冰冻切片和石蜡切片对免疫组化染色效果的对比分析

冰冻切片和石蜡切片对免疫组化染色效果的对比分析作者：方雪松来源：《中外医疗》2017年第13期[摘要] 目的研究皮肤、肉芽组织采用石蜡切片以及冰冻切片免疫组化的染色效果。

方法2014年8月—2016年8月期间选取Wistar大鼠共60只，双盲法随机分为A、B两组各30只。

实验前对60只大鼠进行背部切割伤，脱毛后在每只大鼠背部切割伤部位取1 cm×1 cm大小的皮肤块作为标本，A组大鼠皮肤块标本采用石蜡制片，B组大鼠皮肤块标本采用冰冻制片。

对两组大鼠标本切片进行免疫组化染色，观察两组大鼠标本切片染色情况。

结果 B组SP、EGF、EGFR以及FGF强阳性率分别为96.67%、100.00%、96.67%、93.33%，明显高于A 组的0.00%（P[关键词] 皮肤；肉芽组织；冰冻制片；石蜡制片；免疫组化染色[中图分类号] R5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）05（a）-0016-03[Abstract] Objective To study the effects of paraffin sections and frozen sections on Immumohistochemical staining in the tissues of skin and granulation. Methods 60 Wistar rats were selected from August 2014 to August 2016 and randomly divided into group A and group B with 30 cases in each group respectively. Before experiment， 60 rats were concis on the back. After removing the hair， the skin with the size of 1 cm×1 cm was taken from cut injuries on the back and served as sample. The specimens of rats in group A were adopted paraffin sections， and rats in B group were adopted frozen sections. Immunohistochemical staining was performed on the two groups of rats to observe the section staining of the rats in two groups. Results The positive rates of SP，EGF， and EGFR in group B 96.67%、100.00%、96.67%、93.33% were significantly higher than those of group A 0.00%（P[Key words] Skin； Granulation Tissue； Frozen Sections； Paraffin Sections；Immunohistochemical Staining病理组织检查在临床上应用广泛，是众多疾病诊断的金标准。

1．冰冻切片是免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法。

其最突出的优点是能够较完好地保存多种抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。

新鲜的组织及已固定的组织均可作冰冻切片。

冰冻时，组织中水份易形成冰晶，往往影响抗原定位。

一般认为冰晶少而大时，影响较小，冰晶小而多时，对组织结构损害较大，在含水量较多的组织中上述现象更易发生。

冰晶的大小与其生长速率成正比，而与成核率（形成速率）成反比，即冰晶形成的数量愈多则愈小，对组织结构影响愈严重。

因此，应尽量降低冰晶的数量。

Fish认为冰冻开始时，冰晶成核率较慢，以后逐渐增加，其临界温度为-33。

C,从-30。

C降至-43。

C之间，成核率急剧增加达1018，然后再减慢。

基于上述理论可采取以下措施减少冰晶的形成。

（1）速冻，使组织温度骤降，缩短从-33。

C43。

C的时间，减少冰晶的形成。

其方法有二：①干冰-丙酮（酒精）法：将150-200ml丙酮（酒精）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，再加干冰不再昌泡时，温度可达-70℃C，用一小烧杯（50-100ml）内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮（纯酒精）饱和液内，至异戊烷温度达-70℃时即可使用。

将组织（大小为1cm××）投入异戊烷内速冻30-60s后取出，或置恒冷箱内以备切片，或置-80℃低温冰箱内贮存。

②液氮法：将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。

取出组织冰块立即置入-80℃冰箱贮存备用，或置入恒冷箱切片机冰冻切片。

（2）将组织置于20%-30%蔗糖溶液1～3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。

影响冰冻切片的因素较多，因此，技术难度较大，选择好的冰冻切片机是保证切片质量的关键。

中外医疗China &Foreign Medical Treatment病理组织检查在临床上应用广泛,是众多疾病诊断的金标准。

临床上常见的检查手段包括组织石蜡制片检测以及组织冰冻切片检测,两种方法的优劣在临床上众说纷纭,褒贬不一,在临床上也无相关的统一标准,争议性较大[1-2]。

因此该文于2014年8月—2016年8月期间对60只大鼠模型进行研究,探讨皮肤和肉芽DOI:10.16662/ki.1674-0742.2017.13.016冰冻切片和石蜡切片对免疫组化染色效果的对比分析方雪松安徽省立医院病理科,安徽合肥230001[摘要]目的研究皮肤、肉芽组织采用石蜡切片以及冰冻切片免疫组化的染色效果。

方法2014年8月—2016年8月期间选取Wistar 大鼠共60只,双盲法随机分为A、B 两组各30只。

实验前对60只大鼠进行背部切割伤,脱毛后在每只大鼠背部切割伤部位取1cm×1cm 大小的皮肤块作为标本,A 组大鼠皮肤块标本采用石蜡制片,B 组大鼠皮肤块标本采用冰冻制片。

对两组大鼠标本切片进行免疫组化染色,观察两组大鼠标本切片染色情况。

结果B 组SP、EGF、EGFR 以及FGF 强阳性率分别为96.67%、100.00%、96.67%、93.33%,明显高于A 组的0.00%(P <0.05)。

A1组抗原活性阳性率分别为93.33%、96.67%、93.33%、100.00%。

明显高于A2组的13.33%、13.33%、3.33%、6.67%以及A3组的10.00%、16.67%、13.33%、3.33%(P <0.05)。

B1组EGF、FGF 抗原活性强阳性率分别为100.00%、93.33%,高于B2组的6.67%、3.33%(P <0.05)。

结论冰冻制片免疫组化染色效果更佳,值得临床应用及推广。

[关键词]皮肤;肉芽组织;冰冻制片;石蜡制片;免疫组化染色[中图分类号]R5[文献标识码]A[文章编号]1674-0742(2017)05(a)-0016-03Comparison over the Effects of Paraffin Sections and Frozen Sections onImmumohistochemical Staining in the Tissues of Skin and GranulationFANG Xue-songDepartment of Pathology,Anhui Provincial Hospital,Hefei,Anhui Province,230001China[Abstract]Objective To study the effects of paraffin sections and frozen sections on Immumohistochemical staining in the tissues of skin and granulation.Methods 60Wistar rats were selected from August 2014to August 2016and randomly di⁃vided into group A and group B with 30cases in each group respectively.Before experiment,60rats were concis on the back.After removing the hair,the skin with the size of 1cm×1cm was taken from cut injuries on the back and served assample.The specimens of rats in group A were adopted paraffin sections,and rats in B group were adopted frozen sections.Immunohistochemical staining was performed on the two groups of rats to observe the section staining of the rats in two groups.Results The positive rates of SP,EGF,and EGFR in group B 96.67%、100.00%、96.67%、93.33%were significantly higher than those of group A 0.00%(P <0.05).In group A,the weak positive rates were relatively higher with regard to anti⁃gen activity detection for specimens of A2and A3(93.33%、96.67%、93.33%、100.00%vs 13.33%、13.33%、3.33%、6.67%vs 15.00%、16.67%、13.33%、3.33%).However,the above mentioned antigen activity detection rates of A1were significantly higher than those of A2and A3with (P <0.05).In group B,the strong positive rates of B1group with significantly higherthan those of B2with regard to antigen activity detection of EGF and FGF with (10.00%、93.33%vs 6.67%、3.33%)(P <0.05).Conclusion The effect of frozen sections is significantly better than that of paraffin sections on immumohistochemical stain⁃ing,which is worthy of clinical application and popularization.[Key words]Skin;Granulation Tissue;Frozen Sections;Paraffin Sections;Immunohistochemical Staining[通讯作者]方雪松(1963-),女,安徽合肥人,大专,主管技师,研究方向:病理技术常规,冰冻制片及免疫组织化学染色,E-mail:tanghui7808@。

关于术中冰冻切片与石蜡切片诊断的对比研究摘要：目的：研究与分析术中冰冻切片与石蜡切片在诊断工作中的效果情况。

方法：选择我院在2019年1月-12月接收的100例患者，按照诊断方式，将其分为对照组与实验组，进行对比分析。

结果：从相关数据可知，两组患者都能够有效地诊断出患者的病变情况，对于患者的健康来讲，冰冻切片能够有效的确认其实际情况，两组患者不具有差异，（P>0.05）。

结论：术中冰冻切片能够获准确的对患者情况作出判断，对于患者的病情诊断具有更加积极的意义，可以有效的确定患者实际情况，对于患者的健康具有更大程度的帮助，虽然依旧存在一定的误诊率与漏诊率，但是其能够缩短诊断时间，帮助医师更快的制定诊断方案，所以值得在临床中推广使用。

关键词：术中冰冻切片；石蜡切片；癌症诊断冰冻切片是一种通过低温坏境使人体组织变硬到一定程度后，进行切片的方式，这一方式能够在手术的过程中，及时有效的判断病变的位置与其种类，能够为手术方式的选择更快的提供帮助。

从相关研究与分析来讲。

术中冰冻切片能够为其提供非常大的帮助，可以有效的诊断出患者的患病情况，但是在任何诊断方式使用的过程中，都存在一定程度的误诊与漏诊的情况，而提高其准确性有成为研究工作中的重点。

在本次分析工作中，对术中冰冻切片与石蜡切片进行了对比分析，现总结如下。

1.资料与方法1.1一般资料选择我院在2019年1月-12月接收的100例患者，患者均为乳腺癌患者。

按照诊断方式，将其分为对照组与实验组，其中对照组患者50例，年龄为24-56岁，平均（35.6±2.4）岁，实验组患者50例，年龄为23-56岁，平均（35.62±2.1）岁。

纳入标准为，符合临床诊断要求，年龄处于研究范围。

排除标准为，患有其他器官疾病或是精神疾病等。

两组患者均签订了知情同意书，并且实验通过了医院伦理委员会的同意。

两组患者在一般资料方面无差异，（P>0.05），可以进行比较。

论著·临床辅助检查CHINESE COMMUNITY DOCTORS 中国社区医师2020年第36卷第19期甲状腺疾病是临床比较常见的内分泌疾病，主要包括甲状腺功能亢进、甲状腺功能减退、甲状腺炎、甲状腺肿瘤和甲状腺结节等[1]。

对于甲状腺肿瘤等疾病手术治疗是常用的治疗措施，由于病变较为复杂，术中临床病理诊断发挥了重要作用，术中冰冻切片及石蜡切片是临床病理主要的切片方法，为探讨甲状腺疾病术中冰冻切片及石蜡切片病理诊断差异，更好地指导病理切片的选择，2018年7月-2019年11月收治手术治疗甲状腺疾病患者426例，病理资料进行回顾性分析，现报告如下。

资料与方法选取2018年7月-2019年11月手术治疗的甲状腺疾病患者426例，男200例，女226例；年龄21～74岁，平均(46.3±6.5)岁；其中左侧甲状腺病变176例，右侧甲状腺病变167例，双侧甲状腺病变83例。

方法：所有患者于术中切取肉眼可见的甲状腺病变组织1～4块，选取灰白色硬质小结节的部位进行冰冻切片和石蜡切片送病理诊断。

冰冻切片制作方法：将选取标本用滤纸吸干组织血性成分，切取0.2cm×0.2cm×0.2cm 样本[2]，周边滴包埋剂，于冷冻台上迅速进行冷冻处理，该过程中控制温度小于-20℃，切取厚度约为5～7μm 切片，95%乙醇固定1min，常规展片、贴片、烤片，脱蜡复水，HE 染色[3]，梯度酒精快速脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

术后石蜡切片：将选取标本用0.9%氯化钠溶液冲洗后，置于10%的中性甲醛溶液固定24h，洗涤后梯度乙醇脱水，做二甲苯透明处理，然后将组织块放入二甲苯与石蜡的混合液中，对标本组织用熔蜡进行包埋，作连续切片，厚度5～10μm [4]，常规展片、贴片、烤片，脱蜡复水，HE 染色，通过光镜观察病理组织。

结果两种切片方法病理诊断结果比较：石蜡切片诊断为恶性病变182例，其中髓样癌7例，乳头状癌163例，滤泡癌12例；诊断良性病变244例，其中Graves 病8例，亚急性甲状腺炎12例，桥本甲状腺炎19例，滤泡性腺瘤27例，结节性甲状腺肿178例。

甲状腺冰冻与石蜡切片的病理诊断价值观察甲状腺病理诊断对于甲状腺疾病的诊断与治疗具有重要意义。

甲状腺病理诊断主要依赖于甲状腺冰冻与石蜡切片的病理诊断。

本文旨在观察甲状腺冰冻与石蜡切片的病理诊断价值，为临床提供更准确的病理诊断依据。

甲状腺冰冻切片是指在手术过程中取得甲状腺组织标本后，即刻进行快速冷冻处理，然后切割成薄片，用于病理诊断。

而石蜡切片是指将组织标本进行固定、脱水、透明和包埋处理后，切割成薄片，然后染色观察。

1. 诊断准确性甲状腺冰冻切片由于在手术过程中立即进行处理，因此能够提供实时的病理诊断结果，有助于指导手术决策。

石蜡切片则需要几天的时间才能得到诊断结果，这对于急需治疗的患者来说不够及时。

甲状腺冰冻切片在诊断准确性方面具有明显优势。

2. 组织结构保存情况甲状腺冰冻切片由于采用快速冷冻技术，组织结构得以有效保存，细胞形态清晰可见，有利于对细胞核和胞质进行观察和分析。

而石蜡切片在组织处理过程中易出现伪影和变性，对组织结构的保存影响较大。

3. 染色效果石蜡切片在染色过程中可以选择不同的染色方法，如H&E染色、免疫组化染色等，从而对不同组织成分进行有效染色。

而对于甲状腺冰冻切片，染色效果较差，对于一些细胞结构的观察存在一定的局限性。

4. 费用和时间成本甲状腺冰冻切片的制备过程简单快捷，费用低廉，适合临床急诊手术。

而石蜡切片的制备需要较长时间，费用较高，不适合急诊手术的病例。

5. 病理诊断以及随访观察石蜡的保存年限长，可为临床随访观察提供有力的依据。

而临床病理冰冻组织标本保留期非常有限，对一些需要长期随访的患者来说可能会不够充分。

甲状腺冰冻与石蜡切片在病理诊断中各有其特点与优势。

甲状腺冰冻切片因其快速、准确、低成本等特点，对于临床急诊手术具有重要意义；而石蜡切片则适合于对于一些需要长期观察的患者，并能提供更为细致的组织结构信息。

在实际临床应用中，需要根据临床情况和诊断需求综合考虑选择合适的病理诊断方法，以提供更精准的病理诊断结果，为患者的治疗和管理提供更有力的支持。

脑组织冰冻切片漂片法与石蜡切片贴片法的免疫组化效果比较钟琴;张燕翔;钱锋;杨波;任伯绪【摘要】目的：：比较脑组织冰冻切片与石蜡切片免疫组化的效果。

方法：健康雄性昆明小鼠20只，腹腔注射匹罗卡品诱导癫痫持续状态模型。

24h后成功模型小鼠脑灌注固定，断头取脑，随机分别取8只行冰冻切片40μm (A组)与石蜡切片4μm (B组)，采用羊抗鼠 DCX (1：200)抗体，以 SABC 法进行免疫组化染色。

结果：A组阳性神经元数目与B组比较差异有统计学意义(P<0.05)，且 A组镜下视野切片染色更加清晰，对比良好。

结论：脑组织切片免疫组化染色采用冰冻切片漂片法效果更为可靠。

【期刊名称】《长江大学学报（自然版）理工卷》【年(卷),期】2015(000)036【总页数】3页(P95-97)【关键词】冰冻切片;石蜡切片;免疫组化;癫痫【作者】钟琴;张燕翔;钱锋;杨波;任伯绪【作者单位】长江大学医学院，湖北荆州 434023;长江大学医学院，湖北荆州434023;长江大学医学院，湖北荆州 434023;长江大学医学院，湖北荆州434023;长江大学医学院，湖北荆州 434023【正文语种】中文【中图分类】R361随着神经科学的不断发展，脑组织免疫组化技术越来越多地应用于神经学研究。

由于脑组织本身具有柔软、含水量大等特点，其石蜡切片的免疫组化染色结果易出现切片染色不清楚、脱片、假阳性、假阴性等问题[1]，很难得到高质量的脑组织免疫组化切片。

本实验采用癫痫持续状态模型(status epilepticus, SE)，用免疫组化的方法检测海马齿状回下区编码微管相关蛋白(DCX)阳性神经元的表达，对比脑组织冰冻切片漂片法与石蜡切片贴片法免疫组化的效果，以期更好的开展实验研究工作。

1.1 对象健康雄性昆明小鼠20只，体质量(30±5)g，由湖北省实验动物研究中心提供；东莨菪碱、匹罗卡品由Sigma公司提供；免疫组化ABC试剂盒、DCX羊抗鼠一抗、驴血清、驴抗羊二抗由Santa cruze公司提供。

XX医院病理科2010～2012年术中冰冻与石蜡切片诊断准确性分析肿瘤手术中冰冻切片快速病理诊断具有十分重要的意义，它不仅是鉴别良、恶性肿瘤准确快速的方法，也是指导临床医生决定手术切除范围及制定下一步治疗方案的关键手段。

比较冰冻切片快速病理诊断与石蜡切片病理诊断的符合率，分析可能导致误诊的原因。

现对我科2010年１月～2012年5月间所有冰冻切片诊断工作进行回顾性分析。

一、材料与方法为防止制成的冰冻切片镜下组织形态发生改变，送检标本要求用干纱布包裹或置于不加任何液体的洁净容器内及时送达病理科，病理医师详细检查大体标本后取肉眼确认病变最明显区域1～2块组织，迅速置全自动恒冷切片机（英国产SHANDN ）上制作切片。

切片厚4μm，经酒精固定，HE染色，普通光镜（Olympus BX41）下观察。

二、结果三、讨论冰冻切片与石蜡切片诊断的符合率逐年有所提高，说明我科病理医生对冰冻切片诊断的知识面及经验都有所提高。

误诊原因分析1、科外因素：⑴.术中标本送检时放入生理盐水或其它液体中，或用湿纱布包裹标本，或术者用水冲洗标本等，做冰冻切片时由于骤冷产生大量冰晶使组织呈空网状，使病理医师误认为是粘液或脂肪组织来源的肿瘤，被迫第二次取材。

⑵.手术医师取材不当或取材错误，可造成冰冻切片诊断的准确率和预测值之间的差异，如滑膜肉瘤送检组织为纤维结缔组织；胰腺癌时切取正常胰腺组织送检；脑胶质瘤送检脓性坏死渗出物，从客观上导致假阴性。

⑶.有些病变由于组织结构的特殊性，冰冻切片很难确诊，例如：①乳腺硬化性病变，包括某些类型的腺病（硬化性腺病）及放射状瘢痕。

有人认为良性硬化性病变与硬癌的鉴别很困难，在冷冻切片中尤其如此。

我们曾遇见过乳腺硬化性腺病的假浸润现象而诊断为乳腺癌的病例。

②乳腺乳头状病变，包括导管内乳头状瘤与末梢导管的乳头状瘤病。

③乳腺导管上皮增生性病变，包括不典型增生。

本组有一例导管上皮增生呈“搭桥”样生长，并形成不规则的间隙，误诊为恶性。

甲状腺冰冻与石蜡切片的病理诊断价值观察
甲状腺冰冻与石蜡切片是常见的病理学诊断方法，对于甲状腺疾病的诊断和治疗具有
重要价值。

本文通过观察甲状腺冰冻和石蜡切片的病理诊断价值，探讨两种方法的特点和
适应症。

甲状腺冰冻切片是一种快速冰冻固化组织样本的方法，通常在手术中进行。

它可以提
供即时的病理诊断结果，有助于指导手术决策和术中治疗。

冰冻切片的优点是操作简便、
快速，能够有效减少手术时间和术后并发症的发生。

但是冰冻切片的缺点是样本保存时间短，冻结伤害较大，易于形成伪像。

冰冻切片对于某些病理类型的诊断准确率较低，如甲
状腺微小癌等。

石蜡切片是将组织标本固定在石蜡中，切成薄片后染色和镜检的方法。

石蜡切片的优
点是样本保存时间长，可以进行多种染色，方便进行进一步的分子病理学检测。

石蜡切片
的诊断准确率较高，可以对甲状腺病变进行详细的形态学评估，不会出现伪像。

石蜡切片
需要时间进行处理和制备，不能提供即时的诊断结果。

甲状腺冰冻切片和石蜡切片在不同的临床情况下有不同的适应症。

对于甲状腺恶性肿
瘤的判断，冰冻切片通常用于术中快速诊断，以确定是否需要行颈淋巴结清扫。

而石蜡切
片则用于术后病理学评估，可以进行详细的组织形态学分析和免疫组化染色，协助确定病
变的类型和分级。

对于甲状腺炎、甲状腺结节等非恶性病变，石蜡切片是首选的诊断方法，可以提供更全面的信息。

1．冰冻切片是免疫构造化教染色中最时常使用的一种切片要领.其最超过的便宜是不妨较完佳天保存多种抗本的免疫活性，越收是细胞表面抗本更应采与冰冻切片.新陈的构造及已牢固的构造均可做冰冻切片.之阳早格格创做冰冻时，构造中火份易产死冰晶，往往做用抗本定位.普遍认为冰晶少而大时，做用较小，冰晶小而多时，对于构造结构益伤较大，正在含火量较多的构造中上述局面更易爆收.冰晶的大小与其死少速率成正比，而与成核率（产死速率）成反比，即冰晶产死的数量愈多则愈小，对于构造结构做用愈宽沉.果此，应尽管落矮冰晶的数量.Fish认为冰冻启初时，冰晶成核率较缓，以来渐渐减少，其临界温度为-33.C,从-30.C 落至-43.C之间，成核率慢遽减少达1018，而后再减缓.鉴于上述表面可采与以下步伐缩小冰晶的产死.（1）速冻，使构造温度骤落，支缩从-33.C43.C的时间，缩小冰晶的产死.其要领有二：①搞冰-丙酮（酒粗）法：将150-200ml丙酮（酒粗）拆进小保温杯内，渐渐加进搞冰，曲至鼓战呈粘稀状，再加搞冰出有再昌泡时，温度可达-70℃C，用一小烧杯（50-100ml）内拆同戊烷约50ml，再将烧杯缓缓置进搞冰丙酮（杂酒粗）鼓战液内，至同戊烷温度达-70℃时即可使用.将构造（大小为1cm×0.8cm×0.5cm）加进同戊烷内速冻30-60s后与出，或者置恒热箱内以备切片，或者置-80℃矮温冰箱内贮存.②液氮法：将构造块仄搁于硬塑瓶盖或者特造小盒内（曲径约2cm），如构造块小可适量加OCT包埋剂浸出构造，而后将特造小盒缓缓仄搁进衰有液氮的小杯内，当盒底部交触液氮时即启初气化沸腾，此时小盒脆持本位切勿浸进液氮中，约莫10-20s构造即赶快冰结成块.与出构造冰块坐时置进-80℃冰箱贮存备用，或者置进恒热箱切片机冰冻切片.（2）将构造置于20%-30%蔗糖溶液1～3天，利用下渗吸支构造中火分，缩小构造含火量.做用冰冻切片的果素较多，果此，技能易度较大，采用佳的冰冻切片机是包管切片品量的关键.久时冰冻切片机有二类：①恒缓冰冻切片机（Cryastat）：为较理念的冰冻切片机，型号很多，但是其基础结构是将切片机置于-30℃C矮温稀关室内，故切片时出有受中界温度战环境做用，可连绝切薄片至2-4μm，真足能谦脚免疫构造化教标记表记标帜央供.切片时，矮温室内温度以-15℃～18℃为宜，温度过矮构造易破碎，抗卷板的位子及角度要适合，载玻片附揭构造切片，切勿上下移动.②启搁式冰冻切片机：包罗半导体致热切片机战甲醇致热切片以及老式的CO2、氯乙烷等热冻切片机.切片时表露气氛中，温度出有简单统造，切片技能易度大，正在下温季节，切片越收艰易，且切片薄8～15μm，出有简单连绝切片，但是其便宜是价廉，海内有死产.冰冻切片后如出有染色，必须吹搞，贮存矮温冰箱内，或者举止短促预牢固后贮存冰箱保存.2．石蜡切片其便宜是构造结构保存良佳，正在病理战回瞅性钻研中有较大的真用价格，能切连绝薄片，构造结构浑晰，抗本定位准确.用于免疫组化技能的石蜡切片造备与惯例造片略有分歧：①脱火、透明等历程应正在4℃.C下举止，以尽管缩小构造抗本的益坏.②构造块大小应限于2cm×1.5cm×0.2cm，使构造充分脱火、透明、浸蜡.③浸蜡、包埋历程中，石蜡应脆持正在60℃以下，以溶面矮的硬蜡最佳（即矮温石蜡包埋）.构造块脱火、透明、浸蜡时间参照表1-3：表1-3 构造块处理时间表1 70%乙醇4℃ 3～4h2 80%乙醇4℃ 3～4h3 90%乙醇4℃ 2～3h4 95%乙醇Ⅰ 4℃ 2～3h5 95%乙醇Ⅱ 4℃ 1～2h8 二甲苯Ⅰ 4℃ 0.5～1h9 二甲苯Ⅱ 4℃ 0.5１～1h10 石蜡Ⅰ 60℃ 1h11 石蜡Ⅱ 60℃ 2h以上齐历程为18-24h，也可正在室温内使用自动脱火机代替.如构造块小，曲径小于0.5cm，可用赶快石蜡包埋切片，齐历程只需4h安排.石蜡切片为惯例造片技能，切片机多为轮转式，切片薄度2～7μm，应用范畴广，出有做用抗体的脱透性，染色匀称普遍.由于甲醛牢固、有机熔剂战包埋剂对于组抗本有一定的益伤及遮蔽，使抗本特性爆收改变.有人报告经蛋黑酶消化，不妨革新光镜免疫组化染色强度，时常使用的有胰蛋黑酶、链霉蛋黑酶及胃蛋黑酶等消化法.石蜡切片应进37℃恒温箱过夜，那样烤片可缩小染色中脱片局面.切片如需少久贮存，可存搁于4℃冰箱内备用.石蜡切片便宜较多，但是正在造片历程中要通过酒粗、二甲苯等有机溶剂处理，构造内抗本活性得来较多，有人采与热冻搞燥包埋法（Freeze drying embedding methed），不妨保存构造内可溶性物量，预防蛋黑变性战酶的得活，进而缩小了抗本的拾得.该法是将新陈构造矮温速冻，利用热冻搞燥机（Freezing dryer）正在真空、矮温条件下排除构造内火分，而后用甲醛蒸气牢固搞燥的构造，末尾将构造浸蜡、包埋、切片.此法可用于免疫荧光标记表记标帜、免疫酶标记表记标帜及搁射自隐影.。

石蜡切片与冰冻切片对比全集石蜡切片与冰冻切片《一》石蜡切片把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片(section)。

切片必须保持切片刀锐利，切片厚度通常为5～7um，也可根据染色需要切成不同厚度，一般不旋转式切片机超过10um。

切好的蜡带，放人40℃左右的温水中将蜡片展平。

良好的切片应无刀痕、裂痕，切片厚度均一平整。

切片如有上述问题，在进行免疫组织化学染色时会出现假阳性现象。

为能得到平整无皱褶的组织切片。

可采用两次展片，即先将组织切片漂浮在30％的乙醇溶液中进行第一次展片，然后将切片捞起，再次放人45～50℃的水浴中进行第二次展片，乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。

此过程是利用乙醇溶液与水之间的张力差展开切片的皱褶。

为防止脱片，载玻片要涂黏片剂。

对HE染色的切片，可在载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应，故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、3—氨丙基—乙氧基甲硅烷等处理。

《二》冰冻切片冰冻切片(fiozen section)是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法，其最突出的优点是能够较完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶活性以及抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。

新鲜组织和已固定的组织均可作冰冻切片。

为了得到高质量的冰冻切片，选择好的冰冻切片机是保证切片质量的关键。

恒冷箱切片机(cryostat)是目前最常用的冰冻切片机，可得到3—5um 的连续薄片。

组织在切片前需要冰冻，而冰冻过程容易使组织中的水分形成冰晶，从而影响抗原定位。

一般认为，冰晶体积大而量少时，影响较小；冰晶体积小而量多时，对组织结构损害较大。

含水量较多的组织中较易出现冰晶。

1．防止组织中冰晶形成的方法(1)速冻：使组织温度骤降，减少冰晶的形成。

方法包括：1)干冰—丙酮(乙醇)法：将150～200ml丙酮(无水乙醇)装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈黏稠状，再加干冰不再冒泡时，温度可达-70℃，用一小烧杯内装异戊烷约50ml，将此烧杯缓慢置人干冰—丙酮(或无水乙醇)饱和液内，至异戊烷温度-70℃时即可使用。

两种切片我都做得比较多。

相比之下，我更喜欢石蜡切片。

石蜡切片的最突出优点是标本可以长期保存。

在这次试验结束的若干年后，还可以用来做别的指标。

对于比较珍贵的标本，如罕见的临床标本，石蜡切片是比较好的选择。

我觉得石蜡标本的好坏取决于固定的质量。

个人认为组织块不宜过大，固定时间不宜过长。

我的经验是取火柴头大的组织，4%多聚甲醛或10%福尔马林4摄氏度固定3-4小时。

固定时间太长的话，蛋白质的肽链过度扭曲，抗原决定族被缠绕包裹，不容易做出结果。

石蜡切片的主要缺点是不适合做荧光。

我也不知道为什么，反正我老板是这么说的。

可能是由于石蜡有自发荧光的缘故。

我也试过用石蜡切片做荧光，效果还可以。

可是文章中这么做的确实很少。

冰切相对简单，容易出结果。

大多数人是用新鲜组织直接冰切，然后丙酮固定。

这样做虽然省事，可固定完了以后要马上漂洗、孵抗体或染色，不能让切片晾干，不然形态会非常糟糕。

我喜欢先用4%多聚甲醛或10%福尔马林固定，然后蔗糖脱水，再切片。

这样虽然麻烦一些，可切片的形态会好很多。

切片可以晾干，而且在4摄氏度下可以保存1-2个月。

千万不能放-20度保存，否则会有严重的冰晶，切记。

冰冻切片最大的问题还是标本不能长期保存，要现取现做。

适合用于容易获取的动物标本。

chengjinxiang wrote:做冰冻切片的组织可以是直接放在液氮里直接冻存的组织吗？石蜡切片前的福尔马林固定的组织过大会怎么样，我们因为自己没有机器通常是把组织扔到甲醛里直到有一定量和有足够多标本才去包蜡块这样对组化结果有什么影响？做冰切的组织可以先在液氮中长期保存。

而且经过液氮冻存的组织冰切后的形态特别漂亮，一点儿冰晶都没有。

不过保存之前要先用OCT包埋。

切片之前要把冰切机预冷到工作温度（-20度以下）。

包埋块从液氮中一拿出来就要放进冰切机中，不能让包埋块融化，否则还是会出现严重的冰晶。

做HE染色的话，组织固定时间长一点儿没关系。

但如果做免疫组化的话，固定时间就不能太长。

免疫组化经验总（好假哟）一、石蜡切片和冰冻切片的比较？1.要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是我向一老师请教得出的结论。

因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。

2.冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。

缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。

当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。

3.石蜡切片的优点是可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在 -80℃的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的切片，为了防止 RNA 降解，保存一贯很重要。

由于石蜡切片可以切到 4 μm 左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。

二、一抗的选择要点和技巧是什么？1.单克隆和多克隆抗体的选择。

由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。

单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。

另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。

在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。

2.应用范围的选择。

有的一抗只能用于 WB （ Western blotting）或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等；甚至表明石蜡切片或冰冻切片。

3.种属反应性的选择。

这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差异，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。

4.种属来源，一般兔来源的多是多克隆；而小鼠来源的多是单克隆，但也有另外。

术中冰冻切片与石蜡切片诊断的价值对照分析【摘要】目的：研究探讨术中冰冻切片的诊断价值。

方法：选取268例患者的甲状腺术中冰冻切片作为研究资料，分别进行术中冰冻切片与石蜡切片诊断，比较两种诊断结果。

结果：268例切片经石蜡切片诊断，其中195例为良性病变，73例为恶性病变，术中冰冻切片检查确诊259例，总确诊率为96.64%，与石蜡切片诊断比较，完全符合251例，基本符合10例，延迟诊断7例，误诊2例。

结论：虽然术中冰冻切片诊断存在一定的局限性，与石蜡切片诊断存在一定差异，但仍具有较高的诊断准确率，是临床中重要的诊断方法，提升诊断医师的操作水平是增强术中冰冻切片诊断准确性的重要手段。

【关键词】术中冰冻切片；石蜡切片；甲状腺[Abstract] Objective：To study the diagnostic value of intraoperative frozen section. Methods：268 cases of thyroid surgery were selected as the research data，the frozen sections and paraffin sections were used for diagnosis. The results of the two diagnostic methods were compared. Results：268 cases of paraffin sections were diagnosed，including 195 cases of benign lesions，73 cases of malignant lesions，intraoperative frozen section examination confirmed 259 cases，the total positive rate was 96.64%，compared with the histopathologic diagnosis，251 cases were completely correct，consistent with 10 cases，7 cases of delayed diagnosis，2 cases of misdiagnosis. Conclusion：Although the intraoperative frozen section diagnosis has certain limitation，there are some differences in paraffin section and diagnosis，diagnostic accuracy but still have higher，is an important diagnostic method in clinical diagnosis，improve the operation level of physicians is to enhance the accuracy of the sections of an important means of diagnosis of intraoperative frozen.Key words：intraoperative frozen section；paraffin section；thyroid gland术中冰冻切片是临床病理诊断的重要方式，具有诊断时间短，诊断准确率高等优势，为确定病变性质及制定治疗方案等提供了重要的依据，因而在临床中应用较为广泛[1-2]。

卵巢肿瘤快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断的价值体会及准确性分析摘要：目的：解析在诊断卵巢肿瘤时，对患者使用快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断的准确性。

方法：卵巢肿瘤患者53例，在2021年1月到2022年5月的被选取，施加不同的诊断方法，对比两种方法的诊断准确性和检测时间。

结果：比较石蜡切片病理，快速冰冻切片准确率没有差异（P＞0.05），检测时间短（P<0.05）。

结论：在诊断卵巢肿瘤时，对患者使用快速冰冻切片，准确率较高，具有临床价值。

关键词：卵巢肿瘤；快速冰冻切片；石蜡切片病理；准确性卵巢肿瘤的诊断，主要有影像学检查，包括CT和MRI，PET-CT也可用于全身扫描，以寻找怀疑有恶性肿瘤倾向的患者[1]。

还可抽取血液检查一些相关肿瘤指标，如卵巢上皮性肿瘤，肿瘤指标如CA155，CA199可能略有增加[2]。

病理学是诊断的金标准。

本研究解析在诊断卵巢肿瘤时，对患者使用快速冰冻切片与石蜡切片病理诊断的准确性。

1、一般资料1.1基本资料卵巢肿瘤患者53例，在2021年1月到2022年5月的被选取，43-72岁，已签同意书，平均（62.34±6.17）岁。

1.2研究方法石蜡切片病理学：选择游离卵巢肿瘤组织，组织越新鲜越好。

组织块薄0.1-0.2 cm，立即用液体固定剂固定。

80%、90%、95%、100%不同浓度的乙醇连续脱水2小时。

对石蜡组织进行包埋，然后切片。

厚度一般为4～6μm，在60-65℃恒温烤箱烘烤15-30分钟，并进行染色和镜检观察病变程度。

快速冰冻切片：恒冷箱速冻段机速冻头温度调至25-18℃。

在低温恒温器上涂一层低温保存剂OCT，然后将新鲜标本放在低温保存盘上，用OCT覆盖并切片，厚度一般为4-8μm，切片立即用丙酮固定，在稍微干燥后立即将切片置于冷甲醇中10-15min，然后进行相应的组织化学染色，显微镜下观察病理变化。

1.3观察指标对比两种方法的诊断准确性和检测时间。