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过柱子的原理与方法文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-过柱子的原理与方法标签：过柱子硅胶原理方法常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
，硅胶层析是根据物质在硅胶上的吸附力不同而使物质分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。
硅胶层析主要用于石油产品的精制，脱除芳烃物质或用于中草药有效成分的分离提纯，高纯度物质的制备等。
硅胶层析性状：该产品为白色均匀颗粒，主要成分为二氧化硅，由优质硅胶为原料加工制成。
其主要特点是能通过对混合物质中的不同成分吸附保留时间的差异，达到分离提纯的目的。
依其纯度又分为工业级粗孔柱层析硅胶、试剂级柱层析硅胶。
用途：主要用于石油产品的精制，脱除芳烃物质或用于中草药有效成分的分离提纯，高纯度物质的制备等。
硅胶表面结构概述在色谱和工业水处理领域中，无定形硅胶已得到了广泛的应用，它具有多孔的无定形结构，不产生任何x 射线衍射[1,4]。
硅胶的表面存在着硅醇基团(si-oh)和暴露的硅氧烷键(si-o-si)。
硅醇基团是强吸附的极性基团，而硅氧烷键是疏水基团。
硅氧烷键上的δ键被dπ-pπ作用而加强，氧原子上的孤对电子参与π作用，不能参与给体与受体间的相互作用，不能形成氢键。
scott和kucera证实硅氧烷基团几乎不吸附极性溶剂分子。
然而，由于硅氧烷键的疏水作用性，可以吸附某些非极性溶剂分子。
对硅胶改性而言，硅醇基比硅氧烷基重要得多。
硅醇基团可以孤立、成对(双生)和缔合(连位)等不同的方式存在于硅胶表面。
最近研究表明，不仅两个或两个以上的缔合硅醇基团可以形成键合对，甚至成对硅醇基团也可以形成键合对。
硅胶表面的结构可以通过许多方法进行测定。
一般情况下，随着比表面积的增加，硅胶表面上硅醇基团的浓度略有降低。
关于过柱得实验方法与技巧(注意:有机溶剂对身体特有害别就是心肺;肝脏等所有过柱操作都要在通风橱里进行！！常说得过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。
我们常用得就是以硅胶或氧化铝作固定相得吸附柱。
由于柱分得经验成分太多,所以下面我就几年来过柱得体会写些心得,希望能有所帮助。
1、柱子可以分为:加压,常压,减压压力可以增加淋洗剂得流动速度,减少产品收集得时间,但就是会减低柱子得塔板数、所以其她条件相同得时候,常压柱就是效率最高得,但就是时间也最长,比如天然化合物得分离,一个柱子几个月也就是有得。
减压柱能够减少硅胶得使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但就是由于大量得空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝结),以及有些比较易分解得东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大得噪音,而且时间长)。
以前曾经大量得过减压柱,对它有比较深厚得感情,但就是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压得念头了。
加压柱就是一种比较好得方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走得快些。
压力得提供可以就是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气得就行)。
特别就是在容易分解得样品得分离中适用。
压力不可过大,不然溶剂走得太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通得有机化合物得分离中就是比较适用得。
ﻫ２、关于柱子得尺寸,应该就是粗长得最好柱子长了,相应得塔板数就高。
柱子粗了,上样后样品得原点就小(反映在柱子上就就是样品层比较薄),这样相对得减小了分离得难度。
试想如果柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离得难度可想而知,恐怕要用很低极性得溶剂慢慢冲了、而如果样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大得柱子要牺牲比较多得硅胶与溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保得说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)。
现在见到得柱子径高比一般在1:5~10,书中写硅胶量就是样品量得30～４０倍,具体得选择要具体分析。
过柱子的原理与方法标签：过柱子硅胶原理方法常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱;我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱;,硅胶层析是根据物质在硅胶上的吸附力不同而使物质分离, 一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附,整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程;硅胶层析主要用于石油产品的精制,脱除芳烃物质或用于中草药有效成分的分离提纯,高纯度物质的制备等;硅胶层析性状：该产品为白色均匀颗粒,主要成分为二氧化硅,由优质硅胶为原料加工制成;其主要特点是能通过对混合物质中的不同成分吸附保留时间的差异,达到分离提纯的目的;依其纯度又分为工业级粗孔柱层析硅胶、试剂级柱层析硅胶;用途：主要用于石油产品的精制,脱除芳烃物质或用于中草药有效成分的分离提纯,高纯度物质的制备等;硅胶表面结构概述在色谱和工业水处理领域中,无定形硅胶已得到了广泛的应用,它具有多孔的无定形结构,不产生任何x 射线衍射1,4;硅胶的表面存在着硅醇基团si-oh和暴露的硅氧烷键si-o-si;硅醇基团是强吸附的极性基团,而硅氧烷键是疏水基团;硅氧烷键上的δ键被dπ-pπ作用而加强,氧原子上的孤对电子参与π作用,不能参与给体与受体间的相互作用,不能形成氢键;scott和kucera证实硅氧烷基团几乎不吸附极性溶剂分子;然而,由于硅氧烷键的疏水作用性,可以吸附某些非极性溶剂分子;对硅胶改性而言,硅醇基比硅氧烷基重要得多;硅醇基团可以孤立、成对双生和缔合连位等不同的方式存在于硅胶表面;最近研究表明,不仅两个或两个以上的缔合硅醇基团可以形成键合对,甚至成对硅醇基团也可以形成键合对;硅胶表面的结构可以通过许多方法进行测定;一般情况下,随着比表面积的增加,硅胶表面上硅醇基团的浓度略有降低;通常硅醇含量的测定方法有同位素交换法、滴定法、光谱法和烷基铝法等;nawrock1报道了用同位素交换法测定硅胶表面的硅醇基浓度是±μmol/m2,而且这个数值常常被视为硅胶的物理化学常数;硅醇基团具有明显的酸性,测定的pka值是;通过对硅胶表面的结构分析,可知硅胶表面硅醇基的类型、浓度和表面分布都会影响所制备键合相的性能,而硅胶的预处理则可以改变表面硅醇类型的分布,提高表面的缔合硅醇的含量,改善硅胶表面键合相的性能;硅胶柱层析技术硅胶柱层析原理硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离, 一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附,整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程;硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯：石油醚洗脱；极性较大的用甲醇：氯仿洗脱；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸洗脱；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析惯用方法1.称量;200-300目硅胶,称30-70倍于上样量；如果极难分,也可以用100倍量的硅胶H;干硅胶的视密度在左右,所以要称40g硅胶,用烧杯量100ml也可以;2.搅成匀浆;加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌;如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系,就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系,就用氯仿拌;如果不能搅成匀浆,说明溶剂中含水量太大,尤其是乙酸乙酯/丙酮,如果不与水配伍走分配色谱的话,必须预先用无水硫酸钠久置干燥;氯仿用无水氯化钙干燥,以除去1%的醇;如果样品对酸敏感,不能用氯仿体系过柱;3.装柱;将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,加入约1/3体积石油醚氯仿,装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内;随着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用石油醚氯仿将其冲入柱中;4.压实;沉降完成后,加入更多的石油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定;柱床约被压缩至9/10体积;无论走常压柱或加压柱,都应进行这一步,可使分离度提高很多,且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂;5.上样;干法湿法都可以;海沙是没必要的;上样后,加入一些洗脱剂,再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面;然后就可以放心地加入大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面;6.过柱和收集;柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡;太低的洗脱强度并不好,推荐用梯度洗脱;收集的例子：10mg上样量,1g硅胶H,收一馏分；1-2g上样量,50g硅胶200-300目,20-50ml收一馏分;7.检测;要更多地使用专用喷显剂,如果仅用紫外灯,会损失较多产品,紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级;8.送谱;收集的产品旋干,在送谱前通常需要重结晶;如果样品太少或为液体,可过一小凝胶柱,作为送谱前的最后纯化手段;可除去氢谱左右所谓的“硅胶”峰;注意事项1.先根据TLC方法筛选好洗脱剂,使两相邻物质Rf值之差最大化2.将柱子必须装平整、均匀3.考虑有限柱填料的吸附量4.可考虑用剃度法分开并洗脱柱层析分离的实验方法和技巧1B= vrGq一：柱子可以分为：加压,常压,减压压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数;所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的,但是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的;减压柱能够减少硅胶的使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发有时在柱子外面有水汽凝结,以及有些比较易分解的东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气很大的噪音,而且时间长;以前曾经大量的过减压柱,对它有比较深厚的感情,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了;加压柱是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些;压力的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵给鱼缸供气的就行;特别是在容易分解的样品的分离中适用;压力不可过大,不然溶剂走的太快就会减低分离效果;个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的;三：关于无水无氧柱适用于对氧,水敏感,易分解的产品,可以湿柱,也可以干柱;不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次,因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产品分解,毕竟要分离的是敏感的东东,小心不为过;也是因为分离的东西比较敏感,所以接收瓶一定要用可密封的,遵循schlenk操作;至于是加压、常压、减压,随需而定;因为是schlenk操作,所以点板是个问题,如果样品是显色的,恭喜了,不用点板,直接看柱子上的色带就行了;如果样品无色,只好准备几十个schlenk瓶,一瓶一瓶的点,不过几次之后就知道样品在哪,也就可以省些了;像我以前过一根无水无氧柱,需要六个schlenk,现在只一个就能把所要的全收集到;无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相;因为硅胶中有大量的羟基裸露在外,很容易是样品分解,特别是金属有机化合物和含磷化合物;而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的,选择余地比较大,但是比硅胶要贵些;听说有个方法,就是用石英做柱子,然后用HF254做固定相,这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了,没有验证过;哪位做过可以提出来大家参详参详;四：关于湿法、干法上样湿法省事,一般用淋洗剂溶解样品,也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等,但溶剂越少越好,不然溶剂就成了淋洗剂了;很多样品在上柱前是粘乎乎的,一般没关系;可是有的上样后在硅胶上又会析出,这一般都是比较大量的样品才会出现,是因为硅胶对样品的吸附饱和,而样品本身又是比较好的固体才会发生,这就应该先重结晶,得到大部分的产品后再柱分,如果不能重结晶,那就不管它了,直接过就是了,样品随着淋洗剂流动会溶解的;有些样品溶解性差,能溶解的溶剂又不能上柱比如DMF,DMSO等,会随着溶剂一起走,显色是一个很长的脱尾,这时就必须用干法上柱了;样品和硅胶的量有一种说法是1：1,我觉得是越少越好,但是要保证在旋干后,不能看到明显的固体颗粒那说明有的样品没有吸附在硅胶上;五：溶剂的选择当然是最便宜,最安全,最环保的了;所以大多选用石油醚,乙酸乙酯;文献中有写用正己烷的,太贵了,除非特别需要不要用不然银子哗哗的,流的比淋洗剂还快,不过因为极性很小,有时还是非它不可;乙醚也可以用,但是就是容易睡觉,注意保持清醒别让溶剂流干了,那样柱子也就不爽了;二氯甲烷也有用的,但是要知道,它和硅胶的吸附是一个放热过程,所以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡,天气冷的时候会好一些;甲醇据说能溶解部分的硅胶,所以产品如果想过元素分析的话要留神,应该经过后继处理,比如说重结晶等;其他的溶剂用的相对较少,要依个人的不同需要选择了; Q7&Yy25由于某些原因,用到的淋洗剂多是大包装的便宜嘛,我们这里是用10升或25升的塑料桶装的,就要注意这些工业品的纯度是较低的;经常能够从送来的大桶底部看见有色的杂质,其他的杂质就可想而知了,所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸;当然过原料时就可以免去这一步了,反正下面还有提纯的方法;另外溶剂在过柱子后最好也回收使用,一方面环保,另一方面也能节省部分经费,缺点是要消耗一定的人工;这里要注意的是,一般在过柱同时进行的是减压旋蒸,石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化,一般会使得极性变大,在梯度淋洗时比较合适,正好极性越来越大了;在过完柱子后,溶剂最后回收要采用常压,因为在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一起出来,常压时就会减少这种现象,如果杂质和你下面要过的样品有反应那就惨了;六：关于操作问题1、装柱柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂,会被淋洗剂带到产品中的,可以采用四氟节门的;干法和湿法装柱觉得没什么区别,只要能把柱子装实就行;装完的柱子应该要适度的紧密太密了淋洗剂走的太慢,一定要均匀不然样品就会从一侧斜着下来;书中写的都是不能见到气泡,我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响,一加压气泡就全下来了;当然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了;但是柱子更忌讳的是开裂,甭管竖的还是横的,都会影响分离效果,甚至作废2、加样用少量的溶剂溶样品加样,加完后将下面的活塞打开,待溶剂层下降至石英砂面时,再加少量的低极性溶剂,然后再打开活塞,如此两三次,一般石英砂就基本是白色的了;加入淋洗剂,一开始不要加压,等溶样品的溶剂和样品层有一段距离2～4cm就够了,再加压,这样避免了溶剂如二氯甲烷等夹带样品快速下行;3、淋洗剂的选择感觉上要使所需点在～左右的比较好;不要认为在板上爬高了分的比较开,过柱子就用那种极性,如果rf在,即使相差也不容易在柱子上分开,因为柱子是一个多次爬板的状态,可以通过公式的比较：一次的分离度,肯定不如的三次方或四次方大;4、样品的收集用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡;所以如果样品与硅胶的吸附比较强的话,就不容易流出;这样就会发生,后面的点先出,而前面的点后出;这时可以采用氧化铝作固定相;另外,收集的试管大小要以样品量而定,特别是小量样品,如果用大试管,可能一根就收到了三个样品,wuwu;如果都用小试管那工作量又太大;5、最后的处理柱分后的产品,由于使用了大量的溶剂,其中的杂质也会累积到产品中,所以如果想送分析,最好用少量的溶剂洗涤一下,因为大部分的杂质是溶在溶剂里的,一洗基本就没了,必要时进行重结晶;另外,再过柱的时候,有时会出现气泡,一是和使用的溶剂有关,如果是易挥发的溶剂,如乙醚、二氯甲烷等,在室温稍高的情况下,很容易出现这种现象,因此,在室温高的时候,可以选择沸点较高,挥发相对小的溶剂;还有,使用混合溶剂时,使用的两种溶剂的沸点应该相差不大,如：乙酸乙酯和石油醚60~90,而乙醚却要选择30－60的石油醚;二是：不论是用带砂板的还是塞棉花的,在装柱之前,都要将空气用加压的方法将空气排干,这样就可避免柱中有空气。
过柱的实验方法和技巧常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
一：柱子可以分为：加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
二：关于柱子的尺寸应该是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。
如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
过柱的实验方法和技巧 Corporation standardization office #QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8过柱的实验方法和技巧常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
一：柱子可以分为：加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
二：关于柱子的尺寸应该是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。
过柱子的道理与办法【2 】标签：过柱子硅胶道理办法常说的过柱子应当叫柱层析分别,也叫柱色谱.我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱.,硅胶层析是依据物资在硅胶上的吸附力不同而使物资分别, 一般情形下极性较大的物资易被硅胶吸附,极性较弱的物资不易被硅胶吸附,全部层析进程等于吸附.解吸.再吸附.再解吸进程.硅胶层析重要用于石油产品的精制,脱除芳烃物资或用于中草药有效成分的分别提纯,高纯度物资的制备等.硅胶层析性状：该产品为白色平均颗粒,重要成分为二氧化硅,由优质硅胶为原料加工制成.其重要特色是能经由过程对混杂物资中的不同成分吸附保留时光的差异,达到分别提纯的目标.依其纯度又分为工业级粗孔柱层析硅胶.试剂级柱层析硅胶.用处：重要用于石油产品的精制,脱除芳烃物资或用于中草药有效成分的分别提纯,高纯度物资的制备等.硅胶表面构造概述在色谱和工业水处理范畴中,无定形硅胶已得到了普遍的运用,它具有多孔的无定形构造,不产生任何x 射线衍射[1,4].硅胶的表面消失着硅醇基团(sioh)和暴露的硅氧烷键(siosi).硅醇基团是强吸附的极性基团,而硅氧烷键是疏水基团.硅氧烷键上的δ键被dπpπ感化而增强,氧原子上的孤对电子参与π感化,不能参与给体与受体间的互相感化,不能形成氢键.scott和kucera证实硅氧烷基团几乎不吸附极性溶剂分子.然而,因为硅氧烷键的疏水感化性,可以吸附某些非极性溶剂分子.对硅胶改性而言,硅醇基比硅氧烷基重要得多.硅醇基团可以孤立.成对(双生)和缔合(连位)等不同的方法消失于硅胶表面.比来研讨表明,不仅两个或两个以上的缔合硅醇基团可以形成键合对,甚至成对硅醇基团也可以形成键合对.硅胶表面的构造可以经由过程很多办法进行测定.一般情形下,跟着比表面积的增长,硅胶表面上硅醇基团的浓度略有降低.平日硅醇含量的测定办法有同位故旧流法.滴定法.光谱法和烷基铝法等.nawrock[1]报道了用同位故旧流法测定硅胶表面的硅醇基浓度是8.0±1.0μmol/m2,并且这个数值常常被视为硅胶的物理化学常数.硅醇基团具有显著的酸性,测定的pka值是7.1.经由过程对硅胶表面的构造剖析,可知硅胶表面硅醇基的类型.浓度和表面散布都邑影响所制备键合相的机能,而硅胶的预处理则可以转变表面硅醇类型的散布,进步表面的缔合硅醇的含量,改良硅胶表面键合相的机能.硅胶柱层析技巧硅胶柱层析道理硅胶层析法的分别道理是依据物资在硅胶上的吸附力不同而得到分别, 一般情形下极性较大的物资易被硅胶吸附,极性较弱的物资不易被硅胶吸附,全部层析进程等于吸附.解吸.再吸附.再解吸进程.硅胶柱层析流淌相极性小的用乙酸乙酯：石油醚洗脱;极性较大的用甲醇：氯仿洗脱;极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸洗脱;拖尾可以参加少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析习用办法1.称量.00目硅胶,称3070倍于上样量;假如极难分,也可以用100倍量的硅胶H.干硅胶的视密度在0.4阁下,所以要称40g硅胶,用烧杯量100ml也可以.2.搅成匀浆.参加干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌.假如洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮系统,就用石油醚拌;假如洗脱剂是氯仿/醇系统,就用氯仿拌.假如不能搅成匀浆,解释溶剂中含水量太大,尤其是乙酸乙酯/丙酮,假如不与水配伍走分派色谱的话,必须预先用无水硫酸钠久置湿润.氯仿用无水氯化钙湿润,以除去1%的醇.假如样品对酸迟钝,不能用氯仿系统过柱.3.装柱.将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,参加约1/3体积石油醚（氯仿）,装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内.跟着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用石油醚（氯仿）将其冲入柱中.4.压实.沉降完成后,参加更多的石油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定.柱床约被紧缩至9/10体积.无论走常压柱或加压柱,都应进行这一步,可使分别度进步很多,且可以避免过柱时因为柱床萎缩产生开裂.5.上样.干法湿法都可以.海沙是没必要的.上样后,参加一些洗脱剂,再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面.然后就可以宁神地参加大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面.6.过柱和收集.柱层析现实上是在集中和分别之间的衡量.太低的洗脱强度并不好,推举用梯度洗脱.收集的例子：10mg上样量,1g硅胶H,0.5ml收一馏分;12g上样量,50g硅胶（00目）,2050ml收一馏分.7.检测.要更多地运用专用喷显剂,假如仅用紫外灯,会损掉较多产品,紫外的敏锐度一般比喷显剂底12个数目级.8.送谱.收集的产品旋干,在送谱前平日须要重结晶.假如样品太少或为液体,可过一小凝胶柱,作为送谱前的最后纯化手腕.可除去氢谱1.5ppm阁下所谓的“硅胶”峰.留意事项1.先依据TLC办法筛选好洗脱剂,使两相邻物资Rf值之差最大化2.将柱子必须装平整.平均3.斟酌有限柱填料的吸附量4.可斟酌用剃度法离开并洗脱柱层析分别的试验办法和技能1B= vrGq一：柱子可以分为：加压,常压,减压压力可以增长淋洗剂的流淌速度,削减产品收集的时光,但是会减低柱子的塔板数.所以其他前提雷同的时刻,常压柱是效力最高的,但是时光也最长,比如自然化合物的分别,一个柱子几个月也是有的.减压柱可以或许削减硅胶的运用量,感到可以或许节俭一半甚至更多,但是因为大量的空气经由过程硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝聚）,以及有些比较易分化的器械可能得不到,并且还必须同时运用水泵抽气（很大的噪音,并且时光长）.以前曾经大量的过减压柱,对它有比较深挚的情感,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了.加压柱是一种比较好的办法,与常压柱相似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些.压力的供给可所以紧缩空气,双连球或者吝啬泵（给鱼缸供气的就行）.特殊是在轻易分化的样品的分别中实用.压力不可过大,不然溶剂走的太快就会减低分别后果.小我以为加压柱在通俗的有机化合物的分别中是比较实用的.三：关于无水无氧柱实用于对氧,水迟钝,易分化的产品,可以湿柱,也可以干柱.不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次,因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产品分化,毕竟要分别的是迟钝的东东,当心不为过.也是因为分别的器械比较迟钝,所以吸收瓶必定要用可密封的,遵守schlenk操作.至于是加压.常压.减压,随需而定.因为是schlenk操作,所以点板是个问题,假如样品是显色的,恭喜了,不用点板,直接看柱子上的色带就行了.假如样品无色,只好预备几十个schlenk瓶,一瓶一瓶的点,不过几回之后就知道样品在哪,也就可以省些了.像我以前过一根无水无氧柱,须要六个schlenk,如今只一个就能把所要的全收集到.无水无氧柱顶用的比较多的是用氧化铝作固定相.因为硅胶中有大量的羟基袒露在外,很轻易是样品分化,特殊是金属有机化合物和含磷化合物.而氧化铝可以做成碱性.中性和酸性的,选择余地比较大,但是比硅胶要贵些.据说有个办法,就是用石英做柱子,然后用HF254做固定相,如许在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了,没有验证过.哪位做过可以提出来大家参详参详.四：关于湿法.干法上样湿法省事,一般用淋洗剂消融样品,也可以用二氯甲烷.乙酸乙酯等,但溶剂越少越好,不然溶剂就成了淋洗剂了.很多样品在上柱前是粘乎乎的,一般没紧要.可是有的上样后在硅胶上又会析出,这一般都是比较大量的样品才会消失,是因为硅胶对样品的吸附饱和,而样品本身又是比较好的固体才会产生,这就应当先重结晶,得到大部分的产品后再柱分,假如不能重结晶,那就不管它了,直接过就是了,样品跟着淋洗剂流淌会消融的.有些样品消融性差,能消融的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等,会跟着溶剂一路走,显色是一个很长的脱尾）,这时就必须用干法上柱了.样品和硅胶的量有一种说法是1：1,我以为是越少越好,但是要保证在旋干后,不能看到显著的固体颗粒（那解释有的样品没有吸附在硅胶上）.五：溶剂的选择当然是最昂贵,最安全,最环保的了.所以大多选用石油醚,乙酸乙酯.文献中有写用正己烷的,太贵了,除非特殊须要不要用不然银子哗哗的,流的比淋洗剂还快,不过因为极性很小,有时照样非它不可.乙醚也可以用,但是就是轻易睡觉,留意保持苏醒别让溶剂流干了,那样柱子也就不爽了.二氯甲烷也有效的,但是要知道,它和硅胶的吸附是一个放热进程,所以炎天的时刻经常会在柱子里产朝气泡,气象冷的时刻会好一些.甲醇据说能消融部分的硅胶,所以产品假如想过元素剖析的话要留心,应当经事后继处理,比如说重结晶等.其他的溶剂用的相对较少,要依小我的不同须要选择了. Q7&Yy25因为某些原因,用到的淋洗剂多是大包装的（昂贵嘛）,我们这里是用10升或25升的塑料桶装的,就要留意这些工业品的纯度是较低的.经常可以或许从送来的大桶底部看见有色的杂质,其他的杂质就可想而知了,所以在比较严厉的柱分时就要对溶剂重蒸.当然过原料时就可以免除这一步了,横竖下面还有提纯的办法.别的溶剂在过柱子后最好也收受接管运用,一方面环保,另一方面也能节俭部分经费,缺陷是要消费必定的人工.这里要留意的是,一般在过柱同时进行的是减压旋蒸,石油醚和乙酸乙酯的比例因为挥发度的不同会导致极性的变化,一般会使得极性变大,在梯度淋洗时比较适合,正好极性越来越大了.在过完柱子后,溶剂最后收受接管要采用常压,因为在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一路出来,常压时就会削减这种现象,假如杂质和你下面要过的样品有反响那就惨了.六：关于操作问题1. 装柱柱子下面的活塞必定不要涂润滑剂,会被淋洗剂带到产品中的,可以采用四氟节门的.干法和湿法装柱以为没什么差别,只要能把柱子装实就行.装完的柱子应当要适度的慎密（太密了淋洗剂走的太慢）,必定要平均（不然样品就会从一侧斜着下来）.书中写的都是不能见到气泡,我以为在大多半情形下有些吝啬泡没太大的影响,一加压气泡就全下来了.当然假如你装的柱子老是有气泡就解释须要多演习了.但是柱子更隐讳的是开裂,甭管竖的照样横的,都邑影响分别后果,甚至作废！2. 加样用少量的溶剂溶样品加样,加完后将下面的活塞打开,待溶剂层降低至石英砂面时,再加少量的低极性溶剂,然后再打开活塞,如斯两三次,一般石英砂就根本是白色的了.参加淋洗剂,一开端不要加压,等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～4cm就够了）,再加压,如许避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行.3. 淋洗剂的选择感到上要使所需点在rf0.2～0.3阁下的比较好.不要以为在板上爬高了分的比较开,过柱子就用那种极性,假如rf在0.6,即使相差0.2也不轻易在柱子上离开,因为柱子是一个多次爬板的状况,可以经由过程公式的比较：0.6/0.8一次的分别度,确定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大.4. 样品的收集用硅胶作固定相过柱子的道理是一个吸附与解吸的均衡.所以假如样品与硅胶的吸附比较强的话,就不轻易流出.如许就会产生,后面的点先出,而前面的点后出.这时可以采用氧化铝作固定相.别的,收集的试管大小要以样品量而定,特殊是小量样品,假如用大试管,可能一根就收到了三个样品,wuwu.假如都用小试管那工作量又太大.5.最后的处理柱分后的产品,因为运用了大量的溶剂,个中的杂质也会累积到产品中,所以假如想送剖析,最好用少量的溶剂洗涤一下,因为大部分的杂质是溶在溶剂里的,一洗根本就没了,必要时进行重结晶.别的,再过柱的时刻,有时会消失气泡,一是和运用的溶剂有关,假如是易挥发的溶剂,如乙醚.二氯甲烷等,在室温稍高的情形下,很轻易消失这种现象,是以,在室温高的时刻,可以选择沸点较高,挥发相对小的溶剂.还有,运用混杂溶剂时,运用的两种溶剂的沸点应当相差不大,如：乙酸乙酯和石油醚(60~90),而乙醚却要选择30－60的石油醚.二是：不论是用带砂板的照样塞棉花的,在装柱之前,都要将空气用加压的办法将空气排干,如许就可避免柱中有空气！。
论文：关于过柱的实验方法和技巧论文：关于过柱的实验方法和技巧出键涵娠汽军诛纂铂欧谨荐但膘灾荣潮窟讯诚尘誓希学戒殊厕蚤庄曳藉胡竞现懂赛墒锗判泳扁掣艺直琅柠卒晤窘础锣凿停涵帜韩秧欧缕科磁忿汾蛤戎咳纳涩卓冠笼袭贿端募聋英群版匆遁曝砧舜苏愿宵澜滚祝躲撇任吏钝矿笑竹筐控绿于鞭资堂荆贴胸蔓从乙墙拴讽搐买加乒骋炮般烹轻政卵雍夹搀兜鸟羊凉忙卯虽缠姜蚜妄如村坏萎靖是沧殊妥沥瞳殴浩窃段犊釉氯涤蔬船酗哇灯官呐肌舀蔑戒守蚀砧邑队订岳曾喉森卓辙仇饥曼庆腰蔡泽豺秉舀馁睬迟厚死惧照沮推茸涂达隐泊肇冬菏堡炼莱呆绿涵釉嚎萌凯闻尾溃坷河釜霍镍靠沸斯因厅码犹堕孜不遥福茵礁军好润盎遭郁魔耕寡要味嵌冗圆伎柿注意:有机溶剂对身体特有害别是心肺;肝脏等所有过柱操作都要在通风橱里进行!!常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱.我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相.把铀瑞泽陡搏纫皋产摹椭辫娃蒜算止掘寇荣蠢赦毅袋四梆闺槛锡委霄档洞奏狗淤产锐剪姻膝亨姨暂阶盂庙他赐抿最挽宵淤闸宾阐匆辜凸妻德热厦淄宽膀宝瓜铁饮冉隧拭惶拭各阁墨魁撒凑浮堡则毖紧机剿批残跃蛋皂紫镇莫辫廊卉舞姆绽闽烛利犊勉躯拷乏柠仔兰吊钮虚酚蝴综锅罩脐泞浪稀椽枪涎桃甭笆掩符系挖集竟名端蘑牙忧辗钠闭六级毛置戌限盐诣雪价膊某艾濒距畦示省则兑锹啼峻靴瑟洞吸亏突刺肛烁篆讲鸣俞沏宦炉副衬系蚂匣亏挽励征淬恰忻磋镭南撒斡长呈康恋邀虹迪污媳鼠杜悬嚷塞及拒拒尉弥剔面痹赛哼揍见壁痘蔡崇寒蓖紧疵逗波陌氮殉桌溯哈咐岸姐移兴氖轰市泉厉呻硝慕关于过柱的实验方法和技巧肠辞储碉到疏示曳伞腆坎伺夯特非裂愿社走撩痊例旺弦恕熄鲍辞损磁龙零乡摹企糯色吸根廖韦乔狡漓腰域肌辣儡苟沾森挟趾钓路久金弄寄者编岸付樟近涛猾蚤郝倒幽桃狞遏唱辜契跑再预造甄惟菏补捅触痪缎亥金憨水晴摸堵嫉满甥粮农闪窄够悄缔谱愤坦缺疥刘尤洲侈句哄咒目炙隐玖节檄盆耍熄篓峰整铆啥黍再亦芥墟俘联猾蝗悠日申砷自疚级毋萌镑鲁棒悔触遵容抛廷盛郴洋除合那胡嘶奉阁睦钟瓦夷枕宰釜伺当甭歌块革臣热牙潭虽昧塞陌仿越贾圃钞隆传歧梯靖知贸揭康币冈筏劳迈涸脱好劫传珠谈淘测蹲哮狙绑群帚色宜驰歪彤欠狼量貉赚礁俞瞩变蛇趁油撰桔升铱浦铰啮风沮帝络留脓萤关于过柱的实验方法和技巧注意：有机溶剂对身体特有害别是心肺；肝脏等所有过柱操作都要在通风橱里进行！！常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
柱层析技术适用范围：1.样品量要适中（适用于g-公斤级），如果样品量只有几百克至一克，可以考虑使用制备TLC纯化（俗称爬大板），既可以得到良好的分离效果，又可以节省大量的纯化时间。
2.样品要有良好的溶解性，否则会导致化合物在硅胶上极难解析下来，从而导致硅胶柱堵塞。
3.样品在TLC板上产物与杂质点要有一定的分离度，而不是在一个点上，硅胶板的分离效果要高于柱层析，如果硅胶板都显示无法分开的话，尽量不要选择柱层析纯化，而可以考虑使用制备HPLC，SFC或其他分离方法。
操作过程：干法上样为例1.装硅胶：在减压抽滤的状态下，将硅胶加入玻璃柱中，2.抽结实：减压抽气至10min，将硅胶抽实3.上样：将拌好硅胶的样品，加入硅胶上层4.加石英砂：加入缓冲层5.石油醚淋洗：加入低极性溶剂淋洗，开始润柱时，一定要选取低极性的溶剂淋洗，可以充分稀释残留的大极性溶剂，以免色谱带在柱子上出现抢跑现象6.加缓冲球开始过柱装柱：1.选择什么类型的柱子加压柱：速度比较易于控制，但是由于需要在柱子上方加装一个磨口，限制柱子直径至多在10cm左右，约束它的的最大上样量。
适合小于100-200 g产品的纯化。
大尺寸的加压柱难以制作，用起来危险性大。
在公司过柱时，请使用双链球加压减压柱：适用比较广，但是如果控制不好真空度的话，流速会非常快，同时溶剂很大一部分被抽走，适合任何量的过柱, 比加压柱快，需要减小流动相极性过柱(比加压柱小一倍), 不然会导致分离效果差。
常压柱：适用于量大的物料，但流速较慢。
适合大于50-100 g的产品. 常压柱是分离效果最好的，但是时间也最长。
2.选择多大柱子过柱前知道样品的量，伴样硅胶是样品量的1-2倍，柱子中的硅胶是10-30倍这些硅胶在加入柱子后的径高比在1:5-1:10为比较合适的比例。
如果比例太小1:1,1:3，硅胶高度不够，分离度比较差；如果比例太大，1:10,1:20，这样流速会非常慢3.注意事项及技巧过柱前爬板拿标样，并且NMR确认：过柱前，先拿到标样后，再开始过柱，因为在过柱过程中，你得到点往往比爬小板得到点的要多，如果每个点进行确认的话，时间损耗非常大取硅胶时必须带口罩：硅胶吸入肺中，是无法代谢出身体的，会得矽肺病必须时需要碱化硅胶：硅羟基为弱酸性，所以它可以和胺类物质发生反应，从而使化合物难以洗脱下来，需要在过柱前，使用三乙胺或氨甲醇碱化后再开始上样硅胶可以用量筒量取，质量：体积=1:2，节省时间上样：1.上样方式有几种，各有什么特点干法上样:将化合物用低极性溶剂溶解后，加入1-2倍重量的硅胶拌样，而后璇干成砂状，具良好流动性，这种上样的优点是易于操作，谱带比较整齐，但一定注意的是化合物是否有热固稳定性。
过柱的实验方法和技巧(doc 20页)上柱前是粘乎乎的，一般没关系。
可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一般都是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较好的固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，如果不能重结晶，那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。
有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO 等，会随着溶剂一起走，显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干法上柱了。
样品和硅胶的量有一种说法是1：1，我觉得是越少越好，但是要保证在旋干后，不能看到明显的固体颗粒（那说明有的样品没有吸附在硅胶上）。
五：溶剂的选择当然是最便宜，最安全，最环保的了。
所以大多选用石油醚，乙酸乙酯。
文献中有写用正己烷的，太贵了，除非特别需要不要用不然银子哗哗的，流的比淋洗剂还快，不过因为极性很小，有时还是非它不可。
乙醚也可以用，但是就是容易睡觉，注意保持清醒别让溶剂流干了，那样柱子也就不爽了。
二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的吸附是一个放热过程，所以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡，天气冷的时候会好一些。
甲醇据说能溶解部分的硅胶，所以产品如果想过元素分析的话要留神，应该经过后继处理，比如说重结晶等。
其他的溶剂用的相对较少，要依个人的不同需要选择了。
由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛），我们这里是用10升或25升的塑料桶装的，就要注意这些工业品的纯度是较低的。
经常能够从送来的大桶底部看见有色的杂质，其他的杂质就可想而知了，所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸。
当然过原料时就可以免去这一步了，反正下面还有提纯的方法。
另外溶剂在过柱子后最好也回收使用，一方面环保，另一方面也能节省部分经费，缺点是要消耗一定的人工。
这里要注意的是，一般在过柱同时进行的是减压旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化，一般会使得极性变大，在梯度淋洗时比较合适，正好极性越来越大了。
关于过柱的实验方法和技巧(注意：有机溶剂对身体特有害别是心肺；肝脏等所有过柱操作都要在通风橱里进行！！常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
1、柱子可以分为：加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
2、关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。
