微生物的实验室培养课件

固体培养基：菌落
液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
半固体培养基：
无动力
有动力(弥散)
(是否运动)
2、培养基配制原则：
• （1）目的要明确：根据微生物的种类、培养 目的等确定配制培养基的种类，因为不同的微 生物对培养物质的需求不同。 • （2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度 和比例。 • （3）pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范 围不同。 • 细菌pH为：6.5-7.5； • 放线菌pH为：7.5-8.5； • 真菌pH为：5.0-6.0。
3.微生物实验室培养的基本操作程序 1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存
三、实验操作 （ 一.）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）
操作步骤 1．计算、称量 2．溶化 3．调pH： pH7．6 4．过滤：这一步可以省去。 5．分装：分装过程中注意不要使培养 基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而 引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过 三角烧瓶容积的一半为宜。 6．加塞 7．包扎
合成培养基:
根据细胞生存所需物质的种类和 数量，用人工方法模拟合成的。 合成培养基主要成分是氨基酸、 维生素、碳水化合物、无机盐和其它 一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相 对固定;成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完全满 足体外细胞生长需要。
天然培养基：
天然培养基有血清、血浆、和组 织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限;成分复杂，影响对某 些实验产物的提取和实验结果的分析; 易发生支原体污染;
一、基础知识：
（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成 的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 1.培养基的类型和用途 （1）按物理状态来分：培养基可分为固体培 养基、液体培养基和半固体培养基。其中固 体培养基用于菌种分离、鉴定等。 （2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别 培养基。 （3）按成分来分，可分为天然培养基和合成 培养基。
3、培养基的营养构成
不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、 和氮源、无机盐等营养物质，另外还需要 满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如: 生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合 成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、 嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要 求。
4、微生物的五种营养要素
碳源 （carbon source） 氮源（nitrogen source）
有些微生物自己不能合成某种氨基 酸，必须给予补充，如赖AA发酵所用的 黄色短杆菌不能合成环丝AA，为环丝 AA缺陷型菌株，在培养基中必须添加含 环丝AA的氮源。如豆饼水解液或毛发水 解液等。
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碱基
嘧啶和嘌呤是核酸和辅酶的重要组分， 是许多微生物必须的生长因素。 有些微生物不仅不能合成嘧啶和嘌呤， 而且不能将补充的嘧啶和嘌呤结合在核 苷酸上，还必须供给核苷酸，有的菌需 补充卟啉或其衍生物，还有的菌需供给 （低碳）脂肪酸等。
（二）无菌技术
1.无菌技术的概念
无菌操作泛指在培养微生物的操作中， 所有防止杂菌污染的方法。无论是随后 将要学到的倒平板、平板划线操作，还 是平板稀释涂布法，其操作中的每一步 都需要做到“无菌”，即防止杂菌污染。 只有熟练、规范地进行无菌操作，才可 能成功地培养微生物。
2.消毒与灭菌的概念及两者的区别
(2)灭菌的方法：
1、灼烧灭菌 接种环、接种针、 试管口 2、干热灭菌： 160-170 ℃下加 热1-2h。 3、高压蒸气灭菌： 100kPa、121 ℃ 下维持15-30min.
最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以 杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休 眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被 破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了 防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻 璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花 塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只 可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过 。 培养微生物的培养皿是由正反两平面板互扣 而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染 而设计的。
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水
是细胞中生化反应的良好介质；营养 物质和代谢产物都必须溶解在水里，才 能被吸收或排出体（细胞）外。 水的比热高，能有效的吸收代谢过程 中放出的热量，不致使细胞的温度骤然 上升。 维持细胞的膨压（控制细胞形态）。

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碳源、氮源、生长因子的比较
来 源 常用原料 功 能 构成细胞物质 和一些代谢产 物，有些还是 异养做生物的 主要能源物质
无机盐（mineral salts） 生长因子（growth factor） 水（wahtor）
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碳源
凡能为微生物提供生长繁殖所需碳元 素的营养物质都称为碳源 。
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碳源功能
C素构成细胞及代谢产物的骨架
C素是大多数微生物代谢所需的能量来源 自养微生物以二氧化碳或碳酸盐为惟一 碳源进行代谢生长；异养微生物必须以 有机物作为碳源进行代谢生长。 碳源是异养微生物的主要能源物质。
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无机盐种类
构成微生物细胞以C、H、O、N、P、S六种 元素为主，约占细胞干重的95％以上； Ca、K 、Mg、Fe为大量元素，以无机盐阳离 子形式被吸收，配培养基要加磷酸盐、硫酸盐 。 Zn、Ca、Mn、Co、Mo等微量元素，在微生 物培养中有0.1PPM就可以了，自来水原料中 已够用，不需另加。
10．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培 养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。
倒平板技术
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的 温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形 瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手 时，就可以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
（１）消毒定义： 利用化学或物理方法，杀死大部份 致病微生物的过程。
（2）灭菌的定义：
是指使用强烈的理化因素杀死物 体内外所有的微生物，包括所有细菌 的孢子、芽孢、霉菌及病毒，而达到 完全无菌之过程。 灭菌与消毒技术是微生物有关工 作中最普通也是最重要的技术。
消毒与灭菌的比较 比 理化因素的 消灭微生物 的数量 较 作用强度 项 芽孢和孢子 能否被消灭
专题2 :微生物的培养与应用
微生物基础知识
病毒
细菌
病毒界
微生物包括哪五类： 放线菌 真菌 原生动物
原核生物界 真菌界
原生生物界
特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通 常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有 的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿 素.不能进行光合作用.
一、课题目标： 了解有关培养基的基础知识，进行无 菌技术的操作，进行微生物的培养。 二、课题重点和难点： 无菌技术的操作。 三、技能目标： 掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和 平板划线法等基本操作技术，熟练、规范 地进行无菌操作，成功地培养微生物。
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氮源种类
分子态氮：固氮微生物以分子氮为唯一氮源 无机态氮：硝酸盐、铵盐几乎所有微生物能利用 有机态氮：蛋白质及其降解产物 a实验室常用牛肉膏、蛋白胨、酵母膏做氮源 b生产用玉米浆、豆饼、葵花饼、花生饼等
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无机盐（mineral salts）
无机盐功能 构成微生物细胞的组成成分 调解微生物细胞的渗透压， PH值和氧 化还原电 位 有些无机盐如S、Fe还可做为自养微生 物的能源 构成酶活性基的组成成分，维持酶活性 。Mg、Ca、K是多种酶的激活剂
CO2、NaHCO3、糖 碳源 类、脂肪酸、花生粉 糖类 饼、石油等
N2、NH3、铵盐、硝 合成蛋白质、 铵盐、硝酸 氮源 酸盐、尿素、牛肉膏 核酸以及含氮 盐等 和蛋白胨等 的代谢产物 生长 维生素、氨基酸、碱 因子 基 酶、核酸等的 组成成分
选择培养基
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、 次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基: 分离杂交瘤细胞
消 毒
灭 菌
较为温和
部分生活状 态的微生物
全部微生物
不能
强烈
能
3.常用的消毒与灭菌的方法 (1)消毒的方法：
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min 或 80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁 尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ……
培养基的种类
在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要 的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。 液体培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种 例如，在培养基中加入青霉素，以抑制细菌、 指示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种 据物理性质分 半固体培养基 放线菌的生长，从而分离到酵母菌和霉菌。又 类的微生物。例如，在培养基中加入伊红和美 如，在培养基中加入高浓度的食盐可以抑制多 固体培养基 常用于工业生产 蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在 种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生 大肠杆菌等细菌：如果有大肠杆菌，其代谢产 长。 常用于观察微生物的 天然培养基 物就与伊红和美蓝结合，使菌落呈深紫色，并 运动、鉴定菌种 据化学成分分 带有金属光泽。 用于微生物的分离、计数 合成培养基 常用于工业生产 选择培养基 据用途分 鉴别培养基常用于分类、鉴定
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微 生物污染培养基。
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒臵？