免疫血清制备

抗原与免疫血清的制备××××××××××抗体是机体接受抗原刺激后产生的一种具有免疫特异性的球蛋白。

在免疫学实践中，为制备抗体常以抗原性物质（细菌、病毒、类毒素、血清及其他蛋白质）给动物注射。

经过一定时间后，动物血清中可以产生大量的特异性抗体。

这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清或者抗血清。

免疫血清的制备是一项常用的免疫学技术，高效价，高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂（如用于制备免疫标记抗体等），也可供特异性免疫治疗用[1]。

免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。

如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体，常可获得高效价的免疫血清。

而使用免疫原性弱的抗原免疫时，则需同时加用佐剂以增强抗原的免疫原性。

免疫血清的特异性主要取决于免疫用抗原的纯度。

因此，如欲获得高特异性的免疫血清，必须予先纯化抗原。

此外，抗原的剂量、免疫途径及注射抗原的时间间隔等，也是影响免疫血清效价的重要因素应予重视。

在本实验中采用ELISA法和凝集反应的原理来测定免疫血清的效价：ELISA测定的原理是利用标记技术将酶标记到抗体（抗原）上，使待检物中相应的抗原（抗体）与酶标记抗体（抗原）发生特异性反应。

在遇到相应的酶底物时，酶能高效、专一催化、分解底物，生成有颜色的产物。

根据颜色的深、浅、可以判断待检物中有无特异的抗原（抗体）以及量的大小。

该方法可对待检样品进行定性和定量分析；同时具有微量、特异、高效、经济、简便等优点，因此是一种广泛应用于生物和医学领域的微量测定技术。

凝集反应是一种经典的抗原抗体反应，也是高等医学院校学生免疫学实验的重要内容之一，它是指可溶性抗原及其相应抗体在一定条件下出现肉眼可见的沉淀物的现象[2]。

凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类。

前者可利用已知抗血清鉴定未知细菌，优点是极端快速，为诊断肠道传染病时鉴定病人标本中肠道细菌的重要手段；后者是一种定量法，现已发展成微量滴定凝集法，它可利用已知抗原测定人体内抗体的水平(效价)，也是诊断肠道传染病的重要方法。

抗红细胞免疫血清的制备
一、绵羊红细胞抗原的制备
1．采血：无菌试管加EDTA-K2 5滴，静脉采血5ml，加入上述试管，混匀。

2．洗涤红细胞：抗凝血2000r/min离心5min，吸去上清，加入等量无菌生理盐水混匀，2000r/min离心5min，吸去上清，如此连续洗2次，最后一次2500r/min 离心10min以使SRBC密集管底，直至上清液透明无色再吸去上清液，留密集SRBC备用。

3．用生理盐水将SRBC配成需要浓度，即为试验用的SRBC悬液。

如需20%SRBC悬液时，则吸取1ml洗涤后的红血球加生理盐水4ml即成。

二、家兔血清的采集、分离与保存
自家兔耳缘静脉采血（用头皮针）2-3ml，加入塑料试管，温育，2000r/min
离心10min、分离血清分装于EP管中，留作阴性对照。

注：家兔耳静脉采血法：轻弹兔耳，再用75%酒精深擦，使其充血和消毒，然后刺破静脉，用注射器轻轻抽取血液。

三、免疫动物
按如下剂量及程序免疫：
1。

血清制备原理
血清制备是一种从动物（通常是哺乳动物）的血液中得到的透明液体，其中包含大量的抗体和其他血浆蛋白质。

血清常常被用于实验室研究、临床诊断和治疗等领域。

血清制备的过程主要包括以下步骤：
1. 选择合适的动物供体：通常选择小鼠、兔子、猪等动物作为供体。

供体选择通常基于其体积、免疫反应性和商业可获得性等因素。

2. 免疫刺激：将特定抗原或疫苗注射到动物供体体内，以刺激其免疫系统产生抗体。

注射剂量和时间可根据具体要求进行调整。

3. 收集血清：在一定时间后，通过采集供体动物的血液来获取血清。

最常见的方法是从动物的静脉中采集血液，然后将血液置于离心机中进行离心分离，将血浆与红细胞分离。

4. 血清的保存和处理：分离后的血浆可以通过多种方法进行保存和处理，例如添加抗生素以防止细菌生长、冻干或冷冻在低温下保存。

在血清制备过程中，关键的一点是在注射抗原之后充分免疫供体动物，以激发免疫系统产生大量的抗体。

动物的免疫系统会对抗原做出反应，并产生特异性抗体。

这些抗体会被释放到血液中，从而形成抗体丰富的血清。

血清的制备非常重要，因为血清中含有大量的抗体和其他免疫相关因子，可以被用来检测特定抗原的存在、了解免疫反应机制以及进行疾病的诊断和治疗。

由于血清的制备需要动物供体，并在涉及抗原注射的过程中涉及动物实验伦理问题，因此在实际操作中需要严格遵守伦理规范和法律法规。

动物免疫血清的制备目的：探讨制备动物免疫血清的方法和效果，以适应其在实验教学中的需要。

方法：制备好的免疫原，按照一定的免疫程序(免疫途径、次数、间隔时间、剂量)接种给所选择的动物。

待动物体内产生抗体后，采集动物血液，分离血清对其效价进行测定。

结果：经免疫后的抗血清最终分别达到1：2040以上的高效价。

结论：此方法制备的抗血清效价高，特异性高，亲和力强，既经济又方便，适用于实验教学，提高了实验的开出率。

标签：免疫血清；免疫；免疫学试验；效价[文献标识码]B[文章编号]1674-4721(2009)12(b)-139-02动物免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术，广泛用于临床诊断、治疗和预防中，为教学、科研、检验之常用。

在医学免疫学教学中，形象、直观、简易的直接凝集反应有助于学生了解抗原、抗体及抗原抗体间的免疫反应等抽象的概念，免疫血清的质量直接影响实验的特异性和敏感性。

因此，制备高质量的免疫血清是建立高水平检测方法的前提条件。

但免疫血清的制备较复杂，且需学生动手操作，用量较大，为达到这一目的，除了具备理想的免疫原外，还需要选择适宜的动物和设计有效可行的免疫程序或方案。

通过多年的工作实践，笔者制备了高效价、高特异性、高亲和性的动物免疫血清，既经济又方便，供教学、科研所用，提高了实验的开出率。

1方法与结果1.1动物的选择及饲养制备抗血清的动物主要是哺乳类和禽类。

羊、马、豚鼠、兔都是常用的动物，在实验中，选择动物时应考虑抗原与动物的种属关系、抗原性质与动物种类、免疫血清的需要量、要求以及动物个体等因素。

因不同动物对同一抗原的敏感性不同，免疫时至少取用2只以上动物。

选择制备免疫血清的动物必须是适龄、健壮、无感染的正常动物，体重最好在2～3 kg，年龄6个月以上，因雌性动物在性周期的不同阶段和怀孕、授乳时机体对抗原的敏感性有较大改变，所以一般挑取雄性动物。

动物免疫后要认真做好动物的编号、标记、管理和记录，本实验用的动物是健康家兔。

抗血清的制备抗血清制备是一种常见的免疫学实验技术，用于检测特定物质的存在和数量。

下面将对抗血清制备的原理、步骤及注意事项进行详细介绍。

一、原理抗血清是由动物免疫某种抗原制备得到的一种免疫血清，其中包含了特异性抗体。

抗血清制备的原理是通过注射一定量的特异性抗原到动物体内，使其产生特异性抗体，然后收集抗血清。

二、材料和试剂1.抗原：需要制备抗血清的特定抗原。

2.兔、小鼠等动物。

3.盐酸：用于调整兔抗血清的pH值。

4.取血器：用于采集动物血液。

5.离心管、离心机：用于收集血清。

6.不含菌的容器：用于保存抗血清。

三、步骤根据实验要求，制备特定抗原，可以是蛋白质、细胞、病毒、细菌等。

2.制作与抗原相应的抗体兔/小鼠选择适宜种类的动物，注射免疫原，隔一段时间后，在动物体内试验特异性抗体的出现，出现后即可采血制血清。

一般来讲，兔子被认为是制备抗血清的最佳动物，而小鼠常常会出现交叉反应。

3.采集兔血液注射完最后一次免疫原后一周左右，在一个清洁的容器上臂处用取血器采血2-3ml。

离心采集到的兔血液，定量将其分离出血清，再加入盐酸，调节pH值，即可得到兔抗血清。

5.评价抗血清的质量评价抗血清的质量，主要是通过测定抗体滴度来判断抗血清的特异性和强度。

四、注意事项1.严格控制免疫原和免疫过程，确保抗原和抗体的特异性和纯度。

2.合理选择免疫动物种类，不同种类免疫动物会对抗原产生不同反应。

3.采血时要注意安全和卫生，防止感染病毒和细菌。

4.在制备抗血清的过程中需要注意保护动物的健康和福利，并严格按照实验室安全规范操作。

高免血清制作方案
免疫对象：最好是准备淘汰的经产母猪
免疫剂量：4mL/头口蹄疫合成肽苗
免疫程序：首免后15天二免，二免后15天三免，三免后28天取血。

血清制备：三免后28天后，先将猪只消毒，再倒挂起来，在脖子动脉处取血，下面用消毒好的大盆接着，放到室温
（18℃-25℃）过夜，次日将盆中的血块用消毒好的铲子
铲出来，此时可能有少量的溶血，这没关系。

最后1mL
血清中加入2000单位的青霉素和200单位的链霉素。

分装：将制备好的血清放入500 mL或250 mL的消毒好的葡萄瓶。

贮存：-20℃保存，或制备好直接使用。

注射剂量：2mL/kg。

使用对象：各日龄的仔猪。

注意事项：1、铲子、刀子、盆子可先用消毒液消好毒，最后一定要用酒精消毒。

2、采血时母猪可先用乙醚将其麻醉，猪只也应消毒，最
后也用酒精消毒。

动物血清制备实验报告本实验旨在研究动物血清的制备方法，探究其应用领域及生物学意义。

实验原理：动物血清是一种含有丰富抗体及其他生物活性因子的生物制品，广泛应用于生物医学和生物技术领域。

其制备方法一般包括以下几个步骤：1. 动物免疫：选取合适的动物作为免疫体，通常选择小鼠、大鼠、兔子等。

根据需要，可选择单一抗原进行免疫，也可以采用多次免疫或多个抗原的混合免疫。

2. 收集血清：免疫后经过一定的时间，将动物取杀，取出血液，离心分离血浆，即可获得动物血清。

3. 补充试剂：血清属于液态制品，需要添加一定比例的防腐剂，如青霉素、链霉素、青霉素等，以防止细菌生长。

实验步骤：1. 准备免疫动物：选择健康、无特殊疾病的动物作为免疫体，并进行预免疫处理，增强动物免疫力。

2. 免疫处理：按照免疫计划，将免疫原与佐剂混合，并按照一定的途径注射到免疫动物体内，可以选择皮下注射、肌肉注射、腹腔注射等。

3. 动物管理：在免疫过程中，需要对动物进行日常管理，包括喂养、环境控制、体温测量等。

4. 血液采集：根据免疫计划，逐步采集免疫动物的血液样本，可以选择尾静脉采血、眼眶静脉采血等方法。

5. 血清分离：采集完血液样本后，将其低速离心，得到纯净的血浆，血浆中包含了动物体内产生的丰富抗体及其他生物活性因子。

6. 血清处理：将血浆分装到无菌试管中，根据需要添加适量的防腐剂，进行混匀搅拌，然后密封保存于-20以下，以保证其稳定性质。

实验结果：通过动物血清制备的实验，可得到丰富的血清样品，其中富含抗体及其他活性分子。

这些血清样品可以应用于多个领域，包括：1. 免疫学研究：动物血清中含有反应特定抗原的抗体，可用于免疫组织化学、免疫电镜等实验，研究免疫反应机制。

2. 生物医学研究：动物血清中的特定抗体可以用于诊断疾病，如乙肝、艾滋病等，通过检测患者血清中的特定抗体水平，判断患者是否感染病原体。

3. 药物研发：动物血清中的抗体可以用作药物的检测和评价，通过检测药物与特定抗体的结合能力，评估药物的疗效和安全性。

项目一免疫血清的制备与提纯一、免疫血清的制备(Preparation of antiserum)【实验原理】将适当的免疫原物质注入动物体内，经一段时间动物血清中可出现大量特异性抗体，这种含抗体的血清称为抗血清(或免疫血清)。

它在血清学检测中有广泛应用。

理想的抗血清的产生主要取决于抗原的纯度和免疫原性，以及动物的应签性。

同时免疫接种时的免疫途径、抗原剂量、有无佐剂、注射次数及间隔时间等因素均可影响抗血清的质量。

制备的抗血清可直接用于某些实验，也可从中提取特异性抗体或某一组分。

下面介绍几种常用的免疫血清制备方法，免疫动物均选用家兔，这是因为：(1)其产生的血清量足够实验应用并容易驯养；(2)为采血、注射用耳血管很容易找到；(3)用兔子作免疫接种的资料较多，可方便利用；(4)能产生高效价抗体，并且可用常用的沉淀反应、凝集反应或溶血、溶菌反应等试验方法进行鉴定。

【试剂和器材】1．免疫动物2～3kg健康雄性家兔。

2．免疫原绵羊红细胞(SRBC)、OX19变形杆菌、人IgG(SPA菌体吸附)、正常人混合血清、牛血清白蛋白(BSA)、聚丙烯酰胺凝胶分离的蛋白质抗原。

3．佐剂完全和不完全福氏(Freund)佐剂。

4．其它试剂生理盐水、70%酒精等。

5．器材注射器及针头、棉球、三角烧瓶、玻璃珠、试管、吸管、柯氏瓶(扁瓶)、Luer-lock(双联)注射器、止血钳、手术剪、手术刀等，以上器材均应高压灭菌或消毒后使用；离心机、液体旋转混合器、温箱、水浴箱、冰箱等。

【步骤和方法】(一)溶血素的制备1．制备抗原取脱纤维羊血或用阿氏(Alsever)液保存的绵羊红细胞(采血方法见附录常用实验动物采血方法)，用生理盐水洗３次，每次加2～3倍生理盐水，离心2000r/min 10min，弃上清。

最后一次按压积用生理盐水配成10%SRBC悬液，放４℃保存备用。

2．免疫动物家兔耳缘静脉注射10%SRBC悬液1ml，间隔3天，连续7次，末次免疫后2周，由耳静脉取血1ml(取血方法见附录常用实验动物采血方法)，分离血清，测定溶血素效价(见补体结合试验)，当效价≥1:2000则可放血收集血清，此法效价可达1:6000~1:10000。

抗原与免疫血清的制备××××××××××抗体是机体接受抗原刺激后产生的一种具有免疫特异性的球蛋白。

在免疫学实践中，为制备抗体常以抗原性物质（细菌、病毒、类毒素、血清及其他蛋白质）给动物注射。

经过一定时间后，动物血清中可以产生大量的特异性抗体。

这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清或者抗血清。

免疫血清的制备是一项常用的免疫学技术，高效价，高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂（如用于制备免疫标记抗体等），也可供特异性免疫治疗用[1]。

免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。

如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体，常可获得高效价的免疫血清。

而使用免疫原性弱的抗原免疫时，则需同时加用佐剂以增强抗原的免疫原性。

免疫血清的特异性主要取决于免疫用抗原的纯度。

因此，如欲获得高特异性的免疫血清，必须予先纯化抗原。

此外，抗原的剂量、免疫途径及注射抗原的时间间隔等，也是影响免疫血清效价的重要因素应予重视。

在本实验中采用ELISA法和凝集反应的原理来测定免疫血清的效价：ELISA测定的原理是利用标记技术将酶标记到抗体（抗原）上，使待检物中相应的抗原（抗体）与酶标记抗体（抗原）发生特异性反应。

在遇到相应的酶底物时，酶能高效、专一催化、分解底物，生成有颜色的产物。

根据颜色的深、浅、可以判断待检物中有无特异的抗原（抗体）以及量的大小。

该方法可对待检样品进行定性和定量分析；同时具有微量、特异、高效、经济、简便等优点，因此是一种广泛应用于生物和医学领域的微量测定技术。

凝集反应是一种经典的抗原抗体反应，也是高等医学院校学生免疫学实验的重要内容之一，它是指可溶性抗原及其相应抗体在一定条件下出现肉眼可见的沉淀物的现象[2]。

凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类。

前者可利用已知抗血清鉴定未知细菌，优点是极端快速，为诊断肠道传染病时鉴定病人标本中肠道细菌的重要手段；后者是一种定量法，现已发展成微量滴定凝集法，它可利用已知抗原测定人体内抗体的水平(效价)，也是诊断肠道传染病的重要方法。