红曲中桔霉素的发酵,分离,纯化现状与改良

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红曲的应用状况及发展

滁州学院课程论文题目：红曲及红曲色素的应用与发展趋势课程名称食品添加剂考查学期2014 / 2015 学年第一学期考查方式课程论文姓名苏丹学号专业农产品质量与安全成绩指导教师蔡华珍红曲及红曲色素的应用与发展趋势摘要：红曲是具有我国特色的自然资源，被广泛用于食品、医药等行业。

该文中介绍了红曲色素及功能性红曲在国内外的生产及市场现状，考察了红曲在开发、应用中存在的问题及未来的研究和发展方向，并展望了功能性红曲在国际市场中的发展前景。

关键词：红曲；红曲色素；应用领域；发展趋势Abstract:Red koji is a kind of natural resource with Chinese characteristic and has been extensively used in food and medicine industry. Currentsituation about its production and market both at home and abroad are introduced in this paper. In addition, the problems in R&D, application andtrend of functional red koji are reviewed also.Key word：red koji;Monascus pigment； application; trend前言红曲是一种具有悠久应用历史的药食两用品。

近年来，由于合成色素的安全性受到质疑，天然色素日益受到人们的重视。

近年来药理学家发现，红曲入药，是一种出色的降血脂、降血压天然药物。

在李时珍主编的巨着《本草纲目》一书中即收载有若干个含有红曲成分的治病良方。

中国中科院研究人员开发的以红曲为原料的降脂新药“乐脂平”，疗效可与美国公司开发的他汀类降脂药物媲美，国外称之为“中国他汀”。

桔霉素检测技术研究现状及展望

桔霉素检测技术研究现状及展望李秀利;曹学丽;廖永红【摘要】Citrinin is a toxic secondary metabolites produced by severalfungi ,w hich exists widely in food. The mycotoxin is hepatonephrotoxic and implicated in disease outbreaks in animals and humans. In recent years ,it attracts wide concerns in the field of food safety ,and its detection methods are continuous-ly improved. In this paper ,the physicochemical properties ,toxicities ,sources ,sample pre-treatment and analytical methods of citrinin were reviewed in detail ,and the detection of citrinin in monascus products and red sufu ,a vast consumptive traditional Chinese food were also discussed.%桔霉素是霉菌的次级代谢产物，在食品中广泛存在，对人和动物具有肾毒性，近年来在食品安全领域受到广泛关注，桔霉素的分析检测方法也不断发展进步。

文章对桔霉素的理化性质、毒性、来源、及其分析方法、前处理方法进行了详细综述，并对我国食用历史悠久、食用量大的红曲及其相关产品中桔霉素的分析检测问题进行了探讨。

【期刊名称】《分析仪器》【年(卷),期】2014(000)001【总页数】6页(P1-6)【关键词】桔霉素;分析方法;前处理方法;食品;红曲产品【作者】李秀利;曹学丽;廖永红【作者单位】北京工商大学食品学院，食品添加剂与配料北京高校工程研究中心，北京100048;北京工商大学食品学院，食品添加剂与配料北京高校工程研究中心，北京100048;北京工商大学食品学院，食品添加剂与配料北京高校工程研究中心，北京 100048【正文语种】中文1 前言桔霉素（citrinin）分子式为C13H14O5，分子量为250.25，结构式如图1，是一个醌类的甲基化合物，具有荧光特性（λex＝331nm，λem＝500nm），在低pH、β－CD环糊精溶液、乙腈、醋酸环境中荧光性会加强［1］。

红曲的化学成分、药理作用及临床应用研究进展

红曲的化学成分、药理作用及临床应用研究进展阅读笔记1. 红曲菌Monascus spp.隶属真菌门子囊菌亚门不整囊菌纲散囊菌目红曲科红曲属，以菌丝体及孢子入药，菌株大致可分为3种：安卡红曲霉Monascus ankasp.、丛毛红曲霉Monascus pilosusSato及紫色红曲霉Monascus purpureusWent。

其培养物大多呈现紫红色，古代称丹曲，又称红曲，主要以大米为原料，接种红曲菌发酵而成。

红曲在我国的使用历史已有1000余年之久，广泛用于中药、酿酒、食品着色等方面。

红曲味甘，性温，归肝、脾、胃、大肠经，具有消食和胃、活血止痛、健脾燥胃之功效。

现代研究表明，其含有的他汀类、脂肪酸、甾醇、色素等成分具有调节血脂、抗炎、抗肿瘤、抗氧化等药理作用。

20世纪70年代，日本学者从红曲中分离筛选出了具有调节血脂作用的生理活性物质莫纳可林K，掀起了对红曲研究的热潮，至今已取得了斐然成果。

2. 红曲中的化学成分分类代表药物莫纳可林类洛伐他汀，成为首个上市的调脂药，其能够显著降低胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterin，LDL-C）水平，是他汀类调脂的代表药。

近年来，洛伐他汀的抗肿瘤作用也成为了研究的热点，研究发现其对肺癌、胃癌、鼻咽癌、宫颈癌等多种常见恶性肿瘤都有明显的抑制作用。

甾 1.麦角甾醇又称麦角固醇，是红曲发酵过程中产生的主醇类要维生素类化合物，也是微生物细胞膜的主要成分之一。

麦角甾醇为维生素D2的前体物质之一，经紫外线照射发生结构转化生成维生素D2，参与人体内钙和磷的代谢，并影响细胞增殖分化。

研究发现，维生素D2还和癌症、骨质疏松症、自发性免疫疾病、心血管疾病等多种疾病有关。

麦角甾醇可显著降低糖尿病肾病模型小鼠的血糖水平，为麦角甾醇用于糖尿病肾病的临床治疗提供了理论依据。

2.豆甾醇又称豆固醇，是一种植物甾醇，广泛存在于多种植物种子中。

红曲发酵过程中桔霉素和黄曲霉毒素的检测方法及控制对策刍议

０１．６
文章编号：０２５４ — ５０７１（２０１７）０８ — ０１２５ — ０５
ｄｏｉ：ｌ０．１１８８２４．ｉｓｓｎ．０２５４ — ５０７１．２０１７．０８．０２７
ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｓｒａｔｔｅｇｉｅｓｏｆｃｉｔｒｉｎｉｎｎｄａａｌｆａｔｏｘｉｎｓｄｕｒｉｎｇＭｏｎａｓｃｕｓｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ
生产过程中如何快速准确检测桔霉素和黄曲霉毒素以及如何有效进行控制，成为了当前亟待解决的问题。该文对近年来国内外对于红曲产品中桔霉素和黄曲霉毒素的检测方法以及控制策略进行了综述，同时分析了各检测方法的优缺点，以期为提高红曲产品的安全性提供一定的参考，从而促进我国传统红曲产业的发展。关键词：红曲；桔霉素；黄曲霉毒素；检测方法；控制对策
ＳｉｃｈｕａｎＰｒｏｖｉｎｃｅｎｄａＭＯＳＴ，ＰｈａｒｍａｃｙＣｏｌｌｅｇｅ，ＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴａｄｒｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１１１３￣Ｃｈｉｎａ）

红曲色素和桔霉素代谢调控方法的研究进展

抑制桔霉素的产生成为解决这一矛盾的关键。文章介绍了国内外红曲色素和桔霉素的代谢调控方法的
研究概况，主要包括茵种选育、发酵工艺优化及基因工程等来达到调控目的，通过掌握红曲茵代谢调控
网络，研究红曲茵产桔霉素的代谢途径及途径中的代谢机制，进而综合分析调控红曲霉合成代谢桔霉素
存在的问题并提出应对措施，对推动红曲产品的出口和红曲产业的健康发展具有重要意义。
关键词：红曲茵；真茵毒素桔霉素；红曲色素；调控
中图分类号：ＴＳ２０１．５７文献标志码：Ａ
ｄｏｉ：１０．３９６９／］．ｉｓｓｎ．１０００—９９７３．２０１８．０２．０４５
第４３卷第２期２０１８年２月
中国调味品
ＣｈｉｎａＣｏｎｄｉｍｅｎｔ
专论综述
红曲色素和桔霉素代谢调控方法的研究进展
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
黄颖颖ｈ，陈慎，杨成龙ｈ，陆东和ｈ。
（１．福建省农业科学院农业工程技术研究所，福州３５０００３；２．福建省农产品发酵加工工程技术研究中心，福州３５０００３）
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＦｕｊｉａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，
Ｆｕｚｈｏｕ３５０００３，Ｃｈｉｎａ；２．ＦｕｊＪａｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔＦｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００３，Ｃｈｉｎａ）

红曲红色素深层发酵桔霉素的控制

不同条件下产桔霉素差异的形成可能与外界因素诱导基因组产生差异表达有关。日本厚生省在
２１１培养基．．（）分离培养基ＰＡ：２％马铃薯１０ｍ，１Ｄ０００Ｌ葡萄糖２ｇ０，琼脂２ｇ０；（）分离培养基ＣＡ：蔗糖３，酵母膏２Ｙ％
对人畜有害的真菌毒素桔霉素（ｉｉｎ，使红Ｃｔｎ）ｒｉ
曲菌产品在世界范围内应用受到限制，ＰＪＢａｃ．．ｌｎ
２材料与方法
２１红曲茵优良菌种的选育．
认为，桔霉素的产生与红曲菌次生代谢产物的代谢途径，与红曲菌培养方式及培养基组成密切相关，同一菌株不同条件下可能产或不产桔霉素，
产或低产桔霉素；③ 能充分利用现有的培养基（以大米、黄豆为主要原料）进行产业化大生产；红曲红深层发酵低产或不产桔霉素（ｉｉｉ）的生产工艺条件及控制方法。Ｃｔｎｎｒ关键词：红曲菌；红曲红色素；深层发酵；桔霉素
Ｃｉｎｎｃｎｒｌｎｐｏｅｓｎｎｓｕｅｒｉｏｔｒｃｓｉｇｍｏａｃｓｒｄｉｏｉ
（）化学诱变２制备孢子悬浮液，用００．１～０１２Ｏ．ＭＨＮ３和
１Ｍ醋酸（Ｈ．）处理，震荡摇匀５～３ｒｎｐ４５０ｉ，再ａ用００Ｍａ２Ｏ．５ＮＨＰ４作缓冲液（Ｈ．）终止反应。ｐ８０涂布平板培养（温度３～３℃ 、时间６～８天）２５。
ＮＮ３．％～０４，ＭｇＯ０２～０４，黄ａＯ０２．％Ｓ．％．％豆２％～３，蛋白胨２～３，玉米浆０２％％％．％～

食品添加剂红曲红中桔霉素检测方法的研究

食品添加剂红曲红中桔霉素检测方法的研究 3柴秋儿 , 田亚琼 , 钟其顶 , 李惠宜(中国食品发酵工业研究院 , 北京 , 100027)摘要食品添加剂红曲红中桔霉素限量问题已成为近年来国内外研究热点。

目前 ,国内缺乏专门针对红曲红色素中桔霉素检测的标准方法。

文中在综合分析国内外相关桔霉素检测方法技术资料的基础上 ,通过试验 ,对粉状样品预处理条件进行了优化 ,研究了适合我国生产的红曲红色素中桔霉素检测方法。

粉状红曲红样品先用体积分数 50 %乙醇配制成一定浓度的试样液 ,试样液在优化的树脂分离条件下进行洗脱 ,然后采用高效液相色谱法测定洗脱液中的桔霉素含量。

实验结果显示 :优化的树脂分离条件能较好地洗脱样品中的桔霉素 ; 配有荧光检测器的高效液相色谱仪能较灵敏地检出桔霉素含量 , 方法检测限为 01 2 μg/ L , 基质加标平均回收率为1051 5 % ,相对标准偏差 ( RS D ) 为 21 2 % 。

关键词红曲红色素 ,桔霉素 ,预处理 ,高效液相色谱红曲红是红曲霉在生长代谢过程中产生的红色物质 ,为酮类衍生物[ 1 ]。

我国红曲红常规生产方式有2 种 ,1 种是以红曲米为原料 ,经萃取、浓缩、精制而得到 ;另 1 种是以大米、大豆等为主要原料的液体培养基 ,经红曲霉( M on a sc u s a n k a N a k a z a w a et s a t o ) 菌液体发酵培养、提取、浓缩、精制而成[ 2 ] 。

市售产品以液体深层发酵方法为主。

红曲红作为一种安全性高的天然色素广泛用于各类食品中。

日本是红曲红色素生产和使用较多的国家 ,在肉制品发达的欧美等国也有使用红曲类产品替代部分其他着色剂的需求。

1995 年 ,法国人 Bla n c 博士证实红曲霉菌产生真菌毒素 ———桔霉素 ( C it ri n i n ) [ 3 ] ,至此 ,红曲红的食用安全性受到挑战。

碱处理法脱除红曲色素中桔霉素

２．２碱处理条件对处理结果的影响
１材料与方法
１．１材料
红曲原料由福建省古田县平湖酒曲厂提供。薄层层析板采用硅胶ＧＦ２５４，５０ｍｍｘ２００ｍｍ；上海信谊仪器厂生产。其它化学试剂为分析纯。
图１为不同处理条件下碍到的红曲色素于ｋ＝３６０ｎｍ处的薄层色谱扫描图。如图所示。未处理的红曲色素出现７个色谱峰，其中．５０和ｒｈ６．６处的色谱峰发生重叠；经过常温碱处理６ｈ后，Ｒｌｏ．３２处的色谱峰基本消失，．５０和
２结果与讨论
２．１红曲色素组分的薄层色谱
扩张以及上皮细胞坏死。桔霉素可溶于有机溶剂，红曲色素的提取采用有机溶剂提取。故采用目前工艺得到的红曲色素可能含有桔霉素。桔霉素的存在给红曲色素及红曲产
关键词红曲色素，桔霉素，处理
红曲是以粮食为原料．红曲菌（Ｍｏｎａｓｃｕｓ）培养过程的
代谢产物…。据报道，从红曲中提取的红曲色素主要是一些红色和黄色组分Ｕ－］，不但可以用作食品着色剂，而且在医
２．２．２沸水浴碱处理时问对结果的影响
４郝常明．罗袜．红曲制品的桔霉素（ｅｉｔｒｉｎｉｎ）ｆｎ＇］题及应对措施．中国食品添剂．２００２（１）：３０ — ３３

红曲菌中桔霉素的控制策略及研究进展

红曲菌中桔霉素的控制策略及研究进展李贞景，薛意斌，刘妍，徐晗，任志远，王昌禄*（天津科技大学食品工程与生物技术学院，食品营养与安全教育部重点实验室，天津 300457）摘要：红曲菌在我国的使用历史悠久，其在食品添加剂、发酵食品、酿酒和中药等方面应用广泛。

目前，虽然液态发酵技术基本解决了红曲色素产品中的桔霉素含量高的问题，但固态发酵红曲米产生的桔霉素含量高的问题依然是制约红曲企业及产业发展的主要技术难题之一。

本文对红曲菌代谢产物中桔霉素的毒性、限量标准、检测方法、合成途径及调控基因进行了综述，并从传统方法和生物方法两个层面阐述了控制红曲菌中桔霉素含量的主要策略，旨在为有效降低红曲菌中桔霉素的含量和促进红曲产业健康发展提供参考。

关键词：红曲菌；桔霉素；毒性；合成途径；控制策略Recent Progress on Control Strategies against Citrinin in Monascus spp.LI Zhenjing, XUE Yibin, LIU Yan, XU Han, REN Zhiyuan, WANG Changlu *(Key Laboratory of Food Nutrition and Safety, Ministry of Education, College of Food Engineering and Biotechnology,Tianjin University of Science and Technology, Tianjin 300457, China)Abstract: Monascus spp . has a long history of use in food additive, fermented food, winemaking and traditional Chinese medicine in China. At present, although the problem of the presence of citrinin in Monascus pigments produced by liquid-state fermentation has been substantially solved, high levels of citrinin produced by Monascus spp. during solid-state fermentation are one of the main technical difficulties in the production of pigments by Monascus spp. In this paper, the toxicity, national standard limit, analytical methods, synthesis pathway and regulatory genes of citrinin as a secondary metabolite of Monascus spp. are summarized. Also, the main strategies for controlling the biosynthesis of citrinin by Monascus spp. are reviewed including traditional and biological methods. This review aims to provide guidance for effectively reducing the content of citrinin in Monascus pigments and promoting the healthy development of Monascus industry.Keywords: Monascus spp.; citrinin; toxicity; synthesis pathway; control strategy DOI:10.7506/spkx1002-6630-201817042中图分类号：TS201.6 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2018）17-0263-06引文格式：李贞景, 薛意斌, 刘妍, 等. 红曲菌中桔霉素的控制策略及研究进展[J]. 食品科学, 2018, 39(17): 263-268. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201817042. LI Zhenjing, XUE Yibin, LIU Yan, et al. Recent progress on control strategies against citrinin in Monascus spp.[J]. Food Science, 2018, 39(17): 263-268. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201817042. 收稿日期：2017-06-08基金项目：国家自然科学基金重点项目（31330059）；国家自然科学基金面上项目（31171729）第一作者简介：李贞景（1980—），男，助理研究员，博士，研究方向为发酵食品及其开发。

桔霉素红曲桔霉素控制对策

２．１从发酵工艺条件来抑制甚至阻断桔霉素的生物合成许多相关的研究表明，针对不同的红曲霉菌株，采用各种优化的培养条件，能够有效地降低红曲中桔霉素的含量。在发酵工艺的优化过程中，即要考虑尽量降低桔霉素产量，同时也必须保证红曲产品中有效物质的含量。因此整个优化过程需要围绕着如何提高目标产物与桔霉素的产量比值而进行。２．１．１通过改良培养基的组分降低桔霉素的产量培养基的成分对桔霉素产量影响显著。Ｂｌａｎｃ等
１７］Ｕ／ｇ。Ｗａｎｇ等［利用桔霉素对枯草杆菌具有抑菌活
［５］
曲色素合成，但意外的发现此举对红曲色素的合成几乎没有影响，却显著的抑制了桔霉素的合成。进一步研究表明，中链脂肪酸或其相应的甲基酮可能通过诱导菌体的过氧化物酶体合成过氧化氢，进而引起桔霉
８］经两年的生产试素或其中间产物的降解。胡文林等［
验跟踪，提出了红曲菌在有机氮源丰富的培养基中较容易产桔霉素，尤其是以酵母粉为氮源的培养基更易产生桔霉素。另外，碳、氮比也是高色价、低产桔霉素的基本保证，一般控制碳、氮比为８ ∶ １．５较合适。２．１．２通过调节发酵工艺参数控制桔霉素的产量发酵工艺参数的变化也能够影响到桔霉素的产量。
１红曲桔霉素概述
１．１红曲桔霉素的发现及毒性研究
１］１９８１年，Ｗａｎｇ等［从红曲中分离出一种抑菌因［２］子，命名为ＭｏｎａｓｃｉｄｉｎＡ。１９９３年，Ｂｌａｎｃ对
ＭｏｎａｓｃｉｄｉｎＡ进行吸收光谱、ＮＭＲ、ＭＳ等方面特征分析，得出ＭｏｎａｓｃｉｄｉｎＡ就是桔霉素的结论。研究表明桔霉素具有一定肾毒性和肝毒性，且能够致畸、引发肿瘤、诱发突变。尽管人们对桔霉素毒性

关于红曲霉产桔霉素规律的初步探讨

Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３００４７，Ｃｈｉｎａ；２．ＴｈｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｙｒｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅｏｆＭＯＥＪｉａｎｇｘｉ — ＯＡＩＪｏｉｎｔＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，
杨，李燕萍，熊勇华
氨基丁酸和乙酰胆碱具有控制血压的功效；麦角固醇经紫外线照射后逐步转化为ＶＤ：，而ＶＤ是一种重要药品，可防治幼儿的佝偻病，对促进孕妇和老年人的钙磷的吸收有明显作用；他汀类化合物具有抗骨质疏松的功效，而且是目前惟一发现的，通过增强骨细胞中骨形成蛋白基因的表达来增加骨骼密度的一类物质，可以逆转骨质疏松这一进程。所有这一切，使得古老的红曲
（日本）、
２．２标准曲线的绘制
ＷＡＴＥＲＳ４２０荧光检测器（美国）。
将标准样品稀释成不同浓度（１、２．５、５、１０、２５、５０、１２５、２５０ｕｅＣｍＬ）进样，每次进样１０ｕＬ，根据标品浓度
（ＨＰＬＣ）ｄｕｉｒｎｇｔｈｅｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ．ＴｈｅｓｒｔａｉｎＡＳ３．４３８４ｔｈａｔｐｒｏｄｕｃｅｄ

红曲中桔霉素的分析检测

各国的桔霉素检测方法
香港中文大学Hin-chung Wang等采用先酸化沉淀，将滤出液冷冻干燥后再相继用 95%的乙醇和乙酸乙酯萃取，蒸干后溶于苯，用色谱柱分离，收集相关部分进行 TLC分析
荷兰科学家Monica等用等体积的氯仿和甲醇萃取红曲样品，萃取液经真空浓缩至干、溶解于流动相，进行HPLC分析
桔霉素的形成机理
在红曲霉培养时,首先由一个乙酰辅酶A 分子和四个丙二酰辅酶A 分子缩合成戊酮,然后分经两条途径:一条途径是此戊酮再与丙二酰辅酶A 分子缩合成己酮,最后生成红曲色素；另一途径是此戊酮经甲基化、缩合、还原、烷基化、还原、氧化、脱水等步骤,最后生成桔霉素。
桔霉素的处理方法：1)加热处理；2)氧化处理；3)微波处理。
流动相pH
• 根据大多数文献资料，流动相的pH都设定在2.5。这主要是因为，当桔霉素溶液的pH 为2.5时，桔霉素呈非离子状态，在荧光检测器检测时信号最强.
在不同的流动相配比条件下桔霉素与其它杂质的分离效果比较
桔霉素的三个最大吸收峰： 222.6nm、254nm、325nm
柱温 : 2 8℃
6.紫外检测
红曲样品双向展开示意图
第二相
第一相
高效液相色谱法
高效液相色谱法能精确测定红曲中桔霉素含量，采用紫外检测器，需对样品进行预处理和板层析，最低检测浓度为１mg/L；采用荧光检测器，由于桔霉素本身具有在激发态下产生荧光的特性，而其它色素在这一波长范围内不具备激发荧光的条件，因而不需对样品进行预处理，桔霉素的测定也不受干扰，检测结果的重现性好。
底物显色反应
• 每孔加反应底物100μL （ 40mg邻苯二胺溶于 100ml，pH5.0，0.1mol/l柠檬酸-0.2mol/l磷酸氢二钠缓冲溶液，再加入150μLH2O（现配现用）， 37℃避光反应30min，每孔50μL，2mol/l硫酸终止反应，5min后以空白对照孔调零，490nm测吸光值。

实验8-1红曲霉的分离纯化

实验8-1 红曲霉的分离纯化一、实验目的熟悉红曲霉菌种的分离纯化方法。

二、实验原理红曲霉广泛分布于自然界，因此可以从自然界中分离纯化得到。

鉴于我国劳动人民很早就开始利用红曲，他们将红曲霉制成了各种各样的发酵食品，因此，要得到红曲霉菌种，最简便的办法是直接从这些发酵食品中去分离。

培养红曲霉多用麦芽汁琼脂培养基，红曲霉在该培养基上生长良好，菌落较大，培养初期菌落为白色，老熟后变为淡红色、紫红色、橙红色、烟灰色等，因种而异。

菌落有呈绒毡状的，也有呈皮膜状的，呈皮膜状的菌落少褶皱或只有辐射纹。

红曲霉在马铃薯培养基（PDA）上呈现局限性生长，而不像在麦芽汁琼脂上那样蔓延。

某些种能在PDA培养基上形成疮疤状菌落。

红曲霉产生的是水溶性红色色素，能分泌到培养基中，使培养基着色。

三、实验器材与试剂1. 样品市售红曲米或红曲酒酒药。

2. 培养基（1）半合成培养基：葡萄糖30g，NaNO3 3 g，酵母提取物1 g，K2HPO4 1 g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5 g，FeSO4·7H2O 0.01 g，pH5.6，用蒸馏水定容至1 L。

固体培养基添加20 g琼脂；（2）麦芽汁培养基：5～8。

P麦芽汁；（3）豆芽汁培养基：豆芽200 g，加水1000 mL，煮沸10 min后过滤，滤液加2％葡萄糖即成，固体培养基添加2％琼脂。

3. 器材水浴锅、培养箱、灭菌锅、培养皿、移液管、试管等。

四、实验步骤1. 实验准备配制上述半合成固体培养基（或麦芽汁培养基、豆芽汁培养基），高压蒸汽灭菌；准备无菌水，移液管、培养皿等，灭菌备用；实验前将培养基倒入平皿中，冷却凝固后于30 ℃培养箱中放置5～6 h，以烘去冷凝水。

2. 红曲霉的分离纯化称取红曲米5 g，放入45 mL无菌水中，振荡摇匀后置于60 ℃水浴中保温30 min以杀死不耐热的细菌及酵母，将上层孢子悬液用稀释涂平板法分离，30℃培养5 d，挑取能产红曲色素的霉菌单菌落，用显微镜检查是否纯种（细胞形态是否一致），确认后保存。

红曲色素固态发酵优化研究

关键词：红曲色素：桔霉素；正交实验
中图分类号：ＴＱ９２５＋．７
文献标识码：Ａ
文章编号：１６７４ — ５０６Ｘ（２０１３）０１ — ００４６ — ０００４
ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＳｏｌｉｄＦｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆＭｏｎａｓｃｕｓＰｉｇｍｅｎｔ
（西华大学生物工程学院。四川成都６１００３９）
摘要：以色价和桔霉素为指标，通过正交实验对红曲霉ＡＳ３．５３进行了优化研究
结果表明：装料量６０ｇ／２５０ｍＬ、温度３７ ℃、ｐＨ５．５、培养基初始含水量７０％时色价达到最高；装料量４０ｇ／２５０ｍＬ、温度３７ｏＣ、ｐＨ５．０、培养基初始含水量６０％时，桔霉素的生物合成量最低，综合考虑高色价和低桔霉素。最优发酵条件为装料量５０ｇ／２５０ｍＬ、温度３７￣Ｃ、ｐＨ５．０、培养基初始含水量７０％，此条件下色价为２５６Ｕ／ｇ，桔霉素含量为０．０８０５１￣ｇ／ｇ。
ＡＳ３．５３１ｐｒｏｄｕｃｉｎｇＭｏｏｓｎｃｕｓｐｉｇｍｅｎｔｗｅｒｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔ：ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｅｏｎｄｉ・

红曲霉固态发酵控制条件对色素及桔霉素生产的影响

红曲霉固态发酵控制条件对色素及桔霉素生产的影响张红梅;靳赛;伍家发;牛明福;龚明贵【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2008(036)017【摘要】[目的]探讨红曲霉固态发酵控制条件对色素及桔霉素生产的影响.[方法]通过改变红曲霉(FF-6202)固态发酵的条件,研究发酵过程中烘干温度,发酵时间,接种量,发酵温度及翻曲次数对色素和桔霉素的影响.[结果]50℃时桔霉素的含量最大.随着温度升高,色素和桔霉素损失增大.桔霉素的生成量随着固态发酵时间的延长而增大,到96 h时达到最大.所产色素随着接种量的增加而增多,12%接种量时为最多.变温培养时红曲霉产桔霉素量增加,恒温培养时色价高于变温培养时.降低固态发酵翻曲次数.可同时降低桔霉素和色素的产量.[结论]红曲霉固态发酵最佳控制条件为:烘干温度50℃,发酵时间在96 h内,接种量12%,温度恒温34℃.发酵后期的翻曲次数减少为1次.【总页数】3页(P7066-7067,7106)【作者】张红梅;靳赛;伍家发;牛明福;龚明贵【作者单位】河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳,471003;黄河科技大学,河南郑州,450006;河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳,471003;河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳,471003;河南科技大学食品与生物工程学院,河南洛阳,471003【正文语种】中文【中图分类】Q939.97【相关文献】1.红曲霉菌9903发酵工艺条件对色素及桔霉素生产的影响 [J], 顾玉梅;许赣荣;陈蕴;刘绍艳;徐人敬2.脂肪酸对红曲菌M2液态发酵生产色素和桔霉素的影响 [J], 赵靖;沈艳华;李晨阳;赵树欣3.不同液态发酵基质对红曲霉产红曲色素及桔霉素的影响 [J], 吴宏;代文婷;连喜军;郭安民;吴洪斌4.不同温度对红曲霉液态发酵合成红曲黄色素及桔霉素的影响 [J], 况嘉铀;屈廷啟;韦胜;王伟平5.氯化铵对紫色红曲霉固态发酵红曲色素和桔霉素合成的双向调控作用 [J], 周文斌;黄梓芮;洪家丽;李路;郭伟灵;蒋雅君;刘斌;倪莉;饶平凡;陈劲星;吕旭聪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

红曲霉产色素和桔霉素影响因素的研究进展

红曲霉产色素和桔霉素影响因素的研究进展黄娟;姚若一;黄邵培;刘思芬;邓颖;王伟平【摘要】Monascus,a microbial strain,is widely used in China and its secondary metabolites have important use values in food and medicinal fields.Monascus pigments are widely used in food coloring and wine-making.However,Monascus could also produce my-cotoxin citrinin which is harmful to the kidney.Accordingly, it's necessary to find the factors related to high-yield of pigment and low-yield of citrinin.In this paper,the influencing factors were summarized from the aspects of microbial species,culture mediums (nitrogen source,carbon source,metal ions,pH values),and culture conditions(light,temperature,and oxygen solubility),which was helpful for developing Monascus product with high-yield of pigment and low-yield of citrinin.%红曲霉是我国应用广泛的微生物菌种,其次级代谢产物在食用和药用方面有重要的利用价值.其中红曲色素广泛应用于食品着色和酿酒,但是红曲霉也会产生对肾脏有毒害作用的真菌毒素桔霉素,因此很有必要找出与高产红曲色素低产桔霉素相关的影响因素.从菌种、培养基(氮源、碳源、金属离子、pH值)、培养条件(光照、温度、氧溶度)等方面综述了高产红曲色素低产桔霉素的影响因素与培养条件,以便于开发生产高产红曲色素低产桔霉素的产品.【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2018(000)002【总页数】4页(P109-112)【关键词】红曲霉;红曲色素;桔霉素;影响因素【作者】黄娟;姚若一;黄邵培;刘思芬;邓颖;王伟平【作者单位】湖北工业大学生物工程与食品学院,湖北武汉430068;湖北工业大学生物工程与食品学院,湖北武汉430068;湖北工业大学生物工程与食品学院,湖北武汉430068;湖北工业大学生物工程与食品学院,湖北武汉430068;湖北工业大学生物工程与食品学院,湖北武汉430068;湖北工业大学生物工程与食品学院,湖北武汉430068【正文语种】中文【中图分类】Q93-3;TQ925.7红曲霉是散囊菌目中的一属子囊菌曲霉科真菌，红曲霉利用各种碳源和氮源合成红曲色素、洛伐他汀、γ-氨基丁酸、桔霉素等代谢产物。

用双向薄层层析检测红曲中的桔霉素

近两年关于在红曲霉发酵产物中发现枯霉素的报道不时见诸报刊杂志，常有生产、流通及消费领域的人士问及此事。下面我们对桔霉素及其检测方法作一介绍，并将我们所进行的红曲中枯霉素的双向薄层层析检测方法介绍给大家，希望能耐相关人士有
所帮助。
１桔霉素及其毒性桔霉素《ｉｎＣｌ）是２世纪３年代首先在枯青霉中发现的￣ｉ００种抗生物质，因此命名为枯霉素。它对某些微生物有很好的抑制作用。后来发现枯霉素对肾脏有毒害作用，并且认定它是一种
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抑菌物质存在的情况下。根据我们的经验，因为红雎中存在其他的抑菌物质，所以用此法检测红曲样品误差较大，并且不同的样品抑菌物质的古量都有变化。相对来说，薄层层析法简单易行，无需昂贵的仪器和试剂。
３红曲中桔霉素的检测无论是色素红曲还是功能性红曲，其色素的古量都很高。井且红曲的色素有６种之多。同来源的红曲，～８不其色素中红、橙、黄色素的量也不同。固态发酵得到的产物中还含有大量的其他代谢产物。所有这些都会对检测带来影响用一般的薄层层析法分析红曲中桔霉素，囡干扰物太多，很难在板上分辨出来。我们采甩了双向薄层层析法，褥到了较好的结果。

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桔霉素
1.4桔霉素的发酵桔霉素的发酵研究结果表明, 在液态培养时, 提高通风量会促使桔霉素的生成。对于通风量和搅拌转速来说,前者的影响更大。因此在足溶氧需求的情况下,应尽可能采用低通风量。较高的氮源含量, 会强化桔霉素的生成; 在液态培养基中,不同的氨基酸扮演着不同的角色。谷氨酸和丙氨酸可强化桔霉素的生成, 而缬氨酸、组氨酸、色氨酸、亮氨酸可消除桔霉素的生成。在液态培养中, 苹果酸是一个不可忽视的代谢产物。分批补料(葡萄糖) 情况下, 苹果酸积累, 桔霉素大量产生。
桔霉素
1.3桔霉素的毒性桔霉素的毒性桔霉素(Citrinin)是一种真菌毒素，具有肾毒性，也被称为肾毒(nephrotoxin)。它是真菌产生的次生代谢产物，对肾有毒害作用。桔霉索能减少肾皮质和肝细胞中线粒体磷酸化的效率，抑制与呼吸链有关的几种酶系的活性，减少线粒体基质中的钙离子水平，影响膜转移和氧化还原系统，可引起肾脏肿、尿量增多、肾小管扩张、上皮细胞变性坏死等症状，属于中等偏剧毒
总结
作为目前世界上唯一微生物发酵生产的天然色素，红曲色素符合食品着色剂“天然、营养、多功能”的发展方向，具有很好的应用前景。虽然目前对红曲色素研究已取得较大进展，但生产的产品存在成分不明确、质量不均一等问题，进一步分离鉴定其化学成分，从分子水平上对红曲菌产色素、桔霉素等代谢产物进行调控，发展液态工业化生产工艺，开发生产成分确定、性能优异、色调多样的色素产品，将是红曲色素研究的发展方向，另外建立色素成分检测方法，加强红曲色素安全性研究，建立国际适用的红曲色素质量标准将是红曲色素进一步开发应用的重要保障。
红曲色素的前景
红曲色素是红曲霉在生长代谢过程产生的红色天然色素。因人工合成红色素具有致畸、致突变的潜在危险，其安全性受到严重质疑，天然红曲色素日益受到国际市场的重视。目前红曲及红曲色素主要应用于酿酒、酿醋、食品着色及肉类的保存、制作腐乳等，目前国内将其用作酿造红曲酒的糖化剂，年需求量超过1万t。
桔霉素
1.5桔霉素的分离桔霉素的分离红曲中桔霉素的分离方法取红曲米粉----用甲醇溶解----超声一小时----离心 20min。3000R/min----取上清液—真空浓缩-----点样---展层----挂下桔霉素对应的荧光斑点----收集斑点---甲醇溶解----过滤后取滤液----挥干甲醇----用苯跟环己烷的混合溶液溶解----挥干溶剂----得桔霉素
红曲的药食性
它是药食两用食品，在中国已有一千多年历史。早在古代它已被广泛应用于食品着色、酿酒、发酵、中药方面。近年来，随着对红曲中生物活性物质研究不断发展，各国学者对其进行深入而广泛研究，发现红曲能产生许多令人瞩目次级代谢产物，如红曲色素、胆固醇抑制剂，及具有降血压、抗菌、降血氨、抗肿瘤、降血糖等生理活性成分，使传统红曲增添新的内涵。一种天然物质能同时具有多项生物活性实属罕见，因此开发红曲新功能现已成为各国研究热点。
红曲色素的发酵
长期以来，我国及东南亚一些国家和地区多采用传统的固态发酵法，目前较多的停留在手工作坊形式。该方法生产红曲色素能耗低、设备要求简单、成本较低、废水废涪少、不易造成二次污染，但是操作繁琐，劳动强度大，生产周期长目前产品质量稳定性不高，不适宜大规模机械化生产。 20世纪90年代以来国内外在红曲色素的液态发酵生产方面做了大量工作，研究已取得突破性进展。液态发酵生产的红曲红色素，主要成分是水溶性的“复合色素”。采用这种生产方式具有周期短、产量高、杂质少、产品质量稳定等优点，有助于实现生产白动化，提高产品质量稳定性，扩大生产规模。
桔霉素
1.5桔霉素的提纯桔霉素的提纯桔霉素有酸式和内酯式两种构象．在水溶液中呈酸性，能与碱反应生成盐。在桔霉素发酵液的分离中．加入饱和碳酸氢钠溶液与氯仿层中的桔霉素反应形成桔霉素钠盐．溶于水溶液中．再加入盐酸与桔霉素钠盐反应．制备出桔霉素．然后再用氯仿把桔霉素从水溶；夜中萃取．分离出来，重结晶．最后可得到纯的桔霉索。
红曲中色素和桔霉素的发酵、分离、纯化现状与进展
制作人：王欢王树琦
红曲的历史渊源
红曲又称红曲米，是一种生物红色原材料商品，其发明至今已有一千多年历史，它是以稻米蒸熟后接种红曲霉发酵，使真菌互相扩散传播、发酵、繁殖生长、产生红色素，大米饭变成深色干米糕。红曲外表呈棕红色、质脆、断面红色，微有淡酸气味。结构式：
桔霉素的发现
桔霉素(Citrinin)是一种真菌毒素，1995 年法国学者 Blanc在红曲霉的培养物中检测出一种对人畜有害的真菌毒素———橘霉素引起了国内外一些专家学者的关注，并对红曲霉产橘霉素的问题进行了深入研究。
桔霉素
1.1桔霉素的理化性质桔霉素的理化性质
桔霉素含一个羧基, 有两种形式: 离子态和非离子态(羧基和相邻的酮基及羟基形成分子内氢键) ,其分子式为C13 H14O5 , 分子量250。在无水乙醇或苯- 环己烷中结晶呈柠檬黄针状结晶, 溶点: 175 ℃。溶于热酒精、乙酸乙酯、苯、丙酮、氯仿,在二乙醚和乙醇中微溶,不溶于水结构式为：
红曲中色素的提取
菌体干湿状况对色素提取的影响在实验中发现，将过滤得到的湿液进行浓缩时，因含水过多，有机溶剂蒸发慢。而将湿菌体于103℃干燥24h，再将干燥菌体碾磨成粉末，浸提速度明显高于湿菌体，目的浸提液色价也明显提高，进行浓缩时所需时间短、温度低，避免了因长时间浓缩而使红曲色素发生部分聚合反应，导致浓缩液结块产生沉淀而变性。因此将菌体烘干后进行色素提取效果较好。
桔霉素
1.5桔霉素的分离桔霉素的分离桔霉素在加热热时会热分解．所以加热去除红曲产品中的桔霉素来说．是一种有效的方法，但是加热同时会破坏红曲色素，降低红曲的色价，而且桔霉素的分解点在172℃ 左右，如果加热到这么高的温度时，红曲色素也大部分被破坏了。用微波处理红曲产品，可以高效地减少桔霉素含量．高火处理5min．可减少红曲产品中的桔霉素，但是微波仍然会使红曲色素在处理中减少。从红曲中桔霉素的合成途径中．可见。其中有多步反应是还原反应而在制备桔霉素的过程中．发现桔霉素在空气中容易氧化．化学方法则多用H2O2进行脱毒，培养过程产生过氧化物复合酶有助于分解桔霉素。