绿猴肾细胞
Vero非洲绿猴肾细胞
Vero-E6非洲绿猴肾细胞
MA-104恒河猴肾细胞（中国预防医学科学院病毒研究所惠赠）MDCK狗肾细胞
VX2兔的肝细胞
NRK大鼠肾小管上皮细胞
HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞EC
五、干细胞类
D3129小鼠ES细胞
E14129小鼠ES细胞
B/c-ES BALB/c小鼠ES细胞
MSCS（曹）猴的骨髓间充质细胞
SDBMSC SD大鼠骨髓间充质细胞。

前言细胞生物学是高校生命科学的主干课程之一，是一门实验性很强的学科。

生命科学的许多重大发现与细胞生物学实验技术的不断创新、发展是分不开的。

因此，学习和掌握细胞生物学最基本的技术和最新的实验方法，对于从事生命科学研究工作者来说是非常重要和完全必要的。

目前，适用于高等院校不同层次使用的细胞生物学实验教材不多。

由于细胞生物学已成为重要的前沿生物学科，其发展速度之快可谓日新月异，突飞猛进，异常迅速。

各种研究新方法、新技术如雨后春笋层出不穷。

各学科之间的相互渗透，相互依存紧密相联。

如细胞生物学与分子生物学、分子遗传学等实验技术之间就具有很强的依存性和相融性。

细胞生物学实验技术的巨大变化，将推动细胞生物学向着更深的层次发展。

我们为了紧跟学科发展的趋势，把握学科前进的方向，适应学科发展的要求，将多年来在教学和科研实践中积累及编写的细胞生物学技术编写成《细胞生物学实验》一书。

旨在让学生能掌握细胞生物学研究的基本操作技能和新的实验技术，从细胞生物学的角度分析生物学中的问题，为独立进行研究打下基础。

本书是王金发教授主编的《细胞生物学》的配套教材之一。

全书共有64个实验，内容较丰富，知识面广，既包括常规的经典实验，又新增了不少与现代细胞生物学和分子生物学相关的新技术，如电穿孔和电融合技术、反转录病毒载体介导的基因转导技术、胚胎干细胞的培养和体外分化技术、流式细胞技术、细胞显微注射、共聚焦显微技术、细胞凋亡检测技术等。

这些实验内容新颖、技术先进，可操作性强，对培养学生的动手能力、分析问题和解决问题的能力很有帮助。

本书第1～4章由戚康标编写；第5～7章由何炎明编写；第8章由何炎明、张利红编写；第9、12章及附录由刘兵编写，并对全书进行文字编辑和校对；第10、11章由张利红、张为民编写；冯冬茹参加了部分实验的初稿编写工作。

本书在编写过程中得到王金发教授的亲自指导和中山大学生命科学院的大力支持，在此表示感谢。

由于编者的水平有限，难免出现错误，恳请广大读者给予批评指正。

鱼类红细胞的渗透脆性与鱼类白细胞形态和分类计数一、实验目的1.学习鱼类采血取样的方法并探究红细胞的渗透脆性2.学习血液涂片的制作和染色方法3.了解鱼类血液中的白细胞特征二、实验原理1.血液由血浆和血细胞组成，血细胞中含量最高的是红细胞。

红细胞的渗透压与血压相等，使进出红细胞的水分平衡。

当血浆渗透压降低时，过量水分进入细胞，细胞膨胀成球形，甚至破裂，进而导致血红蛋白逸出，该过程称之为溶血；反之，若血浆的渗透压升高，水分析出过多，致使红细胞皱缩，沉积于试管底部。

2.将正常红细胞悬浮于不同浓度的NaCl溶液中：在等渗溶液中的红细胞保持正常大小和双凹圆碟形；在渗透压递减的一系列溶液中，红细胞逐步胀大并双侧凸起，当体积增加30% 时成为球形，体积增加45%～60% 则细胞膜损伤而发生溶血，仅留下一个双凹圆碟形细胞膜空壳。

红细胞置于低渗溶液中而引起此特性称为渗透性脆性。

3.白细胞是位于血液中的一类无色、球形的有核血细胞。

鱼类白细胞的数量因为鱼种属不同而不同，其大小与红细胞相差不大。

作为免疫系统的重要组成，白细胞比例的任何异常变化都可能意味着疾病的发生。

4.鱼类白细胞可以分为颗粒白细胞（中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞）和无颗粒白细胞（单核细胞、淋巴细胞）。

其分类计数可以通过在显微镜下观察并统计50-100个白细胞样品中不同白细胞数量，来确定不同白细胞比例。

三、实验材料、仪器、试剂与方法1.实验材料：鲈鱼2.实验仪器：显微镜、一次性采血注射器、针头、载玻片、试管、滴管、移液枪3.实验试剂：瑞氏染液（A、B液）、171 mM NaCl溶液、草酸盐抗凝剂、蒸馏水4.实验方法：将从鲈鱼身上取得的血液滴入配置的不同浓度的NaCl溶液，观察得到红细胞的渗透脆性；将血液滴到载玻片上涂片后染色，洗净后显微镜下观察白细胞形态特征图1 Wright染色条件下不同血细胞形态模式图（包含中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞）四、实验步骤1.配置不同浓度的NaCl溶液：将10支完全相同的试管分别编号1～10，按照下图向不同试管中加入不同体积的171 mM NaCl溶液和蒸馏水。

关于清理离职人员系统账号的通知
各课题组：
因空间和资源有限，目前实验动物中心（以下简称“中心”）的设施只对校内在职人员开放。

近年来，中心大小鼠饲养笼位十分紧张，年需求增量在5000笼以上，即使中心不断增加设施建设也无法满足日益增长的需要。

鉴于此，中心拟近期开展离职人员的账号清理工作。

现将相关事宜通知如下：
1.请已离职的原中山大学教职员工，于8月2日之前结束实验，停止使用share系统账号，并清理实验动物离场。

如有特殊情况，请提交说明，由上级管理部门处理，并执行校外收费标准。

2.在中山大学系统内工作单位调整的教职工，请于8月2日之前在中心管理系统完成个人工作单位更新。

请各课题组配合中心的工作安排，为校内教学和科研提供更多的设施资源，提高资源使用效率，减少课题组排队等候的时间。

中山大学实验动物中心
2021年6月25日。

CD133和CD44在结直肠癌细胞中的表达及其与患者5年生存率的相关性分析陈仕才;宋新明;陈志辉;李明哲;何裕隆;詹文华【摘要】目的:探讨不同CD133/CD44细胞亚群的成瘤能力及CD133、CD44的表达水平对根治性结直肠癌患者术后生存率的影响,明确CD133和CD44作为结直肠癌肿瘤干细胞表面标志物的意义.方法:利用流式细胞术分选出SW480细胞系中CD133和CD44标记的不同细胞亚群,比较其在裸鼠皮下成瘤情况;并利用免疫组化的方法观察CD133和CD44在90例结直肠癌患者石蜡切片标本的表达情况,对CD133、CD44与患者临床病理资料及生存率进行分析.结果:CD133+CD44+细胞群成瘤能力明显优于其它各组.CD133和CD44均在细胞膜上表达,两者均与患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、肝转移、肿瘤分化程度及UICC分期无关(P＞0.05).Kaplan-Meier生存分析法显示,CD133高表达组5年生存率为45.2%,CD133低表达组5年生存率为83.8%,两者有明显差异(P ＜0.01);而CD44高表达组5年生存率(75.6%)与低表达组(70.1%)无明显差异(P＞0.05);其中CD133/CD44同时高表达者5年生存率明显较差(P＜0.01).Cox风险回归模型分析结果表明,CD133、肝转移、分化程度及淋巴结转移是影响结直肠癌患者预后的几个独立危险因素(P＜0.05).结论:CD133可作为结直肠癌肿瘤干细胞的良好标志物.CD133是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素,其表达水平越高,预后越差;尽管CD44与结直肠癌患者预后无明显相关性,但联合检测CD133/CD44却能更好地判断患者的预后情况.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2011(027)005【总页数】7页(P883-889)【关键词】CD133;CD44;结直肠肿瘤;预后【作者】陈仕才;宋新明;陈志辉;李明哲;何裕隆;詹文华【作者单位】中山大学附属第一医院胃肠胰外科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院胃肠胰外科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院胃肠胰外科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院胃肠胰外科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院胃肠胰外科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院胃肠胰外科,广东,广州,510080【正文语种】中文【中图分类】R735.3结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是最常见的恶性肿瘤之一。

动物细胞培养常用技术动物细胞培养中山大学实验动物中心前言1885年Roux最早尝试使组织离体培养，材料是鸡胚神经板，采用生理盐水为培养液，并首次采用组织培养这个术语。

1907年Harrison 和1912年Carrel开始把组织培养作为一种方法，用于研究离体动物细胞的培养。

由于组织培养在医学研究中的应用，如抗病毒疫苗的生产等，现已经逐渐发展成为一门精细技术。

许多细胞株、细胞系的培育成功，尤其是以人的肿瘤组织为材料建立的各种细胞系，如Hela细胞系（Gey，1952），可用来进行一系列研究，更加促进了组织培养技术的发展。

组织培养中热门的研究领域1)细胞内部的活动，如DNA的复制和转录、蛋白质合成、能量代谢；2)细胞内部的流动，如RNA从细胞核向细胞质方向运转，激素受体复合物的易位等；3)生态学，如营养、感染、病毒或化学诱变、药物作用；4)细胞与细胞之间的相互作用，如胚胎诱导、细胞群体的动力学等。

组织培养的分类及基本概念分类:1.组织培养(Tissue Culture) 指的是从体内取出组织，在模拟体内生理环境，无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。

2.细胞培养(Cell Culture) 培养物是单个细胞和细胞群。

3.器官培养（Organ Culture）培养的是器官的原基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法。

组织培养的细胞生物学特点:1.体内外细胞的差异：当人工条件和体内实际情况不完全相同时，细胞在体外培养后，一旦失去神经体液调节和细胞间相互影响，生活在缺乏动态平衡的环境中，发生变化则是必然。

细胞最多见的表现是：返祖（Atavism）现象，即失去原有组织结构和细胞形态、分化减弱或不显、细胞趋单一化、不死性、恶性状。

2.细胞增殖和分化：是细胞生命进化中所获得的基本属性，增殖使细胞数量增多；分化使机体结构和功能多样化，最后演变成完整的有机体。

第一章：1. 根据细胞生物学研究的内容与你所掌握的生命科学知识,客观地、恰当地估价细胞生物学在生命科学中所处的地位以及它与其它生物科学的关系。

2. 从细胞学发展简史，你如何认识细胞学说的重要意义?3. 试简明扼要地分析细胞生物学学科形成的客观条件以及它今后发展的主要趋势。

4. 当前细胞生物学研究的热点课题中你最感兴趣的是哪些？为什么？第二章：1. 简述各种实验方法的基本原理。

2. 简述各种实验方法在研究工作中的应用。

第三章：生物膜的基本组成和结构特征是什么? 这些特征与膜的功能有哪些相?从生物膜结构模型的演化谈谈人们对生物膜结构的认识过程?细胞表面有哪几种常见的特化结构?跨膜运输的主要方式有哪些？比较主动运输与被动运输的特点及其生物学意义。

动物细胞间有哪些连接方式?胞间连丝的基本结构与作用是什么？胞外基质的组成、分子结构及主要生物学功能是什么？第四章：1.比较粗面内质网和光面内质网的形态结构与功能。

2. 细胞内蛋白质合成部位及其去向如何?3. 粗面内质网上合成哪几类蛋白质，它们在内质网上合成的生物学意义是什么?4. 指导分泌性蛋白在粗面内质网上合成需要哪些主要结构或因子?它们如何协同作用完成肽链在内质网上的合成。

5. 结合高尔基体的结构特征，谈谈它是怎样行使其生理功能的。

6.溶酶体是怎样发生的? 它有哪些基本功能?7.过氧化物酶体与溶酶体有哪些区别? 怎样理解过氧化物酶体是异质性的细胞器?8.图解说明细胞内膜系统的各种细胞器在结构与功能上的联系。

9.何谓蛋白质的分选？已知膜泡运输有哪几种类型？第五章：1．准确描述线粒体的结构2．线粒体中电子传递链的主要成员有哪些？3．解释ATP合成的化学渗透学说4．何谓线粒体的半自主性5．准确描述叶绿体的结构6．光系统Ⅰ和光系统Ⅱ在光合作用中的作用7．叶绿体的半自主性第六章：1. 通过细胞骨架一章的学习，你对生命体的自组装原则有何认识?2. 除支持和运动外，细胞骨架还有什么功能? 怎样理解“骨架”的概念?3. 试述微管在体外组装的条件以及微管的主要功能。

大鼠异基因骨髓移植模型的实验研究赵永;孙巧璋;丁春华;聂如琼【摘要】目的本研究拟通过全身照射,采取Y染色体标记,通过全骨髓细胞移植,建立SD大鼠性别错配异基因骨髓移植模型,并探讨建立该模型的可行性及其意义,为干细胞示踪等研究提供实验参照.方法以雄性SD大鼠为供鼠,雌性SD大鼠为受鼠,受体大鼠随机分成移植组和对照组,每组各10只.移植当天移植组和对照组大鼠均接受8.0Gy的全身照射,于照射后6h,移植组经鼠尾静脉输入2×108个/kg的雄性供鼠全骨髓细胞;对照组组注射等量的RPMI1640培养液.观察两组大鼠存活情况,检测移植组大鼠生存期外周白细胞计数,采用PCR技术检测SRY基因.结果采用8.0 Gy的全身照射为预处理方案,对照组大鼠2周内全部死亡,而移植组大鼠30d 的存活率为70％.外周血细胞计数提示全骨髓移植后造血功能恢复,且检测有雄性供鼠Y染色体出现,提示SD大鼠性别错配异基因骨髓移植成功.结论应用8.0Gy的全身照射加供体骨髓移植可成功建立Y染色体标记的同种异体大鼠嵌合体模型.【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2014(036)009【总页数】3页(P1040-1042)【关键词】骨髓移植;全身照射;造血重建【作者】赵永;孙巧璋;丁春华;聂如琼【作者单位】广东省中医院,广州510000;广东省中医院,广州510000;广东省中医院,广州510000;中山大学孙逸仙纪念医院,广州510000【正文语种】中文【中图分类】R392.4为了监测骨髓干细胞在体内的存活、迁移、增殖及分化，需要有效的标记方法对这些细胞进行示踪。

Y染色体标记的最大优点为操作简单。

本研究拟通过全身照射，采用Y染色体标记，探讨建立SD大鼠性别错配异基因骨髓移植模型的可能性及其意义，为进一步研究提供实验依据。

1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物清洁级雌性SD大鼠(20只，体重250～280g)为受鼠，清洁级雄性SD大鼠(24只，体重120～150g)为供鼠，提供全骨髓细胞，大鼠均由中山大学实验动物中心提供。

第32卷第2期2011年3月中山大学学报（医学科学版）JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY （MEDICAL SCIENCES ）Vol．32No．2Mar．2011收稿日期：2010－12－24基金项目：广东省自然科学基金博士启动（9451008901002230）作者简介：王紫菲，医学硕士，研究方向：小鼠胚胎干细胞的神经分化，E-mail ：wangzifeifei＠sohu．com ；*通信作者：项鹏，教授，博士生导师，E-mail ：xiangp＠mail．sysu．edu．cnNestin-GFP 小鼠胚胎干细胞的建系及体外神经分化王紫菲1，赖文玉2，柯琼1，李付贵1，王涛1，张秀明1，李伟强1，项鹏1*（1．中山大学干细胞与组织工程研究中心，广东广州510080；2．中山大学附属第二医院儿科，广东广州510120）摘要：【目的】建立Nestin-GFP 转基因小鼠的胚胎干细胞（mESC ）系，并观察其示踪ES 细胞系的神经分化过程。

【方法】将E3．5的Nestin-GFP 小鼠囊胚接种于小鼠胚胎成纤维细胞上（MEF 经γ射线照射失去增殖活性）。

4～6d 后将自囊胚长出的内细胞团（ICM ）继续培养并传代扩增，检测所得细胞Oct-4、SSEA-1和AKP 等胚胎干细胞特异性标志物的表达及在体内外向三胚层分化的能力；之后，诱导细胞向神经元样细胞及神经胶质样细胞分化，利用免疫荧光检测其标志性抗原。

【结果】免疫组化可见Nestin-GFP 小鼠胚胎干细胞表达未分化细胞特异性标志Oct-4、SSEA-1，AKP 染色呈强阳性，并具有向体内外三胚层分化潜能；在体外诱导其向神经分化，第6d 可见到明显的绿色荧光，并与免疫组化Nestin 表达部位基本吻合。

第12d 及第16d 分别可见神经元及神经胶质细胞特异性标志物表达，而此时Nestin 的表达较前明显下降。

【结论】成功建立了Nestin-GFP 小鼠胚胎干细胞系，该细胞具有自我更新的特性及多向分化潜能，并可用于在体外更直观的监测神经分化的阶段性变化并由此进行调控。

第42卷第3期2021年5月Vol.42No.3May2021中山大学学报（医学科学版）JOURNAL OF SUN YAT⁃SEN UNIVERSITY（MEDICAL SCIENCES）补体系统C1q/C3介导的胶质细胞激活在小鼠抑郁样行为中的作用王睿，王清波，谢婷，郭开华（中山大学中山医学院人体解剖学教研室，广东广州510080）摘要：【目的】探讨小鼠的杏仁核中C1q/C3补体系统在诱导抑郁样行为过程中的作用途径。

【方法】本实验分3部分：①采用慢性束缚压力方法建立小鼠抑郁模型，将12只8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照（WT）组和抑郁模型（CRS）组，各6只，抑郁模型组造模2周。

行为学测试系统悬尾实验（TST）、强迫游泳实验（FST）测试小鼠抑郁状态，采用免疫荧光染色法检测小鼠杏仁核中突触素（Syn）和突触后致密物（PSD95）变化情况，小胶质细胞（Iba-1）和星形胶质细胞（GFAP）细胞荧光强度，C1q、C3含量。

②6只8周CX3CR1-GFP雄性鼠，随机分为GFP组以及GFP模型（GFP+CRS）组，各3只，采用免疫荧光染色法观察小胶质细胞及星形胶质细胞相互作用情况。

③12只8周龄雄性C57BL/6和12只C1q-/-小鼠随机分为对照（WT）组，抑郁模型（CRS）组，C1q敲除（C1q-/-）组，C1q敲除模型（C1q-/-+CRS）组，各6只，模型组组造模2周，行为学TST、FST检测4组小鼠抑郁状态，采用免疫荧光染色法检测四组小鼠杏仁核部位突触Syn和PSD95变化。

【结果】行为学分析结果显示：与WT组比较CRS组在TST和FST中不动时间明显升高（P<0.0001）；免疫荧光法测定，与WT组比较CRS组杏仁核内突触Syn、PSD95含量明显降低（P< 0.0001；P=0.0038）；与WT组比较CRS组杏仁核内Iba-1和GFAP明显激活（P=0.0004，P=0.003）且与WT组比较CRS组杏仁核内小胶质细胞与星形胶质细胞相互作用明显；与WT组比较CRS组杏仁核内C1q与C3产生明显增多（P=0.0002，P=0.0119）；行为学分析，WT、CRS、C1q-/-、C1q-/-+CRS4组综合比较，在TST中，与CRS组比较，WT组不动时间明显升高，C1q-/-+CRS组不动时间也明显增高（均P<0.001）；在FST中，与CRS组比较，WT组不动时间明显升高，C1q-/-+CRS组不动时间也明显增高（均P<0.001）；与CRS组比较WT组与C1q-/-+CRS组杏仁核内突触Syn明显增多（P<0.001；P<0.05），PSD95明显增多（P<0.05）。

㊀基金项目:广东省自然科学基金面上项目(Ｎｏ.２０２１Ａ１５１５０１０５８０)作者简介:许嘉越ꎬ女ꎬ硕士生ꎬ研究方向:药理与毒理学ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｘｕｊｙ５７＠ｍａｉｌ２.ｓｙｓｕ.ｅｄｕ.ｃｎ通信作者:金晶ꎬ女ꎬ博士ꎬ副教授ꎬ研究方向:药理与毒理学ꎬＴｅｌ:０２０－３９９４３０３４ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｊｉｎｊｉｎｇ＠ｍａｉｌ.ｓｙｓｕ.ｅｄｕ.ｃｎ基于网络药理学探讨雷公藤红素改善奥沙利铂引起的外周神经病变的作用机制许嘉越ꎬ张庚弋ꎬ江诗琴ꎬ秦之焱ꎬ黄民ꎬ金晶(中山大学药学院ꎬ广东广州５１０００６)摘要:目的㊀结合实验与网络药理学探讨雷公藤红素改善奥沙利铂引起的外周神经病变(ＯＩＰＮ)的作用与机制ꎮ方法㊀对大鼠进行奥沙利铂与雷公藤红素的合用给药考察雷公藤红素对ＯＩＰＮ的改善作用ꎮ使用中药系统药理学数据库与分析平台(ＴＣＭＳＰ)㊁ＳｗｉｓｓＴａｒｇｅｔＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎ和ＰｈａｒｍＭａｐｐｅｒ数据库收集雷公藤红素靶点ꎬ并从ＧｅｎｅＣａｒｄｓ和ＯＭＩＭ数据库中获取奥沙利铂引起的外周神经病变的靶点ꎬ取两者交集ꎬ利用Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ软件构建 雷公藤红素－靶点－ＯＩＰＮ 网络图ꎻ采用ＳＴＲＩＮＧ数据库构建雷公藤红素改善ＯＩＰＮ靶点的蛋白－蛋白相互作用(ＰＰＩ)网络图ꎻ应用ＤＡＶＩＤ数据库对交集靶点进行ＧＯ功能富集分析和ＫＥＧＧ通路富集分析ꎬ以及运用ＭＯＥ软件对核心靶点进行分子对接验证ꎮ结果㊀雷公藤红素能明显改善奥沙利铂引起的大鼠机械和冷刺激痛敏症状ꎬ减轻背根神经节神经元和坐骨神经的病理损伤ꎬ且在体外水平上不影响奥沙利铂对结肠癌细胞的杀伤作用ꎮ网络药理学分析获得雷公藤红素靶点３０９个ꎬＯＩＰＮ疾病靶点１３１８个ꎬ两者交集靶点８０个ꎻＰＰＩ相互作用网络分析得到ＨＳＰ９０ＡＡ１㊁ＣＡＳＰ３㊁ＰＴＧＳ２等核心靶点ꎻＧＯ富集分析得到１９３个条目ꎬＫＥＧＧ结果表明ꎬ雷公藤红素可能作用于白细胞介素－１７(ＩＬ－１７)信号通路和ＰＩ３Ｋ/Ａｋｔ信号通路起到对ＯＩＰＮ的改善作用ꎻ分子对接结果进一步表明ꎬ雷公藤红素与核心靶点ＣＡＳＰ３㊁ＰＴＧＳ２的结合能力良好ꎮ结论㊀雷公藤红素具有改善奥沙利铂引起的外周神经病变的作用ꎬ网络药理学揭示该机制可能涉及多靶点㊁多通路的调节ꎮ关键词:雷公藤红素ꎻ奥沙利铂ꎻ外周神经病变ꎻ网络药理学ꎻ分子对接ꎻ作用机制中图分类号:Ｒ２８５㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２４)０４－０３１９－０９ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２４.０４.００２Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃｅｌａｓｔｒｏｌａｇａｉｎｓｔｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙｏｎｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙＸＵＪｉａｙｕｅꎬＺＨＡＮＧＧｅｎｇｙｉꎬＪＩＡＮＧＳｈｉｑｉｎꎬＱＩＮＺｈｉｙａｎꎬＨＵＡＮＧＭｉｎꎬＪＩＮＪｉｎｇ(ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＳｕｎＹａｔ－ｓｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＧｕａｎｇｚｈｏｕ５１０００６ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｃｅｌａｓｔｒｏｌｏｎｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐ￣ａｔｈｙ(ＯＩＰＮ)ｂｙｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓａｎｄｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎａｎｄｃｅｌａｓｔｒｏｌｗｅｒｅａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄｔｏｒａｔｓａｎｄｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｃｅｌａｓｔｒｏｌｏｎＯＩＰＮ.ＴｈｅｔａｒｇｅｔｓｏｆｃｅｌａｓｔｒｏｌｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｕｓｉｎｇＴＣＭＳＰꎬＳｗｉｓ￣ｓＴａｒｇｅｔＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎａｎｄＰｈａｒｍＭａｐｐｅｒｄａｔａｂａｓｅｓꎬａｎｄｔｈｅｔａｒｇｅｔｓｏｆｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍＧｅｎｅＣａｒｄｓａｎｄＯＭＩＭｄａｔａｂａｓｅｓ.Ｂｏｔｈｏｆｔｈｅｉｎｔｅｒｓｅｃｔｅｄｔａｒｇｅｔｓｗｅｒｅｔａｋｅｎａｎｄｔｈｅｎｅｔｗｏｒｋｄｉａｇｒａｍｏｆｃｅｌａｓｔｒｏｌ－ｔａｒｇｅｔｓ－ＯＩＰＮｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｂｙＣｙｔｏｓｃａｐｅｓｏｆｔｗａｒｅ.Ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ(ＰＰＩ)ｎｅｔｗｏｒｋｄｉａｇｒａｍｏｆｔｈｅｔａｒｇｅｔｓｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｕｓｉｎｇＳＴＲＩＮＧｄａｔａｂａｓｅ.ＤＡＶＩＤｄａｔａｂａｓｅｗａｓｕｓｅｄｆｏｒＧＯｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓａｎｄＫＥＧＧｐａｔｈｗａｙｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｏｓｅｉｎｔｅｒｓｅｃｔｉｏｎｔａｒｇｅｔｓꎬａｎｄＭＯＥｓｏｆｔｗａｒｅｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｏｃｋｉｎｇｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｏｒｅｔａｒ￣ｇｅｔｓ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｃｅｌａｓｔｒｏｌｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｃａｌａｎｄｃｏｌｄｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｐａｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｓｙｍｐｔｏｍｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎｉｎｒａｔｓꎬｒｅｄｕｃｅｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｊｕｒｙｏｆｄｏｒｓａｌｒｏｏｔｇａｎｇｌｉｏｎｎｅｕｒｏｎｓａｎｄｓｃｉａｔｉｃｎｅｒｖｅꎬａｎｄｄｏｎｏｈａｒｍｏｎｔｈｅｋｉｌｌｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎｏｎｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏ.Ｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｂｔａｉｎｅｄ３０９ｔａｒｇｅｔｓｏｆｃｅｌａｓｔｒｏｌꎬ１３１８ｔａｒｇｅｔｓｏｆＯＩＰＮａｎｄ８０ｔａｒｇｅｔｓｏｆｔｈｅｉｒｉｎｔｅｒｓｅｃｔｉｏｎ.ＴｈｅｃｏｒｅｔａｒｇｅｔｓｓｕｃｈａｓＨＳＰ９０ＡＡ１ꎬＣＡＳＰ３ａｎｄＰＴＧＳ２ｗｅｒｅｏｂ￣ｔａｉｎｅｄｂｙＰＰＩｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｎｅｔｗｏｒｋａｎａｌｙｓｉｓ.ＧＯｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓｏｂｔａｉｎｅｄ１９３ｉｔｅｍｓａｎｄＫＥＧＧｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｃｅｌａｓ￣ｔｒｏｌｍｉｇｈｔａｌｌｅｖｉａｔｅＯＩＰＮｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＩＬ－１７ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙａｎｄＰＩ３Ｋ/Ａｋｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ.Ｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｏｃｋｉｎｇｒｅ￣ｓｕｌｔｓｆｕｒｔｈｅｒｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｃｅｌａｓｔｒｏｌｈａｄｇｏｏｄｂｉｎｄｉｎｇａｂｉｌｉｔｙｗｉｔｈｃｏｒｅｔａｒｇｅｔｓＣＡＳＰ３ａｎｄＰＴＧＳ２.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀Ｃｅｌａｓｔｒｏｌｃｏｕｌｄａｍｅｌｉｏｒａｔｅｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙꎬｗｉｔｈｎｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｒｅｖｅａｌｉｎｇｔｈａｔｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｍｉｇｈｔｉｎｖｏｌｖｅｍｕｌｔｉ－ｔａｒｇｅｔｓａｎｄｍｕｌｔｉ－ｐａｔｈｗａｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＣｅｌａｓｔｒｏｌꎻＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎꎻＰｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙꎻＮｅｔｗｏｒｋｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎻＭｏｌｅｃｕｌａｒｄｏｃｋｉｎｇꎻＥｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈ￣ａｎｉｓｍ㊀㊀奥沙利铂引起的外周神经病变(ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ－ｉｎ￣ｄｕｃｅｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙꎬＯＩＰＮ)是奥沙利铂化疗中常见的副作用ꎬ发生率可达９３％[１]ꎮ其主要表现为感觉功能异常和精细运动协调障碍ꎬ严重影响患者生活质量ꎬ导致用药依从性降低ꎬ甚至治疗计划的提前终止[２]ꎮ尽管研究发现一些抗炎和抗抑郁类药物展现出一定的改善作用[３－４]ꎬ截止目前仍未有药物获批应用于ＯＩＰＮ的临床治疗[５]ꎬ寻找针对ＯＩＰＮ有良好防治效果的药物和治疗靶点具有十分重要的意义ꎮ雷公藤红素(ｃｅｌａｓｔｒｏｌꎬＣｅｌ)是中药雷公藤的重要活性成分之一ꎬ属木栓烷型五环三帖类化合物[６]ꎬ具有良好的抗肿瘤㊁抗炎㊁抗肥胖㊁免疫抑制㊁神经保护等药理活性[７]ꎮ研究发现ꎬ在Ｌ５脊神经结扎的神经病理性疼痛模型小鼠模型中ꎬ雷公藤红素灌胃给药能明显改善小鼠的机械痛敏行为[８]ꎻ在完全性弗氏佐剂诱导的炎性疼痛大鼠模型中ꎬ给予腹腔注射雷公藤红素治疗发现抑制了背根神经节高迁移率族蛋白Ｂ１(ＨＭＧＢ１)㊁核转录因子κＢ(ＮＦ－κＢ)和白细胞介素－１β(ＩＬ－１β)ｍＲＮＡ及蛋白的表达ꎬ减轻了完全性弗氏佐剂诱发的热痛敏[９]ꎮ这些结果表明ꎬ雷公藤红素具有减轻神经炎症和神经疼痛的作用ꎬ但关于雷公藤红素能否能够改善化疗药物引起的外周神经病变及其潜在机制的研究尚未得到报道ꎮ网络药理学以系统生物学㊁基因组学㊁蛋白质组学等学科理论为基础ꎬ通过组学㊁网络可视化和网络分析等技术ꎬ解析药物㊁靶点和疾病间的相互关系ꎬ由此预测药物潜在作用机制[１０]ꎮ网络药理学突破了 一药一靶 的限制ꎬ在以中药为代表的复杂体系的药理研究中有着不可替代的优势ꎬ并在中药活性化合物㊁中药药理学等研究领域得到了广泛应用[１１]ꎮ基于此ꎬ本文采用实验与网络药理学分析相结合的方法ꎬ拟通过体内外实验初步确证雷公藤红素是否具有改善ＯＩＰＮ的作用ꎬ进而分析预测药物的作用靶点和潜在作用机制ꎬ旨在为ＯＩＰＮ治疗提供新的理论依据ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀实验动物与细胞㊀ＳＰＦ级雄性Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠３２只ꎬ７~８周龄ꎬ体重２８０~３２０ｇꎬ购于广东省医学实验动物中心[使用许可证号:ＳＹＸＫ(粤)２０１６－０１１２]ꎬ饲养于中山大学实验动物中心(大学城)ＳＰＦ级屏障环境ꎬ温度２０~２６ħꎬ相对湿度４０％~７０％ꎬ１２ｈ交替光照ꎬ饮用水和灭菌饲料自由摄取ꎮ动物实验经中山大学动物伦理与福利委员会批准(批准编号:ＳＹＳＵ－ＩＡＣＵＣ－２０２２－００１１７０)ꎮＣＴ－２６细胞和ＨＣＴ１１６细胞源自中山大学药学院微生物与生化药学实验室的馈赠ꎮ１.２㊀药物试剂与仪器㊀奥沙利铂和雷公藤红素购于上海源叶生物科技有限公司ꎻＰＥＧ４００购自北京索莱宝科技有限公司ꎻ４％多聚甲醛通用型组织固定液购于北京兰杰柯科技有限公司ꎻ胎牛血清(美国Ｃｏｒｎｉｎｇ公司)ꎻＲＰＭＩ－１６４０培养基(美国Ｇｉｂｃｏ公司)ꎻＣＣＫ－８试剂盒(日本同仁化学研究所)ꎻＶｏｎＦｒｅｙ针刺痛觉测试套件(美国ＤａｎｍｉｃＧｌｏｂａｌ公司)ꎻＣＸ４３研究级生物显微镜(日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司)ꎻＣＯ２水套式培养箱(美国ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ公司)ꎻＭｕｌｔｉｓｋａｎＧｏ多功能酶标仪(美国Ｔｈｅｒｍｏ公司)ꎮ１.３㊀动物实验１.３.１㊀动物分组及给药㊀将２４只雄性大鼠随机分为４组ꎬ每组６只ꎮ奥沙利铂溶解于５％葡萄糖溶液ꎬ雷公藤红素溶解于载体溶液(ＰＥＧ４００ʒＨ２Ｏʒ乙醇＝１３ʒ６ʒ１)中[１２]ꎮ根据是否进行ＯＩＰＮ造模和雷公藤红素给药治疗分为以下几组[１３－１４]:①空白对照组(Ｃｏｎｔｒｏｌ)ꎻ②ＯＩＰＮ模型对照组:ＯＸＡ４ｍｇ ｋｇ－１ꎻ③雷公藤红素低剂量组:ＯＸＡ４ｍｇ ｋｇ－１＋Ｃｅｌ１ｍｇ ｋｇ－１ꎻ④雷公藤红素高剂量组:ＯＸＡ４ｍｇ ｋｇ－１＋Ｃｅｌ３ｍｇ ｋｇ－１ꎮ参照文献中的方法[１５]ꎬ对大鼠进行每周两次的奥沙利铂腹腔注射给药造模ꎬ持续４周ꎬ给药的时间定在实验总日程周期的第１㊁２㊁８㊁９㊁１５㊁１６㊁２２㊁２３天ꎮ雷公藤红素则从第１天开始进行灌胃给药ꎬ每天１次ꎬ持续２８ｄꎮ１.３.２㊀大鼠机械刺激痛敏测定 ＶｏｎＦｒｅｙ试验㊀于实验前(０ｄ)㊁实验第６㊁１２㊁１８㊁２４天ꎬ采用ＶｏｎＦｒｅｙ试验纤维针刺激的方法ꎬ对大鼠的机械刺激痛觉敏感性进行测试ꎮ将大鼠置于安静房间中的有机玻璃箱内ꎬ使之适应测试环境１５~３０ｍｉｎꎬ待其安静ꎮ采用文献中[１６]的 上－下法(ｕｐ－ｄｏｗｎｍｅｔｈｏｄ) 的刺激模式进行测试ꎬ使用规格为２.０㊁４.０㊁６.０㊁８.０㊁１０.０㊁１５.０㊁２６.０㊁６０.０ｇ的纤维针作用于大鼠左侧掌跖部无毛处ꎬ作用时间６~８ｓꎬ视抬足㊁抖动足或舔舐被刺激侧为阳性反应ꎬ记录下刺激的响应模式ꎬ计算出每只足底的５０％刺激响应阈值ꎮ对于每只大鼠ꎬ取计算出的左右两足响应阈值的平均值作为该个体的机械刺激痛觉敏感结果ꎮ１.３.３㊀大鼠冷刺激痛敏测定 冷板法㊀参照文献中的方法[１７]ꎬ于实验前(０ｄ)ꎬ实验第７㊁１３㊁１９㊁２５天采用冷板法评估大鼠对冷刺激的痛觉敏感性ꎮ将金属薄板置于冰上ꎬ外罩透明有机塑料罩ꎬ待板表面温度稳定在４ħ以下后ꎬ将大鼠放入罩中的金属板上ꎬ持续１ｍｉｎꎮ记录下１ｍｉｎ内出现的所有冷刺激表现(身体颤抖㊁抬足㊁快速走动㊁跳跃等)ꎬ对每只大鼠重复测定３次ꎬ每次间隔５ｍｉｎ以上ꎮ将记录到的冷刺激反应按表１换算成反应得分ꎬ每只大鼠的冷刺激痛敏结果为３次测定的得分取平均值ꎮ表１㊀大鼠冷刺激痛敏反应评分冷刺激反应得分无反应１.０轻蜷前爪ꎬ身体轻颤１.５前爪蜷缩ꎬ身体颤抖２.０持续紧握前爪ꎬ身体抖动２.５前爪轻抖ꎬ后爪轻抬㊁轻跺３.０前爪持续抖动ꎬ抬动后爪㊁跺脚３.５舔舐前后爪ꎬ跳动４.０１.３.４㊀大鼠背根神经节㊁坐骨神经Ｈ＆Ｅ染色切片观察与病理学评价㊀于实验第２８天ꎬ收集各组大鼠背根神经节(ｄｏｒｓａｌｒｏｏｔｇａｎｇｌｉａꎬＤＲＧ)与坐骨神经ꎬ浸泡于４％多聚甲醛室温避光固定２４ｈꎬ然后将组织样本送至武汉塞维尔生物科技有限公司进行脱水㊁石蜡包埋㊁切片和苏木精与伊红(ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎａｎｄｅｏｓｉｎꎬＨ＆Ｅ)染色ꎮ染色后的组织切片于光学显微镜下观察㊁拍照和定量分析ꎮ对于背根神经节ꎬ每组选取３只大鼠ꎬ每只量化３个随机视野中核仁偏移和多核仁神经元的数量ꎻ对于坐骨神经ꎬ每组选取３只大鼠ꎬ每只量化３个随机视野中免疫细胞浸润情况ꎬ以０㊁１㊁２㊁３㊁４的分数ꎬ分别表示０㊁０~２５％㊁２５％~５０％㊁５０％~７５％和大于７５％的浸润[１８]ꎮ１.４㊀细胞实验１.４.１㊀细胞培养及分组㊀ＣＴ－２６和ＨＣＴ１１６细胞接种于含有１０％胎牛血清和１％双抗的ＲＰＭＩ－１６４０培养基中ꎬ置于含５％ＣＯ２的３７̊Ｃ培养箱中培养ꎮ设置对照组(Ｃｏｎｔｒｏｌ)㊁单给奥沙利铂组(ＯＸＡ１０μｍｏｌ Ｌ－１和ＯＸＡ４０μｍｏｌ Ｌ－１)㊁奥沙利铂合用低剂量雷公藤红素组(ＯＸＡ１０μｍｏｌ Ｌ－１＋Ｃｅｌ０.５μｍｏｌ Ｌ－１和ＯＸＡ４０μｍｏｌ Ｌ－１＋Ｃｅｌ０.５μｍｏｌ Ｌ－１)㊁奥沙利铂合用高剂量雷公藤红素组(ＯＸＡ１０μｍｏｌ Ｌ－１＋Ｃｅｌ１μｍｏｌ Ｌ－１和ＯＸＡ４０μｍｏｌ Ｌ－１＋Ｃｅｌ１μｍｏｌ Ｌ－１)ꎮ１.４.２㊀ＣＣＫ－８检测结肠癌细胞存活率㊀取ＣＴ－２６和ＨＣＴ１１６细胞ꎬ按照５ˑ１０３个/孔的密度接种于９６孔板ꎬ贴壁生长过夜后ꎬ于次日取出进行细胞给药ꎬ再继续培养２４ｈꎮ于避光条件下用无血清培养基配制浓度１０％的ＣＣＫ－８溶液ꎬ将９６孔板从培养箱中取出ꎬ吸弃孔中培养基ꎬ每孔加入１００μＬＣＣＫ－８溶液ꎬ置于３７ħ培养箱中孵育４０ｍｉｎꎮ使用酶标仪测定４５０ｎｍ波长处各孔吸光度值ꎬ计算各组细胞存活率ꎮ１.５㊀网络药理学分析１.５.１㊀雷公藤红素与ＯＩＰＮ靶点的预测㊀以 ｃｅｌａｓ￣ｔｒｏｌ 为关键词在中药系统药理学数据库与分析平台(ｈｔｔｐｓ://ｔｃｍｓｐ－ｅ.ｃｏｍ/ｔｃｍｓｐ.ｐｈｐ)[１９]检索获得雷公藤红素靶点ꎬ通过ＵｎｉＰｒｏｔ数据库(ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｕｎｉ￣ｐｒｏｔ.ｏｒｇ/)转化为对应基因名称ꎻ从ＰｕｂＣｈｅｍ数据库获取雷公藤红素的ＳＤＦ结构文件ꎬ导入ＳｗｉｓｓＴａｒｇｅｔ￣Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ数据库(ｈｔｔｐ://ｗｗｗ.ｓｗｉｓｓｔａｒｇｅｔｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ.ｃｈ/)和ＰｈａｒｍＭａｐｐｅｒ数据库(ｈｔｔｐ://ｗｗｗ.ｌｉｌａｂ－ｅｃｕｓｔ.ｃｎ/ｐｈａｒｍｍａｐｐｅｒ/)[２０]进行靶点预测ꎮ对以上获得的靶点进行整合和去重ꎮ以 Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ 为关键词ꎬ在ＯＭＩＭ数据库(ｈｔｔｐｓ://ｏｍｉｍ.ｏｒｇ/)和ＧｅｎｅＣａｒｄｓ数据库(ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｇｅｎｅｃａｒｄｓ.ｏｒｇ/)[２１]中检索ꎬ收集ＯＩＰＮ相关靶点并进行去重ꎮ将雷公藤红素靶点与ＯＩＰＮ靶点取交集ꎬ获得雷公藤红素改善ＯＩＰＮ作用的潜在靶点ꎮ１.５.２㊀ 雷公藤红素－ＯＩＰＮ 靶点网络构建㊀筛选出的 雷公藤红素－ＯＩＰＮ 交集靶点导入到Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ３.７.１软件ꎬ生成雷公藤红素与ＯＩＰＮ的 药物－靶点－疾病 可视化网络图ꎮ将共有靶点输入到ＳＴＲＩＮＧ数据库在线分析平台(ｈｔｔｐｓ://ｃｎ.ｓｔｒｉｎｇ－ｄｂ.ｏｒｇ/)[２２]ꎬ设置物种为 ＨｏｍｏＳａｐｉｅｎｓ ꎬ进行蛋白质－蛋白质相互作用(ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃ￣ｔｉｏｎꎬＰＰＩ)网络构建ꎬ再将该ＰＰＩ网络导入Ｃｙｔｏｓｃａｐｅꎬ通过Ｎｅｔｗｏｒｋａｎａｌｙｚｅｒ计算度值ꎬ分析关键靶点信息ꎮ１.５.３㊀雷公藤红素改善ＯＩＰＮ的ＧＯ功能和ＫＥＧＧ通路富集分析㊀采用ＤＡＶＩＤ平台(ｈｔｔｐｓ://ｄａｖｉｄ.ｎｃｉｆｃｒｆ.ｇｏｖ/ｓｕｍｍａｒｙ.ｊｓｐ)[２３]对雷公藤红素改善ＯＩＰＮ的潜在靶点进行基因本体论(ｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏｇｙꎬＧＯ)功能和京都基因与基因组百科全书(ＫｙｏｔｏＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆＧｅｎｅｓａｎｄＧｅｎｏｍｅｓꎬＫＥＧＧ)通路富集分析ꎬ设定显著性Ｐ<０.０５ꎬ筛选出靶点富集的生物过程和代谢通路ꎮ通过微生信分析平台ꎬ以条形图形式输出ＧＯ功能富集分析结果ꎬ以气泡图形式输出ＫＥＧＧ通路富集分析结果[２４]ꎮ１.５.４㊀分子对接验证㊀采用ＭｏｌｅｃｕｌａｒＯｐｅｒａｔｉｎｇＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ(ＭＯＥ)２０２２软件进行对雷公藤红素和潜在关键靶点蛋白进行分子对接验证ꎮ从ＰＤＢ数据库(ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｒｃｓｂ.ｏｒｇ/)下载人源㊁分辨率较高(<２.５Å)㊁具有配体的靶点蛋白复合物晶体结构ꎬ导入ＭＯＥ软件ꎬ通过去除水分子和杂原子ꎬ并添加电荷和氢原子的方式进行预处理ꎮ导入雷公藤红素的ＳＤＦ文件ꎬ与靶点蛋白进行对接ꎬ选择亲和力高㊁结合能低的构象作为最终对接结果ꎮ１.６㊀统计分析㊀使用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ６.０软件进行数据统计分析和实验结果图标绘制ꎬ两组比较采用ｔ检验和Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ检验ꎬ多组比较采用单因素方差分析和Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ检验ꎮＰ<０.０５认为差异有统计学意义ꎮ２㊀结果２.１㊀雷公藤红素改善大鼠奥沙利铂引起的外周神经病变症状㊀在ＶｏｎＦｒｅｙ测试中ꎬ与空白对照组相比ꎬＯＸＡ模型对照组５０％爪缩阈值明显降低(见图１ＡꎬＰ<０.００１)ꎻ与ＯＸＡ模型对照组比较ꎬ给予雷公藤红素治疗后ꎬ从第１１天后的行为学测试均观察到５０％爪缩阈值的明显升高(Ｐ<０.０５ꎬＰ<０.０１ꎬＰ<０.００１)ꎮ冷板测试中ꎬＯＸＡ组与空白对照组比较ꎬ冷刺激反应评分也从第１１天后表现出明显的增高(见图１ＢꎬＰ<０.０５ꎬＰ<０.０１)ꎻ而雷公藤红素合用治疗则明显减轻了ＯＸＡ注射造模导致的冷刺激反应评分增高的现象(Ｐ<０.０５ꎬＰ<０.０１)ꎬ且高剂量组的效果更稳定ꎮ综上可见ꎬ雷公藤红素具有缓解奥沙利铂诱导的大鼠机械痛敏和冷痛敏的作用ꎮ㊀Ａ.ＶｏｎＦｒｅｙ测试结果ꎻＢ.冷板法测试结果图１㊀雷公藤红素对ＯＩＰＮ大鼠行为学表现的影响(ｎ＝６)㊀注:与空白对照组相比ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎻ与模型对照组对比ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎬ＃＃＃Ｐ<０.００１ꎮ２.２㊀雷公藤红素减轻ＯＩＰＮ大鼠神经病理损伤㊀如图２Ａꎬ空白对照组ＤＲＧ神经元形态正常ꎬ坐骨神经未见炎性细胞浸润ꎮ与空白对照组相比ꎬＯＸＡ组ＤＲＧ神经元细胞质空泡化ꎬ出现了明显的核仁偏移和多核仁现象(见图２Ａ中红色三角形标注)ꎬ坐骨神经中可见炎性细胞浸润(深色颗粒)ꎬ且以上异常细胞数目均体现出明显提升(见图２ＢꎬＰ<０.０５ꎬＰ<０.０１)ꎮ合用雷公藤红素治疗组相比ＯＸＡ模型对照组ꎬＤＲＧ神经元中偏核和多核的数目明显降低(Ｐ<０.０５ꎬＰ<０.０１)ꎬ外观趋于正常ꎬ坐骨神经中炎性浸润程度减轻ꎮ上述结果表明雷公藤红素在组织病理学水平上对大鼠ＯＩＰＮ关键组织起到改善保护作用ꎮ㊀Ａ.背根神经节神经元和坐骨神经Ｈ＆Ｅ染色结果ꎻＢ.ＤＲＧ神经元㊁坐骨神经中损伤统计分析图２㊀雷公藤红素对ＯＩＰＮ大鼠神经病理的影响(ｎ＝３)㊀注:与空白对照组相比ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎻ与模型对照组对比ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎮ２.３㊀雷公藤红素不影响奥沙利铂对癌细胞的杀伤作用㊀分别对小鼠结肠癌细胞ＣＴ－２６和人结肠癌细胞ＨＣＴ１１６进行奥沙利铂与雷公藤红素的合用药试验ꎬ考察合用药相比单给奥沙利铂对细胞存活率的影响ꎮ结果如图３显示ꎬ单给不同浓度的奥沙利铂相较于对照组ꎬ癌细胞存活率明显降低(Ｐ<０.０５ꎬＰ<０.０１ꎬＰ<０.００１)ꎬ而合用高㊁低剂量的雷公藤红素相比于ＯＸＡ组ꎬ癌细胞存活率进一步下降(Ｐ<０.０５)或无明显差异ꎮ这表明体外水平上ꎬ雷公藤红素与奥沙利铂合用不会削弱奥沙利铂对癌细胞的杀伤作用ꎮ㊀Ａ.ＣＣＫ－８检测小鼠结肠癌细胞ＣＴ－２６合用药存活率的结果ꎻＢ.人结肠癌细胞ＨＣＴ１１６合用药存活率的结果图３㊀雷公藤红素合用奥沙利铂对结肠癌细胞存活率的影响(ｎ＝５)㊀注:与对照组相比ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎻ与单给奥沙利空白组对比ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎮ２.４㊀雷公藤红素治疗ＯＩＰＮ的潜在靶点预测㊀检索ＴＣＭＳＰ㊁ＳｗｉｓｓＴａｒｇｅｔ和ＰｈａｒｍＭａｐｐｅｒ数据库ꎬ经去重后获得雷公藤红素靶点３０９个ꎻ对ＯＭＩＭ和Ｇｅｎｅ￣Ｃａｒｄｓ数据库进行检索ꎬ去重后得到ＯＩＰＮ疾病靶点１３１８个ꎮ将获取到的雷公藤红素及ＯＩＰＮ疾病靶点导入微生信在线作图平台ꎬ构建Ｖｅｎｎ图(见图４)预测 雷公藤红素－ＯＩＰＮ 共同靶点ꎬ取交集得到潜在靶基因８０个ꎮ图４㊀ 雷公藤红素－ＯＩＰＮ 交集靶点Ｖｅｎｎ图２.５㊀雷公藤红素－ＯＩＰＮ靶点网络分析㊀将 ２.４ 项下获得的交集基因导入Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ３.７.１软件ꎬ绘制出 雷公藤红素－靶点－ＯＩＰＮ 的可视化网络图(见图５)ꎮ其中包括了８２个节点ꎬ１６０条相互作用的连接边ꎬ连线表示靶点与雷公藤红素㊁ＯＩＰＮ之间的相互作用ꎮ２.６㊀ 雷公藤红素－ＯＩＰＮ 交集靶点的ＰＰＩ网络分析㊀将获得的交集基因导入ＳＴＲＩＮＧ在线分析平台ꎬ得到ＰＰＩ网络(见图６)ꎮ利用Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ对交集基因进行网络参数拓扑分析ꎬ其中包含７７个相互关联的节点ꎬ９３８条边ꎬ平均局部聚类系数０.６６７ꎬ平均节点度值２４.４ꎬ度值排名前２０的靶点的具体信息见表２ꎮ图５㊀ 雷公藤红素－共有靶点－ＯＩＰＮ网络图６㊀ 雷公藤红素－ＯＩＰＮ 交集靶点ＰＰＩ网络表２㊀ＰＰＩ网络靶点信息靶点名称度值中间中心性ＡＬＢ５８０.１０８５ＨＳＰ９０ＡＡ１５２０.０５３２ＭＹＣ５２０.０４２９ＣＡＳＰ３５１０.０２５９ＥＧＦＲ５００.０２７８ＢＣＬ２５００.０２２８ＰＴＧＳ２４８０.０３５９ＭＭＰ９４７０.０２４３ＨＳＰ９０ＡＢ１４５０.０２７３ＣＣＮＤ１４３０.０１３２ＡＮＸＡ５４３０.０１５６ＧＳＫ３Ｂ４２０.０１５２ＳＲＣ４２０.０１５３ＰＡＲＰ１４００.０１１５ＢＣＬ２Ｌ１３９０.００５６ＩＧＦ１３８０.００８２ＭＤＭ２３７０.００６３ＩＬ－２３５０.０１３８ＳＴＡＴ１３５０.００３９ＨＭＯＸ１３５０.０３２０２.７㊀雷公藤红素改善ＯＩＰＮ靶点的ＧＯ分析和ＫＥＧＧ富集分析㊀为了进一步探究雷公藤红素改善ＯＩＰＮ靶点的生物过程和信号通路ꎬ利用ＤＡＶＩＤ数据库对８０个靶基因进行ＧＯ功能富集分析ꎬ根据ＦＤＲ<０.０５共筛选出１９３个条目ꎬ其中包括生物学过程(ＢＰ)１４５个条目ꎬ细胞组成(ＣＣ)１９个条目ꎬ分子功能(ＭＦ)２９个条目ꎮ选取基因数量ȡ１０的条目绘制ＧＯ功能分析图(见图７)ꎬ结果表明雷公藤红素主要作用于胞液(ｃｙｔｏｓｏｌ)㊁细胞质(ｃｙｔｏｐｌａｓｍ)㊁细胞核(ｎｕｃｌｅｕｓ)㊁核浆(ｎｕｃｌｅｏｐｌａｓｍ)㊁外泌体(ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅｘｏｓｏｍｅ)㊁线粒体(ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｏｎ)㊁胞外区域(ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｒｅｇｉｏｎ)等ꎻ涉及分子功能包括蛋白质结合(ｐｒｏｔｅｉｎｂｉｎｄｉｎｇ)㊁相同蛋白质结合(ｉ￣ｄｅｎｔｉｃａｌｐｒｏｔｅｉｎｂｉｎｄｉｎｇ)㊁ＡＴＰ结合(ＡＴＰｂｉｎｄｉｎｇ)㊁蛋白丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸激酶活性(ｐｒｏｔｅｉｎｓｅｒｉｎｅ/ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ/ｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ)㊁蛋白质同源二聚化活性(ｐｒｏｔｅｉｎｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙ)㊁蛋白激酶活性(ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ)㊁酶结合(ｅｎｚｙｍｅｂｉｎｄｉｎｇ)㊁蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性(ｐｒｏｔｅｉｎｓｅｒ￣ｉｎｅ/ｔｈｒｅｏｎｉｎｅｋｉｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ)等ꎻ主要参与的生物过程包括凋亡过程的负调控(ｎｅｇａｔｉｖｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆａｐ￣ｏｐｔｏｔｉｃｐｒｏｃｅｓｓ)㊁凋亡过程(ａｐｏｐｔｏｔｉｃｐｒｏｃｅｓｓ)㊁信号转导(ｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ)㊁对外源刺激的反应(ｒｅ￣ｓｐｏｎｓｅｔｏｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃｓｔｉｍｕｌｕｓ)㊁ＲＮＡ聚合酶Ⅱ启动子的转录正调控(ｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆｒｏｍＲＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅⅡｐｒｏｍｏｔｅｒ)㊁蛋白质磷酸化(ｐｒｏｔｅｉｎｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ)㊁神经元凋亡过程负调控(ｎｅｇａｔｉｖｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒｏｎａｐｏｐｔｏｔｉｃｐｒｏｃｅｓｓ)等ꎮ图７㊀雷公藤红素改善ＯＩＰＮ靶点的ＧＯ富集结果㊀㊀同样地采用ＤＡＶＩＤ对８０个靶基因进行ＫＥＧＧ富集分析ꎬ根据ＦＤＲ<０.０５筛选并获得１３９条可能与雷公藤红素改善ＯＩＰＮ相关的通路ꎮ选取其中前２０条进行可视化分析(见图８)ꎬ结果显示雷公藤红素改善ＯＩＰＮ靶点涉及的通路包括ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔ信号通路(ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ)㊁ＩＬ－１７信号通路(ＩＬ－１７ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ)㊁ＦｏｘＯ信号通路(ＦｏｘＯｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ)㊁癌症通路(ｐａｔｈｗａｙｓｉｎｃａｎｃｅｒ)㊁ＥＧＦＲ酪氨酸激酶抑制剂耐药性信号通路(ＥＧＦＲｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ)等ꎮ其中有２３个靶点落在ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔ信号通路上ꎬ包括糖原合酶激酶３β(ＧＳＫ３Ｂ)㊁热休克蛋白９０α家族Ａ类成员１(ＨＳＰ９０ＡＡ１)㊁ｆｍｓ相关受体酪氨酸激酶１(ＦＬＴ１)㊁热休克蛋白９０α家族Ｂ类成员１(ＨＳＰ９０ＡＢ１)㊁内皮型一氧化氮合成酶(ＮＯＳ３)㊁磷酸肌醇３－激酶调节亚基１(ＰＩＫ３Ｒ１)㊁胰岛素样生长因子－１(ＩＧＦ１)㊁表皮生长因子受体(ＥＧＦＲ)㊁白细胞介素２(ＩＬ－２)㊁胎盘生长因子(ＰＧＦ)㊁磷脂酰肌醇－４ꎬ５－二磷酸３－激酶催化亚基γ(ＰＩＫ３ＣＧ)㊁胰岛素样生长因子１受体(ＩＧＦ１Ｒ)㊁血管内皮生长因子Ａ(ＶＥＧＦＡ)㊁细胞周期蛋白Ｄ１(ＣＣＮＤ１)㊁ＭＹＣ原癌基因(ＭＹＣ)㊁细胞周期蛋白依赖性激酶２(ＣＤＫ２)㊁ＭＤＭ２原癌基因(ＭＤＭ２)㊁激酶插入域受体(ＫＤＲ)㊁凋亡调节蛋白Ｂｃｌ－２(ＢＣＬ２)㊁丝裂原活化蛋白激酶１(ＭＡＰＫ１)㊁酪氨酸蛋白激酶ＪＡＫ２(ＪＡＫ２)㊁成纤维细胞生长因子受体２(ＦＧＦＲ２)㊁Ｂｃｌ－２样蛋白１蛋白(ＢＣＬ２Ｌ１)ꎻ１１个靶点落在ＩＬ－１７信号通路上ꎬ包括ＧＳＫ３Ｂ㊁ＨＳＰ９０ＡＡ１㊁丝裂原激活蛋白酶８(ＭＡＰＫ８)㊁ＨＳＰ９０ＡＢ１㊁胱天蛋白酶３(ＣＡＳＰ３)㊁人脂质运载蛋白２(ＬＣＮ２)㊁ＭＡＰＫ１㊁丝裂原活化蛋白激酶１４(ＭＡＰＫ１４)㊁前列腺素内过氧化物合酶２(ＰＴＧＳ２)㊁Ｓ１００钙结合蛋白Ａ９(Ｓ１００Ａ９)㊁基质金属蛋白酶(ＭＭＰ９)ꎻ以及１２个靶点落在ＦｏｘＯ信号通路:ＭＡＰＫ８㊁ＣＣＮＤ１㊁ＣＤＫ２㊁ＭＤＭ２㊁ＭＡＰＫ１㊁ＢＲＡＦ蛋白(ＢＲＡＦ)㊁ＩＧＦ１㊁ＰＩＫ３Ｒ１㊁ＭＡＰＫ１４㊁超氧化物歧化酶２(ＳＯＤ２)㊁ＥＧＦＲ㊁ＩＧＦ１Ｒꎮ综上可见ꎬ雷公藤红素可能通过作用于不同通路信号起到改善ＯＩＰＮ的作用ꎮ图８㊀ 雷公藤红素－ＯＩＰＮ 共有靶点的ＫＥＧＧ富集分析结果㊀注:Ｙ轴为信号通路名称ꎬＸ轴为该通路上含有的靶基因数占总靶基因数的比率ꎬ气泡大小为该通路基因数量ꎬ气泡颜色为该通路基因富集的显著性ꎮ２.８㊀分子对接分析㊀以雷公藤红素作为配体ꎬ结合相关研究文献ꎬ选择ＰＰＩ网络中度值较高ꎬ参与ＫＥＧＧ信号通路较多的９个靶蛋白作为受体(见表３)ꎬ导入雷公藤红素的ＳＤＦ和靶点的ＰＤＢ文件ꎬ运用ＭＯＥ软件进行分子对接ꎬ以虚拟评价的方式预测结果ꎮ如表３显示ꎬ雷公藤红素与靶蛋白的结合能均小于－５ｋｃａｌ ｍｏｌ－１ꎬ说明雷公藤红素与靶蛋白均具有较好的结合活性ꎻ其中ꎬＣＡＳＰ３和ＰＴＧＳ２与雷公藤红素的结合能的分别约为－６.４５ｋｃａｌ ｍｏｌ－１和－６.１９ｋｃａｌ ｍｏｌ－１ꎬ结合作用如图９ꎬ提示雷公藤红素可能通过作用于ＣＡＳＰ３和ＰＴＧＳ２起到改善ＯＩＰＮ的作用ꎮ表３㊀分子对接靶点信息与结合能靶点名称ＰＤＢＩＤ结合能/ｋｃａｌ ｍｏｌ－１ＨＳＰ９０ＡＡ１４ＢＱＧ－５.５６１６ＣＡＳＰ３３ＤＥＪ－６.４５１６ＥＧＦＲ１Ｍ１７－５.６５４０ＢＣＬ２６Ｏ０Ｋ－５.７４２１ＰＴＧＳ２５ＩＫＴ－６.１８６３ＧＳＫ３Ｂ５Ｋ５Ｎ－５.６２２０ＢＣＬ２Ｌ１７ＪＧＷ－５.７４２５ＩＧＦ１１ＩＭＸ－５.１７７７ＭＡＰＫ８４Ｅ７３－５.１６８９㊀Ａ.雷公藤红素与ＣＡＳＰ９ꎻＢ.雷公藤红素与ＰＴＧＳ２图９㊀雷公藤红素与ＣＡＳＰ３和ＰＴＧＳ２分子对接可视化图３㊀讨论奥沙利铂引起的外周神经病变是奥沙利铂化疗中的一项重要临床问题ꎬ能够导致患者减药甚至停药ꎬ对患者癌症治疗造成不良影响ꎮ迄今为止ꎬ还未有药物被批准用于ＯＩＰＮ的预防和治疗ꎬ根据临床指南ꎬ只有度洛西汀可用于神经性疼痛的治疗[２５]ꎮ雷公藤红素作为雷公藤的关键活性成分ꎬ其改善神经性病理痛㊁神经炎症㊁抗神经细胞凋亡的作用得到了广泛研究探索[２６]ꎬ然而关于雷公藤红素是否可对奥沙利铂引起的外周神经病变起到改善作用尚未得到报道ꎮ因此ꎬ本研究以雷公藤红素单体为研究对象ꎬ先从动物水平上直接考察雷公藤红素是否对ＯＩＰＮ起到保护和改善作用ꎬ再结合体外水平探究雷公藤红素对奥沙利铂的抗肿瘤作用的影响ꎮ结果显示ꎬ行为学方面ꎬ雷公藤红素对奥沙利铂所致外周神经毒性症状具有较好的保护作用ꎬ能够明显改善奥沙利铂导致的大鼠对冷刺激和机械刺激的过度敏感ꎻ组织病理学方面ꎬ雷公藤红素减轻了奥沙利铂所致的背根神经节神经元损伤ꎬ降低了坐骨神经的炎性浸润程度ꎮ体外水平上ꎬ雷公藤红素与奥沙利铂合用不会削弱奥沙利铂对结肠癌细胞的杀伤作用ꎮ这些结果表明ꎬ雷公藤红素对奥沙利铂引起的外周神经病变具有保护和改善的作用ꎮ奥沙利铂引起的外周神经病变可能涉及奥沙利铂与神经元㊁神经胶质㊁传感与效应细胞㊁免疫系统等之间复杂的相互作用[２７]ꎬ鉴于雷公藤红素已报道的抗炎㊁抗氧化㊁免疫调节㊁神经保护等多种药理活性ꎬ采取多靶点角度研究雷公藤红素改善ＯＩＰＮ的作用具有重要的意义ꎮ因此ꎬ本研究运用网络药理学的方法检索收集和预测了雷公藤红素改善ＯＩＰＮ的多个潜在靶点ꎬ经过ＰＰＩ网络和Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ分析筛选出度值较高的靶点ＣＡＳＰ３和ＰＴＧＳ２ꎮＣＡＳＰ３被认为能够通过裂解ＲＥＴ酪氨酸激酶受体参与神经节交感神经元细胞的黏附的调节[２８]ꎬＰＴＧＳ２则在炎症反应中起到重要作用ꎬ可参与疼痛反应的调节[２９]ꎬ神经炎症中神经元调节吞噬性小胶质细胞的介质的分泌过程ꎬ免疫细胞的激活等[３０]ꎮ分子对接验证的结果表明ꎬ雷公藤红素与ＣＡＳＰ３和ＰＴＧＳ２均表现出良好的结合性ꎬ进一步提示雷公藤红素可能通过调节神经炎症和免疫过程ꎬ作用于神经元起到ＯＩＰＮ的改善作用ꎮＫＥＧＧ通路富集分析结果表明雷公藤红素改善ＯＩＰＮ的作用可能与ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔ信号通路㊁ＩＬ－１７信号通路㊁ＦｏｘＯ信号通路㊁ＥＧＦＲ酪氨酸激酶抑制剂耐药性信号通路等有关ꎮ研究发现ꎬＩＬ－１７/ＩＬ－１７Ｒ介导神经元－胶质细胞相互作用ꎬ调节脊髓和背根神经节中的神经元的突触传递和兴奋性ꎬ从而驱动化疗诱导的神经性疼痛[３１]ꎻＰＩ３Ｋ/Ａｋｔ则显示参与了ＯＩＰＮ病理过程中巨噬细胞与神经元之间的相互作用[３２]ꎮ而作为ＰＩ３Ｋ/Ａｋｔ信号通路中关键组成的ＧＳＫ３Ｂ㊁ＨＳＰ９０ＡＡ１㊁ＩＧＦ１㊁ＥＧＦＲ㊁ＢＣＬ２㊁ＢＣＬ２Ｌ１ꎬ和ＩＬ－１７信号通路中的ＧＳＫ３Ｂ㊁ＨＳＰ９０ＡＡ１㊁ＭＡＰＫ８㊁ＣＡＳＰ３㊁ＰＴＧＳ２均显示在与雷公藤红素的分子对接中显示出良好的结合ꎮ对核心靶点的ＧＯ功能富集分析表明雷公藤红素改善ＯＩＰＮ作用过程中涉及神经元凋亡的负调控ꎮ以上结果提示雷公藤红素可能通过调控ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔ信号通路和ＩＬ－１７信号通路ꎬ参与神经元与免疫细胞㊁其他神经细胞之间的相互作用ꎬ起到改善和减轻ＯＩＰＮ的作用ꎮ综上所述ꎬ本研究发现了雷公藤红素对奥沙利铂引起的外周神经病变的改善作用ꎬ并通过网络药理学的方法初步预测了该作用的潜在靶点和作用通路ꎬ为进一步实验确证成分与靶点及通路的调控关系ꎬ阐明雷公藤红素改善ＯＩＰＮ的具体机制提供了理论基础ꎮ参考文献:[１]㊀ＢＲＯＺＯＵＶꎬＶＡＤＡＬＯＵＣＡＡꎬＺＩＳＰ.ＰａｉｎｉｎＰｌａｔｉｎ－Ｉｎ￣ｄｕｃｅｄＮｅｕｒｏｐａｔｈｉｅｓ:ＡＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＲｅｖｉｅｗａｎｄＭｅｔａ－Ａ￣ｎａｌｙｓｉｓ[Ｊ].ＰａｉｎＴｈｅｒꎬ２０１８ꎬ７(１):１０５－１１９.[２]马凯丽ꎬ程志祥.化学治疗导致周围神经病变的发生机制及防治进展[Ｊ].中国疼痛医学杂志ꎬ２０１８ꎬ２４(３):２１８－２２０.[３]ＫＩＭＷꎬＣＨＵＮＧＹꎬＣＨＯＩＳꎬｅｔａｌ.ＤｕｌｏｘｅｔｉｎｅＰｒｏｔｅｃｔｓａ￣ｇａｉｎｓｔＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎ－ＩｎｄｕｃｅｄＮｅｕｒｏｐａｔｈｉｃＰａｉｎａｎｄＳｐｉｎａｌＮｅｕｒｏｎＨｙｐｅｒｅｘｃｉｔａｂｉｌｉｔｙｉｎＲｏｄｅｎｔｓ[Ｊ].ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉꎬ２０１７ꎬ１８(１２):２６２６.[４]ＤＵＡＮＺꎬＳＵＺꎬＷＡＮＧＨꎬｅｔａｌ.Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｐｒｏ－ｉｎ￣ｆｌａｍｍａｔｉｏｎｓｉｇｎａｌｐａｔｈｗａｙｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆｒａｐａｍｙｃｉｎｏｎｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃｐａｉｎ[Ｊ].ＭｏｌＰａｉｎꎬ２０１８(１４):１７４４８０６９１８７６９４２６.[５]赵丽玲ꎬ黄彦珊ꎬ王利ꎬ等.ＳＮＲＩｓ类药物应用于神经病理性疼痛的临床应用进展[Ｊ].医药导报ꎬ２０２３ꎬ４２(６):８９２－８９７.[６]张丽心ꎬ胡晓龙ꎬ汪豪.雷公藤红素的结构修饰及药理活性研究进展[Ｊ].西北药学杂志ꎬ２０２３ꎬ３８(２):２１２－２２２.[７]ＳＯＮＧＪꎬＨＥＧＮꎬＤＡＩＬ.Ａｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｒｅｖｉｅｗｏｎｃｅｌａｓｔｒｏｌꎬｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅａｎｄｔｒｉｐｔｏｎｉｄｅ:Ｉｎｓｉｇｈｔｓｏｎｔｈｅｉｒｐｈａｒ￣ｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙꎬｔｏｘｉｃｉｔｙꎬｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｔｈｅｒａｐｙꎬｎｅｗｄｏｓａｇｅｆｏｒｍａｎｄｎｏｖｅｌｄｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙｒｏｕｔｅｓ[Ｊ].ＢｉｏｍｅｄＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒꎬ２０２３(１６２):１１４７０５.[８]吴红艳ꎬ师钰琪ꎬ李佳豪ꎬ等.雷公藤红素对神经病理性疼痛模型小鼠的干预作用[Ｊ].中国实验方剂学杂志ꎬ２０２０ꎬ２６(１３):９７－１０３.[９]ＺＨＡＮＧＸꎬＺＨＡＯＷꎬＬＩＵＸꎬｅｔａｌ.ＣｅｌａｓｔｒｏｌａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｐａｉｎａｎｄｍｏｄｕｌａｔｅｓＨＭＧＢ１/ＮＦ－κＢｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎｄｏｒｓａｌｒｏｏｔｇａｎｇｌｉｏｎ[Ｊ].ＮｅｕｒｏｓｃｉＬｅｔｔꎬ２０１９(６９２):８３－８９.[１０]毛丽斯ꎬ朱晓红.网络药理学在中药领域的应用进展[Ｊ].中医药管理杂志ꎬ２０２１ꎬ２９(１３):９８－１０２.[１１]王凤雪ꎬ高宇ꎬ刘海波.中药网络药理学研究流程及代表性数据库工具[Ｊ].中国现代中药ꎬ２０２１ꎬ２３(６):１１１１－１１１８.[１２]ＷＯＮＧＶＫＷꎬＱＩＵＣꎬＸＵＳＷꎬｅｔａｌ.Ｃａ２＋ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇｐｌａｙｓａｒｏｌｅｉｎｃｅｌａｓｔｒｏｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｙｎｏｖｉａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｏｆｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｒｔｈｒｉｔｉｓｉｎｒａｔｓ[Ｊ].ＢｒＪＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１９ꎬ１７６(１６):２９２２－２９４４.[１３]ＮＩＥＹꎬＦＵＣꎬＺＨＡＮＧＨꎬｅｔａｌ.Ｃｅｌａｓｔｒｏｌｓｌｏｗｓｔｈｅｐｒｏ￣ｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅａｒｌｙｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙｉｎｒａｔｓｖｉａｔｈｅＰＩ３Ｋ/ＡＫＴｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＢＭＣＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔＭｅｄＴｈｅｒꎬ２０２０ꎬ２０(１):３２１.[１４]ＡＢＵＢＡＫＡＲＭＨꎬＳＨＡＲＩＦＦＫＡꎬＴＡＮＪＳꎬｅｔａｌ.Ｃｅｌａｓｔｒｏｌａｔｔｅｎｕａｔｅｓｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎａｄｉｐｏｓｅｔｉｓ￣ｓｕｅｓａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｓｓｋｅｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓｉｎｈｉｇｈｆａｔｄｉｅｔ－ｉｎｄｕｃｅｄｏｂｅｓｅｒａｔｓｖｉａｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＡＭＰＫ/ＳＩＲＴ１ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓ[Ｊ].ＥｕｒＪＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０２０(８８３):１７３３７１.[１５]ＫＡＷＡＳＨＩＲＩＴꎬＫＯＢＡＹＡＳＨＩＤꎬＥＧＡＳＨＩＲＡＮꎬｅｔａｌ.ＯｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＣｙｓｔｉｎｅａｎｄＴｈｅａｎｉｎｅａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｃｈｒｏｎｉｃｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙｉｎｒｏ￣ｄｅｎｔｓ[Ｊ].ＳｃｉＲｅｐꎬ２０２０ꎬ１０(１):１２６６５.[１６]ＣＨＡＰＬＡＮＳＲꎬＢＡＣＨＦＷꎬＰＯＧＲＥＬＪＷꎬｅｔａｌ.Ｑｕａｎｔｉ￣ｔａｔｉｖｅａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｔａｃｔｉｌｅａｌｌｏｄｙｎｉａｉｎｔｈｅｒａｔｐａｗ[Ｊ].ＪＮｅｕｒｏｓｃｉＭｅｔｈｏｄｓꎬ１９９４ꎬ５３(１):５５－６３.[１７]ＣＨＥＮＧＸꎬＨＵＯＪꎬＷＡＮＧＤꎬｅｔａｌ.ＨｅｒｂａｌＭｅｄｉｃｉｎｅＡＣ５９１ＰｒｅｖｅｎｔｓＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎ－ＩｎｄｕｃｅｄＰｅｒｉｐｈｅｒａｌＮｅｕｒｏｐａｔｈｙｉｎＡｎｉｍａｌＭｏｄｅｌａｎｄＣａｎｃｅｒＰａｔｉｅｎｔｓ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１７(８):３４４.[１８]ＣＡＭＰＯＬＯＭꎬＬＡＮＺＡＭꎬＰＡＴＥＲＮＩＴＩＩꎬｅｔａｌ.ＰＥＡ－ＯＸＡＭｉｔｉｇａｔｅｓＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎ－ＩｎｄｕｃｅｄＰａｉｎｆｕｌＮｅｕｒｏｐａｔｈｙｔｈｒｏｕｇｈＮＦ－κＢ/Ｎｒｆ－２Ａｘｉｓ[Ｊ].ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉꎬ２０２１ꎬ２２(８):３９２７.[１９]ＲＵＪꎬＬＩＰꎬＷＡＮＧＪꎬｅｔａｌ.ＴＣＭＳＰ:ａｄａｔａｂａｓｅｏｆｓｙｓｔｅｍｓｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｆｏｒｄｒｕｇｄｉｓｃｏｖｅｒｙｆｒｏｍｈｅｒｂａｌｍｅｄｉｃｉｎｅｓ[Ｊ].ＪＣｈｅｍｉｎｆｏｒｍꎬ２０１４(６):１３.[２０]ＷＡＮＧＸꎬＳＨＥＮＹꎬＷＡＮＧＳꎬｅｔａｌ.ＰｈａｒｍＭａｐｐｅｒ２０１７ｕｐｄａｔｅ:ａｗｅｂｓｅｒｖｅｒｆｏｒｐｏｔｅｎｔｉａｌｄｒｕｇｔａｒｇｅｔｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｗｉｔｈａｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｔａｒｇｅｔｐｈａｒｍａｃｏｐｈｏｒｅｄａｔａｂａｓｅ[Ｊ].ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓꎬ２０１７ꎬ４５(Ｗ１):Ｗ３５６－Ｗ３６０. [２１]ＳＴＥＬＺＥＲＧꎬＲＯＳＥＮＮꎬＰＬＡＳＣＨＫＥＳＩꎬｅｔａｌ.ＴｈｅＧｅｎｅ￣ＣａｒｄｓＳｕｉｔｅ:ＦｒｏｍＧｅｎｅＤａｔａＭｉｎｉｎｇｔｏＤｉｓｅａｓｅＧｅｎｏｍｅＳｅｑｕｅｎｃｅＡｎａｌｙｓｅｓ[Ｊ].ＣｕｒｒＰｒｏｔｏｃＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓꎬ２０１６(５４):１.３０.１－１.３０.３３.(下转第３４１页)[５]ＮＩＮＧＹꎬＬＩＮＧＪꎬＷＵＣＤ.Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｅａｃａｔｅ￣ｃｈｉｎｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎｇａｌｌａｔｅａｎｄａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃｓａｇａｉｎｓｔｏｒａｌＣａｎｄｉｄａｓｐｅｃｉｅｓ[Ｊ].ＡｒｃｈＯｒａｌＢｉｏｌꎬ２０１５ꎬ６０(１０):１５６５－１５７０.[６]ＳＨＡＲＩＡＴＩＡꎬＤＩＤＥＨＤＡＲＭꎬＲＡＺＡＶＩＳꎬｅｔａｌ.ＮａｔｕｒａｌＣｏｍｐｏｕｎｄｓ:ＡＨｏｐｅｆｕｌＰｒｏｍｉｓｅａｓａｎＡｎｔｉｂｉｏｆｉｌｍＡｇｅｎｔＡｇａｉｎｓｔＣａｎｄｉｄａＳｐｅｃｉｅｓ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０２２(１３):９１７７８７.[７]ＫＩＭＹＧꎬＬＥＥＪＨꎬＰＡＲＫＳꎬｅｔａｌ.ＨｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅｓＩｎｃｌｕ￣ｄｉｎｇＴｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅＩｎｈｉｂｉｔＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓＢｉｏｆｉｌｍＦｏｒｍａｔｉｏｎｂｙＲｅｐｒｅｓｓｉｎｇＨｙｐｈａｅ－ＲｅｌａｔｅｄＧｅｎｅｓ[Ｊ].ＭｉｃｒｏｂｉｏｌＳｐｅｃｔｒꎬ２０２２ꎬ１０(５):ｅ０２５３６２２. [８]ＹＯＮＧＪꎬＺＵＲꎬＨＵＡＮＧＸꎬｅｔａｌ.ＳｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃＥｆｆｅｃｔｏｆＢｅｒｂｅｒｉｎｅＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅａｎｄＦｌｕｃｏｎａｚｏｌｅＡｇａｉｎｓｔＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓＲｅｓｉｓｔａｎｔＩｓｏｌａｔｅｓ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＭｉｃｒｏｂｉｏｌꎬ２０２０(１１):１４９８.[９]ＤＡＳＩＬＶＡＣＲꎬＤＥＡＮＤＲＡＤＥＮＥＴＯＪＢꎬＤＥＳＯＵＳＡＣＡＭＰＯＳＲꎬｅｔａｌ.Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｆｌａｖｏｎｏｉｄｃａｔｅ￣ｃｈｉｎꎬｑｕｅｒｃｅｔｉｎꎬｏｒｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎｇａｌｌａｔｅｗｉｔｈｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅｉｎｄｕｃｅｓａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎＣａｎｄｉｄａｔｒｏｐｉｃａｌｉｓｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ[Ｊ].ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒꎬ２０１４ꎬ５８(３):１４６８－１４７８.[１０]ＫＮＩＤＥＬＣꎬＰＥＲＥＩＲＡＭＦꎬＢＡＲＣＥＬＯＳＤＨＦꎬｅｔａｌ.ＥｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎｇａｌｌａｔｅｈａｓａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｎｄａｎｔｉｂｉｏｆｉｌｍａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔａｎｄｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅＳｔａｐｈｙｌｏ￣ｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｉｎｅａｇｅｓｉｎｎｏｎ－ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｃｏｎ￣ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ[Ｊ].ＮａｔＰｒｏｄＲｅｓꎬ２０２１ꎬ３５(２２):４６４３－４６４７. [１１]ＬＩＵＣꎬＨＡＯＫꎬＬＩＵＺꎬｅｔａｌ.Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎｇａｌｌａｔｅ(ＥＧＣＧ)ａｔｔｅｎｕａｔｅｓｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌａｌｐｈａ－ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ(Ｈｌａ)－ｉｎｄｕｃｅｄＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｖｉａＲＯＳ－ＭＡＰＫｐａｔｈｗａｙｓａｎｄＥＧＣＧ－Ｈｌａｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ[Ｊ].ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０２１(１００):１０８１７０.[１２]ＭＥＨＭＯＯＤＳꎬＭＡＱＳＯＯＤＭꎬＭＡＨＴＡＢＮꎬｅｔａｌ.Ｅｐｉｇａｌ￣ｌｏｃａｔｅｃｈｉｎｇａｌｌａｔｅ:Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙꎬｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｃｈａｌｌｅｎｇｅｓꎬａｎｄｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ[Ｊ].ＪＦｏｏｄＢｉｏｃｈｅｍꎬ２０２２ꎬ４６(８):ｅ１４１８９.[１３]ＴＨＯＭＳＯＮＤＤꎬＷＥＨＭＥＩＥＲＳꎬＢＹＦＩＥＬＤＦＪꎬｅｔａｌ.Ｃｏｎｔａｃｔ－ｉｎｄｕｃｅｄａｐｉｃａｌａｓｙｍｍｅｔｒｙｄｒｉｖｅｓｔｈｅｔｈｉｇｍｏｔｒｏｐｉｃｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓｈｙｐｈａｅ[Ｊ].ＣｅｌｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌꎬ２０１５ꎬ１７(３):３４２－３５４.[１４]ＵＷＡＭＡＨＯＲＯＮꎬＶＥＲＭＡ－ＧＡＵＲＪꎬＳＨＥＮＨＨꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｐａｔｈｏｇｅｎＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓｈｉｊａｃｋｓｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓｆｏｒｅｓ￣ｃａｐｅｆｒｏｍｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ[Ｊ].ｍＢｉｏꎬ２０１４ꎬ５(２):ｅ００００３－１４.(收稿日期:２０２３－０７－０４)(上接第３２６页)[２２]ＳＺＫＬＡＲＣＺＹＫＤꎬＫＩＲＳＣＨＲꎬＫＯＵＴＲＯＵＬＩＭꎬｅｔａｌ.ＴｈｅＳＴＲＩＮＧｄａｔａｂａｓｅｉｎ２０２３:ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｎｅｔｗｏｒｋｓａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔａｎａｌｙｓｅｓｆｏｒａｎｙｓｅ￣ｑｕｅｎｃｅｄｇｅｎｏｍｅｏｆｉｎｔｅｒｅｓｔ[Ｊ].ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓꎬ２０２３ꎬ５１(Ｄ１):Ｄ６３８－Ｄ６４６.[２３]ＳＨＥＲＭＡＮＢＴꎬＨＡＯＭꎬＱＩＵＪꎬｅｔａｌ.ＤＡＶＩＤ:ａｗｅｂｓｅｒｖｅｒｆｏｒｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎｎｏｔａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｌｉｓｔｓ(２０２１ｕｐｄａｔｅ)[Ｊ].ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓꎬ２０２２ꎬ５０(Ｗ１):Ｗ２１６－Ｗ２２１.[２４]ＴＡＮＧＤꎬＣＨＥＮＭꎬＨＵＡＮＧＸꎬｅｔａｌ.ＳＲｐｌｏｔ:Ａｆｒｅｅｏｎｌｉｎｅｐｌａｔｆｏｒｍｆｏｒｄａｔａｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｇｒａｐｈｉｎｇ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０２３ꎬ１８(１１):ｅ０２９４２３６.[２５]ＬＯＰＲＩＮＺＩＣＬꎬＬＡＣＣＨＥＴＴＩＣꎬＢＬＥＥＫＥＲＪꎬｅｔａｌ.Ｐｒｅ￣ｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＭａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ－ＩｎｄｕｃｅｄＰｅ￣ｒｉｐｈｅｒａｌＮｅｕｒｏｐａｔｈｙｉｎＳｕｒｖｉｖｏｒｓｏｆＡｄｕｌｔＣａｎｃｅｒｓ:ＡＳＣＯＧｕｉｄｅｌｉｎｅＵｐｄａｔｅ[Ｊ].ＪＣｌｉｎＯｎｃｏｌꎬ２０２０ꎬ３８(２８):３３２５－３３４８.[２６]ＬＩＵＤꎬＺＨＡＮＧＱꎬＬＵＯＰꎬｅｔａｌ.ＮｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅＥｆｆｅｃｔｓｏｆＣｅｌａｓｔｒｏｌｉｎＮｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅＤｉｓｅａｓｅｓ－ＵｎｓｃｒａｍｂｌｅＩｔｓＭａｊｏｒＭｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＡｃｔｉｏｎａｎｄＴａｒｇｅｔｓ[Ｊ].ＡｇｉｎｇＤｉｓꎬ２０２２ꎬ１３(３):８１５－８３６.[２７]ＹＡＮＧＹꎬＺＨＡＯＢꎬＧＡＯＸꎬｅｔａｌ.Ｔａｒｇｅｔｉｎｇｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ:ｃｌｉｎｉｃａｌｓｙｎ￣ｄｒｏｍｅꎬｍｏｌｅｃｕｌａｒｂａｓｉｓꎬａｎｄｄｒｕｇｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ[Ｊ].ＪＥｘｐＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓꎬ２０２１ꎬ４０(１):３３１.[２８]ＣＡＢＲＥＲＡＪＲꎬＢＯＵＺＡＳ－ＲＯＤＲＩＧＵＥＺＪꎬＴＡＵＳＺＩＧ－ＤＥＬＡＭＡＳＵＲＥＳꎬｅｔａｌ.ＲＥＴｍｏｄｕｌａｔｅｓｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｖｉａｉｔｓｃｌｅａｖａｇｅｂｙｃａｓｐａｓｅｉｎｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃｎｅｕｒｏｎｓ[Ｊ].ＪＢｉｏｌＣｈｅｍꎬ２０１１ꎬ２８６(１６):１４６２８－１４６３８.[２９]ＭＵＳＥＥＪꎬＭＡＲＮＥＴＴＬＪ.ＰｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎＨｓｙｎｔｈａｓｅ－２－ｃａｔａｌｙｚｅｄｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｏｆ２－ａｒａｃｈｉｄｏｎｏｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌｉｓｍｏｒｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏｐｅｒｏｘｉｄｅｔｏｎｅｔｈａｎｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｏｆａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃａｃｉｄ[Ｊ].ＪＢｉｏｌＣｈｅｍꎬ２０１２ꎬ２８７(４４):３７３８３－３７３９４. [３０]ＤＡＬＬＩＪꎬＣＨＩＡＮＧＮꎬＳＥＲＨＡＮＣＮ.Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎｏｆｎｏｖｅｌ１３－ｓｅｒｉｅｓｒｅｓｏｌｖｉｎｓｔｈａｔｉｎｃｒｅａｓｅｗｉｔｈａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎａｎｄｃｌｅａｒｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ[Ｊ].ＮａｔＭｅｄꎬ２０１５ꎬ２１(９):１０７１－１０７５. [３１]ＬＵＯＨꎬＬＩＵＨＺꎬＺＨＡＮＧＷＷꎬｅｔａｌ.Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１７ＲｅｇｕｌａｔｅｓＮｅｕｒｏｎ－ＧｌｉａｌＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓꎬＳｙｎａｐｔｉｃＴｒａｎｓ￣ｍｉｓｓｉｏｎꎬａｎｄＮｅｕｒｏｐａｔｈｉｃＰａｉｎａｆｔｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ[Ｊ].ＣｅｌｌＲｅｐꎬ２０１９ꎬ２９(８):２３８４－２３９７.[３２]ＫＵＭＡＲＫＡＬＶＡＬＡＡꎬＢＡＧＤＥＡꎬＡＲＴＨＵＲＰꎬｅｔａｌ.ＲｏｌｅｏｆＣａｎｎａｂｉｄｉｏｌａｎｄＴｅｔｒａｈｙｄｒｏｃａｎｎａｂｉｖａｒｉｎｏｎＰａｃｌｉ￣ｔａｘｅｌ－ｉｎｄｕｃｅｄｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃｐａｉｎｉｎｒｏｄｅｎｔｓ[Ｊ].ＩｎｔＩｍｍｕ￣ｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０２２(１０７):１０８６９３.(收稿日期:２０２３－１２－２０)。

申请日期
申 请 者实验编号
动物实验申请表（东校区）
（2012版）
以下由实验动物中心填写：
收表日期
收件人
质量保证
部意见
中心主任
意见
填表须知：
1、中山大学实验动物中具有实验动物使用许可证：SYXK(粤2011-0112，只可接收常规性的动物实验，对于放射性、感染性、化学毒性等特殊动物实验没有接收资格。

2、本表填写时注意红色部分内容需要重新选择，如无相关选项请选空白，请打印后手工填写，电子版发到]K]KLQ#PDLO V\VX HGX FQ，纸质版经试验负责人签名后提交给本中心213办公室李老师。

本中心审核的时限为10个工作日。

3、试验的主要内容、实验材料等内容用于判定实验的安全性和注意事项，以保护本中心实验设施和实验人员，请如实填写，本中心将为实验信息保密。

对于隐瞒实验内容者，将根据实际情况提出警告并记录在册，甚至取消该课题组实验资格。

对于造成实验动物环境设施破坏、人员健康危害等情况，本中心将汇报学校相应管理部门按规定处理。

4、实验人员必须持有动物实验资格证，否则实验申请不予受理。

5、现期间动物接收时间为每周二、周四上午9:00~11:30。

动物饲养如有特殊要求，如高脂、低盐饮食，饲料称重，饮水量测定等请在备注项注明。