紫外可见分光光度计的使用方法
1、电源开关，使仪器预热20分钟；
▪ 仪器接通电源后，仪器即进入自检状态，自检结束后波长自动停在546nm处，测量的方式自动设定在透射比方式（%T），并自动调100%和0%T。
注意：①开机前，先确认仪器样品室内是否有东西挡在光路上。光路上有东西将影响仪器自检甚至造成仪器故障。
②检查透过率模式下，挡光位置，透过率是否显示00.0%T。否则要调整暗电流，按“0%T”键，使透过率显示为00.0%T。返回对光位置时仍能显示100.0%T，否则重新调100%T。通过“▲”和“▼”键，设定测试波长；按“100%T”键，使透过率显示为100.0%。
如果您要获得被测样品的透射比参数时（透射比方式）：T
2、按 方式键“MODE”将测试方式设置为透射比方式：
▪ 显示器显示“xxnm xxx x%T”
3、按 波长设置键 “ ▲ ”或“ ▼
”设置您想要的分析波长，如340nm；
▪ 按 波长设置键“ ▲ ”或“ ▼ ”直到显示器显示“340nm xxx x%T”
▪ 每当波长被重新设置后，请不要忘记调整“100.0%T”。
4、将您的参比溶液和被测溶液分别倒入比色皿中；
▪ 比色皿内的溶液面高度不应低于25毫米，大约25毫升。否则，会影响测试参数的精确度。
▪ 被测试的样品中不能有气泡和漂浮物，否则，会影响测试参数的精确度。
5、打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。
▪ 一般情况下，参比样品放在样品架的第一个槽位中。
▪ 被测样品的测试波长在340nm—1000nm范围内时，建议使用玻璃比色皿，被测样品在190nm—340nm范围内时，建议适用石英比色皿。
▪ 仪器所附的比色皿，其透射率是经过测试和匹配的，未经匹配处理的，比色皿将影响样品的测试精确度。
▪ 比色皿的透光部分表面不能有指印、溶液痕迹。否则，将影响样品的测试精确度。
UV752紫外-可见分光光度计使用方法
一、仪器原理
物质对光的吸收具有选择性，在光的照射下产生吸收效应。不同的物质具有
不同的吸收光谱，当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减
弱的程度和物质的浓度呈一定的比例关系。在一定浓度范围内符合朗伯比尔定律：A=lg1/T=kcLT=I/I0A：吸光度；T：透光率；I：透过光强度；I0：入射光强度；
k：样品的吸光系数；c：样品浓度；L：吸收层厚度
二、使用方法1、预热：打开仪器电源预热30分钟。
2、放样品：手持比色皿毛面，用参比（空白）或样品溶液润洗比色皿2-3次，
将参比（空白）或样品溶液倒入比色皿约3/4高度，用擦镜纸将比色皿外液体擦
干，将透光面擦拭干净，依次放入样品架，盖上样品室盖。置入样品架时，石英
比色皿上端的“Q”、玻璃比色皿上端的“G”标记方向应一致。（紫外区200-340nm需使用石英比色皿，可见光区340-1000nm使用玻璃比色皿）
3、调波长：通过波长旋钮选择到所需波长位置。
4、选择模式：按MODE键切换测量值，A（吸光度）、T（透射比）、C（浓度）、
F（斜率）。指示灯亮的位置就表示切换到的位置。
5、调空白：
T模式下：把黑体拉入光路，按【0%T】键，待显示0.0，取出黑体；
T/A模式下：把装有参比溶液的比色皿拉入光路中，按【100%T/ABS0】键，
显示0.0。6、样品测量：将装有样品溶液的比色皿拉入光路中，读数即为该溶液的测量值。
7、实验结束：打开样品室盖，手持比色皿毛面并将其取出，盖上样品室盖，将
比色皿清洗干净，倒置滤纸上晾干。
产品名称 型号 技术参数 产地、厂家 单价
紫外可见分光光度计 SP--754 波长显示范围(nm) 190-1100 上海、上海光谱 9280.00
光谱带宽(nm) 4
波长准确度(nm) ±1
波长重复性(nm) 0.5
波长设置方式： 自动
光度范围 0-125%T, -0.097-3A 0.9999C(0-9999F)
光度准确度 ±0.5%T
光度重复性 0.3%T
杂散光 ≤0.3%T（在220nm 和340nm处）
稳定性(A/h,500nm处) ±0.002
基线平直度(Abs) ±0.002 外形尺寸：475、420、180、（mm）
仪器重量：11kg
产品名称 型号 技术参数 产地、厂家 单价
紫外可见分光光度计 SP--754PC 波长显示范围(nm) 190-1100 上海、上海光谱 14000.00
光谱带宽(nm) 4
波长准确度(nm) ±1
波长重复性(nm) 0.5
波长设置方式 自动
光度范围 0%T-125.0%T -0.097-3A 0.9999C(0-9999F)
光度准确度 ±0.5%T
光度重复性 0.3%T
杂散光 ≤0.3%T（在220nm 和340nm处） 稳定性(A/h,500nm处) ±0.002
第一节 紫外-可见分光光度法
一、紫外-可见吸收光谱
紫外-可见吸收光谱的产生
1．分子吸收光谱的产生——由能级间的跃迁引起
能级：电子能级、振动能级、转动能级
跃迁：电子受激发，从低能级转移到高能级的过程
2．分子吸收光谱的分类：
分子内运动涉及三种跃迁能级，所需能量大小顺序
3．紫外-可见吸收光谱的产生
由于分子吸收紫外-可见光区的电磁辐射，分子中价电子（或外层电子）的能级跃迁而产生
（吸收能量=两个跃迁能级之差）
二、基本原理
（一）Lamber-Beer定律：吸收光谱法基本定律
描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系
假设一束平行单色光通过一个吸光物体
讨论：
1．Lamber-Beer定律的适用条件（前提）
入射光为单色光
溶液是稀溶液
Lamber-Beer定律的描述了一束平行单色光穿过一定厚度液层时，吸光度与溶液浓度和光路长度之间的关系。
A=-lgT=0lgII=ECL
式中A-吸光度， T-透光率，E-比例常数， C-被测物质溶液的浓度，L-光路长度。比例常数E是物质的物理常数，它与入射光的波长和物质性质有关而与光的强度、溶液的浓度及液层厚度无关；随浓度C单位的不同，吸收系数E有不同的表示方法。
当C以“mol/L”为单位时，E称为摩尔吸收系数，用ε表示；当用“g/100ml”为单位时，E称为百分吸收系数，用1%1cmE表示。在药品检验中使用百分吸收系数（1%1cmE），其物理意义是当吸光物质溶液的浓度为1%（1g/100ml），液层厚度为1cm时，在一定条件下的吸光度。
2．该定律适用于固体、液体和气体样品
3．在同一波长下，各组分吸光度具有加和性
应用：多组分测定
（二）吸光系数和吸收光谱
1．吸光系数的物理意义：
单位浓度、单位厚度的吸光度
讨论：
1）E=f（组分性质，温度，溶剂，λ）
