VEGF在乳腺癌组织与血清中的表达及临床意义
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文章编号:1006-3110(2012)08-1245-03 实验研究与卫生检验检测 VEGF在乳腺癌组织与血清中的表达及临床意义刘 畅1,曹仁贤2,陶松桔1摘要: 目的 探讨血管内皮生长因子(V EGF)与乳腺癌发生、发展及淋巴结转移的关系。
方法 免疫组化方法测定不同组织学类型乳腺癌组织中V EGF水平;用双抗体夹心酶联免疫吸附法(EL ISA)测定血清中V EG F水平。
结果1)V EGF表达阳性率随着乳腺癌组织学分级增高而逐渐增高,淋巴结转移的乳腺癌组VEGF阳性表达率为92.86%(2628),无淋巴结转移的乳腺癌组VEGF阳性表达率为81.82%(18 22);2)正常对照组和良性乳腺癌组血清VEGF水平比较,两组间差异无统计学意义(P>0.05);正常对照组与恶性乳腺癌组进行比较,差异有统计学意义(P<0.01);良性乳腺癌组与恶性乳腺癌组比较,其VEGF的浓度较恶性乳腺癌患者低,差异有统计学意义(P<0.01)。
结论 V EG F在乳腺癌中高表达,提示其可能与乳腺癌的恶性进展有关;V EGF与乳腺癌淋巴结转移有关,检测V EGF含量对预测乳腺癌淋巴结转移具有重要意义。
关键词: 血管内皮生长因子;乳腺癌;免疫组织化学中图分类号:R737 9 文献标识码:BExpression of VEGF in Breast C ancer Tissue and its Clinical Significance LI U Chang,CA O Ren-Xian,T A O Song-J u.(Dep ar tment of Endocr inology,the Fir st People s H osp ital of Chenz hou,Chenz hou423000,H unan,China) Abstract: Objective T o investigate the expressions of vascular endot helial growt h factor(VEGF)in ser um and breast cancer tissues,and to explore their r elationships wit h the occurrence,dev elo pment and lymph node metastasis of the cancer.Methods VEGF ex pression in the br east cancer tissue of different histological types w as determined by immunohistochemistry, and V EG F level in serum was detected by EL ISA. Results T he positive rate of V EGF ex pression w as increased w ith the progr ess of the histological grade of the breast cancer.T he positive rate of V EG F in the lymph node metastasis group was92.86%(26 28),while that in the non lymph no de metastasis group was81.82%(18 22).T he serum VEGF level in thelymph no de metastasis group was significantly higher than that in the non lymph node metastasis group(P<0.05).T he serum VEGF level w as not significantly different between the nor mal control group and the benign breast cancer group(P>0.05), while that in the malignant breast cancer g roup w as significantly hig her than those in the other tw o g roups(P<0.01). C on-clusions VEGF is highly expressed in breast cancer.It may corr elate w ith the malig nancy and node metastasis of the cancer.Detection of V EG F is of important significance in predicting node metastasi s of breast cancer.Key words: VEGF;Breast Cancer;Immunohistochemistr y乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,据资料统计,发病率占全身各种恶性肿瘤的7%~10%。
它的发病常与遗传有关,以及40~60岁之间、绝经期前后的妇女发病率较高,是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一[1]。
近年来,乳腺癌的发生、发展已成为一个研究热门,自上世纪70年代Folkmanl提出 肿瘤生长依赖血管 学说后,众多学者开始对肿瘤血管进行了大量的研究。
研究表明[2],当实体瘤生长到一定体积时一般需要新生血管生成,为肿瘤内部提供营养支持,并为肿瘤血行转移提供通道。
血管内皮生长因子作者单位:1湖南省郴州市第一人民医院内分泌科(湖南 郴州 423000); 2南华大学附属第一医院临床医学研究所作者简介:刘畅,男,硕士,主治医师,主要从事内分泌系统肿瘤的基础与临床研究工作。
通讯作者:陶松桔,男,硕士,副主任医师,E-mail:(vascular endothelial grow th factor,V EGF)是目前发现的作用最强,特异性最高的促血管形成因子,它特异的作用于血管内皮细胞,与血管内皮细胞上的V EG FR-2结合,具有促进血管内皮细胞增殖、迁移、增加血管通透性等作用,在肿瘤生长及转移等生理、病理过程中起重要作用。
为进一步探讨VEGF在乳腺癌致病机制中的作用,本文拟应用免疫组化法等技术检测V EGF在乳腺癌组织与血清中的表达情况,期望为乳腺癌的治疗及其预后提供新的思路。
1 对象与方法1.1 对象 选择2010-2011年在郴州市第一人民医院肿瘤科住院手术治疗的女性乳腺疾病患者82例。
选择病例时排除了伴有冠心病、糖尿病以及类风湿性关节炎等疾病的患者。
82改良根治术的乳腺癌患者50例(术前均未经任何治疗)。
50例乳腺癌患者按组织学分级: 级9例, 级27例, 级14例。
其中有淋巴结转移者28例,无淋巴结转移者22例。
另选取2010-2011年在本院体检的健康女性36例作为正常对照。
良性疾病组年龄为(50.68 9.36)岁,乳腺癌病症组年龄为(53.16 10.52)岁,对照组年龄为(51.48 9.89)岁。
三组年龄差异无统计学意义(P >0.05)。
1.2 标本收集 病例组在入院后第2d 清晨采集空腹静脉血,正常对照组在体检当天上午抽取空腹静脉血3ml,分离血清,置于-20 冰箱内保存。
组织标本均经10%中性福尔马林固定,常规脱水后使用石蜡包埋后保存备用。
所有标本在1个月内检测。
1.3 主要试剂和仪器鼠抗人V EGF 单克隆抗体(北京雷根生物技术有限公司)、人VEGF EL ISA 检测试剂盒(晶美生物公司)、酶联免疫检测仪(DG5033A )、Oly mpus PM -10AO 全自动显微照相装置。
1.4 免疫组化实验 按试剂盒说明书要求操作,其中鼠抗人VEGF 单克隆抗体采用高温高压进行抗原修复。
每次实验以PBS 缓冲液代替一抗作为阴性对照,以已知V EG F 阳性的切片作为阳性对照。
根据阳性细胞数及染色强度进行综合判定,即按5%以上细胞浆或细胞膜呈棕黄色染色者为V EG F 表达阳性。
1.5 血清中V EG F 浓度检测 从冰箱内取出样品及试剂盒,平衡至室温,配置标准品、洗涤液、生物素化抗体及酶结合工作液等,测定V EG F 水平采用双抗夹心EL ISA 法,操作程序严格按说明书进行,最后依据标准品的浓度及OD450值作出标准曲线,计算出样品的浓度。
1.6 统计学分析 采用SPSS15.0统计软件,各组间比较采用单因素方差分析(One-w ay A NO VA)和 2检验,以 =0.05为检验水准进行统计分析。
2 结果2.1 乳腺癌组织中V EGF 的表达V EGF 定位于肿瘤细胞浆及胞膜,阳性表达为胞浆或胞膜染为棕黄色,呈弥漫或散在的颗粒状,V EGF 在癌组织的表达水平明显高于癌周组织,见图1。
在50例乳腺癌组织中,V EG F 阳性表达43例(86%),癌间质内皮细胞不表达或呈弱阳性表达,癌旁组织几乎无表达。
图1 乳腺癌组织中VEGF 表达的免疫荧光分析( 100)a.正常上皮组织VEGF 的表达;b.乳腺癌癌周组织VEGF 的表达;C.乳腺癌组织VEGF 的表达表1 正常、良性与恶性乳腺癌组血清VEGF 浓度比较Group n VEGF density (pg m l )P 值Normal group 3625.32 16.760.385a Benign group 3226.78 19.450.002b Malignant g roup50125.48 109.520.001c注:a:normal group vs benign group;b:benign group vs malignantgroup;c:mali gnant group vs normal group2.2 正常、良性与恶性乳腺癌组血清中VEGF 的浓度 通过标准品的浓度和所对应的OD 值得出方程式求出各组研究对象血清中VEGF 的浓度。
V EGF 在正常、良性与恶性乳腺癌组之间采用单向方差分析进行比较,结果显示正常对照组血清VEGF 的平均浓度和良性乳腺癌组比较,差异无统计学意义(P =0.385)。
正常对照组与恶性乳腺癌组进行比较,差异有统计清V EG F 的浓度较恶性乳腺癌患者低,差异有统计学意义(P <0.01),见表1。
2.3 V EGF 表达与不同组织学类型乳腺癌的关系 结果显示血清V EG F 浓度及V EGF 表达阳性率随着乳腺癌组织学分级增高而逐渐增高,见表2。