动物急性毒性实验报告

敌敌畏，化学名称为二甲基二硫代磷酸酯，是一种常用的有机磷农药，主要通过抑制乙酰胆碱酯酶活性，导致神经递质乙酰胆碱在神经突触中积累，从而引起一系列神经中毒症状。

为了研究敌敌畏对小鼠的毒性作用，本实验采用不同浓度的敌敌畏溶液对小鼠进行灌胃给药，观察其毒性反应。

二、实验目的1. 研究不同浓度敌敌畏对小鼠的毒性作用。

2. 评估敌敌畏对小鼠的致死剂量（LD50）。

3. 探讨敌敌畏对小鼠神经系统的毒性作用。

三、实验材料1. 实验动物：昆明种小鼠，体重18-22克，雌雄各半。

2. 实验试剂：敌敌畏原液（纯度≥95%），生理盐水，蒸馏水。

3. 实验仪器：电子天平，恒温水浴锅，灌胃器，注射器，解剖显微镜，组织培养箱等。

四、实验方法1. 分组：将小鼠随机分为5组，每组10只，分别为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和最大剂量组。

2. 给药：对照组灌胃生理盐水，低剂量组灌胃浓度为0.1%的敌敌畏溶液，中剂量组灌胃浓度为0.5%的敌敌畏溶液，高剂量组灌胃浓度为1%的敌敌畏溶液，最大剂量组灌胃浓度为2%的敌敌畏溶液。

3. 观察指标：- 急性毒性：观察小鼠灌胃给药后的行为变化、死亡情况等。

- 亚急性毒性：观察小鼠灌胃给药后7天内的体重变化、行为变化、死亡情况等。

- 组织学观察：取小鼠大脑、心脏、肝脏、肾脏等组织，进行HE染色，观察组织学变化。

1. 急性毒性：- 对照组：小鼠灌胃生理盐水后，未见明显异常。

- 低剂量组：小鼠灌胃给药后，表现为兴奋、活动增多，部分小鼠出现流涎、抽搐等症状。

- 中剂量组：小鼠灌胃给药后，表现为极度兴奋、抽搐、呼吸抑制等症状，部分小鼠死亡。

- 高剂量组：小鼠灌胃给药后，迅速出现兴奋、抽搐、呼吸抑制等症状，多数小鼠死亡。

- 最大剂量组：小鼠灌胃给药后，迅速出现兴奋、抽搐、呼吸抑制等症状，全部小鼠死亡。

2. 亚急性毒性：- 对照组：小鼠灌胃生理盐水后，未见明显异常。

- 低剂量组：小鼠灌胃给药后，表现为体重略微下降，部分小鼠出现流涎、抽搐等症状。

天然藻蓝蛋白动物急性毒性实验一目的24小时内单次或多次给药，给药后的14天内连续观察动物的情况，了解动物所产生的毒性反应及其严重程度，包括定性和定量两个方面，定性方面观察中毒表现、出现和消失时间以及可能的靶器官；定量方面求出致死剂量、最大给药量和半数致死量，为后续长毒实验和临床安全用药及监测提供参考。

二受试物1 名称天然藻蓝蛋白2 动物昆明小鼠（6~9周龄，体重18-20g），45只，雌雄各半。

实验前在动物房饲养一周。

实验开始时动物体重的差异不超过体重的±20%。

3 染毒途径经口染毒——灌胃，试验前空腹，即动物应隔夜空腹，禁食16h 左右，不限制饮水。

小鼠每次灌胃容量为0.4mL/20g。

4 预实验的剂量（霍恩氏法）小鼠4只，使用12g/kg体重的剂量组（天然藻蓝蛋白最大浓度）和一个蒸馏水对照组，每隔四小时灌胃一次，连续灌胃三次，观察一周，估计LD50的可能范围。

5 毒性作用观察主要从两个方面进行观察：A 中毒体征及发生过程（中毒体征的观察参考附表二）B 死亡情况和时间分布6 正式实验根据上述预实验数据结果，进一步细化剂量范围重新设置5个实验组重复上述实验，实验前将动物在实验动物房饲养观察3~5天后，随机分组，给予受试物后观察7-14天，记录死亡数、死亡时间及中毒表现等。

7 实验记录表格见附表一附表一数量体重死亡时间死亡数量中毒体征对照12g/kg附表二啮齿动物中毒表现观察项目附表三1.实验方法2.动物品系，来源，性别3.样品名称，形状及处理记录者：＿＿＿＿＿附录（规范性附录）急性毒性（LD50）剂量分级表。

试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。

一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1.动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。

选用其他动物应说明原因。

年龄一般为7-9周龄。

同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%.实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。

2.饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。

若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。

应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。

3.受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。

（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。

1.伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。

2.最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。

3.最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。

4.单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。

选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。

实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。

如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。

根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg 进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。

实验一药物急性半数致死量（LD50）的测定【目的】了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理，掌握半数致死量的测定方法和计算过程。

【原理】LD50是指在一群动物中能使半数动物死亡的剂量。

由于实验动物的抽样误差，药物的致死量对数值大多在50％质反应的上下呈正态分布。

在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线，S型曲线的两端处较平，而在50％质反应处曲线斜率最大，因此这里的药物剂量稍有变动，则动物的死或活的反应出现明显差异，所以测定半数致死量能比较准确地反映药物毒性的大小。

【实验材料】1、动物：小白鼠，体重18-24g，雌、雄各半，实验前禁食12小时，不禁水。

2、药品：盐酸普鲁卡因，苦味酸。

3、器械：小鼠笼，天平，注射器（1mL），电子计算器。

【方法和步骤】（一）预备实验1、探索剂量范围：先找出100%及0%死亡的剂量，此即上下限剂量（D m及D n）。

方法是先取出小鼠9-12只，每组3只，按估计量（根据经验或文献资料定出）给药，如3只小鼠全死则降低剂量一半，如全不死则增加剂量一倍，如部分死亡，则按2：1的比例向上、向下调整剂量，由此找出上下限剂量。

2、确定组数，计算各组剂量：确定组数（G）：可根据适宜的组距确定组数，一般分5-8个剂量组。

计算各组剂量：要求各组剂量按等比级数排列，在找出D m及D n和确定组数后，可按下列公式求出公比r：r再按公比计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……D m，其中D1=D n=最小剂量，D2=D1⨯r; D3=D2⨯r; D4=D3⨯r; D5=D4⨯r; ……D G=D G-1⨯r。

r值一般以1.7~1.15之间为宜。

计算举例：已知某药在致死毒性实验中，Dm=187.5 mg/kg; Dn=76.8 mg/kg, 确定组数G=5，求r及各组剂量。

先代入公式求r=1.25，再计算各组剂量D1=Dn=76.8 mg/kg,D2=76.8⨯1.25=96 mg/kg, 依次计算D3，D4，及D G(D5)分别为120，150，187.5 mg/kg。

毒理学实验二经口急性毒性试验1、实验目的1、掌握实验动物分组方法2、测定LD50的试验设计原则3、小鼠的经口灌胃技术二、试剂和材料1、实验动物：（1）动物品种：健康成年ICR小鼠，体重18g～22g（2）样品来源：首都医科大学实验动物部2、器材：注射器（1ml）、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。

3、试剂：敌敌畏（1400mg/ml）、苦味酸染液（标记用）。

3、实验内容1、健康实验动物的选择和性别鉴定选择健康的雄性小鼠（健康标准：毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。

动物出现圆圈动作可能为中耳炎，废弃。

）肛门与生殖孔距离：大者为雄性，小者为雌性2、实验动物称重、编号和随机分组选择体重在18-22 g的小鼠，采用随机分组的方法（动物按体重分为几个体重段，再从每个体重段分出各组动物），每组10只小鼠，用黄色的苦味酸饱和液标号1~9,10号小鼠不标记。

3、受试化学物溶液的配制（1）确定灌胃量：0.1ml/10g（2）确定最高给药量，计算溶液浓度，估计给药总体积（3）药品称量及稀释4、小鼠灌胃技术左手固定，右手持灌胃器，插入动物口腔，沿咽后壁徐徐插入食道，深度为口腔至剑突的距离。

5、毒性体征的观察和LD50计算（1）毒性体征的观察：染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间按表格记录动物体征及出现时间，记录死亡情况及时间，观察期为30 min（2） LD50的计算：a、实验各组剂量的确定：设5组，每组雌雄动物各10只。

剂量组距 d 为：d为相邻两个剂量组剂量对数之差利用lgLD0依次加d，取反对数，即可得出各组剂量。

b、LD50的计算（见附件）：C、求半数致死量的95%可信区间4、实验过程1、人员分工：本次实习同学分两个大组(A组和B组)，分别在不同实验室。

每大组分5个小组，分别处理雌雄动物，每小组10只动物。

集体活动：1、 2、 3、 4、5 组各1人，进行受试物配制。

各小组活动：每小组1人（共4人），进行动物标记。

苏贝止咳颗粒小鼠急性毒性实验【摘要】苏贝止咳颗粒组方来自民间验方，该方在临床使用多年，疗效确切，安全可靠。

具有散寒宣肺，祛痰、止咳、平喘之功，用于急性气管、支气管炎（风寒袭肺证）所致的咳嗽、咳痰稀薄、咽痒、气急等症状。

根据该方的功能主治、各味药材的理化性质和验方汤剂的临床应用实践，我们对其进行了止咳、祛痰、抗炎、解热、抗病毒、抗菌等主要药效学实验和急性毒性实验研究。

苏贝止咳颗粒经国家食品药品监督管理总局药品审评中心技术审评，发补充资料通知（药审补字[2014]第1030号），其中药理毒理方面要求为：本品进行的急毒试验未提供剖检结果，建议补充。

如果没有观察该方面的内容，建议补充规范的急性毒性试验。

针对该问题，该项目研究在前期的申报材料中的确没有详述相关内容，因此按照中心老师的发文内容和相关规定对该品种的急性毒性实验重新进行规范性实验，对实验所有动物进行大体解剖、并对相关重要脏器进行病理形态学观察。

实验结果显示，苏贝止咳浸膏小鼠口服急性毒性实验测不出LD50，从而进行小鼠ig最大给药量实验，单次最大给药剂量164g生药/kg，单次最大给药容积为0.8mL/20g，24h内给药3次，连续观察13天，所观察的各项指标均正常，未见动物死亡，实验观察期结束时对所有动物大体解剖和相关重要脏器进行病理形态学观察，未见与药物相关性病变。

因此苏贝止咳浸膏小鼠一日口服最大给药剂量为492g生药/kg，相当于临床拟用量的424.1倍。

表明苏贝止咳浸膏急性毒性较低，提示苏贝止咳浸膏在临床上急性用药具有一定的安全性。

【实验目的】观察苏贝止咳浸膏的小鼠急性毒性。

【供试品】1.名称：苏贝止咳浸膏（本实验采用苏贝止咳颗粒为浸膏，实验代号：SB-补1），含量规格及配置：4.1g生药/每毫升浸膏，人用临床拟用剂量81g生药/d。

采用小鼠灌胃给药，以最大给药剂量164g生药/kg，最大给药容积为0.8mL/20g，24h 内给药3次。

常见毒性试验研究报告该研究的目的是评估某化学物质的毒性对实验动物的影响。

我们使用了常见的毒性试验方法来确定该化学物质的急性和慢性毒性。

以下是我们的研究结果和讨论：1. 急性毒性试验：在急性毒性试验中，我们将该化学物质分别给予不同剂量的小鼠进行观察。

观察期为72小时，并记录了动物的行为、食物摄入和身体反应。

结果显示，在较低剂量下，小鼠几乎没有任何明显的不适症状。

然而，在高剂量下，观察到一些明显的毒性反应，包括运动减少、食物摄入减少、呼吸困难和体重下降。

此外，在高剂量下观察到一些动物死亡。

2. 慢性毒性试验：慢性毒性试验的目的是评估该化学物质长期暴露对实验动物的潜在毒性。

我们选择了小鼠作为实验动物，并在一定时间内持续给予该化学物质。

观察期为6个月，期间我们记录了动物的行为、食物摄入、体重变化以及一些生化指标的变化。

我们还进行了组织学检查，以评估该化学物质对动物器官的潜在损害。

结果显示，长期暴露于该化学物质下的小鼠表现出一些体征上的变化，包括运动减少、食物摄入减少和体重下降。

同时，一些生化指标也显示了异常的变化，如肝功能损害和肾功能异常。

组织学检查也显示了一些组织损伤的迹象，尤其是对肝脏和肾脏的影响。

3. 讨论：本研究的结果表明，该化学物质存在一定的急性和慢性毒性。

在高剂量下，该化学物质引起了明显的行为、生理和生化反应的变化，甚至导致一些动物死亡。

长期暴露于低剂量下的小鼠也显示了一些不适症状和器官损害的迹象。

这些发现对于对这种化学物质的安全性进行评估和相关政策的制定都具有重要的意义。

进一步的研究应该考虑在更广泛的动物模型和不同剂量下进行，以更全面地评估该化学物质的毒性潜力。