高中生物实验知识：过氧化氢酶活性的测定

实验三过氧化氢酶活性的测定一、实验目的：了解过氧化氢酶的作用，掌握碘量法测定过氧化氢酶活性的原理和方法；二、实验原理:过氧化氢酶是一类色素蛋白，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢既是氧化剂又是还原剂。

R（Fe＋2）2＋H2O2---R(Fe+3OH)2R(Fe+3OH)2+ H2O2 ----R（Fe＋2）2+2H2O+O2并合上式：H2O2 ----2H2O+O2据此，可根据消耗H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。

在反应系统中加入一定量的过氧化氢溶液，经酶促反应后，加入过量的KI溶液生成的I2用标准的Na2S2O3滴定，根据N a2SO3消耗的体积计算H2O2的消耗量。

三、实验材料、仪器和试剂：1、实验材料：小白菜2、仪器：恒温水浴锅、研钵、容量瓶、刻度吸管、100mL三角瓶3、试剂：（1）0.05mol/L H2O2 （2）2mol/LH2SO4（3）0.1mol/L Na2S2O3（4）1%淀粉溶液（5）10%(NH4)6Mo7O24（6）pH7.8的磷酸缓冲液（7）20% KI（8）CaCO3四、实验步骤：（1）酶液提取：称取2.5g白菜叶，加少量CaCO3，2mLpH7.8的缓冲液少量，研成匀浆，移入100ml容量瓶，用上述缓冲液冲洗研钵数次转入容量瓶中定容，静置10分钟，过滤。

取滤液10mL于另一100mL的容量瓶中稀释定容待测（根据酶活高低而定）。

（2）酶促反应：取锥形瓶4个，编好号各加入10ml酶液之后，立即向两个瓶中加入2mol/L H2SO45mL，终止酶活性，作空白对照。

向另外两瓶各加H2O2 5mL，摇匀，在加入H2O2的那一刻起，记录时间，5分钟后迅速向实验瓶中加入2mol/LH2SO45mL，终止酶活性。

向三角瓶中加1mL 20% KI和3滴(NH4)6Mo7O24，摇匀后迅速用标准Na2S2O3溶液进行滴定至淡黄色，加入1mL1%淀粉指试剂，蓝色恰好消失，记录消耗的Na 2S 2O 3的体积V 0，V ；五、结果记录与数据处理：被分解的H 2O 2量（mg ）=（空白滴定值-样品滴定值）×Na 2S 2O 3摩尔浓度×17 过氧化氢酶活性（mg.g -1.min -1）=(min))()()(O H 22时间样品重测定取液量总体积量被分解的 g mg 六、 结果分析与问题讨论：实验十还原型V C含量测定一、实验目的学会从生物样品中提取维生素C方法,了解蔬菜中维生素C的含量。

植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积.H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。

过氧化氢酶可以清除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。

因此,植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。

本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性.一、过氧化氢含量的测定【原理】H2O2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H２SO4溶解后，在415nm波长下比色测定.在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系.【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。

【试剂】100μmol/L H2O2丙酮试剂：取30％分析纯H2O257μl,溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5％（W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水.【方法】1。

制作标准曲线：取10ml离心管7支,顺序编号，并按表40—1加入试剂.待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，415nm波长下比色.2.样品提取和测定：（1）称取新鲜植物组织2~5g（视H2O2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000 r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。

(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35—1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。

沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。

(3）向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。

3.结果计算:植物组织中H2O2含量（μmol/g Fw）=式中 C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度（μmol）;V t—样品提取液总体积（ml）；V1—测定时用样品提取液体积（ml）；FW-植物组织鲜重(g）。

过氧化氢酶活力检测方法过氧化氢酶（catalase）是一种重要的酶类物质，它在生物体内起着催化无毒的氧化还原反应，将过氧化氢（H2O2）分解成水（H2O）和氧气（O2）。

由于其在维持细胞内氢离子浓度、氧化还原平衡和细胞抵抗氧化应激等方面的重要作用，因此过氧化氢酶活性的准确测定和分析显得非常必要。

在实验室中，常用的过氧化氢酶活力检测方法主要有光度法、气体检测法和电化学检测法。

首先是光度法，这是一种常用的测定过氧化氢酶活力的方法。

实验中，可以通过分光光度计测量酶样溶液中过氧化氢的浓度的变化来推测过氧化氢酶的活性。

具体的测定步骤一般为：首先，在酶样溶液中加入过氧化氢；然后，在适宜的温度下进行一段时间的潜伏期；然后，用过氧化氢检测试剂滴定到一定浓度时，观察溶液的颜色变化，并用分光光度计读取吸光度。

根据吸光度的变化可以计算出过氧化氢酶的活性。

第二种方法是气体检测法，这是一种基于检测氧气产生的方法。

实验中，可以将过氧化氢溶液加入酶样溶液中，然后用带有氧气传感器的电极测量氧气的产生速率和浓度。

根据氧气产生速率的变化可以推断过氧化氢酶的活性。

第三种方法是电化学检测法，这是一种基于电流变化的方法。

实验中，可以将过氧化氢溶液加入酶样溶液中，然后通过电极测量氧气的生成速率。

根据电流的变化可以计算出过氧化氢酶的活性。

除了以上的方法，还有其他一些比较新颖的方法用于测定过氧化氢酶活性。

例如，近年来，一些研究人员采用蛋白质组学和质谱分析等技术，通过检测酶样溶液中蛋白质的表达水平和酶活性的相关性，来推断过氧化氢酶的活性水平。

总结起来，测定过氧化氢酶活性的方法有光度法、气体检测法、电化学检测法等。

不同的方法有各自的优缺点，例如，光度法具有操作简单、成本低廉的特点，但可能受其他物质的干扰；气体检测法具有灵敏度高的特点，但需要专门的仪器和高昂的成本；电化学检测法具有快速、灵敏的特点，但需要较高的技术水平和仪器要求。

研究人员可以根据实际需求和条件选择合适的方法来测定过氧化氢酶的活性。

植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积.H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。

过氧化氢酶可以清除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。

因此,植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。

本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性.一、过氧化氢含量的测定【原理】H2O2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H２SO4溶解后，在415nm波长下比色测定.在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系.【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。

【试剂】100μmol/L H2O2丙酮试剂：取30％分析纯H2O257μl,溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5％（W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水.【方法】1。

制作标准曲线：取10ml离心管7支,顺序编号，并按表40—1加入试剂.待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，415nm波长下比色.2.样品提取和测定：（1）称取新鲜植物组织2~5g（视H2O2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000 r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。

(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35—1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。

沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。

(3）向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。

3.结果计算:植物组织中H2O2含量（μmol/g Fw）=式中 C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度（μmol）;V t—样品提取液总体积（ml）；V1—测定时用样品提取液体积（ml）；FW-植物组织鲜重(g）。

高中生物实验知识：过氧化氢酶活性的测定过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中，能将过氧化氢分解为氧和水，可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。

测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。

用氧电极法测量放氧速度，方法灵敏而快速。

放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。

仪器药品氧电极仪记录仪电磁搅拌器超级恒温水浴注射器、微量注射器容量瓶反应杯亚硫酸钠过氧化氢酶50mmol/L磷酸缓冲液，pH7.0(见附表2)。

50mmol/L过氧化氢溶液：取1.4ml30%H2O2用磷酸缓冲液定容至250ml即得。

标准过氧化氢酶溶液：称取过氧化氢酶(Sigma)1.0mg(110U/mg)，溶于50mmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)11ml中，使酶浓度为10U/ml。

操作步骤1.仪器的标定按实验88步骤进行仪器的标定，以求得记录纸上每小格相当的含氧量。

2.绘制酶活性标准曲线(1)在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液，开启电磁搅拌器搅动10分钟，插入电极，吸去溢出在电极外面的溶液，调节移位旋钮，使记录笔位于满刻度的10─20%左右，使记录纸走动，1─2分钟后温度达到平衡，记录笔画出直线。

(2)用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110U/ml过氧化氢酶，立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。

(3)根据上述同样步骤，注入不同浓度的过氧化氢酶10μl(例如浓度为20、30、40、50U/ml等)，记录氧释放曲线。

(4)取放氧曲线的直线部分，根据其斜率及走纸速度，计算每分钟氧的释放量。

(5)以过氧化氢酶活性单位为横坐标，每分钟氧的释放量为纵坐标，绘制标准曲线。

3.样品测定(1)在反应怀内注入50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液搅动10分钟，插上电极，待记录为一直线后，注入10μl合适浓度的待测酶液样品，立即记下最初90秒钟内的放氧曲线。

(2)根据样品的放氧曲线，计算得到每分钟的放氧量，在标准曲线上查得酶活性大小。

(3)如果没有标准的过氧化氢酶，不能计算酶活性单位时，也可以用每分钟的放氧量相对地表示酶的活性大小。

过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）一、原理过氧化氢广泛存在于生物体和土壤中，是由生物呼吸过程和有机物的生物化学氧化反应的结果产生的，这些过氧化氢对生物和土壤具有毒害作用。

与此同时，在生物体和土壤中存有过氧化氢酶，能促进过氧化氢分解为水和氧的反应（H2O2→H2O+O2），从而降低了过氧化氢的毒害作用。

土壤中过氧化氢酶的测定便是根据土壤（含有过氧化氢酶）和过氧化氢作用析出的氧气体积或过氧化氢的消耗量，测定过氧化氢的分解速度，以此代表过氧化氢酶的活性。

测定过氧化氢酶的具体方法比较多，如气量法：根据析出的氧气体积来计算过氧化氢酶的活性；比色法：根据过氧化氢与硫酸铜产生黄色或橙黄色络合物的量来表征过氧化氢酶的活性；滴定法：用高锰酸钾溶液滴定过氧化氢分解反应剩余过氧化氢的量，表示出过氧化氢酶的活性。

本实验重点采用高锰酸钾滴定法。

二、试剂（1）2mol/L H2SO4溶液:量取5.43ml的浓硫酸稀释至500ml，置于冰箱贮存;（2）0.02mol/L高锰酸钾溶液：称取1.7g高锰酸钾，加入400mL 水中，缓缓煮沸15min，冷却后定容至500mL，避光保存，用时用0.1mol/L草酸溶液标定；（3） 0.1mol/L草酸溶液：称取优级纯H2C2O4?2H2O 3.334g,用蒸馏水溶解后，定容至250ml；（4）3%的H2O2水溶液：取30% H2O2溶液25ml，定容至250ml，置于冰箱贮存，用时用0.1mol/L KMnO4溶液标定。

三、操作步骤（1）分别取2~5g土壤样品于具塞三角瓶中（用不加土样的作空白对照），加入0.5mL甲苯，摇匀，于4℃冰箱中放置30min。

（2）取出，立刻加入25mL冰箱贮存的3% H2O2水溶液，充分混匀后，再置于冰箱中放置1h。

（3）取出，迅速加入冰箱贮存的2mol/L H2SO4溶液25mL，摇匀，过滤。

（4）取1mL滤液于三角瓶，加入5mL蒸馏水和5mL 2mol/L H2SO4溶液，用0.02mol/L高锰酸钾溶液滴定。

植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积.H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。

过氧化氢酶可以清除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。

因此,植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。

本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性.一、过氧化氢含量的测定【原理】H2O2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H２SO4溶解后，在415nm波长下比色测定.在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系.【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。

【试剂】100μmol/L H2O2丙酮试剂：取30％分析纯H2O257μl,溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5％（W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水.【方法】1。

制作标准曲线：取10ml离心管7支,顺序编号，并按表40—1加入试剂.待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，415nm波长下比色.2.样品提取和测定：（1）称取新鲜植物组织2~5g（视H2O2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000 r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。

(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35—1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。

沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。

(3）向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。

3.结果计算:植物组织中H2O2含量（μmol/g Fw）=式中 C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度（μmol）;V t—样品提取液总体积（ml）；V1—测定时用样品提取液体积（ml）；FW-植物组织鲜重(g）。

过氧化氢酶活性的测定过氧化氢酶（catalase）是一种重要的酶类，在多种生物体和植物中广泛存在。

其主要作用是将氧化还原反应中产生的过氧化氢（H2O2）转化成水（H2O）和氧气（O2）。

这个反应是非常重要的，因为H2O2是一种有害物质，会破坏细胞内的蛋白质、脂质和DNA等结构。

因此，过氧化氢酶不仅保护生物体内部结构的完整性，还保护它免受外部环境的伤害。

本文将介绍过氧化氢酶活性的测定方法。

实验材料：1. 1.5 mL离心管；2. 10% 过氧化氢溶液；3. 100 mM 磷酸缓冲液（pH 7.0）；4. 视网膜素（1 mg/mL）。

实验步骤：1. 将取自动物或植物的新鲜组织（例如肝脏、叶片、果实）切成小块，加入绞肉机中充分研磨，随后用冷水冲洗，挤出汁液，离心5分钟，去除颗粒，收集上清液作为酶提取物；2. 准备一组试管，分别加入0.1 mL酶提取物、0.5 mL100 mM磷酸缓冲液和0.4 mL 10% 过氧化氢溶液，并加入0.1 mL纯水作为对照试验管；3. 在试管中迅速混合，放在37℃恒温水浴中反应15分钟；4. 反应结束后，加入1 mL苯酚酐试剂，盖上盖子，轻轻颠倒，立即读取吸光度A405，并计算过氧化氢酶活性。

计算过氧化氢酶活性的公式为：过氧化氢酶活性（U/mg）= [（对照A405 - 试验A405）/ 对照A405] × 1000/ [反应体系总反应时间（分钟）÷ 酶提取体积（mL）] × 酶提取物的蛋白质浓度（mg/mL）其中，对照是不加入酶提取物的试验管，试验则是加入酶提取物的试验管。

以对照的A405为100%活性，试验管的活性则为相对活性。

过氧化氢酶的活性单位为U/mg，也可以表示为U/g或U/L。

本实验中，苯酚酐试剂可以与酶提取物中产生的H2O2发生氧化反应，形成深蓝色产物，进而测量吸光度，从而计算出过氧化氢酶的活性。

总之，本实验的目的是测定过氧化氢酶的活性，以此来了解生物体内的氧化还原反应是否正常，并研究它在细胞生物学中的作用。

实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定一、实验目的1.了解过氧化氢酶的作用和测定方法。

二、实验原理过氧化氢酶(CAT)是一种广泛存在于生物体内的酶，其主要作用是催化过氧化氢(H2O2)分解为水(H2O)和氧(O2)，具有清除细胞内产生的过氧化氢的作用，从而保护细胞免受氧自由基的损伤。

测定过氧化氢酶活性的基本原理是利用过氧化氢酶催化过氧化氢分解的特性，测定其对过氧化氢的催化效率，从而求得过氧化氢酶的活性。

三、实验步骤1.将0.05 mL的0.1 mol/L H2O2加入到0.95 mL反应液中，混匀。

2.分别分装0.1 mL过氧化氢酶标准液A(1 U/mL)、待测样品液和纯水于三个小瓶中。

3.向3个小瓶中加入0.6 mL反应液，混匀后立即读取吸光度值。

4.将三个小瓶依次放入比色皿中，加入等体积的反应液，混匀。

5.在室温下，按照每分钟一次，共计计时5分钟，依次读取吸光度值。

6.根据吸光度值计算过氧化氢酶的活性。

四、实验注意事项1.使用新鲜的过氧化氢酶，避免长时间贮存或受热的过氧化氢酶，因其活性会降低。

2.必须按照比色皿上的顺序加入待测样品、过氧化氢酶标准液和纯水。

3.测定过氧化氢酶活性时，要注意比色皿内的反应物混匀程度和加液顺序。

4.读取吸光度时，要记录时间，使时间相同，以便计算活性值。

五、实验结果处理1.计算反应液的吸光度(OD)值。

2.计算酶活性的计算式为：CAT活性=(sample-Blank)/F/(T2-T1)其中，sample为待测样品的吸光度值；Blank为加入纯水的比色皿的吸光度值；F为稀释系数；T2-T1为反应时间，单位为分钟。

1.活性计算结果应该合理，符合实验要求。

2.实验结果能够表明过氧化氢酶的活性。

七、实验总结本次实验通过测定过氧化氢酶活性的方法，了解了测定过氧化氢酶活性的原理，熟悉了测定过氧化氢酶活性的步骤和操作方法。

同时，也掌握了计算过氧化氢酶活性的方法以及如何进行实验结果分析。

过氧化氢酶的活性测定方法一：高锰酸钾滴定法1、实验目的：掌握高锰酸钾滴定法测定过氧化氢酶的活性的原理和方法。

2、实验内容：实验原理：过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。

据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。

在反应系统中加入一定量的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的H2O2。

即可求出消耗的H2O2的量。

试剂：10％H2SO4；0.2mol／L磷酸缓冲液pH7.8；0.02mol／L高锰酸钾标准液：称取KMnO4(AR)3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL，用0.1mol／L草酸溶液标定；0.1mol／L H2O2：市售30％H2O2大约等于17.6mol／L，取30％H2O2溶液5.68mL，稀释至1000mL，用标准0.02molKMnO4溶液(在酸性条件下)进行标定；0.1mol／L草酸：称取优级纯H2C2O2·2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。

操作步骤：3.1酶液提取：取高羊茅草叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲液少量，研磨成匀浆，转移至25mL 容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000r／min离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。

3.2酶反应过程取50mL三角瓶4个(3个测定，1个对照)，测定瓶中加入酶液2.5mL，对照瓶中加入煮死酶液2.5mL，再加入2.5mL 0.1mol／L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10％H2SO4 2.5mL。

3.3标定用0.02mol／L KMnO4标准溶液滴定H2O2，至出现粉红色(在30s内不消失)为终点。

3.4结果计算酶活性用每克鲜重样品1Min内分解H2O2的毫克数表示：酶活(mg／g·min)＝（A-B）×V T×1.7FW×V1×t（3-2）式中:A:对照KMnO4滴定毫升数(mL)；B:酶反应后KMnO4滴定毫升数(mL)；V T:酶液总量(mL)；V1:反应所用酶液量(mL)；W:样品鲜重(g)；1.7:1mL 0.1mol／L的KMnO4相当于1.7mg H2O2。

过氧化氢酶活性测定引言过氧化氢酶是一种广泛存在于生物体中的重要酶类。

它能够催化过氧化氢（H2O2）与还原物质反应，将H2O2分解成水和氧气。

过氧化氢酶在细胞中起着调节氧化应激及清除有害过氧化氢的作用。

因此，测定过氧化氢酶活性对于研究生物体的氧化应激反应以及评估细胞状态具有重要意义。

原理过氧化氢酶的活性可以通过测定其催化过氧化氢分解反应速率来确定。

本实验以庚酮过氧化物（DPI）为底物，通过酶反应将庚酮过氧化物氧化为二氧化碳和乙酰乙醛。

乙酰乙醛的生成量与过氧化氢酶的活性成正比。

实验中，首先准备一定浓度的庚酮过氧化物溶液，并将待测酶样品与庚酮过氧化物混合。

在特定条件下，观察反应体系中庚酮过氧化物的消耗程度。

通过测定庚酮过氧化物消耗量的变化，可以计算出过氧化氢酶的活性。

实验步骤1.准备实验所需试剂和仪器：庚酮过氧化物溶液、酶样品、缓冲溶液、试管、分光光度计等。

2.设置实验条件：温度、pH值等。

3.分别取适量的庚酮过氧化物溶液和酶样品，加入相应的缓冲溶液，混合均匀。

4.在一组对照实验中，将庚酮过氧化物溶液替换为缓冲溶液，以消除庚酮过氧化物自身的分解。

5.在指定的时间间隔内，从不同实验体系中取出一定量的反应液，用分光光度计测定庚酮过氧化物的吸光度。

6.计算不同时间点庚酮过氧化物消耗量的变化，并绘制庚酮过氧化物消耗曲线。

7.根据庚酮过氧化物的消耗速率计算过氧化氢酶的活性。

数据处理根据庚酮过氧化物的消耗曲线，可以确定反应速率。

通过比较对照组与实验组的反应速率，计算过氧化氢酶的活性。

过氧化氢酶的活性计算公式如下：活性（μmol/min/mg）= (△A/min * Vt) / (ε * d * Venz * t * Venz)其中，△A/min为每分钟庚酮过氧化物的吸光度变化量，Vt为总体系体积，ε为庚酮过氧化物的摩尔吸光系数，d为光程，Venz为酶样品的体积，t为反应时间。

结论通过测定过氧化氢酶的活性，可以评估生物体内的氧化应激程度以及细胞的状态。

过氧化氢酶活性的测定一、实验目的：掌握酶活性测定的基本方法二、实验原理：H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。

根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。

三、实验器材：紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；四、实验试剂：0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；0.1mol/L H2O2（用0.1mol/L高锰酸钾标定）。

五、实验步骤：1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g置研钵中，加入2～3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。

混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000rpm下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。

5℃下保存备用。

2.测定：取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表中顺序加入试剂。

表紫外吸收法测定H2O2样品液配置表管号S1S2S3粗酶液(ml)0.20.20.2pH7.8磷酸(ml) 1.5 1.5 1.5蒸馏水(ml) 1.0 1.0 1.0 25℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。

3.结果计算：以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。

过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=ΔA240*Vt/0.1*V1*t*FW 式中A240= A S0－(As1+As2)/2A S0—加入煮死酶液的对照管吸光值；A S1, A S2—样品管吸光值；Vt—粗酶提取液总体积（ml）；V1—测定用粗酶液体积（ml）；FW—样品鲜重（g）；0.1—A240每下降0.1为1个酶活单位（u）；t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。

植物体内过氧化氢酶活性的测定一、目的过氧化氢酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力均有关系，故常加以测定。

通过实验可了解过氧化氢酶的作用，并掌握测定过氧化氢酶活性的原理和方法。

二、原理过氧化氢酶把过氧化氢分解为水和氧，其活性大小，以一定时间内分解的过氧化氢量来表示，当酶与底物（H2O2）反应结束后，用碘量法测定未分解的H2O2量。

以钼酸铵作催化剂，使H2O2与KI反应，放出游离碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘，其反应式为：H2O2+ 2KI + H2SO4—→I2+ K2SO4+ 2H2OI2+ 2Na2S2O3—→2NaI + Na2S4O6根据空白和测定二者硫代硫酸钠滴定用量之差，即可求出过氧化氢酶分解H2O2的量。

三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：水稻叶、甘蔗叶及其他植物叶片。

2. 仪器设备：分析天平；恒温水浴；研钵；100ml容量瓶；100ml三角瓶；滴定管；滴定管架；移液管；移液管架；漏斗；洗耳球等。

3. 试剂及配制1.8mol·L－1H2SO410﹪(NH4.)6MO7O40.02 mol·L－1 Na2S2 O320﹪KI1﹪淀粉液CaCO3粉石英砂0.018﹪H2O2溶液配制：吸取30﹪H2O2原液0.3ml至50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后再稀释10倍。

四、实验步骤1. 过氧化氢酶的提取选取甘蔗功能叶片，擦净去主脉剪成碎片，混匀后迅速称取1g放入经冷冻过的研钵中，加少量CaCO3粉末及石英砂，并加入3～4ml蒸馏水，在冰浴上研磨至匀浆，用蒸馏水将匀浆通过漏斗洗入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀后过滤。

然后再取滤液10ml 至100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀即为酶稀释液。

2. 酶活性测定2.1取100ml容量瓶4个，编号，向各瓶准确加入稀释后的酶液10ml，立即向3、4号瓶中加入1.8mol·L－1H2SO45ml以终止酶活性，作为空白测定。

过氧化氢酶活力的测定碘量法过氧化氢酶（catalase）是一种重要的酶类，它能催化过氧化氢（H2O2）分解为水和氧气。

过氧化氢酶活力的测定是研究酶活性和酶功能的常用方法之一，其中碘量法是一种常见且简便的测定方法。

碘量法是通过测定过氧化氢酶活性对碘化钾溶液消耗的碘量来间接反映酶活力。

具体步骤如下：1. 实验前的准备准备好所需的试剂和仪器设备。

试剂包括：过氧化氢溶液、碘化钾溶液、淀粉溶液、酶提取液等。

仪器设备包括：移液管、比色皿、分光光度计等。

2. 样品制备将待测的样品加入适量的提取液中，研磨均匀，通过离心等手段将细胞碎片去除，得到酶提取液。

酶提取液中的过氧化氢酶即可用于后续的测定。

3. 碘化钾溶液的制备将一定浓度的碘化钾溶液配制好，一般浓度为0.1mol/L。

注意，碘化钾溶液需新鲜配制并保存在暗处，以免被光照射而分解。

4. 实验操作取一定体积的酶提取液，加入适量的过氧化氢溶液中，使其反应一段时间。

然后，加入适量的碘化钾溶液，停止反应。

接着，加入适量的淀粉溶液，使反应体系中出现蓝色。

5. 测定与计算将混合溶液转移至比色皿中，利用分光光度计测定其吸光度。

根据吸光度与碘量的比例关系，可以计算出碘化钾溶液中消耗的碘量。

而碘量与过氧化氢酶活性之间存在一定的定量关系，从而可以间接反映出过氧化氢酶的活力。

通过以上实验步骤，我们可以测定出过氧化氢酶活性的结果。

需要注意的是，在测定过程中要严格控制实验条件，如温度、pH值等，以保证实验结果的准确性和可靠性。

除了碘量法，还有其他方法可以测定过氧化氢酶活力，如比色法、荧光法等。

每种方法都有其适用的场景和优缺点，研究人员可以根据实际需要选择合适的方法进行测定。

碘量法是一种常用且简便的测定过氧化氢酶活力的方法。

通过测定碘化钾溶液中消耗的碘量，可以间接反映出过氧化氢酶的活力。

这一方法在生物化学和医学领域有着广泛的应用，对于研究酶的功能和活性具有重要意义。

植物生理学实验报告实验题目：过氧化氢酶活性的测定-紫外线吸收法姓名班级学号一、实验原理和目的H 2O2在240 nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。

根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性二、实验器具和步骤材料：海桐叶仪器与用具：紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；试剂:0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.0 、pH7.8 0.1mol/L H2O2步骤：1．称取植物材料0.3g，加入，0.1mo1/L磷酸缓冲液 (pH7.0) 6ml(分三次加入，最后两次用于洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆，以 6000r／min 离心15分钟，倾出上清液。

2.测定：取10ml试管2支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按下表顺序加入试剂。

管号S1S2(对照)粗酶液(ml)0.20.2（ph7.8PBS）pH7.8磷酸(ml) 1.5 1.5蒸馏水(ml) 1.0 1.03．测定: 25℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测2min，记录数据。

4.按下式计算酶活性。

结果计算：以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。

过氧化氢酶活性(u/gFW/min)= ΔA240* Vt/(0.1* t* FW *V1 )Vt—粗酶提取液总体积（ml）；—测定用粗酶液体积（ml）；V1FW—样品鲜重（g）；每下降0.1为1个酶活单位（u）；0.1—A240t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。

三、实验数据和作业过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=(1.546-1.526)*6/(0.1*2*0.3*0.2)=10四、数据分析过氧化氢酶活性较低，可能是由于叶片采集时间过久。

实验2 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）一、实验目的熟悉用滴定法测定过氧化氢酶活性。

二、实验原理过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系；过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。

可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。

在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。

即可求出消耗的H2O2的量。

5H2O2+2KMnO4+4H2SO4 = 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4三、实验器材1材料：植物叶片2仪器设备：研钵；酸式滴定管；恒温水浴；3试剂：10% H2SO4； 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml；0.1mol/L H2O2市售30% H2O2大约等于17.6mol/L，取30% H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml。

四、实验步骤1、酶液提取：取植物叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml量筒中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至量筒中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。

2、取50ml三角瓶2个（1个测定，另1个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。

3、用0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定，至出现粉红色（在30min内不消失）为终点。

五、实验结果酶活性用每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示：过氧化氢酶活性（H2O2mg/g/min）＝（A－B）×Vt×1.7/(W×V s×t)式中：A-对照KMnO4滴定ml数；B-酶反应后KMnO4滴定ml数；Vt-提取酶液总量（ml）；Vs-反应时所用酶液量（ml）；W-样品鲜重（g）；t-反应时间（min）；1.71ml0.1mol/L KMnO4相当于1.7mg H2O2六、实验思考过氧化氢酶与哪些生化过程有关?。

高中生物实验知识：过氧化氢酶活性的测定过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中，能将过氧化氢分解为氧和水，可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。

测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。

用氧电极法测量放氧速度，方法灵敏而快速。

放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。

仪器药品氧电极仪记录仪电磁搅拌器超级恒温水浴注射器、微量注射器容量瓶反应杯亚硫酸钠过氧化氢酶50mmol/L磷酸缓冲液，pH7.0(见附表2)。

50mmol/L过氧化氢溶液：取1.4ml30%H2O2用磷酸缓冲液定容至250ml即得。

标准过氧化氢酶溶液：称取过氧化氢酶(Sigma)1.0mg(110U/mg)，溶于50mmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)11ml中，使酶浓度为10U/ml。

操作步骤1.仪器的标定按实验88步骤进行仪器的标定，以求得记录纸上每小格相当的含氧量。

2.绘制酶活性标准曲线(1)在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液，开启电磁搅拌器搅动10分钟，插入电极，吸去溢出在电极外面的溶液，调节移位旋钮，使记录笔位于满刻度的10─20%左右，使记录纸走动，1─2分钟后温度达到平衡，记录笔画出直线。

(2)用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110U/ml过氧化氢酶，立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。

(3)根据上述同样步骤，注入不同浓度的过氧化氢酶10μl(例如浓度为20、30、40、50U/ml等)，记录氧释放曲线。

(4)取放氧曲线的直线部分，根据其斜率及走纸速度，计算每分钟氧的释放量。

(5)以过氧化氢酶活性单位为横坐标，每分钟氧的释放量为纵坐标，绘制标准曲线。

3.样品测定(1)在反应怀内注入50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液搅动10分钟，插上电极，待记录为一直线后，注入10μl合适浓度的待测酶液样品，立即记下最初90秒钟内的放氧曲线。

(2)根据样品的放氧曲线，计算得到每分钟的放氧量，在标准曲线上查得酶活性大小。

(3)如果没有标准的过氧化氢酶，不能计算酶活性单位时，也可以用每分钟的放氧量相对地表示酶的活性大小。

实验十四过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾标定法）一、实验目的过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。

通过本实验使同学们了解过氧化氢酶的作用，掌握其测定方法并比较不同植物或同一植物不同生理状态下过氧化氢酶活性的大小。

二、实验原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。

可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。

在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。

即可求出消耗的H2O2的量。

三、主要仪器、试剂、材料（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。

（三）试剂：1. 10% H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1 mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605 g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1 mol/L 草酸溶液标定；4. 0.1 mol/L H2O2市售30% H2O2大约等于17.6 mol/L，取30%H2O2溶液5.68 ml，稀释至1000ml，用标准0.1 mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5. 0.1 mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607 g，用蒸馏水溶解后，定容至1000 ml。

四、实验步骤、现象及记录（一）酶液提取：取小麦叶片2.5 g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25 ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000 rpm离心15 min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。

（二）取50 ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5 ml，对照加煮死酶液2.5 ml，再加入2.5 ml 0.1 mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10 min，立即加入10% H2SO4 2.5 ml。